紫外可见分光度法课件

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1、紫外-可见分光光度法讲议l河南省食品药品检验所l2009年8月紫外-可见分光光度法讲议附录附录 分光光度法分光光度法l分光光度法收载于分光光度法收载于05版药典二部附录版药典二部附录22页。是页。是通过测定被测物质在特定波长范围内的通过测定被测物质在特定波长范围内的吸光度吸光度或或发光强度发光强度，对该物质进行，对该物质进行定量定量和和定性定性分析的分析的方法。方法。l常用的波长范围常用的波长范围 ： （1）200400nm的的紫外光区紫外光区 (2) 400760nm的的可见光区可见光区l(3) 波数为波数为4000400cm-1的的红外光区，红外光区，l 也即是也即是中红外光区（中红外光区

2、（2.5 25m ）。）。附录 分光光度法分光光度法收载于05版药典二部附录22页。药典收载方法药典收载方法l附录附录A紫外紫外-可见分光光度法可见分光光度法l附录附录C红外分光光度法红外分光光度法l附录附录D原子吸收分光光度法原子吸收分光光度法l附录附录E荧光分析法荧光分析法l附录附录F火焰光度法火焰光度法药典收载方法附录A紫外-可见分光光度法吸收光谱：吸收光谱：紫外光谱紫外光谱l紫外光谱紫外光谱是物质受到光辐射后，是物质受到光辐射后，分子轨道上的电子能级跃迁产生分子轨道上的电子能级跃迁产生的吸收光谱，又称的吸收光谱，又称电子光谱电子光谱。l光源为氘灯和钨灯光源为氘灯和钨灯.吸收光谱：紫外光

3、谱紫外光谱是物质受到光辐射后，分子轨道上的电吸收光谱：吸收光谱：红外光谱红外光谱l红外光谱红外光谱是化合物受到红外是化合物受到红外辐射后引起分子振动转动能辐射后引起分子振动转动能级跃迁产生的光谱，又称级跃迁产生的光谱，又称分分子光谱或振转光谱子光谱或振转光谱。l光源为能斯特灯。光源为能斯特灯。吸收光谱：红外光谱红外光谱是化合物受到红外辐射后引起分子振动吸收光谱：吸收光谱：原子吸收光谱原子吸收光谱l原子吸收光谱原子吸收光谱是光辐射于原子时是光辐射于原子时原子中的电子从基态跃迁到激发原子中的电子从基态跃迁到激发态引起的吸收光谱。态引起的吸收光谱。l光源为空心阴极灯。每种元素都光源为空心阴极灯。每种

4、元素都有各自的空心阴极灯，因此有各自的空心阴极灯，因此原子原子吸收光谱是锐线光谱。吸收光谱是锐线光谱。吸收光谱：原子吸收光谱原子吸收光谱是光辐射于原子时原子中的电发射光谱：发射光谱：荧光光谱荧光光谱l荧光荧光 是是某些物质受到紫外光或可见光照某些物质受到紫外光或可见光照射激发后极短时间发出较照射波长长的射激发后极短时间发出较照射波长长的光，而当照射光源停止照射时，这种光光，而当照射光源停止照射时，这种光线也随之消失。如薄层色谱法显色时采线也随之消失。如薄层色谱法显色时采用在用在254nm或或365nm紫外光灯显色。紫外光灯显色。l荧光光谱包括激发光谱和发射光谱。荧光光谱包括激发光谱和发射光谱。

5、发射光谱：荧光光谱荧光 是某些物质受到紫外光或可见光照射激发发射光谱：发射光谱：火焰光度法火焰光度法l火焰光度法火焰光度法是某些碱金属或碱土是某些碱金属或碱土金属元素的供试品溶液用喷雾装金属元素的供试品溶液用喷雾装置以气溶胶形式引入火焰光源中，置以气溶胶形式引入火焰光源中，靠火焰的热能将供试品元素原子靠火焰的热能将供试品元素原子化并激发它们的特征光谱。化并激发它们的特征光谱。发射光谱：火焰光度法火焰光度法是某些碱金属或碱土金属元素的供常用分析仪器常用分析仪器l常用的仪器为：常用的仪器为：l紫外分光光度计、可见分光光度计紫外分光光度计、可见分光光度计(或比色计或比色计)l红外分光光度计红外分光光

6、度计l原子吸收分光光度计原子吸收分光光度计l荧光分光光度计荧光分光光度计l火焰光度计（火焰光度计（ICP）常用分析仪器常用的仪器为：2000版与版与05版区别版区别l附录附录A紫外分光紫外分光光度法光度法l附录附录B比色法比色法l附录附录A紫外紫外-可可见分光光度法见分光光度法l照照分光光度法分光光度法，在，在波长处测定波长处测定吸吸收度收度l照照紫外紫外-可见分光可见分光光度法光度法，在，在波波长处测定长处测定吸光度吸光度2000版与05版区别附录A紫外分光光度法附录A紫外-可第一节 紫外-可见分光光度法定义：研究物质在紫外-可见光光区的分子吸收光谱的分析方法称为紫外-可见分光光度法。紫外-

