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1、食品卫生微生物学检验金黄色葡萄球菌检验福建省疾病预防控制中心福建省疾病预防控制中心李闽真李闽真n金黄色葡萄球菌的生物学特性金黄色葡萄球菌的生物学特性n金黄色葡萄球菌的抗原构造及分型简介金黄色葡萄球菌的抗原构造及分型简介n金黄色葡萄球菌的致病性金黄色葡萄球菌的致病性n金黄色葡萄球菌的流行病学金黄色葡萄球菌的流行病学n金黄色葡萄球菌的检验方法金黄色葡萄球菌的检验方法n金黄色葡萄球菌肠毒素的检测金黄色葡萄球菌肠毒素的检测n金黄色葡萄球菌的快速检测方法金黄色葡萄球菌的快速检测方法n金黄色葡萄球菌污染的控制金黄色葡萄球菌污染的控制一、金黄色葡萄球菌的生物学特性1、形状与染色：、形状与染色：(staphy
2、lococcusaureus)金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚荚膜。膜。典型的金黄色葡萄球菌典型的金黄色葡萄球菌为为球型，直径球型，直径0.8mm左右，左右，显显微微镜镜下下陈陈列成葡萄串状。列成葡萄串状。革革兰兰氏染色阳性。氏染色阳性。附：附：金黄色葡萄球菌的金黄色葡萄球菌的显显微微照片照片金黄色葡萄球菌的染色金黄色葡萄球菌的染色照片照片金黄色葡萄球菌的金黄色葡萄球菌的扫扫描描电镜电镜照片照片金黄色葡萄球菌的透射金黄色葡萄球菌的透射电镜电镜照片照片金黄色葡萄球菌的金黄色葡萄球菌的显显微照片微照片典型的金黄色葡萄球菌典型的金黄色葡萄球菌为为球型，直径球
3、型，直径0.8mm左右，左右，显显微微镜镜下下陈陈列成葡萄串状。列成葡萄串状。金黄色葡萄球菌革金黄色葡萄球菌革兰兰氏染色氏染色显显微照片微照片金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚荚膜。膜。革革兰兰氏染色阳性。氏染色阳性。金黄色葡萄球菌的金黄色葡萄球菌的扫扫描描电镜电镜照片照片StaphylococcusaureusEnhancedsemw:7.9micron金黄色葡萄球菌的透射金黄色葡萄球菌的透射电镜电镜照片照片Temx12000digitizedStaphylococcusaureus2、培育特性： 金黄色葡萄球菌营养要求不高，在普通培育基上生长良好，需
4、氧或兼性厌氧，最适生长温度37，最适生长pH 7.4。平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，边缘整齐、外表光滑、潮湿，直径普通为12 mm。血平板菌落周围构成透明的溶血环。金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在7.515%NaCl肉汤中生长。3、生化特性：可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。甲基红反响阳性，VP反响弱阳性。许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，复原硝酸盐，液化明胶。金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力，对磺胺类药物敏感性低，但对青霉素、红霉素等高度敏感。金黄色葡萄球菌的抗原构造和分型金黄色葡萄球菌的抗原构造和分型对分型进展简单的了解。对分型进展简单的了解。、血清学分型：、血清学分型：金黄色
5、葡萄球菌水解，获得两金黄色葡萄球菌水解，获得两种抗原成分：蛋白抗原和多糖抗原。种抗原成分：蛋白抗原和多糖抗原。蛋白抗原主要为葡萄球菌蛋白抗原主要为葡萄球菌A蛋白蛋白SPA)，是一种外表抗原，是一种外表抗原，90%以以上金黄色葡萄球菌有此抗原，无特上金黄色葡萄球菌有此抗原，无特异性。异性。多糖抗原为半抗原，有型特异多糖抗原为半抗原，有型特异性。性。、噬菌体分型。、噬菌体分型。、根据肠毒素分型。、根据肠毒素分型。、根据血浆凝固酶分型。、根据血浆凝固酶分型。金黄色葡萄球菌的致病性金黄色葡萄球菌的致病性金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，可引起部分化脓最常见的病
