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1、第14章 分枝杆菌属 (Mycobacterium),微生物学及免疫学教研室 杨维青,细长略弯的分枝状杆菌 抗酸阳性（胞壁中含有大量脂类） 无鞭毛，无芽胞， 不产生内、外毒素 人型结核分枝杆菌 牛型分枝杆菌 麻风分枝杆菌 非结核分枝杆菌,分枝杆菌属,第一节 结核分枝杆菌 (Mycobacterium tuberculosis，MTB),1882年3月24日宣布发现结核菌。 1905年因对结核杆菌的研究获诺贝尔生理学奖,简称结核杆菌，引起结核病(tuberculosis,TB),德国科学家Koch 郭霍(科赫) 细菌学之父,“世界防治结核病日”-3.24 2010年 (第15个) 立即动手控制结
2、核，群策群力加速行动 2009年 控制结核，人人有责 关注农民工，共享健康 2007年 结核流行广泛 控制从我做起 2005年 防治结核，早诊早治，强化基层,全球总疫情 约20亿人感染了结核菌 现症结核患者2000万 每年新发患者数800万1000万 每年300万人死于结核病,我国疫情 目前有近半数人口感染过结核菌 现有肺结核患者450万 每年新发肺结核患者145万 每年因结核病死亡25万人,结核病患者数量居世界第二位，80%的患者在农村， 75%的患者为中青年。,难控制？ 预防 ？ 治疗 ？,一、生物学性状,形态与染色 培养特性 抵抗力 变异性,抗酸染色法(acid-fast stain),
3、5石炭酸复红加温染色 3盐酸酒精脱色 美蓝复染 结果: 分枝杆菌呈红色 其他细菌和背景物质为蓝色,细胞壁富含脂质 （占细胞壁干重60）：磷脂、脂肪酸、蜡质D、分枝菌酸。,抗酸染色法,菌体细长略带弯曲， 单个或分枝状排列， 抗酸染色阳性（红色） 陈旧培养物中，或抗生素治疗后 形态不典型，出现 L型 结核杆菌L型的医学意义,形态与染色,专性需氧 营养要求高 罗-琴固体培养基 pH6.56.8 生长缓慢,1224h/代时，34周可见菌落 菌落：干燥、坚硬、表面颗粒状，形似菜花。 液体培养呈粗糙皱纹状菌膜。,培养特性,三不怕 抗干燥 抗酸碱 抗染料,三怕 湿热 乙醇 紫外线,抵抗力,强,易传播,脂质含
4、量高,对患者相关物品的消毒,可用酸或碱浓集菌液,形态结构变异 结核杆菌的L型：颗粒状、丝状；高渗培养。 毒力变异 BCG（Bacille Calmette-Gurin ）：牛分枝杆菌经230次传代，成为减毒活疫苗株。 耐药性变异 耐异烟肼及其他抗结核药物。,变异性,难治愈,易漏诊,二、致病性,致病物质 菌体成分 磷脂单核细胞 （形成结核结节，干酪样坏死） 分枝菌酸(索状因子)中性粒细胞（引起肉芽肿） 硫酸脑苷脂吞噬细胞（使菌体在吞噬细胞内存活） 蜡质D：引起迟发型超敏反应） 结核菌素tuberculin：引起迟发型超敏反应 荚膜：保护菌体，利于侵入,细菌增殖引起炎症反应、 迟发型超敏反应引起的
5、损伤。,所致疾病,感染方式 呼吸道、消化道或皮肤损伤侵入机体 所致疾病 结核病，以肺结核常见 原发感染 原发后感染,肺部感染,原发感染：外源性感染 首次感染，多发生于儿童（无免疫力） 形成原发灶：渗出性炎症病灶， 经淋巴管的播散，引起肺门淋巴结肿大等 原发综合征 原发病灶纤维化、钙化，而自愈。 少数病灶扩散，引起全身结核。,原发型肺结核,哑铃征阴影,双肺对称分布，大小相等， 密度均匀 的粟粒样结节。,血行播散导致粟粒型肺结核,肺部感染,原发后感染： 多见成人 多为内源性感染 机体已有的免疫力，使病灶局限 肉芽肿、结核结节、纤维化、干酪样坏死 无淋巴管的播散,原发后感染,空洞,肺外感染,结核杆菌