7、可见分光光度法是通过被测物质在紫外-可见光区的特定波长处，或一定波长范围内光的吸收，对该物质进行定性和定量分析的方法。适用范围：鉴别、检查和含量测定。特点：简便、快速、专属性强、灵敏度高第一节 紫外-可见分光光度法定义：研究物质在紫外-可见光光第一节 紫外-可见分光光度法l物质对紫外辐射的吸收是由于分子中原子的外物质对紫外辐射的吸收是由于分子中原子的外层电子跃迁所产生，因此，紫外吸收主要取决层电子跃迁所产生，因此，紫外吸收主要取决于分子的电子结构，故紫外光谱又称电子光谱。于分子的电子结构，故紫外光谱又称电子光谱。有机化合物分子结构中如含有共轭体系、芳香有机化合物分子结构中如含有共轭体系、芳香环

8、等发色基团，均可在环等发色基团，均可在紫外区紫外区（200400nm）或）或可见区可见区（400850nm）产生吸收。）产生吸收。l通常使用的紫外通常使用的紫外-可见分光光度计的工作波长范可见分光光度计的工作波长范围为围为190900nm。第一节 紫外-可见分光光度法物质对紫外辐射的吸收是由于分子第二节 光吸收基本定律和吸收系数1.光吸收基本定律： 比尔郎伯（BeerLambert）定律为光吸收基本定律，是分光光度分析的理论基础。 Lambert于1730年提出了光强度与吸收介质厚度的关系。1852年Beer提出了光强度与吸收介质中吸光物质浓度之间的关系。第二节 光吸收基本定律和吸收系数1.光

9、吸收基本定律：透光率： 单色光通过一物质的溶液时透过光的强度（I）与入射光的强度（I0)之比称为透光率或透射比（T）。 T I I0吸收度： 透光率的负对数称为吸收度或光密度。 A=log1/T=logT透光率：郎伯（Lambert）定律: 当溶液浓度不变时，吸收度与溶液的液层厚度成正比。比尔（Beer）定律： 当溶液液层厚度不变时，吸收度与溶液的浓度成正比。郎伯（Lambert）定律:郎伯比尔（Lambert Beer ）定律: 单色光通过一物质的溶液时，如果入射光的强度不变，溶液吸收度（A）与溶液浓度（C）和液层厚度（L）成正比。 A=log1/T=ECL 式中E为吸收系数郎伯比尔（Lam

10、bert Beer ）定律:2. ：吸收系数吸收系数 定义：吸光物质在单位浓度和单位液定义：吸光物质在单位浓度和单位液层厚度时的吸光度。层厚度时的吸光度。 表示方法：表示方法：（1）百分吸收系数百分吸收系数（E）：）：以以 表示。表示。 E=A/C(%)L(cm)中国药典规定的吸收系数即为中国药典规定的吸收系数即为 。在用吸收系数法计算含量时，在用吸收系数法计算含量时， 通常要通常要大于大于1001%E1cm1%E1cm1%E1cm2. ：吸收系数1%E1cm1%E1cm1%E1cm（2）摩尔吸收系数摩尔吸收系数（）：）： 当当溶液的浓度（溶液的浓度（C）为为1mol/L,光路长光路长度（度（

11、L）为为1cm时，相应的吸光度为摩尔吸时，相应的吸光度为摩尔吸收系数收系数，以，以表示。表示。 =A/C(mol/L)L(cm)和和E的关系是：的关系是： = 分子量分子量/10 = 10/分子量分子量1%E1cm1%E1cm（2）摩尔吸收系数（）：1%E1cm1%E1cm（2）摩尔吸收系数（）： 当溶液的浓度（C）为1mol/L,光路长度（L）为1cm时，相应的吸收系数为摩尔吸收系数，以表示。 =A/C(mol/L)L(cm)和E的关系是： =E分子量/10 E= 10/分子量（2）摩尔吸收系数（）：第三节.分光光度计组成基本原理框图：光 源单色器吸收池检测器讯号处理及显示器第三节.分光光度

12、计组成基本原理框图：光 源单色器吸收池检测（一（一.）光源）光源 为了满足紫外为了满足紫外-可见区全波长范围的测定，可见区全波长范围的测定，仪器备有两种光源。仪器备有两种光源。 可见光区，常用钨灯做为光源，可使用的范可见光区，常用钨灯做为光源，可使用的范围在围在340 2500nm。紫外光区，常用氢灯或氘灯做为光源。可使紫外光区，常用氢灯或氘灯做为光源。可使用的范围在用的范围在160 375 nm。 仪器必须配有稳压装置。仪器必须配有稳压装置。（一.）光源 为了满足紫外-可见区全波长范（二.）单色器 单色器是能从光源辐射的复合光中分出单单色器是能从光源辐射的复合光中分出单色光的光学装置，其主要

