实验五过氧化物酶酶活性的测定

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1、植物组织中过氧化植物组织中过氧化物酶活性的测定物酶活性的测定愈创木酚比色法愈创木酚比色法实验五过氧化物酶酶活性的测定一、实验目的一、实验目的v熟悉测定过氧化物酶活性的常用方法及其测定原理。实验五过氧化物酶酶活性的测定 过氧化物氧化物酶酶（POD) 过氧化物酶广泛存在于植物体中，是活性较高的一种酶。它与呼吸作用、光合作用及生长素的氧化等都有关系。在植物生长发育过程中它的活性不断发生变化。一般老化组织中活性较高，幼嫩组织中活性较弱。这是因为过氧化物酶能使组织中所含的某些碳水化合物转化成木质素，增加木质化程度。 此外，过氧化物同工酶在遗传育种中的重要作用也正在受到重视。实验五过氧化物酶酶活性的测定二

2、、实验原理二、实验原理v RH2+ H2O22H2O + Rv在有过氧化氢存在的条件下，过氧化物酶能使邻甲氧基苯酚（愈创木酚）氧化，生成茶褐色物质，该物质在 470 nm 处有最大吸收，可用分光光度计测量 470 nm 处的吸光度变化速率来测定过氧化物酶活性。 实验五过氧化物酶酶活性的测定实验五过氧化物酶酶活性的测定三、实验材料三、实验材料v菠菜、油菜、树叶、草、 实验五过氧化物酶酶活性的测定四、仪器用品与试剂四、仪器用品与试剂v分光光度计，研钵，移液管，吸管 v愈创木酚，30过氧化氢，磷酸缓冲液实验五过氧化物酶酶活性的测定五、实验步骤五、实验步骤1、称取植物材料称取植物材料 0.5g ，剪碎

3、，放入研钵中，加入，剪碎，放入研钵中，加入 1 ml 磷酸缓冲液（磷酸缓冲液（ 0.05mol/L）研磨成匀浆，以研磨成匀浆，以 12000 rpm 离心离心 15 min ，上清液即为粗酶液，上清液即为粗酶液。试剂试剂01230.01mol/L磷酸缓冲液，磷酸缓冲液，ml0.02mol/L 愈创木酚，愈创木酚，ml酶液，酶液，ml2.920.0502.90.050.022.90.050.022.90.050.02加好反应物，摇匀，立即加新配制的加好反应物，摇匀，立即加新配制的H2O2 (0.01 ml)，即刻摇，即刻摇匀并计时匀并计时，每隔每隔 30s 读数读数1次，共计次，共计6个数值个数值。对照管对照管 测定管测定管实验五过氧化物酶酶活性的测定七、思考题七、思考题v说明植物过氧化物酶在植物代谢中的意义。实验五过氧化物酶酶活性的测定实验五过氧化物酶酶活性的测定实验五过氧化物酶酶活性的测定