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1、临床基础检验学技术第一章第一章 血液标本采集与处理血液标本采集与处理临床生物化学检验技术 第二章第二章 临床生物化学检测临床生物化学检测方法的选择与评价方法的选择与评价华中科技大学同济医学院华中科技大学同济医学院程黎明程黎明第一节第一节 临床生物化学检测方法的选择临床生物化学检测方法的选择一临床生物化学检测方法的分级检测方法决定性方法参考方法常规方法临床生物化学检测方法的分级临床生物化学检测方法的分级1.决定性方法u定义 n决定性方法（definitivemethod）也称为一级参考方法称为一级参考方法（primary reference method)，是指准确度最高，系统误，是指准确度最高
2、，系统误差最小，经过详细的研究，没有发现产生误差的原因或在差最小，经过详细的研究，没有发现产生误差的原因或在某些方面不够明确的方法。某些方面不够明确的方法。目前仅有少数生化检验项目有决定性方法u用途 n用于发展及评价参考方法，与一级参考物质相互验证临床生物化学检测方法的分级2.参考方法u定义 n参考方法（referencemethod）也称为二级参考方法（secondaryreferencemethod），是指准确度与精密度已经充分证实、干扰因素少、系统误差与重复测定的随机误差相比可以忽略不计、有适当的灵敏度、特异性及较宽的分析范围的分析方法临床生物化学检测方法的分级2.参考方法u用途 n用于
3、评价常规方法的性能，评价其误差大小、干扰因素并决定是否可以被接受；用于鉴定二级参考物质和为质控血清定值；用于商品试剂盒的质量评价临床生物化学检测方法的分级3.常规方法u定义 n常规方法（routinemethod）是指性能指标符合临床或其他目的需要，有足够的精密度、准确度、特异性和适当的分析测量范围，而且经济实用的方法u用途 n用于临床样本常规检验 临床生物化学常规检测方法的选择临床实验室引入新方法的流程临床生物化学常规检测方法的选择临床需求方法及自动分析仪性能要求n探讨检验项目周转时间、临床应用等关键问题n了解临床医生对关键性能指标的要求n了解诊断灵敏度和特异性n新方法 l精密度、正确度及准
4、确度、检测限、分析测量范围和分析特异性等性能指标 n新仪器l移液精密度、携带污染试剂批间变异、检测器的不精密度、第一个结果的报告时间、试剂机上稳定性、检测通量、仪器故障频度、平均维修时间确保患者检测结果临床可接受 确定检测需求临床生物化学常规检测方法的选择考查候选考查候选方法方法材材 料料人人 员员机机 器器候选方法的选择 测测 量量环环 境境方方 法法1.临床生物化学检测方法如何分级？2.临床生物化学检测方法的选择应考虑哪些因素？思考题思考题第二节第二节 临床生物化学检测方法的评临床生物化学检测方法的评价和性能判断价和性能判断监测系统的比对监测系统的比对检测系统的概念u检测系统（testin
5、gsystem）是指完成一个项目检验所涉及的仪器、试剂、校准品、质控品、操作程序、质量控制、保养计划等的组合 u配套检测系统 n整个检测系统所涉及的各个部分由同一厂商或仪器的指定厂商提供并配套使用l特点 检测结果具有溯源性概念检测系统的概念u自建检测系统 n实验室根据自己的意愿自行建立的检测系统，如A制造商的试剂盒、B制造商的校准品、C制造商的分析仪的组合n特点 检测结果不具有溯源性概念检测系统的比对1.制订分析质量目标 尤其是允许总误差2.评价仪器性能 仪器应处于良好状态3.确定对比检测系统 具有溯源性的配套检测系统检测系统比对的实施步骤检测系统的比对4.评价检测系统的分析性能 评价内容至少
6、包括精密度、正确度、可报告范围、分析灵敏度、分析特异性和参考区间等5.比对 同时用两个系统测定同一批临床样品和质控品，样品数量以40到100例为宜，每个样品平行测定2次，被分析物浓度应覆盖可报告范围的上限和下限检测系统比对的实施步骤临床生物化学检测方法的临床生物化学检测方法的评价和性能判断评价和性能判断方法学评价与性能判断的主要内容方法学性能评价方法学性能评价1.精密度2.正确度和准确度3.检测限和分析灵敏度4.分析测量范围和线性5.分析特异性与干扰6.参考区间 质量目标设定与方法学质量目标设定与方法学性能判断性能判断1.基本概念2.质量目标的设定方式3.基于生物学变异的质量目 标设定4.应用
7、实例方法学性能评价方法学性能评价精密度和精密度评价1.概念u精密度(precision) n在规定条件下获得的相互独立的测试结果之间的一致程度。精密度是定性术语，常用低、中、高表示。反映随机误差u重复性（repeatability） n在相同测量条件下，对同一被测量进行连续多次测量所得结果之间的一致程度（批内精密度）u复现性（reproducibility） n改变测量条件后，同一被测量的测量结果之间的一致程度精密度和精密度评价u中间精密度 n实验室内不同操作条件下，采用相同检测方法对同一被测量进行多次重复测量所得结果之间的一致程度l不同操作条件包括不同时间、操作者、校准品批号、试剂批号、仪器