6、原菌，可引起部分化脓感染，感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。甚至败血症、脓毒症等全身感染。金黄金黄色葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其色葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶：产生的毒素和侵袭性酶：a.溶血毒素：外毒素，分甲、乙、丙、丁、溶血毒素：外毒素，分甲、乙、丙、丁、戊五种，能损伤血小板，破坏溶酶体，戊五种，能损伤血小板，破坏溶酶体，引起肌体部分缺血和坏死；引起肌体部分缺血和坏死；b.杀白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬杀白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞；细胞；c.血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人血
7、浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶使血液或血浆中的纤维蛋白体时，该酶使血液或血浆中的纤维蛋白堆积于菌体外表或凝固，妨碍吞噬细胞堆积于菌体外表或凝固，妨碍吞噬细胞的吞噬作用。的吞噬作用。葡萄球菌构成的感染易部葡萄球菌构成的感染易部分化与此酶有关；分化与此酶有关；d.脱氧核糖核酸酶：金黄色葡萄球菌产生脱氧核糖核酸酶：金黄色葡萄球菌产生的脱氧核糖核酸酶能耐受高温，可用来的脱氧核糖核酸酶能耐受高温，可用来作为根据鉴定金黄色葡萄球菌；作为根据鉴定金黄色葡萄球菌；e.肠毒素：金黄色葡萄球菌能产生数种引肠毒素：金黄色葡萄球菌能产生数种引起急性胃肠炎的蛋白质性肠毒素，分为起急性胃肠炎的蛋白质性肠毒素，
8、分为A、B、C、D、E及及F六种血清型。六种血清型。 当当金金黄黄色色葡葡萄萄球球菌菌污污染染了了含含淀淀粉粉及及水水分分较较多多的的食食品品，如如牛牛奶奶和和乳乳制制品品、肉肉、蛋蛋等等，在在温温度度条条件件适适宜宜时时，经经过过810小小时时即即可可产产生生相相当当数数量量的的肠肠毒毒素素，肠肠毒毒素素可可耐耐受受100煮煮沸沸30分分钟钟而而不不被被破破坏坏。人人摄摄食食该该菌菌污污染染的的食食物物23小小时时后后可可引起中毒病症，它引起的食物中毒病症是呕吐和腹泻。引起中毒病症，它引起的食物中毒病症是呕吐和腹泻。此此外外，金金黄黄色色葡葡萄萄球球菌菌还还产产生生溶溶表表皮皮素素、明明胶胶
9、酶酶、蛋蛋白白酶酶、脂肪、脂肪酶酶、肽肽酶酶等。等。金黄色葡萄球菌的流行病学金黄色葡萄球菌的流行病学金黄色葡萄球菌在自然界中无金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人和动处不在，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。作为人和物的排泄物中都可找到。作为人和动物的常见病原菌，其主要存在于动物的常见病原菌，其主要存在于人和动物的鼻腔、咽喉、头发上，人和动物的鼻腔、咽喉、头发上，50%以上安康人的皮肤上都有金黄以上安康人的皮肤上都有金黄色葡萄球菌存在。因此，食品受其色葡萄球菌存在。因此，食品受其污染的时机很多。污染的时机很多。金黄色葡萄球菌的流行病学金黄色葡萄球菌的流行病学近年来，美
10、国疾病控制中心近年来，美国疾病控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引起的报告，由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位，仅次于大肠杆菌。感染占第二位，仅次于大肠杆菌。金黄色葡萄球菌的流行病学特点金黄色葡萄球菌的流行病学特点季节分布，多见于春夏季；季节分布，多见于春夏季；中毒食品种类多，如奶、肉、蛋、中毒食品种类多，如奶、肉、蛋、鱼及其制品。此外，剩饭、油煎鱼及其制品。此外，剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引起的中毒蛋、糯米糕及凉粉等引起的中毒事件也有报道。事件也有报道。上呼吸道感染患者鼻腔带菌上呼吸道感染患者鼻腔带菌率率83%，所以人畜化脓性感染部，所以人畜化脓性感染部位常成为污染源。位常成为污染源。金黄色葡
