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1、 细菌的分布及外细菌的分布及外界因素对细菌的影响界因素对细菌的影响 第一节第一节 细菌的分布细菌的分布 微生物在自然界分布极为广泛，江河、湖泊、海洋、土壤、空气、矿层等数量不等、种类不一的微生物存在。在人类、动物、植物的体表，以及与外界相通的呼吸道、消化道等腔道中，亦有多种微生物的寄生。 一、细菌在人体的分布一、细菌在人体的分布 （一）正常菌群的含义 （二）人体正常菌群的分布 （三）正常菌群的生理作用 （四）条件致病菌和菌群失调 二、细菌在自然界的分布二、细菌在自然界的分布 微生物和其他生物一样，与外界环境有着密切的联系。外界环境适宜，就生长繁殖；条件改变过于剧烈，使微生物的主要代谢发生障碍，
2、或菌体蛋白质变性凝固，会导致生长停顿，甚至死亡。在医学上常用的人工方法，造成微生物极为不利的环境，来达到杀灭微生物的目的。 （一）土壤中的细菌 土壤中的微生物以细菌为主，放线菌次之，另外还有真菌、螺旋体等 （二）水中的细菌 水中的病菌如伤寒杆菌、痢疾杆菌、霍乱弧菌、钩端螺旋体等主要来自人和动物的粪便及污染物。因此，粪便管理在控制和消灭消化道传染病有重要意义。 （三）空气中的细菌 室外空气中常见产芽胞杆菌、产色素细菌及真菌孢子等；室内空气中的微生物比室外多，尤其是人口密集的公共场所、医院病房、门诊等处，容易受到带菌者和病人污染。【目的】 通过实验掌握检测细菌分布的方法，熟悉正常菌群的含义。【材料
3、】 普通琼脂平板培养基，血琼脂平板培养基，生理盐水，碘酊，75%酒精，无菌棉签。 【目的】 通过实验掌握检测细菌分布的方法，熟悉正常菌群的含义。【材料】 普通琼脂平板培养基，血琼脂平板培养基，生理盐水，碘酊，75%酒精，无菌棉签。 【方法】 （一）空气中细菌的检查 1分别在教室、厕所、食堂及无菌室中选择距地面约1米左右的一处桌面，将普通培养基揭开，暴露空气中10min后，再将平皿盖上。 2置37培养箱24h，观察培养基中菌落的数目及菌落形态的特点，并任选一个菌落作革兰氏染色，镜检观察。 （二）呼吸道细菌的检查 1将血平板培养基打开，在距口腔10cm，面对培养基用力咳嗽35次，再盖上平皿。 2用
4、沾过生理盐水的棉签在咽喉处轻轻擦拭，即咽拭子，然后在血平板培养基上用平板分离化线法接种。 3将上述两个培养板均置37培养箱24h，观察培养基中菌落的数目及菌落的形态特点。 （三）皮肤表面细菌的检查 1将普通培养基分为三等份，将未洗的手指、用肥皂洗过的手指、经上碘酊+75%酒精处理的手指在培养基上轻涂。 2将培养板置37培养箱24h，观察培养基中菌落的数目及菌落的形态特点。 第二节第二节 外界因素对细菌的影响外界因素对细菌的影响 细菌在自然界必然不断经受周围环境中各种因素的影响。当环境适宜时，细菌能进行正常的新陈代谢而生长繁殖；若环境条件变化，可引起细菌的代谢和其他性状发生变异；若环境条件改变剧
5、烈，可使细菌生长受到抑制或导致死亡。 消毒: 杀灭病原微生物的方法。 灭菌：杀灭物体上所有的微生物的方法。 无菌：物体上或容器内无活菌存在的意思。 防腐：防止或抑制微生物生长繁殖的方法。 一、物理因素一、物理因素 （一）热力灭菌 1湿热灭菌法 2干热灭菌法 （二）电磁波与射线 1日光与紫外线 2电离辐射 （三）滤过除菌法 除菌滤器简称滤菌器，将液体或空气通过含有微细小孔的滤器，只允许小于孔径的物体如液体和空气通过，大于孔径的的物体不能通过。它们可用陶瓷、硅藻土、石棉或玻璃屑等制成。主要用于一些不耐热的血清、毒素、抗生素、药液、空气等除菌。一般不能除去病毒、支原体和细菌的L型。 （四）超声与超声
6、波 每秒钟超过200，000次振动的声波不被人耳感受，称为超声波。微生物对强度高的超声波很敏感。 （五）干燥 多数细菌的繁殖体在空气中干燥时很快死亡。有些细菌抗干燥力较强，尤其有蛋白质等物质保护时。 （六）低温 多数细菌耐低温。在低温状态下，这些细菌的代谢减慢，当温度如回升到适宜范围又能恢复生长繁殖，故低温常用作保存菌种。 二、化学因素二、化学因素 化学药物能影响细菌的化学组成、物理结构和生理活动，从而发挥防腐，消毒，甚至灭菌的作用。防腐剂的浓度高或作用时间长，也可达到消毒的目的。消毒及防腐药物对人体组织有害，只能外用或用于环境消毒。 （一）化学消毒剂 （二）防腐剂 用于防腐的药物称为防腐剂。