6、经血液、淋巴液扩散至脑、肾、骨、关节。 结核杆菌痰液经消化道肠、腹腔 艾滋病患者全身播散性结核 肺外感染大多与结核分枝杆菌L型有关,临床表现,全身症状： （结核中毒症状） 呼吸系统症状：,午后低热、乏力、纳差、体重减轻、盗汗、月经不调、闭经,咳嗽、咳痰、咯血、胸痛，重者可出现呼吸困难,三、免疫性与超敏反应,免疫性：为感染免疫(infection immunity)， 又称有菌免疫。 以T细胞为主的细胞免疫。 迟发型超敏反应 抗菌免疫与超敏反应的关系：二者共存,Tc细胞 TH1细胞,郭霍现象：抗菌免疫与超敏反应的共存,以前感染过或免疫的豚鼠,未感染的豚鼠,24-48小时,10-14天,局部红肿、
7、浅溃疡,局部红肿、溃疡,不扩散， 脱落后自行愈合,坏死，经久不愈,有毒TB菌,全身扩散,皮下注射少量MTB,大量MTB,动物死亡,抗菌免疫,超敏反应,无抗菌免疫,结核菌素试验（ tuberculin test ) ：,1.原理：迟发型超敏反应的皮肤试验。,2.方法：将PPD注射于前臂掌侧皮内， 4872 小时观察结果。,旧结核菌素（old tuberculin,OT ) 纯蛋白衍生物（purrified protein derivative,PPD）,结果判断：4872小时测量皮肤硬节直径,结核菌素试验,3. 结果：,4. 结果分析：,红肿硬结 5mm为阳性: 15mm为强阳性: 5mm为阴性
8、:,红肿硬结小于 5mm者，应考虑以下情况：,结核菌素试验应用： 用于婴幼儿结核病的诊断参考 选择卡介苗接种的对象及测定免疫效果 用于结核菌感染的流行病学 调查测定肿瘤患者的细胞免疫功能,四、微生物学检查法,标本处理：痰液等，浓缩集菌（10万个/ml） 直接镜检：抗酸染色 分离培养：培养基（注意L型变异） 鉴定：镜下形态、菌落特征 快速诊断： 结核菌素试验 抗PPD IgG检测，作为活动性感染的辅助诊断 PCR,痰中找到结核菌是确诊肺结核的主要依据。,五、防治原则,预防 一般性预防：卫生宣传、提高机体抵抗力 特异性预防：接种卡介苗 免疫程序：新生儿初次免疫、7岁复种 在农村12岁在复种 治疗
9、抗结核药物链霉素、异烟肼、利福平等 治疗原则：早期、联合、适量、规律、坚持全程。,降低耐药性，减少毒性,常用抗结核药：,全杀菌药：异烟肼、利福平 半杀菌药：链霉素、吡嗪酰胺等 抑菌药：乙胺丁醇、对氨基水杨酸钠等,化疗方法：,1、短程疗法：联用二种或二种以上杀菌剂组成高 效杀菌力，疗程69月。 2HSR/47HR 2HSRZ47HR 2HRZ47HRE,2、两阶段疗法：把疗程分成两个阶段 （基于间歇疗法基础上提出） 开始13月每日给药强化阶段 以后每周二次间歇给药巩固阶段 2HRZE7H2R2E2,病历分析 患者，女，23岁，发热 、咳嗽、盗汗、乏力月余，一天前突然咯血200 m l 平素身体健
10、康，无心脏病及支气管扩张病史。其妹妹患肺结核，正在治疗中。 体格检查：38 100次/分 20次/分 BP 120/80mmHg. 发育正常，营养中等，消瘦，表浅淋巴结未触及，左上肺及肩胛间区可闻及小水泡音，心脏听诊无异常，腹平软，肝脾未触及。胸片：,第15章 嗜血杆菌属（自学）,布鲁菌属 炭疽芽胞杆菌 鼠疫耶尔森菌,第16章 动物源性细菌,以动物为传染源，能引起动物和人类发生人畜共患病的病原体，称动物源性细菌。,芽胞杆菌属,炭疽芽胞杆菌 引起炭疽病（烈性人畜共患病） 蜡样芽胞杆菌 引起食物中毒,据世界卫生组织和有关研究部门提示： 如将100kg的炭疽病原散布一个城市， 可使数百万人受到感染、
11、致病中毒。 在未获防治情况下，百万生命毁于一旦。 制造生物武器的首选原料。,生物武器,美国911事件后白色粉末引起的恐慌,炭疽芽胞杆菌 B.anthracis,形态与染色 革兰阳性粗大杆菌（致病菌中最大） 呈竹节状排列（链杆菌） 有氧时形成芽胞、有毒株有荚膜 培养 有毒株可形成粘液状菌落（有荚膜）， 无毒株则为粗糙状。菌落（卷发状） 在普通肉汤中有絮状沉淀，无菌膜，菌液清亮。,1、生物学性状,芽胞抵抗力强 在干燥环境中可存活数十年，在皮毛中可存活数年。 牧场一旦被污染，芽胞可存活数年至数十年。 对消毒剂抵抗力强，但对碘特别敏感， 对青霉素、先锋霉素、链霉素、卡那霉素等高度敏感。,永不死亡的细菌