8、等l评价中间精密度时要规定改变和未改变的条件复现性重复性精密度测量条件改变测量条件不变中间精密度精密度和精密度评价2.精密度评价u精密度评价采用重复性试验n精密度确认试验 至少两个浓度水平的样本，每天运行两个分析批(每批至少间隔两小时），每批进行双份重复测定，连续测定20天。至实验结束时，每个浓度水平应至少收集80个数据，分别计算批内不精密度、批间不精密度、日间不精密度及总不精密度2.精密度评价u精密度评价采用重复性试验n精密度验证试验 至少两个浓度水平的样本，每天运行一个分析批，每批进行三次重复测定，连续测定5天。至试验结束时，每个浓度水平应至少收集15个数据，计算批内不精密度和总不精密度精
9、密度和精密度评价2.精密度评价u注意事项n样本在整个实验过程中应保持稳定n校准品、试剂使用同一批号，仪器应处于良好状态n离群值剔除l初始精密度评价 对样本进行20次重复测定，计算标准差和变异系数（此为初始精密度） l正式精密度试验 如果双份重复测定结果的差值（绝对值）超出5.5SD（初始精密度），即判定为离群值并剔除 精密度和精密度评价3.精密度图u精密度图（precisionprofile） n以分析物浓度为横坐标，以SD或CV为纵坐标绘制的一条函数关系曲线 分析物浓度与标准差分析物浓度与标准差/ /变异系数关系图变异系数关系图精密度和精密度评价正确度和准确度评价1.概念u正确度（truen
10、ess） n由大量（或无限次）测量结果得到的平均值与真值之间的一致程度l定性术语，常用低、中、高表示l反映系统误差 1.概念u偏倚（bias） n大量（或无限次）测量结果的平均值与真值之间的差异l用来度量正确度l可用数字定量表示 正确度和准确度评价2.正确度评价 （1）与参考方法进行方法学比对l例如，每日选取8份新鲜患者血清样本，分别用参考方法和待评价的常规方法进行双份平行测定，至少5天，共40份样本。采用回归分析（线性回归或Deming回归）得到两种方法的回归方程，并计算偏倚的置信区间，如果小于预期的可接受范围，则正确度可接受正确度和准确度评价2.正确度评价 （1）与参考方法进行方法学比对l
11、注意事项在确认无漂移和携带污染后，才可进行正确度评价试验试验期间应保证有效的校准及室内质控在控方法学比对试验所选择的样本浓度应尽可能覆盖整个分析测量范围正确度和准确度评价2.正确度评价（2）检测定值标准物l例如，至少选择两个浓度水平的定值标准物，分别在35个不同批次中重复测定2次，计算均值并与给定的参考值进行比较，确定偏倚l定值的标准物质可以是由参考方法定值的新鲜冰冻血清、具有互换性的有证参考物质、厂家提供的正确度确认物、正确度质控品等l注意定值标准物与常规方法的互换性问题正确度和准确度评价2.正确度评价（3）回收试验（recoveryexperiment）l将样本分割，其中一份样本加入已知量
12、的待测物（多为纯品标准液），另一份样本加入等体积溶剂，两份样本同时测定。计算测定结果的差值，即回收量l回收率（recovery） 回收量与“理论值”之比用百分率表示。回收率越接近100%，检测的正确度越高正确度和准确度评价2.正确度评价（3）回收试验（recoveryexperiment）l向样本中加入的待测物纯品标准液，体积不应超过样本总体积的5%10%l需要加入低、中、高不同浓度的待测物，计算平均回收率l注意加样量的准确性正确度和准确度评价3.准确度图a 正确度较高、精密度较差图b 精密度较高、正确度较差图c 精密度和正确度都较高，即准确度较高正确度、精密度和准确度相关关系示意图abcu准
13、确度（accuracy）n单次测量结果与真值的接近程度正确度和准确度评价检测限和分析灵敏度评价 1.概念u空白限（LimitofBlank,LoB) n指测量空白样本时能观察到的最高测量结果u检出限（LimitofDetection,LoD) n指在给定的显著性水平内，可以定性地从样本中检出分析物的最低浓度u定量限（LimitofQuantitation,LoQ) n指满足声明的精密度和/或正确度，在规定的实验条件下能够可靠定量的分析物的最低浓度 几个概念之间的相互关系u多数情况下 LoBLoDLoQn如果检测结果LoB，结果应报告 “未检出”或“浓度LoD”n如果LoB检测结果LoD或LoD