13、功能：产生光谱纯色光的光学装置，其主要功能：产生光谱纯度高的波长且波长在紫外可见区域内任意可度高的波长且波长在紫外可见区域内任意可调。调。 能产生单色光的色散元件主要是能产生单色光的色散元件主要是: 棱镜棱镜和和光栅。光栅。 双光束仪器：多用光栅为色散元件。双光束仪器：多用光栅为色散元件。（二.）单色器 单色器是能从光源辐射的复（三.）吸收池： 吸收池用于盛放分析试样，一般有石英和玻璃材料两种。为减少光的损失，吸为减少光的损失，吸收池的光学面必须完全垂直于光束方向收池的光学面必须完全垂直于光束方向。 在高精度的分析测定中（紫外区尤其重要），吸收池要挑选配对。因为吸收池材料本身的吸光特征以及吸收

14、池的光程长度的精度等对分析结果都有影响。（三.）吸收池： 玻璃吸收池玻璃吸收池因为能吸收紫外光，故只因为能吸收紫外光，故只能用于能用于320nm以上以上的的可见光区可见光区。石英吸收池石英吸收池因不吸收紫外光而常用因不吸收紫外光而常用于于30nm以以下下的的紫外光区紫外光区，但也可用于，但也可用于可见光区可见光区。 最常用的光路长度为最常用的光路长度为: 1cm的吸收池。的吸收池。 玻璃吸收池因为能吸收紫外光，故只能用于320nm以上的吸收池吸收池吸收池岛津岛津UV-2501PC紫外分光光度计紫外分光光度计样品室内部图样品室内部图岛津UV-2501PC紫外分光光度计样品室内部图（四（四.）检测

15、器检测器： 检测器的功能是检测信号、测量检测器的功能是检测信号、测量单色光透过溶液后光强度变化，是将单色光透过溶液后光强度变化，是将光信号转换成电信号的一种装置。光信号转换成电信号的一种装置。 检测器有检测器有光电管光电管、光电倍增管光电倍增管和和光敏二极管阵列光敏二极管阵列三种。三种。（四.）检测器：上分751紫外可见分光光度计上分751紫外可见分光光度计岛津UV-2501PC紫外分光光度计岛津UV-2501PC紫外分光光度计岛津岛津UV-2501PC紫外分光光度计紫外分光光度计工作站工作站岛津UV-2501PC紫外分光光度计工作站Unicam UV340紫外分光光度计紫外分光光度计Unic

16、am UV340紫外分光光度计Lamda35UV/VIS分光光度计分光光度计Lamda35UV/VIS分光光度计紫外可见分光光度计的校正 波长校正用汞灯、氘灯、钬玻璃波长校正用汞灯、氘灯、钬玻璃l吸光度准确度用重铬酸钾的硫酸溶液吸光度准确度用重铬酸钾的硫酸溶液l杂散光检查杂散光检查1%碘化钠溶液、碘化钠溶液、5%亚硝亚硝酸钠溶液酸钠溶液紫外可见分光光度计的校正 波长校正用汞灯、氘灯、钬第四节 样品测定操作方法一.吸收系数测定（性状项下）: 按各该品种项下规定的方法配制供试品溶液，在规定的波长测定其吸收度，并计算吸收系数，应符合规定范围。原料药原料药经常使用，测定时应使用经常使用，测定时应使用干

17、燥品或无水物。干燥品或无水物。第四节 样品测定操作方法一.吸收系数测定（性状项下）:l 例如：例如： 罗通定罗通定l【性状性状】吸收系数吸收系数 取本品，精密称定，加取本品，精密称定，加0.5%硫硫酸溶液溶解并稀释制成每酸溶液溶解并稀释制成每1ml中约含中约含30ug的溶液，的溶液，照紫外照紫外-可见分光光度法，在可见分光光度法，在281nm的波长处测定吸的波长处测定吸光度，吸收系数为光度，吸收系数为150160。l 30.01mg100ml 550ml 浓度为浓度为30.01ug/ml E=A / C C为为100ml溶液中所含被测物质的重量溶液中所含被测物质的重量（按干燥品或无水物计算按干

18、燥品或无水物计算），），g （C = 0.003001g （1-水分）水分）/ 100ml) 1%E1cm 例如： 罗通定1%E1cm二.鉴别: 按各该品种项下的规定，测定供试品溶液在有关波长处的最大及最小吸收，有的并须测定其各最大吸收峰值或最大吸收与最小吸收的比值，均应符合规定。二.鉴别: 二二.鉴别鉴别: 1 测定最大吸收波长测定最大吸收波长或同时测定最小吸收波长或同时测定最小吸收波长布洛芬：取本品，加布洛芬：取本品，加0.4%氢氧化钠溶液制成氢氧化钠溶液制成每每1ml中含中含0.25mg的溶液，照紫外的溶液，照紫外-可见分光可见分光光度法测定，在光度法测定，在265nm与与273nm的波