12、,荚膜 保护性抗原（PA）（识别单位） 炭疽毒素：三部分：水肿毒素（EF） 致死毒素（LF） 单一组分无毒性，？ PA和EF：损伤血管内皮细胞引起水肿，扩散 PA和LF：抑制和麻痹呼吸中枢呼吸衰竭,致病物质,2、致病性,致病菌即沿淋巴管及血循环播散全身，形成败血症。 死亡率高。,一定数量的芽胞,皮肤破损处、胃肠道或呼吸道,细菌在局部繁殖，产生大量毒素,导致组织及脏器发生出血性浸润、坏死和严重水肿， 形成原发性皮肤炭疽、肠炭疽及肺炭疽。,当机体抵抗力降低时,皮肤炭疽：最常见，多发生于屠宰、制革或毛刷工人及饲养员。本菌由体表破损处形成水疖、水疱、脓疱、中央部呈黑色坏死，周围有浸润水肿、如不及时治疗
13、，细菌可进一步侵入局部淋巴结或侵入血流，引起败血症死亡。 肺炭疽：少见，由吸入病菌所致，多发生于皮毛工人，病死率高。病初似感冒，进而出现严重的支气管肺炎，可在23天内死于中毒性休克。 肠炭疽：由食入病兽肉制品所致，以全身中毒症状为主，并有胃肠道溃疡、出血及毒血症，发病后23日内死亡。,标本采集：注意个人防护，避免污染环境。 标本置65水溶30min，将非芽胞菌杀死，保留芽胞活性再进行增菌和分离培养。 直接镜检 发现G+大杆菌、两端平截、竹节状排列形成长链，并有明显荚膜，可见芽胞，芽胞为卵圆形，位于菌体中央菌体不膨大，可作初步报告。,3、微生物检验,与产气荚膜杆菌的区别,将待检菌接种于含青霉素0
14、.050.5U/ml的培养基经37培养 6 h后，炭疽杆菌可发生形态变化，显微镜下见大而均匀的圆球状菌体呈成串样排列 其它需氧芽胞杆菌无此现象。,青霉素串珠试验,3、微生物学检查,4、防治原则,对疫区的家畜进行预防接种，控制家畜感染和牧场的污染。 对疫区的人员及易感人群接种炭疽杆菌减毒疫苗。 首选青霉素治疗。,第17章 棒状杆菌属(Corynebacterium),Neisser染色， 出现异染颗粒 metachromatic granule,白喉棒状杆菌,形态与染色： 革兰阳性菌 菌体细长微弯，一端或两端膨大呈棒状，常呈V、L形排列， 无荚膜、无鞭毛，不形成芽胞。 Neisser或Alber
15、t染色，可出现异染颗粒（核糖核酸、多偏磷酸盐），有重要鉴定意义,一、 生物学性状,培养特性：,营养要求较高 吕氏培养基（含有凝固血清）上生长迅速，异染颗粒明显，灰白色小菌落。 选择鉴别培养基 亚碲酸钾血平板(黑色菌落) 菌体使亚碲酸钾还原生成元素碲。,抵抗力：,对湿热抵抗力弱 抗日光、寒冷和干燥 对青霉素、氯霉素、红霉素敏感,二、致病性,K抗原：抗吞噬 白喉外毒素： 棒状杆菌噬菌体带有编码外毒素的tox基因，在溶原状态即可产生。 作用多种细胞干扰蛋白合成，如心肌、神经细胞。 索状因子：破坏细胞中的线粒体,致病物质：,溶原性转换,B链：结合亚单位 A链：毒性亚单位。灭活延伸因子-2，影响蛋白质合
16、成。,白喉外毒素作用机制,所致疾病：白喉-急性呼吸道传染病,细菌上呼吸道粘膜， 生长繁殖，产生毒素， 细菌与毒素共同作用引起局部症状： 炎症，坏死，纤维蛋白渗出，假膜窒息 毒素入血（毒血症）引起全身中毒症状 外周神经-神经炎：膈肌麻痹-呼吸困难 声带麻痹-声音嘶哑 软颌麻痹-吞咽困难 心肌-心肌炎,易感者：15岁儿童,白喉假膜,抗毒素 感染后机体可获得牢固的免疫力,免疫性：,三、微生物学检查法,直接涂片镜检形态，异染颗粒， 分离培养吕氏血清培养基，亚碲酸钾平板 毒力鉴定动物试验，Elek平板毒力实验,Elek平板试验：抗毒素与毒素的特异性结合,Elek Test,沉淀线(阳性),含白喉抗毒素滤纸片,白喉杆菌阳性对照菌苔,待检菌 有沉淀线，即为白喉杆菌,阴性对照,4、防治原则,预防 人工主动免疫：注射白喉类毒素（白百破三联疫苗） 人工被动