14、检测结果LoQ，结果应报告“检出，浓度LoQ”，即样本中含有分析物，但不能提供可靠的定量结果n如果检测结果LoQ则直接报告检测结果检测限和分析灵敏度评价 2.评价方法uLoBn制备空白样本 不含待测分析物的样本。包括实验室纯水、超纯水、商业化生理盐水、检测系统清洗缓冲液，或经证实不含特定分析物的商业化样本稀释液n在不同实验条件下（不同天数、不同试剂批号等）进行多次重复测定l如果默认I类、II类错误水平为5%（=0.05）LoB为空白样本测定值的第95百分位数 检测限和分析灵敏度评价 2.评价方法uLoDn制备低值样本 具有能够检出的最低分析物浓度的样本。如果LoD已知，可通过患者样本稀释或向空
15、白样本中添加特定分析物的方法获得低值样本。如果LoD未知，需要对低值样本进行系列稀释，获得一系列低值样本检测限和分析灵敏度评价 2.评价方法uLoDn在不同实验条件下（不同天数、不同试剂批号等）进行多次重复测定l如果默认I类、II类错误水平为5%（=0.05）LoD为95%测定值高于LOB的低值样本的浓度（在该浓度下只有5%的测定值被错误判断与空白样本无显著性差异）检测限和分析灵敏度评价 2.评价方法uLoQn预先选择一个靶浓度作为试验LoQn根据该浓度制备多个低值样本n在不同条件下（不同天数、不同试剂批号等）进行重复测定，计算不精密度（变异系数或标准差）、偏倚或总误差等u如果满足既定目标，该
16、浓度即为此检测系统或方法的LoQ检测限和分析灵敏度评价 3.分析灵敏度和功能灵敏度u分析灵敏度（analyticalsensitivity) n指以横坐标为浓度，纵坐标为测量信号的校准曲线的斜率，它反映检测系统或方法辨别微小分析物浓度差异的能力l除了校准曲线的斜率，分析灵敏度还取决于检测系统或方法的精密度，斜率越大、方法的精密度越高，分析灵敏度越高检测限和分析灵敏度评价 3.分析灵敏度和功能灵敏度u功能灵敏度（functionalsensitivity) n指测定结果变异系数符合特定要求时的分析物浓度，可用LoQ取代l如TSH的功能灵敏度，CV20%时第二代 0.10.2mIU/L第三代 0.
17、010.02mIU/L第四代 0.001mIU/L检测限和分析灵敏度评价 分析测量范围和线性 1.概念u分析测量范围（analyticalmeasurementrange） n又称为测量区间或可报告范围，是指在不进行任何稀释、浓缩或其它预处理等情况下，测量程序直接测量样本，测量结果不精密度和偏倚在允许范围内的分析物的浓度（或活性）范围u临床可报告范围（clinicallyreportablerange) n是指对样本进行稀释、浓缩或其他预处理，以扩展直接分析测量下的分析物浓度（或活性）范围分析测量范围和线性 1.概念u线性（linearity）n是指在分析测量范围内，测量值与预期的分析物浓度（
18、或活性）在数学上有明确的直线关系u线性范围（linearrange）n是指测量值与预期的分析物浓度（或活性）呈直线关系的范围分析测量范围和线性 1.概念u线性范围、可报告范围和分析测量范围是不同组织或专业团体对检测系统或方法在一定范围内给出可靠检测结果能力的描述，表述方式不同但内在含义一致分析测量范围和线性 2.评价方法u线性评价是将样本进行系列稀释，或使用（具有已知值/已知关系的）线性评价材料，对测定值与指定值或稀释值进行回归分析，评价该方法能准确报告的最低、最高的浓度范围，即建立定量测定方法的分析测量范围（线性范围）u目测法 n将样本进行系列稀释后目测检测结果和预期值之间是否呈线性关系分析
19、测量范围和线性 2.评价方法u多项式回归方法 n将线性评价测定的数据分别通过一次方、二次方及三次方进行拟合，得到一次、二次、三次多项式，判断各级多项式的系数是否具有统计学意义，得到最适多项式 多项式回归方法分析测量范围和线性 2.评价方法u评价标准 n如果数据拟合的最佳形式为直线（一次多项式），或数据拟合的最佳形式并非直线（二次或三次多项式），但线性偏离小于具有临床意义的临界值（如总允许误差），并且数据有较高的精密度，则认为该方法（在给定范围内）具有临床可接受的线性关系分析测量范围和线性 2.评价方法u线性偏离（deviationfromlinearity，DL）n也称非线性程度，指某组数据被
20、评价为非线性时，在相应浓度处最适多项式（二次或三次）与一次多项式（线性）拟合模型的差值分析特异性与干扰评价1.概念u分析特异性（analyticalspecificity） n指检测系统或方法不受样本基质中存在的潜在干扰物或干扰因素(如脂血、溶血、胆红素、抗体、分析物的代谢物或降解产物、抗凝剂、防腐剂等)的影响，测定目标分析物浓度的能力 1.概念u干扰（interference） n指因样品特性或其他成分影响，分析物浓度出现有临床意义的偏差u干扰是引起临床实验室检验结果误差的主要原因之一（其他原因包括偏倚和不精密度） 分析特异性与干扰评价2.评价方法u评价方案n干扰筛选l配对差异试验 取不同浓