19、长处有的波长处有最大吸收最大吸收，在，在245nm与与271nm的波长处有的波长处有最最小吸收小吸收，在，在259nm波长处有一波长处有一肩峰。肩峰。 肩峰肩峰是指吸收曲线的峰是指吸收曲线的峰上出现的不成峰上出现的不成峰形的小曲折形的小曲折，形状类似肩膀。形状类似肩膀。 二.鉴别: 1 测定最大吸收波长或同时测定最小吸收布洛芬紫外吸收光谱图布洛芬紫外吸收光谱图布洛芬紫外吸收光谱图二二.鉴别鉴别: 2 规定一定浓度的供试液规定一定浓度的供试液在最大吸收波长处的吸光度在最大吸收波长处的吸光度 双嘧达莫双嘧达莫 取本品，加取本品，加0.01mol/L盐酸溶液制成每盐酸溶液制成每1ml中含中含10ug

20、的溶液，照紫外的溶液，照紫外-可见分光可见分光光度法测定，在光度法测定，在283nm的波长处有的波长处有最大最大吸收，吸光度约为吸收，吸光度约为0.62二.鉴别: 2 规定一定浓度的供试液在最大吸收波双嘧达莫紫外吸收光谱图双嘧达莫紫外吸收光谱图双嘧达莫紫外吸收光谱图双嘧达莫紫外吸收光谱图双嘧达莫紫外吸收光谱图二二.鉴别鉴别: 3 规定吸收波长规定吸收波长和吸光度比值法和吸光度比值法l维生素维生素B2l取含量测定项下的溶液，照紫外取含量测定项下的溶液，照紫外-可见分光可见分光光度法测定，在光度法测定，在267nm、375nm与与444nm的波长处有最大吸收。的波长处有最大吸收。375nm波长处的

21、吸波长处的吸光度与光度与267nm波长处的波长处的吸光度比值应为吸光度比值应为0.310.33；444nm波长处的吸光度波长处的吸光度与与267nm波长处的波长处的吸光度比值应为吸光度比值应为0.360.39二.鉴别: 3 规定吸收波长和吸光度比值法维生素B2二二.鉴别鉴别: 4 对照品与样品同法处理对照品与样品同法处理后吸收光谱比较后吸收光谱比较l多潘立酮片多潘立酮片l取含量测定项下的溶液，照紫外取含量测定项下的溶液，照紫外-可见可见分光光度法，在分光光度法，在220320nm的波长范的波长范围内供试品溶液与对照品溶液围内供试品溶液与对照品溶液吸收光吸收光谱应一致谱应一致二.鉴别: 4 对照

22、品与样品同法处理后吸收光谱比较多多潘立酮紫外吸收光谱多潘立酮紫外吸收光谱多潘立酮紫外吸收光谱二二.鉴别鉴别: 5 经化学处理后经化学处理后测定其反应产物的吸收光谱特性测定其反应产物的吸收光谱特性l苯妥英钠苯妥英钠l取本品约取本品约10mg，加高锰酸钾，加高锰酸钾10mg、氢氧化、氢氧化钠钠0.25g与水与水10ml，小火加热，小火加热5分钟，放冷，分钟，放冷，取上清夜取上清夜5ml，加正庚烷，加正庚烷20ml，振摇提取，振摇提取，静置分层后，取正庚烷提取液，照紫外静置分层后，取正庚烷提取液，照紫外-可见可见分光光度法测定，在分光光度法测定，在248nm的波长处有最大的波长处有最大吸收吸收二.鉴

23、别: 5 经化学处理后测定其反应产物的吸苯妥英钠紫外吸收光谱图苯妥英钠紫外吸收光谱图苯妥英钠紫外吸收光谱图苯妥英钠紫外吸收光谱图苯妥英钠紫外吸收光谱图三、检查三、检查l1 当杂质在某一波长有最大吸收，而药物在此当杂质在某一波长有最大吸收，而药物在此无吸收时，可以通过控制供试品溶液在此波长无吸收时，可以通过控制供试品溶液在此波长处的吸光度来控制杂质处的吸光度来控制杂质l葡萄糖注射液中葡萄糖注射液中5-羟甲基糠醛的检查羟甲基糠醛的检查l精密量取本品适量（约相当于葡萄糖精密量取本品适量（约相当于葡萄糖1.0g）置）置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，照紫外量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，照紫外-

24、可见分光光度法在可见分光光度法在284nm的波长处测定，的波长处测定，吸光吸光度不得大于度不得大于0.32三、检查1 当杂质在某一波长有最大吸收，而药物在此无吸收时l三、三、 、检查：、检查：l维生素维生素C注射液中颜色检查注射液中颜色检查l取本品，加水稀释制成每取本品，加水稀释制成每1ml中含维中含维生素生素C50mg的溶液，照紫外的溶液，照紫外-可见分可见分光光度法，在光光度法，在420nm的波长处测定，的波长处测定，吸光度不得过吸光度不得过0.06三、 、检查：三、三、 、检查：、检查： 2 杂质与一定试剂反应产生杂质与一定试剂反应产生气体，该气体与某一试液反应生成有色物气体，该气体与某

