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1、实验三实验三 网织红细胞计数、血网织红细胞计数、血沉测定及白细胞计数沉测定及白细胞计数一、网织红细胞计数一、网织红细胞计数目的目的 掌握网织红细胞（Ret)试管法计数的原理及操作方法。原理原理 网织红细胞胞质内残存少量核蛋白体及核糖核酸等嗜碱性物质，经煌焦油蓝或新亚甲蓝等染液活体活体染色后，呈蓝色网状或点状结构蓝色网状或点状结构，可与成熟红细胞相区别。器材 显微镜、试管、吸管、玻片、推片、香柏油、擦镜纸、擦镜液试剂 新亚甲蓝标本 新鲜全血操作步骤操作步骤1.加染液加染液 将Ret染液2滴加至小试管中，做好标记。2.2.加血加血 在已加入染液的小试管内注入新鲜全血2滴，立即混匀。3.3.染色染色
2、 室温下染色10-15min。4.4.涂片制备涂片制备 取染色血1小滴推制成薄血涂片，自然干燥5.5.观察观察 低倍镜下选择红细胞分布均匀、着色好、背景清晰的部位进行计数。6.6.计数计数 常规法：在油镜下计数至少1000个红细胞中的网织红细胞。7.7.计算计算 Ret百分数=（1000个RBC中的Ret数/1000）100%8.8.结果报告结果报告 网织红细胞百分数：X.X%血涂片制备推片载玻片血液将推片匀速向前，勿停顿。涂片的厚薄取决于速度和角度。一张满意的血涂片应厚薄均匀 头 体 尾 涂片干燥后用铅笔铅笔在血涂片的头部写上姓名和编号李四B 1 2 3参考区间参考区间成人、儿童：成人、儿童
3、：0.5%-1.5%新新 生生 儿：儿：2.0%-6.0%注意事项注意事项1.1.试剂准备试剂准备 推荐使用新亚甲蓝染液，试剂应定期配制，用前过滤。2.2.染色染色 染液与血液比以1:1为宜,染色时间不能过短。试剂用后及时盖好盖子，以免挥发。3.3.标本标本 应及时染色，及时测定。4.4.计数计数 选择红细胞分布均匀，网织红细胞着色好的、背景清晰的部位计数。应兼顾血片边缘和尾部。目的 掌握魏氏法测定血沉的原理及方法。原理 将一定量的枸橼酸钠抗凝全血置于魏氏血沉管中，直立于血沉架上，由于红细胞比重大于血浆，克服血浆阻力而下沉，1h后读取上层血浆高度的毫米数，即为红细胞沉降率。器材 魏氏管、血沉架
4、、洗耳球。（血沉管）试剂 109mmol/L枸橼酸钠溶液。标本 外周血。二、血液沉降率测定（魏氏法）二、血液沉降率测定（魏氏法）1.1.采血采血 采静脉血1.6ml加入含0.4ml 109mmol/L枸橼酸钠溶液抗凝剂的采血管中（即采血量到采血管2ml刻度线处） ，混匀。2.2.吸血吸血 混匀血吸入血沉管内至刻度“0”处，拭去管外残余血。3.3.立血沉管立血沉管 将血沉管直立于血沉架上。4.4.读数读数 1h末准确读取红细胞下沉后露出的血浆高度。5.5.报告方式报告方式 XX mm/h操作步骤操作步骤参考值参考值 50岁：男性岁：男性 15mm/h15mm/h 女性女性 20mm/h20mm/
5、h 50岁：男性岁：男性 20mm/h20mm/h 女性女性 30mm/h30mm/h 85岁：男性岁：男性 30mm/h0mm/h 女性女性 42mm/h42mm/h 儿童儿童: 10mm/hmm/h二、血液沉降率测定（魏氏法）二、血液沉降率测定（魏氏法）注意事项注意事项 1.严格控制采血量，使抗凝剂与血液比例为1：4。 2.血沉管应垂直放置，不得倾斜。 3.测量时，血沉架应避免直接光照、移动和振动。 4.本实验最适宜温度为1825，并要求在采血后 2h内完成。 5.红细胞沉降率在1h沉降过程中，并不是均衡等速度的沉降，绝不可以只观察30min沉降率，将结果乘以2作为1h血沉结果。二、血液沉
6、降率测定（自动血沉仪法）二、血液沉降率测定（自动血沉仪法）白细胞计数白细胞计数一一、目的目的 掌握显微镜白细胞计数的方法。掌握显微镜白细胞计数的方法。二、二、原理原理 用白细胞稀释液将血液稀释一定倍数，用白细胞稀释液将血液稀释一定倍数，同时破坏溶解红细胞。将稀释的血液冲入计同时破坏溶解红细胞。将稀释的血液冲入计数池后，在显微镜下计数一定体积内的白细数池后，在显微镜下计数一定体积内的白细胞数，经换算求出每升血液中的白细胞数。胞数，经换算求出每升血液中的白细胞数。三、器材三、器材 显微镜、改良计数板、血盖片、试管、微量显微镜、改良计数板、血盖片、试管、微量 吸管、加样枪、乳胶吸头、纱布吸管、加样枪
7、、乳胶吸头、纱布四、试剂四、试剂 白细胞稀释液白细胞稀释液五、标本五、标本 EDTA盐抗凝血盐抗凝血六、操作六、操作1. 加稀释液加稀释液 用加样枪吸取白细胞稀释液用加样枪吸取白细胞稀释液0.38ml于小试管中。于小试管中。2. 加血加血 用清洁干燥微量吸管吸取抗凝血用清洁干燥微量吸管吸取抗凝血20l，擦去管外余血，轻轻加至白细胞稀释液底部，擦去管外余血，轻轻加至白细胞稀释液底部，再轻吸上清液清洗吸管再轻吸上清液清洗吸管23次，混匀。次，混匀。3. 充池充池 混匀后用微量吸管将细胞悬液冲入计数混匀后用微量吸管将细胞悬液冲入计数池，室温下平放池，室温下平放35分钟，待细胞下沉后于显分钟，待细胞下
8、沉后于显微镜下计数。微镜下计数。4. 计数计数 用低倍镜依次计数四角用低倍镜依次计数四角4个大方格内的白个大方格内的白细胞数。细胞数。5. 计算计算 白细胞白细胞/L=N/41020106=N/20109/L6. 报告方式报告方式 X.X109/L。七、注意事项七、注意事项 1. 充池前应将白细胞悬液充分混匀。充池前应将白细胞悬液充分混匀。 2.在充池时要一次完成，不能产生满溢、气泡在充池时要一次完成，不能产生满溢、气泡或充池不足及充液后玻片移动的现象。或充池不足及充液后玻片移动的现象。 3. 白细胞在计数池中若分布不均，各大方格间白细胞在计数池中若分布不均，各大方格间细胞计数不得相差细胞计数不得相差8个以上，应重新计数。个以上，应重新计数。 4. 白细胞数量过多时，可采取加大稀释倍数的白细胞数量过多时，可采取加大稀释倍数的方法。方法。 5. 白细胞稀释液不能破坏有核红细胞，它可使白细胞稀释液不能破坏有核红细胞，它可使白细胞计数偏高，此时应计算白细胞校正值。白细胞计数偏高，此时应计算白细胞校正值。作业：作业： 1.如何区分网织红细胞和如何区分网织红细胞和HbH包涵体？包涵体？ 2.白细胞计数与红细胞计数的异同点？白细胞计数与红细胞计数的异同点？