21、度的患者样本，将样本分割成测试组和对照组。向测试组样本中分别加入不同类型的潜在干扰物（干扰物浓度通常为临床样本中可出现的最高浓度），对照组中加入等体积不含干扰物的溶剂。分别测定分析物浓度，确定差异有统计学意义的干扰物分析特异性与干扰评价2.评价方法u评价方案n干扰筛选l度干扰物的样本和不含干扰物的样本按比例混合（样本中分析物浓度相同），制备一系列含有不同浓度干扰物的样本（一般5个浓度）。分别测定分析物浓度，通过回归分析明确干扰物剂量效应，确定有临床意义的干扰物浓度水平分析特异性与干扰评价2.评价方法u评价方案n利用患者样本进行偏倚分析l选择2组患者样本，一组可能存在潜在干扰物（测试组样本），一
22、组无干扰物（对照组样本），每组约2040个样本。分别用待评价方法与参考方法或比较方法（具有低干扰性、高特异性）进行重复测定，比较两种方法测定结果之间的差异l如果测试组有差异，对照组无差异，提示测试组样本中存在潜在干扰物。如两组均无显著差异说明不存在干扰分析特异性与干扰评价2.评价方法 u评价标准 n与干扰标准进行比较u干扰标准（interferencecriteria）n是指在某分析物浓度水平，相对于真值可接受的最大干扰结果（最大允许偏差），该偏差可能影响医生的医疗决定n干扰标准的建立可以基于生物学变异、分析变异或医生的临床经验 分析特异性与干扰评价3.干扰的处理收集资料告知医生干扰可能导致不
23、可靠的结果尽可能使用分析特异性高的方法分析特异性与干扰评价参考区间1.概念建立参考区间的流程建立参考区间的流程从参考个体组成的参考人群中，选择一定数量的参考个体组成参考样本组通过测定某个指标获得该组所有个体的检测结果（即参考值 ）经过统计处理获得参考值的分布状态（正态或偏态）并计算参考限根据参考限确定参考区间 参考区间1.概念u参考限 n通常设定为包含中间95%的参考值。大多数项目以参考值分布的2.5%为下限，97.5%为上限；如果只有单侧参考限具有临床意义，可以确定5%或95%为参考限u参考区间（reference interval）u即参考上限和参考下限之间的参考值分布范围。对于单侧参考限
24、有临床意义的项目，如参考上限，则参考区间为0参考上限参考区间1.概念u参考个体（referenceindividual）n指依据临床对某个项目的使用要求确定入选标准，选择参与实验的个体u参考个体和参考区间可以与健康相关联，以区分个体的健康状况；也可以与其他生理或病理状况相关联，以反映人体所处的不同生理或病理过程参考区间1.概念u临床实验室所使用的参考区间通常是基于“健康人”的参考个体，如果检测结果在参考区间内视为“正常”，超过则视为“异常”参考区间2.评价方法u参考区间受性别、年龄、环境、生活方式和种族等因素影响，理想情况下，临床实验室应建立符合本地人群特征的参考区间u实际工作中，大多数临床实
25、验室采取参考区间的转移或验证（见第三章）u每个定量检测结果均应附上合适的参考区间，超出参考区间的异常结果，报告单上应当有清楚的标识参考区间2.评价方法u如果人群分组（如年龄、性别分组）对于建立参考区间有明确的意义，应给出不同组别的参考区间u对于存在国际或国内公认医学决定限的检验项目，报告决定限比报告参考区间更合适。例如，血脂合适水平、边缘升高、升高质量目标设定与方法学性能判断质量目标设定与方法学性能判断基本概念u误差（error） n指测量结果对于真值（或可接受参考值）的偏离u随机误差（randomerror) n测量结果与重复性条件下对同一被测量进行无限多次测量所得结果的平均值之差。随机误差
26、由不精密度反映，用标准差或变异系数表示基本概念基本概念u系统误差（systematicerror）n在重复性条件下，对同一被测量无限多次测量所得结果的平均值与被测量的真值（或可接受参考值）之差。系统误差由不正确度反映，用偏倚表示基本概念基本概念u总误差（totalerror，TE） n随机误差和系统误差的总和l计算公式 TE=B+ZCVl90%置信水平 Z=1.65l95%置信水平 Z=1.96基本概念基本概念u质量目标（qualitygoal） n又称质量规范（qualityspecifications）、质量标准（qualitystandards）、分析目标（analyticalgoals
27、）、分析性能目标（analyticalperformancegoals）是指帮助临床医学决策所要求达到的质量水平基本概念基本概念临床检验主要分析质量目标u允许不精密度u允许偏倚u允许总误差u允许总误差最重要，代表从临床使用角度所能接受的分析误差大小质量目标的设定方式评估分析性能对具体医学决定的影响评估分析性能对一般医学决定的影响专业建议或指南提出国家法规或室间质量评价组织提出根据当前技术水平设定与临床需要相关的密切程度下降质量目标的设定方式质量目标的设定方式基于生物学变异的质量目标设定允许不精密度的设定u检验指标如用于疾病监测，检验结果的总变异包含了分析前变异、分析变异（CVA）和个体内生物学