25、一试液反应生成有色物质，测定该物质的吸光度质，测定该物质的吸光度l碘解磷定注射液中氰化物检查碘解磷定注射液中氰化物检查l取本品取本品2.0ml，依法检查，与标准氰化钾溶液，依法检查，与标准氰化钾溶液2.5ml所得的结果比较，应符合规定所得的结果比较，应符合规定（0.00025%）l利用在密闭容器中药物中的游离氰化物与水形利用在密闭容器中药物中的游离氰化物与水形成氢氰酸，于室温下在暗处放置过夜，使氰化成氢氰酸，于室温下在暗处放置过夜，使氰化氢气体扩散进入三硝基苯酚锂试液，生成红色氢气体扩散进入三硝基苯酚锂试液，生成红色的异红紫酸盐，在的异红紫酸盐，在500nm波长处测定吸光度波长处测定吸光度三、

26、 、检查： 2 杂质与一定试剂反应产生气体，该气体与某l 三、检查：三、检查： l 3 溶出度和含量均匀度溶出度和含量均匀度紫外可见分光度法课件四.含量测定:1.对照品比较法 : 按各该品种项下规定的方法，分别配制供试品溶液和对照品溶液，对照品溶液中所含被测成分的量应为供试品溶液中被测成分标示量的（100士10）以内，用同一溶剂，在规定的波长处测定供试品溶液和对照品溶液的吸收度。四.含量测定:检验记录单内容l检品名称：多潘立酮片 批 号：070524l检品编号：201903634 检验项目：含量测定l检验依据：中国药典2019年版二部附录A l紫外分光光度计编号： 检验日期：l天平编号： 称量

27、日期：l室 温： 相对湿度：l检测条件：检测波长 nm 狭缝宽度 2.0 nml标准规定：含多潘立酮应为标示量的90.0%110.0l空白溶剂检查检验记录单内容检品名称：多潘立酮片 批 l对照品溶液的制备对照品溶液的制备 取多潘立酮对照品约取多潘立酮对照品约25mg，精，精密称定，置密称定，置50ml量瓶中，加水量瓶中，加水5ml与异丙醇与异丙醇25ml，置水浴上加热溶解，冷却，加异丙醇稀释至刻度，置水浴上加热溶解，冷却，加异丙醇稀释至刻度，摇匀，精密量取摇匀，精密量取2ml，置，置50ml量瓶中，加异丙醇稀释量瓶中，加异丙醇稀释至刻度，摇匀，即得。至刻度，摇匀，即得。l供试品溶液的制备供试品

28、溶液的制备 取本品取本品20片，精密称定，研细，片，精密称定，研细，精密量取适量（约相当于多潘立酮精密量取适量（约相当于多潘立酮10mg），置），置50ml量瓶中，加水量瓶中，加水5ml，振摇，滤过，精密量取续滤液，振摇，滤过，精密量取续滤液5ml，置，置50ml量瓶中，加异丙醇稀释至刻度，摇匀，量瓶中，加异丙醇稀释至刻度，摇匀，即得。即得。l测定法测定法 取上述对照品溶液与供试品溶液，照分光取上述对照品溶液与供试品溶液，照分光光度法，在光度法，在288nm的波长处分别测定吸收度，计算，的波长处分别测定吸收度，计算，即得即得。多潘立酮片含量测定对照品溶液的制备 取多潘立酮对照品约25mg，精密

29、称定检验记录单内容l测定方法：取上述二溶液，在288nm的波长处分别测定吸光度。l标准物质名称: 批号： l标准物质含量： l标准物质来源: 中国药品生物制品药品检定所l试验计算l试验结果l试验结论检验记录单内容测定方法：取上述二溶液，在288nm的波长处分对照品比较法：计算公式 可根据供试品溶液及对照品溶液的吸收度与对照品溶液的浓度以正比法算出供试品溶液的浓度，再计算含量。 A样品 : A对照 = C样品 : C对照 C样品= A样品 C对照 / A对照 式中 A为吸收度值； C为测试液浓度（以 mgml计）。对照品比较法：计算公式 可根据供试品溶液及对照紫外可见分光度法课件2.吸收系数法

30、按各该品种项下配制供试品溶液，在规定的波长及该波长士nm处测定其吸光度，按各该品种在规定条件下给出的吸收系数计算含量。 采用吸收系数法应对仪器进行校正后测定。2.吸收系数法 地西泮片含量测定地西泮片含量测定测定方法：测定方法：取本品取本品20片，精密称定，研细，精片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于地西泮密称取适量（约相当于地西泮10mg），置），置100ml量瓶中，加水量瓶中，加水5ml，混匀，放置，混匀，放置15分钟，分钟，加加0.5%硫酸的甲醇溶液约硫酸的甲醇溶液约60ml，充分振摇，充分振摇，使地西泮溶解，用使地西泮溶解，用0.5%硫酸的甲醇溶液稀释硫酸的甲醇溶液稀释至刻度，摇匀