7、生物制剂（如疫苗、类毒素、抗毒素等）中常加入防腐剂，以防止杂菌生长。常用防腐剂有0.5%石炭酸、0.01%硫柳汞和0.10.2%甲醛等。 （三）化学疗剂 三、生物因素三、生物因素 （一）噬菌体（Bacteriophage） 噬菌体是能感染细菌、放线菌、真菌、螺旋体的病毒。噬菌体分布广泛，凡是有细菌存在的场所，就可能有相应噬菌体的存在。噬菌体有严格的宿主特异性，只寄居于易感宿主菌体内。 （二）抗生素 某些微生物在代谢过程中产生的，能抑制或杀灭其他微生物的一种化学物质。抗生素主要来源于放线菌、某些真菌和细菌。目前生产的抗生素，除从微生物培养液中提取外，有些已能人工合成或半合成。 四、实验四、实验
8、（一）物理因素对细菌的影响 1温度灭菌试验 【原理】 温度高低对细菌生长繁殖关系非常密切，温度过高过低都会影响细菌的生长，甚至死亡。细菌生长繁殖的最适温度一般为37，低与此温度是细菌的代谢缓慢，生长受到抑制，但仍可生长；而高温则可杀死细菌。 【材料】 （1）大肠杆菌、枯草杆菌斜面培养物 （2）肉汤培养基 （3）接种环，酒精灯 【方法】 （1）取肉汤培养管6支，平均分成3组 （2）每组分别接种大肠杆菌和枯草杆菌 （3）第一组经高压蒸气灭菌15min，第二组置100水浴中10min，第三组不作处理。 （4）将三组培养管均置37孵育，24h后观察。 2紫外线杀菌试验 【原理】 紫外线被DNA吸收后，
9、使DNA两个相邻的嘧啶形成二聚体，DNA的复制被抑制，从而导致细菌变异或死亡。 【材料】 （1）大肠杆菌斜面培养物 （2）琼脂平板培养基 （3）接种环，酒精灯，无菌滤纸片 【方法】 1以密集划线法将大肠杆菌接种于琼脂培养基上。 2将镊子浸酒精燃烧灭菌后取灭菌滤纸片一张，置于涂有细菌的平板培养基表面。 3打开培养皿盖，置于紫外灯下一尺处直接照射3060min 4 取出纸片，盖好平板盖，置37孵育，24h后观察。 （二）化学因素对细菌的影响【原理】 许多化学制剂具有抑制和杀灭细菌的作用，在实际应用中具有杀菌作用的化学制剂称消毒剂，只能外用，用于抑制细菌生长与代谢的制剂称防腐剂【材料】 125%碘酒
10、，75%酒精，1%龙胆紫，5%石炭酸，84消毒液 2滤纸片，固体平板，弯头镊子，L玻棒，吸管 3混合菌液【方法】 1用吸管吸取1滴菌液滴于平板上用L玻棒涂抹均匀。 2将浸有25%碘酒，75%酒精，1%龙胆紫，5%石炭酸，84消毒液的滤纸贴于培养皿盖上。 3倒置培养皿，置于37孵育。 4分别于12h、24h、3h6后观察生长情况。 （三）细菌抗生素敏感性测定 1纸片扩散法【原理】 将含有一定量的抗菌药物纸片，平贴在已经接种被测定细菌的琼脂培养基上，纸片中的抗菌药物溶解于培养基内，并向四周呈球面扩散，药物在琼脂中的浓度随离开纸片的距离增大而降低。同时含菌琼脂经孵育后细菌开始生长。在琼脂内的药物浓度
11、恰高于该药对待检菌的最低抑菌浓度，该细菌的生长就受到抑制，在含药纸片的周围形成透明的抑菌环 【目的】 本实验要求掌握纸片扩散法试验【材料】 （1）菌种：金黄色葡萄球菌，埃希大肠杆菌等 （2）培养基：水解酪蛋白平板 （3）含抗生素（青霉素、链霉素、氯霉素）药敏纸片【方法】 （1）用棉拭子取菌液涂布整个培养基表面，反复几次，保证涂布均匀。 （2）镊子分别取含有不同抗生素的滤纸片，贴在已接种的琼脂平板的表面。每个平板上贴4-6片，各纸片中心相距约24mm，纸片距平皿边缘约15 mm，各纸片间距离相等。 【结果】 分别测量各种抗生素纸片抑菌圈的直径（以mm表示），判断其敏感度及耐药性。常用抗生素与磺胺
12、药物敏感试验判定标准。 2试管稀释法【原理】 以水解酪蛋白（M-H）液体培养基将抗生素作不同浓度的稀释，然后种入待检细菌定量测定抗菌药抑制或杀死该菌的最低抑菌浓度（MIC）或最低杀菌浓度（MBC）。 【材料】 （1）金黄色葡萄球菌液 （2）MH肉汤 （3）80万单位的青霉素钾盐。 【方法】 （1）取无菌小试管10支排于试管架，于第一管加入MH肉汤1.9ml,210管各加1ml。 （2）于第一管加入稀释好的青霉素钾盐0.1ml,混匀后取1ml加入第2管，依次倍比稀释，自第9管吸出1ml弃去，第10管系对照管将各管中加入已校正浓度的金黄色葡萄球菌液0.05ml,混匀后放置35培养18h，观察结果。 【结果】 以药物最高稀释管中无细菌生长者，该管的浓度即为该菌对此药物的敏感度，即MIC。