28、变异（CVI）u忽略分析前变异，检验结果的总变异为(CVA2+CVI2)1/2n分析变异CVA0.5CVI，检验结果总变异的增加不超过12%n分析变异CVA0.25CVI，检验结果总变异的增加不超过3%n分析变异CVA0.75CVI，检验结果总变异的增加不超过25%基于生物学变异的质量目标设定允许不精密度的设定u由此制定允许不精密度的最低、适当和最佳性能目标分别是0.75CVI、0.5CVI和0.25CVI基于生物学变异的质量目标设定允许偏倚的设定u检验指标如用于疾病诊断，需要考虑人群参考区间的变异u参考区间的变异主要由人群生物学变异决定，即(CVI2+CVG2)1/2u分析偏倚（BA）的存在
29、会引起人群的错误划分基于生物学变异的质量目标设定允许偏倚的设定偏倚对参考区间上限和下限的影响基于生物学变异的质量目标设定忽略分析变异 u分析偏倚（BA）1/4人群生物学变异，超出参考区间的人群增加不超过16%u分析偏倚（BA）1/8人群生物学变异，超出参考区间的人群增加不超过2%u分析偏倚（BA）3/8人群生物学变异，超出参考区间的人群增加不超过34%基于生物学变异的质量目标设定忽略分析变异 u由此制定允许偏倚的最低、适当和最佳性能目标分别是n0.375(CVI2+CVG2)1/2n0.25(CVI2+CVG2)1/2n0.125(CVI2+CVG2)1/2偏倚与组生物学变异的比值基于生物学变
30、异的质量目标设定允许总误差的设定u根据TE计算公式得到允许总误差的最低、适当和最佳性能目标n0.75CVI+1.650.375(CVI2+CVG2)1/2n0.5CVI+1.650.25(CVI2+CVG2)1/2n0.25CVI+1.650.125(CVI2+CVG2)1/2基于生物学变异的分析质量目标数据库 应用实例实例u以乳酸脱氢酶（LD）为例介绍临床生物化学检验项目分析质量目标的设定1.什么是方法学性能评价？包括哪些内容？2.简述精密度的概念及其评价方法3.简述正确度的概念及其评价方法4.简述检测限的概念及其评价方法5.简述分析测量范围的概念及线性评价方法6.简述分析干扰及其评价方法7
31、.何为质量目标？如何设定质量目标？思考题思考题第三节第三节 校准和溯源性校准和溯源性基本概念1.校准u概念n在规定条件下，为确定测量仪器或测量系统所指示的量值，或实物量具(包括参考物质等)所代表的值，与对应的由标准所复现的量值之间关系的一组操作u临床检验中的校准基本概念1.校准u临床检验中的校准n在规定条件下，通过测定已知浓度/活性的分析物（即校准品/标准品），建立试剂/仪器系统与分析物浓度/活性之间关系的过程 l校准函数l测量函数基本概念2.溯源性u概念n指测量结果或标准量值的属性，它使测量结果或标准量值通过一条不间断的比较链与给定的参考标准联系起来基本概念2.溯源性u解读n“不间断的比较链
32、”又称溯源链，在临床检验中指计量学级别由低到高的、交替出现的测量程序和校准物，溯源链中的每一步比较都有给定的不确定度n“给定的参考标准”通常是国家标准或国际标准，可理解为参考物质或参考测量程序n溯源链自上而下各环节的溯源性逐渐降低，而不确定度则逐渐增加，应尽量减少中间环节，使溯源链尽可能短基本概念l国际单位制（SI）单位（基本或导出单位）国际通用，是溯源链最高等级l仅2530种化学定义明确的小分子化合物溯源至SI单位 3.溯源性类型 基本概念l 有国际约定的参考测量程序和国际约定的参考物质l 有国际约定的参考测量程序，但无参考物质l 有国际约定的参考物质及定值方案，但无参考测量程序l 既无国际
33、约定的参考测量程序也无参考物质不能溯源至SI单位3.溯源性类型 参考测量系统1.参考物质u概念n是一类充分均匀，并具有一个（或多个）确定的特性值的材料或物质，用以校准测量系统、评价测量程序或为材料赋值u分类n校准物是在校准函数中其值被用作自变量的参考物质（校准测量系统或为材料赋值）n正确度质控物是用于评价一种测量系统的测量偏差的参考物质 参考测量系统1.参考物质u一种参考物质在一个测量程序或测量系统中既可以用作校准物，也可以用作正确度质控物，但不可同时用作校准物和正确度质控物 参考测量系统1.参考物质u分级u一级参考物质（primaryreferencematerial）是具有最高计量学特性的
34、参考物质，是测量单位的体现体，具有最小测量不确定度。它可由一级参考测量程序直接定值，也可通过可靠的杂质分析间接定值。一级参考物质一般是高度纯化的分析物，用于校准二级参考测量程序参考测量系统1.参考物质u分级u二级参考物质（secondaryreferencematerial）由一种或多种二级参考测量程序定值，一般具有与实际样品相同或相似的基质，主要用于量值传递u有证参考物质（certified reference material）是指附有证书的参考物质，其一种或多种特性值由建立了溯源性的程序确定，使之可溯源到准确复现的表示该特性值的计量单位 参考测量系统2.参考测量程序 u概念n是经过充分研