31、，滤过，精密量取续滤液至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，置，置100ml量瓶中，用量瓶中，用0.5%硫酸的甲醇溶液硫酸的甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，照紫外稀释至刻度，摇匀，照紫外-可见分光光度可见分光光度法，在法，在284nm的波长处测定吸光度，按的波长处测定吸光度，按C16H13ClN2O的吸收系数（的吸收系数（ ）为）为454计算，计算，即得。即得。1%E1cm地西泮片含量测定测定方法：取本品20片，精密称定，研细，精密地西泮片紫外吸收图谱地西泮片紫外吸收图谱地西泮片紫外吸收图谱地西泮片含量测定地西泮片含量测定lFile Name: 地西含地西含6lCreated: 17:07 0

32、6-04-10lData: OriginallWavelength: 284.0 lSlit Width: 2.0lMeasuring Mode: Abs.lNumber of Points: 2l ID Abs. l 1 0.4339l 2 0.4330地西泮片含量测定File Name: 地西含6第七节第七节 检验记录单内容检验记录单内容l检品名称：检品名称：地西泮片地西泮片 批批 号：号：060124l检品编号：检品编号：200601634 检验项目：检验项目：含量测定含量测定l检验依据：中国药典检验依据：中国药典2019年版二部附录年版二部附录A l紫外分光光度计编号：紫外分光光度计编

33、号： YQ.H.045l检验日期：检验日期： 2019.4.10l天平编号：天平编号： YQ.H.003 称量日期：称量日期：2019.04.10l室室 温：温：20 相对湿度：相对湿度：40% l检测条件：检测波长检测条件：检测波长 284 nm 狭缝宽度狭缝宽度 2.0 nml标准规定：含地西泮应为标示量的标准规定：含地西泮应为标示量的90.0%110.0l空白溶剂检查：空白溶剂检查：符合规定符合规定l测定方法：见上页测定方法：见上页l计计 算：算：l结结 论：论：第七节 检验记录单内容检品名称：地西泮片 批 中国药典规定的吸收系数，系指 ，即在指定波长时，光路长度为1cm，试样浓度换算为

34、1（gml） 时测得的吸光度值。 标准方法中已给出被测样品的 值，测定值 E测测 与规定的 值比较，即可计算出供试样品的含量。吸收系数法：计算公式1%E1cm1%E1cm1%E1cm 中国药典规定的吸收系数，系指 含量计算公式含量计算公式3.计算分光光度法 采用计算分光光度法的品种，应严格按各该品种项下规定的方法进行，用本法时应注意：有一些吸收度是在供试品或其成分吸收曲线的上升或下降陡坡部处测定，影响精度的因素较多，故应仔细操作，尽量使测定供试品和对照品的条件一致，若该品种不用对照品，如维生素A测定法（见中国药典附录），则应在测定前对仪器作仔细的校正和检定3.计算分光光度法 l4 比色法比色法

35、l 供试品本身在紫外供试品本身在紫外-可见区没有可见区没有强吸收，或在紫外区虽有吸收但为强吸收，或在紫外区虽有吸收但为了避免干扰或提高灵敏度，可加入了避免干扰或提高灵敏度，可加入适当显色剂显色后适当显色剂显色后 测定。测定。4 比色法硫酸阿托品注射液含量测定采用酸性硫酸阿托品注射液含量测定采用酸性染料比色法染料比色法l精密量取供试品溶液和对照品溶液各精密量取供试品溶液和对照品溶液各2ml，分别置预先精密加入三氯甲烷，分别置预先精密加入三氯甲烷10ml的的分液漏斗中，各加分液漏斗中，各加溴甲酚绿溴甲酚绿溶液溶液2.0ml，振摇提取振摇提取2分钟后，静置使分层，分取澄分钟后，静置使分层，分取澄清的

36、三氯甲烷液，照紫外清的三氯甲烷液，照紫外-可见分光光度可见分光光度法，在法，在420nm的波长处测定吸光度的波长处测定吸光度硫酸阿托品注射液含量测定采用酸性染料比色法精密量取供试品溶l注意注意：用比色法测定时，由于显色时影响显色：用比色法测定时，由于显色时影响显色深浅的因素较多，应取深浅的因素较多，应取供试品与对照品或标准供试品与对照品或标准品同时操作品同时操作。l除另有规定外，比色法所用的除另有规定外，比色法所用的空白系指同体积空白系指同体积的溶剂代替对照品或供试品溶液，然后依次加的溶剂代替对照品或供试品溶液，然后依次加入等量的相应试剂，并用同样方法处理入等量的相应试剂，并用同样方法处理。l

37、供试品与对照品供试品与对照品放置显色的时间应尽量一致。放置显色的时间应尽量一致。在规定的波长处测定在规定的波长处测定对照品和供试品溶液的吸对照品和供试品溶液的吸光度光度后，按上述（后，按上述（1）法计算供试品浓度。）法计算供试品浓度。注意：用比色法测定时，由于显色时影响显色深浅的因素较多，应取第五节 注意事项1.试验中所用的量瓶，移液管均应经检定校正、洗净后使用。2.使用的石英吸收池必须洁净。吸收池在测定样品溶液前必须加以校正。 当吸收池中装入同一溶剂，在规定波长测定各吸当吸收池中装入同一溶剂，在规定波长测定各吸收池的透光率，如收池的透光率，如透光率相差在透光率相差在0.3%以下以下者可者可配