11、萄球菌的流行病学金黄色葡萄球菌的流行病学普通说，金黄色葡萄球菌可经普通说，金黄色葡萄球菌可经过以下途径污染食品：过以下途径污染食品：食品加工人员、炊事员或销售食品加工人员、炊事员或销售人员带菌，呵斥食品污染；食品在人员带菌，呵斥食品污染；食品在加工前本身带菌，或在加工过程中加工前本身带菌，或在加工过程中遭到了污染，产生了肠毒素，引起遭到了污染，产生了肠毒素，引起食物中毒；熟食制品包装不严，运食物中毒；熟食制品包装不严，运输过程遭到污染；奶牛患化脓性乳输过程遭到污染；奶牛患化脓性乳腺炎或禽畜部分化脓时，对肉体其腺炎或禽畜部分化脓时，对肉体其他部位的污染。他部位的污染。*金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球
12、菌肠肠毒素是个世界性毒素是个世界性卫卫生生问题问题，在美国，在美国由金黄色葡萄球菌由金黄色葡萄球菌肠肠毒素引起的食物中毒占整个毒素引起的食物中毒占整个细细菌性食菌性食物中毒的物中毒的33%，加拿大那么更多，占，加拿大那么更多，占45%，我国每年，我国每年发发生生的此的此类类中毒事件也非常多。中毒事件也非常多。肠肠毒素构成条件：毒素构成条件：存放温度，在存放温度，在37内，温度越高，内，温度越高，产产毒毒时间时间越短；越短；存放地点，通存放地点，通风风不良氧分不良氧分压压低易构成低易构成肠肠毒素；毒素；食物种食物种类类，含蛋白，含蛋白质质丰富，水分多，同丰富，水分多，同时时含一定量淀含一定量淀粉
13、的食物，粉的食物，肠肠毒素易生成。毒素易生成。金黄色葡萄球菌的检验金黄色葡萄球菌的检验1、样品制备、样品制备按无菌操作取检样按无菌操作取检样25gmL，参与参与225mL灭菌生理盐水，固体样灭菌生理盐水，固体样品研磨或置均质器中制成品研磨或置均质器中制成1:10样品样品混悬液。混悬液。供计数检验时，可按十进位递供计数检验时，可按十进位递增稀释法将样品匀液再进展适当稀增稀释法将样品匀液再进展适当稀释。释。金黄色葡萄球菌的金黄色葡萄球菌的检验检验2、增菌及分、增菌及分别别培育培育汲取汲取5mL混混悬悬液，接种于液，接种于7.5%氯氯化化钠钠肉肉汤汤或胰酪或胰酪胨胨大豆肉大豆肉汤汤50mL培育基内，
14、培育基内，361培育培育24h，转转种血平板和种血平板和Baird-Parker平板，平板，361培育培育24h，挑取，挑取血平板上金黄色血平板上金黄色 有有时为时为白色白色 菌落菌落进进展革展革兰兰氏染色氏染色镜检镜检及血及血浆浆凝固凝固酶酶实验实验。血平板上金黄色葡萄球菌菌落形状金黄色葡萄球球菌的单个菌落在血平板上呈金黄色，有时也为白色，大而突出、圆形、不透明、外表光滑，周围有溶血圈。 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌在在BPBP平板上的菌落形状平板上的菌落形状在在Baird-ParkerBaird-Parker琼脂平板上菌落琼脂平板上菌落呈圆形，外表光滑、凸起、湿呈圆形，外表光滑、凸起、湿
15、润，润，直径直径2 23 mm3 mm。灰黑色至黑色，有光。灰黑色至黑色，有光泽，常有淡色非白色的边缘，周泽，常有淡色非白色的边缘，周围绕以不透明圈围绕以不透明圈 沉淀，其外常沉淀，其外常有一明晰带。当用接种针触及菌落时有一明晰带。当用接种针触及菌落时具有黄油样粘稠感。有时可见到不分具有黄油样粘稠感。有时可见到不分解脂肪的菌株，除没有不透明圈和明解脂肪的菌株，除没有不透明圈和明晰带外，其他外观根本一样。从长期晰带外，其他外观根本一样。从长期储存的冷冻或脱储存的冷冻或脱 水食品中分别的菌水食品中分别的菌落，其黑色常较典型菌落浅些，且外落，其黑色常较典型菌落浅些，且外观能够较粗糙，质地较枯燥。观能
16、够较粗糙，质地较枯燥。金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌在甘露醇在甘露醇盐盐平板上的菌落平板上的菌落Staphylococcusaureusonmannitolsaltsagar3、血浆凝固酶实验： 汲取1:4新颖兔血浆0.5 mL，放入小试管中，再参与培育24 h的金黄色葡萄球菌肉浸液肉汤培育物0.5 mL，振荡摇匀，置 361温箱或水浴内，每半小时察看一次，察看6 h，如呈现凝固,即将试管倒置或 倾斜时，呈现凝块者，被以为阳性结果。同时以知阳性和阴性葡萄球菌株及肉汤作为对照。金黄色葡萄球菌肠毒素的检测金黄色葡萄球菌肠毒素的检测一、动物学实验主要用幼猫和猴。一、动物学实验主要用幼猫和猴。二、血清学