35、究的测量程序，给出的值的测量不确定度适合其预期用途，尤其是评价测量相同量的其他测量程序的正确度和描述参考物质特性的用途参考测量系统2. 参考测量程序 u分级n一级参考测量程序（primaryreferencemeasurementprocedure）是具有最高计量学特性的参考测量程序，其操作能够被充分描述和理解，可用国际单位制单位表示完整的不确定度，结果无需参考相同量的测量标准而被接受l测量原理 同位素稀释/质谱法（ID/MS）、库仑法、重量法、滴定法和依数性测定（如冰点下降法）等参考测量系统2. 参考测量程序 u分级n二级参考测量程序（secondaryreferencemeasuremen
36、tprocedure）是经充分论证，由一或多个一级参考物质校准的测量程序，其不确定度能满足特定要求，能用于低一级测量程序评价和参考物质定值l适合复杂生物样品分析l“参考方法”参考测量系统3.参考测量实验室u参考测量实验简称参考实验室，是运行参考测量程序、提供有给定不确定度的测量结果的实验室u参考实验室有很高的技术和管理要求，需要通过特定的程序才能成为参考实验室u对于同一检验项目，参考实验室形成网络并定期进行测量比对，以保证参考测量的有效性溯源链的结构与工作原理 1.ISO/DIS17511溯源链 计量机构参考实验室制造商终末用户溯源链的结构与工作原理 2.国家标准与技术研究所(NIST)溯源链
37、 参考物质的互换性和基质效应 1.参考物质的互换性 u概念 指用常规方法和参考方法测量参考物质所得结果的数字关系，与上述方法测量实际临床样品所得结果的数字关系的一致程度，直接影响量值传递的正确性参考物质的互换性和基质效应 2.产生参考物质互换性问题的原因 u分析物的存在形式不同n制备参考物质时使用动物来源的样本或添加外源性分析物n互换性随着分析物浓度增大而变差参考物质的互换性和基质效应 2.产生参考物质互换性问题的原因 u基质效应 n指被测量以外的某种样品特性（简称影响量）对测量及被测量的值的影响l分析干扰 影响量本身不产生测量信号，但它增大或减小被测量的测量值l测量过程的非特异性 影响量本身
38、产生测量信号参考物质的互换性和基质效应 产生参考物质互换性问题 参考物质互换性问题的处理 l选择基质与实际样品尽量接近的参考物l选择分析特异性较好、对基质不过分敏感的常规测量方法l进行量值溯源的确认，以判断参考物质的互换性是否影响量值传递的正确性l参考物质的互换性不可接受时，需进行修正或选择其他参考物质 分析物的存在形式不同 u参考物质的加工处理u参考方法与常规方法的检测原理不同 参考物质的互换性和基质效应基质效应 思考题 思考题u何为溯源性？简述溯源链的结构及工作原理 第四节第四节 测量不确定度测量不确定度基本概念 u测量不确定度 n是一个与测量结果有关的非负参数，能够合理地表征赋予被测量量
39、值的分散性u标准不确定度分量 n测量结果的不确定度往往有多个来源，对每个不确定度来源评定的标准差，称为标准不确定度分量概念基本概念 u合成标准不确定度 n当测量结果是由若干个输入量求得时，测量结果的标准不确定度由各输入量的标准不确定度用方差和/或协方差方法合并得到，称为合成标准不确定度u扩展不确定度 n又称“总不确定度”，是确定测量结果区间的量，合理赋予被测量值在一定概率下包含于此区间 概念基本概念 测量不确定度的评定 uA类评定 n对在规定测量条件下测得的量值用统计分析的方法进行的测量不确定度分量的评定，其结果可以用标准差表征。该类评定需要在规定条件下进行多次重复性或复现性试验，从而得到一组
40、或多组观测列并对观测列进行统计分析，其结果较客观、可信基本概念 测量不确定度的评定 uB类评定 n并非由统计方法评定，而是根据经验或其他信息假设的概率分布估算的标准不确定度分量，也可用标准差表征。该类评定需要有可靠的数据来源，或有充分的经验、专业知识以及理论分析能力，方法简单，但主观性、经验性较强uA类评定不可用时，可考虑采用B类评定u无论A类评定还是B类评定都应注意不能遗漏分量，也不能重复计算分量测量不确定度的评定方法 年份年份发布组织发布组织文件或指南文件或指南19957个国际组织测量不确定度表达指南(简称GUM)2004澳大利亚临床化学家协会（AACB）定量医学检测中的测量不确定度实验室