38、对使用，否则测定样品溶液前必须加以校正。配对使用，否则测定样品溶液前必须加以校正。 第五节 注意事项1.试验中所用的量瓶，移液管均应经检定校正第五节 注意事项3、取吸收池时，应手指拿毛玻璃面的两侧。装盛样品溶液以池体积的45为度。4、使用挥发性溶液（甲醇、乙醇、三氯甲烷）（甲醇、乙醇、三氯甲烷）时应加盖。吸收池透光面要用擦镜纸由上而下擦拭干净，检视应无残留溶剂。5、吸收池放入样品室时应注意每次放入方向相同。第五节 注意事项3、取吸收池时，应手指拿毛玻璃面的两侧。装6、吸收池使用后应用溶剂及水冲洗干净，晾干防尘保存。7、吸收池如污染不易洗净时可用硫酸发烟硝酸（3:1V/V）混合液稍加浸泡后，洗净

39、备用。如用铬酸钾清洁液清洗时，吸收池不宜在清洁液中长时间浸泡，否则清洁液中的铬酸钾结晶会损坏吸收池的光学表面并应充分用水冲洗，以防铬酸钾吸附于吸收池表面。第五节 注意事项6、吸收池使用后应用溶剂及水冲洗干净，晾干防尘保存。第五节 测定前应先测定前应先检查所用的溶剂检查所用的溶剂在测定供试品所用在测定供试品所用的波长附近的波长附近是否符合要求是否符合要求。 溶剂纯度对试验有较大影响，紫外光区测定时溶剂纯度对试验有较大影响，紫外光区测定时所用溶剂应对紫外光不呈吸收或吸收不大，平时为所用溶剂应对紫外光不呈吸收或吸收不大，平时为了消除这类可能的影响，了消除这类可能的影响，在测定时制备样品液与空在测定时

40、制备样品液与空白液的溶剂必需用同一批的，以抵消溶剂不纯的影白液的溶剂必需用同一批的，以抵消溶剂不纯的影响响。 每次测定时所用的溶剂，应采用同一厂牌批号，每次测定时所用的溶剂，应采用同一厂牌批号，混合均匀的溶剂混合均匀的溶剂. 8、对溶剂的要求、对溶剂的要求 测定前应先检查所用的溶剂在测定供试品所用的波 但是如果溶剂本身吸收过大，操作时光缝就但是如果溶剂本身吸收过大，操作时光缝就要开得过大，就会使光谱不纯，同时会引来其要开得过大，就会使光谱不纯，同时会引来其他难以意料的误差。他难以意料的误差。 溶剂空白测定方法：可用溶剂空白测定方法：可用1cm石英吸收池盛石英吸收池盛溶剂，溶剂，以空气为空白以空

41、气为空白（即参比光路中不放置任（即参比光路中不放置任何物质），测定其何物质），测定其吸光度吸光度，应符合下表规定。，应符合下表规定。l 220240nm 吸光度吸光度0.40l 241250nm 吸光度吸光度0.20l 251300nm 吸光度吸光度0.10l 300nm以上以上 吸光度吸光度0.058、对溶剂的要求、对溶剂的要求 但是如果溶剂本身吸收过大，操作时光缝就要开得8、对溶剂的要求、对溶剂的要求l含有杂原子的有机溶剂，通常均具有很强的末含有杂原子的有机溶剂，通常均具有很强的末端吸收。因此，当作溶剂使用时，它们的使用端吸收。因此，当作溶剂使用时，它们的使用范围不能小于截范围不能小于截止

42、止使用波长。使用波长。l截止使用波长（极限波长）：截止使用波长（极限波长）：用此溶剂时用此溶剂时的最低波长限度，即低于此波长时溶剂将的最低波长限度，即低于此波长时溶剂将有吸收有吸收l如如甲醇、乙醇甲醇、乙醇的截至使用波长是的截至使用波长是205nm。l水、异丙醇水、异丙醇是是210nm,三氯甲烷三氯甲烷是是245nm8、对溶剂的要求含有杂原子的有机溶剂，通常均具有很强的末端吸紫外可见分光度法课件4 .称量应按药典规定要求。配制测定溶液称量应按药典规定要求。配制测定溶液时时稀释转移次数应尽可能少稀释转移次数应尽可能少，转移稀释，转移稀释时所取溶积一般应时所取溶积一般应不少于不少于5ml。含量测定

43、。含量测定供试品应称取供试品应称取2份份，如为对照品比较法，如为对照品比较法，对照品一般也应称取对照品一般也应称取2份份，平行操作，每，平行操作，每份结果对平均值的份结果对平均值的偏差应在偏差应在0.5%以内。以内。作鉴别或检查可取样品作鉴别或检查可取样品1份。份。4 .称量应按药典规定要求。配制测定溶液时稀释转移次数应尽可5. 供试品测试溶液的浓度，除各该品供试品测试溶液的浓度，除各该品种项下已有注明者外，供试品溶液的种项下已有注明者外，供试品溶液的吸光度以在吸光度以在0.30.7之间为宜，吸光之间为宜，吸光度读数在此范围误差较小，并应结合度读数在此范围误差较小，并应结合所用仪器吸光度线性范