17、实验肠毒素作为抗原，二、血清学实验肠毒素作为抗原，可以和特异性抗体发生结合性反响，可以和特异性抗体发生结合性反响，产生可见沉淀。产生可见沉淀。用血清学反响检验金黄色葡萄球用血清学反响检验金黄色葡萄球菌肠毒素，方法主要有：菌肠毒素，方法主要有：免疫琼脂分散法免疫琼脂分散法反向间接血凝实验反向间接血凝实验免疫荧光法免疫荧光法酶联免疫吸附法酶联免疫吸附法金黄色葡萄球菌快速检测方法目前，随着研讨的深化，一些快速和采用现代技术的检测方法不断出现，这些新的快速方法，普通都缩短了传统检测方法的时间，可以较快地得到检测结果，并且操作相对简单。比如：法国梅里埃公司消费的RPF培育基、API检测系统等。梅里埃公司
18、消费的miniVIDAS利用荧光免疫的方法检测葡萄球菌肠毒素，在仪器上45min可以得到结果。法国梅里埃公司消费的法国梅里埃公司消费的RPFRPF培育基培育基凝固酶阳性葡萄球菌凝固酶阳性葡萄球菌 : 菌落周围构成沉淀圈菌落周围构成沉淀圈(例例) 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 -+l将兔血浆包括在培育基中作为直接确认菌落的手段将兔血浆包括在培育基中作为直接确认菌落的手段金黄色葡萄球菌污染的控制金黄色葡萄球菌污染的控制防止食品污染防止食品污染防止带菌人群对各种食物的污防止带菌人群对各种食物的污染：定期对消费加工人员进展安康染：定期对消费加工人员进展安康检查，患部分化脓性感染如疥疮、检查，患部分化脓
19、性感染如疥疮、手指化脓等、上呼吸道感染如手指化脓等、上呼吸道感染如鼻窦炎、化脓性肺炎、口腔疾病等鼻窦炎、化脓性肺炎、口腔疾病等的人员要暂时停顿其任务或互换的人员要暂时停顿其任务或互换岗位。岗位。金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌污污染的控制染的控制防止食品防止食品污污染染防止金黄色葡萄球菌防止金黄色葡萄球菌对对奶及其制奶及其制品的品的污污染：如牛奶厂要定期染：如牛奶厂要定期检查检查奶牛奶牛的乳房，不能的乳房，不能挤挤用患化用患化脓脓性乳腺炎的性乳腺炎的牛奶；奶牛奶；奶挤挤出后，要迅速冷至出后，要迅速冷至-10-10以下，以防毒素生成、以下，以防毒素生成、细细菌繁衍。奶菌繁衍。奶制品要以消毒牛奶制品要
20、以消毒牛奶为为原料，留意低温原料，留意低温保管。保管。对对肉制品加工厂，患部分化肉制品加工厂，患部分化脓脓感感染的禽、畜尸体染的禽、畜尸体应应除去病除去病变变部位，部位，经经高温或其他适当方式高温或其他适当方式处处置后置后进进展加工展加工消消费费。防止金黄色葡萄球菌肠毒素生成应在低温暖通风良好的条件下贮藏食物，以防肠毒素构成；在气温高的春夏季，食物置冷藏或通风阴凉地方也不应超越6小时，并且食用前要彻底加热。nVjSgPdLaI6F3C0y)v&s#pXlUiRfNcK9H5E2A+x(u$rZoWkThPeMbJ7G4D1z-w&t!qYmVjSgOdLaI6F3B0y)v%s#pXlUiQf
21、NcK8H5E2A+x*u$rZnWkThPeMaJ7G4C1z-w&t!pYmVjRgOdL9I6E3B0y(v%s#oXlTiQfNbK8H5D2A+x*u$qZnWkShPeMaJ7F4C1z)w&t!pYmUjRgOcL9I6E3B+y(v%r#oXlTiQeNbK8G5D2A-x*t$qZnVkShPdMaI7F4C0z)w&s!pXmUjRfOcL9H6E3B+y(u%r#oWlTiQeNbJ8G5D1A-x*t$qYnVkSgPdMaI7F3C0z)v&s!pXmUiRfOcK9H6E2B+x(u%rZoWlThQeMbJ8G4D1A-w*t$qYnVjSgPdLaI7F3C0y
22、)v&s#pXmUiRfNcK9H5E2B+x(u$rZoWkThQeMbJ7G4D1z-w*t!qYmVjSgOdLaI6F3B0y)v%s#pXlUiRfNcK8H5E2A+x(u$rZnWkThPeMbJ7G4C1z-w&t!qYmVjRgOdL9I6F3B0y(v%s#oXlUiQfNbK8H5D2A+x*u$qZnWkShPeMaJ7F4C1z)w&t!pYmVjRgOcL9I6E3B0y(v%r#oXlTiQfNbK8G5D2A-x*u$qZnVkShPdMaJ7F4C0z)w&s!pYmUjRfOcL9H6E3B+y(u%r#oWlTiQeNbK8G5D1A-x*t$qZnVkS