41、应用指南2012美国临床实验室标准化研究院（CLSI）检验医学测量不确定度的表达（C51-A）2012中国合格评定国家认可委员会（CNAS）医学实验室测量不确定度的评定与表达 （CNAS-TRL-001）测量不确定度的评定方法充分考虑临床实验室检验结果的各种不确定度来源充分考虑临床实验室检验结果的各种不确定度来源 分析后因素分析中因素分析前因素测量不确定度“自下而上”的评定方法“自下而上”的评定方法 “自下而上”评定不确定度步骤“自下而上”的评定方法对各种来源的不确定度进行评定，以标准差表示计算合成标准不确定度和扩展不确定度 识别不确定度的来源，列出完整清单，确定不确定度分量的合成方式 规定被
42、测量，说明测量要求，包括被测量以及被测量所依赖的输入量的关系，建立测量模型 “自下而上”的评定方法 “自下而上”方法的评价u优点 n能够全面了解影响检测质量的潜在因素，发现重要的测量不确定度来源并进行干预和控制，得到准确、可靠的检验结果，在改进实验室检测技术及检测质量方面具有不可替代的优势“自下而上”的评定方法 “自下而上”方法的评价u存在的主要问题n临床实验室分析前因素常常复杂而难以估计，评定过程繁琐，工作量大，对实验室条件和技术人员要求高n不同实验室对上述不确定度分量的识别与评定结果很难一致，使实验室间缺少可比性，影响临床医生对检验结果测量不确定度的正确理解和使用“自上而下”的评定方法特定
43、方案试验数据方法学验证试验数据质控数据数据来源u主要从实验室内复现性和偏移两个方面评定不确定度“自上而下”的评定方法“自上而下”评定不确定度步骤评估偏移引入的标准不确定度 评估实验室内测量复现性引入的标准不确定度 计算合成标准不确定度及扩展不确定度 “自上而下”的评定方法确定被测量“自上而下”的评定方法 “自上而下”方法的评价u优点 n无需了解测量过程中的每个不确定度来源，经济、实用、可行性好u存在的问题 n强调分析测量过程本身的测量不确定度，未充分考虑分析前和分析后因素对检测结果测量不确定度的影响u如果对“自上而下”方法评定的测量不确定度有质疑时，应考虑用“自下而上”方法复核评定实例u以乳酸
44、脱氢酶为例介绍“自上而下”方法（基于室内质控数据及能力比对数据）评定测量不确定度评定实例思考题 u何为测量不确定度？如何采用“自上而下”方法评定测量不确定度？ 思考题 参考文献 uCLSI.Methodcomparisonandbiasestimationusingpatientsamples;approvedguideline,2ndedition.CLSIdocumentEP09-A2IR.Wayne,Pa:ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute;2010uCLSI.Evaluationofthelinearityofquantitativemeas
45、urementprocedures:astatisticalapproach;approvedguideline.CLSIdocumentEP06-A.Wayne,Pa:ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute;2003美国临床实验室标准化研究院（CLSI）发布的方法学性能评价指南参考文献 uCLSI.Evaluationofprecisionperformanceofquantitativemeasurementmethods;approvedguideline,2ndedition.CLSIdocumentEP05-A2.Wayne,Pa:Clinic
46、alandLaboratoryStandardsInstitute;2004uCLSI.Interferencetestinginclinicalchemistry;approvedguideline,2ndedition.CLSIdocumentEP07-A2.Wayne,Pa:ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute;2005美国临床实验室标准化研究院（CLSI）发布的方法学性能评价指南参考文献 uCLSI.Preliminaryevaluationofquantitativeclinicallaboratorymeasurementprocedure
47、s;approvedguideline,2ndedition.CLSIdocumentEP10-A3.Wayne,Pa:ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute;2006uCLSI.Userprotocolforevaluationofqualitativetestperformance;approvedguideline,2ndedition.CLSIdocumentEP12-A2.Wayne,Pa:ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute;2008美国临床实验室标准化研究院（CLSI）发布的方法学性能评价指南参考文