44、围，配制合适所用仪器吸光度线性范围，配制合适的读数浓度。的读数浓度。5. 供试品测试溶液的浓度，除各该品种项下已有注明者外，供试6.选用仪器的选用仪器的狭缝谱带宽度应小于供试狭缝谱带宽度应小于供试品吸收带的半宽度的十分之一品吸收带的半宽度的十分之一，否则，否则测得的吸光度值会偏低，测得的吸光度值会偏低，狭缝宽度的狭缝宽度的选择应以减小狭缝宽度时供试品的吸选择应以减小狭缝宽度时供试品的吸光度不再增加为准光度不再增加为准，对于中国药典紫，对于中国药典紫外测定的大部分品种，可以使用外测定的大部分品种，可以使用2nm缝宽，但对某些品种如缝宽，但对某些品种如青霉素钾及钠青霉素钾及钠的吸光度检查则需用的吸

45、光度检查则需用1nm缝宽缝宽或更窄，或更窄，否则其否则其264nm的吸光度会偏低。的吸光度会偏低。6.选用仪器的狭缝谱带宽度应小于供试品吸收带的半宽度的十分之7 .测定时除另有规定者外，应在规定的吸测定时除另有规定者外，应在规定的吸收峰收峰2nm处，再多测几个点的吸光度处，再多测几个点的吸光度，以核对供试品的吸收峰位置是否正确，以核对供试品的吸收峰位置是否正确，并以并以吸光度最大的波长吸光度最大的波长（灵敏度较高，（灵敏度较高，误差小）误差小）作为测定波长作为测定波长。除另有规定外。除另有规定外吸光度吸光度最大波长应在该品种项下规定的最大波长应在该品种项下规定的波长波长nm以内以内，否则应考虑

46、试样的同，否则应考虑试样的同一性、纯度以及仪器波长的准确度。一性、纯度以及仪器波长的准确度。7 .测定时除另有规定者外，应在规定的吸收峰2nm处，再多l用于制剂含量测定时，应注意用于制剂含量测定时，应注意供试供试液与对照液的液与对照液的pH值是否一致值是否一致，如，如pH值对吸收有影响时，则应值对吸收有影响时，则应调溶液的调溶液的pH值一致后再测定吸光度值一致后再测定吸光度用于制剂含量测定时，应注意供试液与对照液的pH值是否一致，如吡洛昔康滴眼液吡洛昔康滴眼液l【含量测定含量测定】 精密量取本品精密量取本品2ml，置，置50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量

47、取精密量取5ml，置，置100ml量瓶中，加水稀量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，照紫外释至刻度，摇匀，照紫外-分光光度法分光光度法（中国药典（中国药典2019年版二部附录年版二部附录 A），），在在354nm的波长处测定吸收度；另取在的波长处测定吸收度；另取在105干燥至恒重的吡洛昔康对照品约干燥至恒重的吡洛昔康对照品约20mg，精密称定，精密称定，加硼砂约加硼砂约20mg，加，加水溶解并稀释成每水溶解并稀释成每1ml中约含中约含10g的溶的溶液，同法测定，计算，即得。液，同法测定，计算，即得。吡洛昔康滴眼液【含量测定】 精密量取本品2ml，置50ml量l吡洛昔康在不同吡洛昔康在不同pH值溶剂中

48、的吸收图谱值溶剂中的吸收图谱吡洛昔康在不同pH值溶剂中的吸收图谱UV测定步骤：1、溶剂空白UV测定步骤：1、溶剂空白UV测定步骤：2、找出最大吸收波长UV测定步骤：2、找出最大吸收波长UV测定步骤：3、在最大吸收波长处测定吸光度l Wavelength Programl _l Date: 9/26/2019 Time: 10:12:51 AM Method: 254l Slit: UV/VIS: 2.00 nml Analyst: MXl Sample ID Cyc Factor 285.00 nml _l 1 1 1.0000 0.4319l 2 1 1.0000 0.4456l 3 1 1

49、.0000 0.3968l 4 1 1.0000 0.4337l 5 1 1.0000 0.4431l 6 1 1.0000 0.4454l dz 1 1.0000 0.4427l _UV测定步骤：3、在最大吸收波长处测定吸光度 小小 结结l 紫外紫外-可见分光光度法因其灵敏度、准确可见分光光度法因其灵敏度、准确度高，仪器价格较低廉，操作简单，易于普度高，仪器价格较低廉，操作简单，易于普及。及。l 它用途广泛，涵盖了药品的性状，鉴别，它用途广泛，涵盖了药品的性状，鉴别，检查，含量测定项，尽管在专属性方面不如检查，含量测定项，尽管在专属性方面不如红外分光光度法，但对判断假劣药的初筛，红外分光光度法，但对判断假劣药的初筛，不失为一种好的检测手段。不失为一种好的检测手段。小 结 紫外-可见分光光度法因其灵敏度、准确 谢 谢 谢 谢