23、gPdMaI7F4C0z)v&s!pXmUjRfOcK9H6E2B+y(u%rZoWlThQeNbJ8G4D1A-w*t$qYnVjSgPdLaI7F3C0z)v&s#pXmUiRfOcK9H5E2B+x(u%rZoWkThQeMbJ8G4D1z-w*t!qYnVjSgOdLaI6F3C0y)v%s#pXlUiRfNcK8H5E2A+x(u$rZnWkThPeMbJ7G4D1z-w&t!qYmVjSgOdL9I6F3B0y)v%s#oXlUiQfNcK8H5D2A+x*u$rZnWkShPeMaJ7G4C1z)w&t!pYmVjRgOcL9I6E3B0y(v%s#oXlTiQfNbK8H5D2
24、A-x*u$qZnWkShPdMaJ7F4C1z)w&s!pYmUjRgOcL9H6E3B+y(v%r#kShPeMaJ7G4C1z)w&t!pYmVjRgOdL9I6E3B0y(v%s#oXlTiQfNbK8H5D2A-x*u$qZnWkShPdMaJ7F4C1z)w&s!pYmUjRgOcL9H6E3B+y(v%r#oWlTiQeNbK8G5D2A-x*t$qZnVkShPdMaI7F4C0z)w&s!pXmUjRfOcL9H6E2B+y(u%r#oWlThQeNbJ8G5D1A-w*t$qYnVkSgPdLaI7F3C0z)v&s!pXmUiRfOcK9H6E2B+x(u%rZoWlTh
25、QeMbJ8G4D1A-w*t!qYnVjSgPdLaI6F3C0y)v&s#pXlUiRfNcK9H5E2A+x(u$rZoWkThPeMbJ7G4D1z-w*t!qYmVjSgOdLaI6F3B0y)v%s#pXlUiQfNcK8H5E2A+x*u$rZnWkThPeMaJ7G4C1z-w&t!pYmVjRgOdL9I6E3B0y(v%s#oXlUiQfNbK8H5D2A+x*u$qZnWkShPeMaJ7F4C1z)w&t!pYmUjRgOcL9I6E3B+y(v%r#oXlTiQeNbK8G5D2A-x*t$qZnVkShPdMaI7F4C0z)w&s!pYmUjRfOcL9H6E3B
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27、jRgOcL9I6E3B0y(v%r#oXlTiQfNbK8G5D2A-x*u$qZnVkShPdMaJ7F4C0z)w&s!pYmUjRfOcL9H6E3B+y(v%r#oWlTiQeNbK8G5D1A-x*t$qZnVkSgPdMaI7F4C0v%r#oXlTiQfNbK8G5D2A-x*u$qZnVkShPdMaJ7F4C0z)w&s!pYmUjRgOcL9H6E3B+y(v%r#oWlTiQeNbK8G5D1A-x*t$qZnVkSgPdMaI7F4C0z)v&s!pXmUjRfOcK9H6E2B+y(u%rZoWlThQeNbJ8G5D1A-w*t$qYnVkSgPdLaI7F3C0
28、z)v&s#pXmUiRfOcK9H5E2B+x(u%rZoWkThQeMbJ8G4D1z-w*t!qYnVjSgOdLaI6F3C0y)v&s#pXlUiRfNcK9H5E2A+x(u$rZoWkThPeMbJ7G4D1z-w&t!qYmVjSgOdL9I6F3B0y)v%s#oXlUiQfNcK8H5D2A+x*u$rZnWkShPeMaJ7G4C1z-w&t!pYmVjRgOdL9I6E3B0y(v%s#oXlTiQfNbK8H5D2A-x*u$qZnWkShPdMaJ7F4C1z)w&s!pYmUjRgOcL9H6E3B+y(v%r#oXlTiQeNbK8G5D2A-x*t$qZnVk
29、ShPdMaI7F4C0z)w&s!pXmUjRfOcL9H6E2B+y(unWkShPdMaJ7F4C1z)w&s!pYmUjRgOcL9I6E3B+y(v%r#oXlTiQeNbK8G5D2A-x*t$qZnVkShPdMaI7F4C0z)w&s!pXmUjRfOcL9H6E2B+y(u%r#oWlThQeNbJ8G5D1A-x*t$qYnVkSgPdMaI7F3C0z)v&s!pXmUiRfOcK9H6E2B+x(u%rZoWlThQeMbJ8G4D1A-w*t!qYnVjSgPdLaI6F3C0y)v&s#pXmUiRfNcK9H5E2B+x(u$rZoWkThQeMbJ7G4D1z-
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