48、献 uCLSI.Characterizationandqualificationofcommutablereferencematerialsforlaboratorymedicine;proposedguideline.CLSIdocumentC53-A.Wayne,Pa:ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute;2010uCLSI.Userverificationofperformanceforprecisionandtrueness;approvedguideline,2ndedition.CLSIdocumentEP15-A2.Wayne,Pa:Cl
49、inicalandLaboratoryStandardsInstitute;2006美国临床实验室标准化研究院（CLSI）发布的方法学性能评价指南参考文献 uCLSI.Protocolsfordeterminationoflimitsofdetectionandlimitsofquantitation;approvedguideline.CLSIdocumentEP17-A.Wayne,Pa:ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute;2004uCLSI.Defining,establishing,andverifyingreferenceintervals
50、intheclinicallaboratory;approvedguideline,3rdedition.CLSIdocumentC28-A3c.Wayne,Pa:ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute;2010 美国临床实验室标准化研究院（CLSI）发布的方法学性能评价指南参考文献 国家发布的性能评价行业指南uWS/T 420-2013 临床实验室对商品定量试剂盒分析性能的验证 uWS/T 408-2012临床化学设备线性评价指南 uWS/T 416-2013 干扰实验指南 参考文献 ISO发布的与溯源性有关的文件uInternationalOrgan
51、izationforStandardization(ISO).Invitrodiagnosticmedicaldevices.Measurementofquantitiesinsamplesofbiologicalorigin.Requirementsforcontentandpresentationofreferencemeasurementprocedures(15193).Geneva:ISO;2009uInternationalOrganizationforStandardization(ISO).Invitrodiagnosticmedicaldevices.Measuremento
52、fquantitiesinsamplesofbiologicalorigin.Requirementsforcertifiedreferencematerialsandthecontentofsupportingdocumentation(15194).Geneva:ISO;2009 参考文献 ISO发布的与溯源性有关的文件uInternationalOrganizationforStandardization(ISO).Invitrodiagnosticmedicaldevices.Measurementofquantitiesinbiologicalsamples.Metrological
53、traceabilityofvaluesassignedtocalibratorsandcontrolmaterials(17511).Geneva:ISO;2003 参考文献 测量不确定度评定u中国合格评定国家认可委员会（CNAS）u化学分析中不确定度的评估指南（CNAS-CL06:2006）u 测量不确定度要求的实施指南（CNAS-GL05:2011）u医学实验室-测量不确定度的评定与表达（CNAS-TRL-001:2012）u澳大利亚临床化学家协会 定量医学检测中的测量不确定度实验室应用指南参考文献 测量不确定度评定u美国临床实验室标准化研究院 检验医学测量不确定度的表达（CLSIC51-A）uInternationalOrganizationforStandardization(ISO).Guide98-1.Uncertaintyofmeasurement.Part1.Introductiontotheexpressionofuncertaintyinmeasurement.Geneva:ISO;2009Thank you !
