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1、一、概况、概况: 2010年版药典抗生年版药典抗生素品种收载情况，见表：素品种收载情况，见表： 品种品种原料原料新增新增制制剂剂新增新增总总数数新增新增-内内酰酰胺胺类类头孢头孢菌素菌素类类272711114848191975753030青霉素青霉素类类与与酶酶抑制抑制剂剂20203 328286 648489 9碳青碳青酶酶烯类烯类及及单环单环-内内酰酰胺胺类类2 21 12 21 14 42 2大大环环内内酯类酯类13132 235354 448486 6氨基糖苷氨基糖苷类类141425251 139391 1四四环环素素类类6 612121818利福霉素利福霉素类类1 17 78 8林可
2、霉素林可霉素类类2 24 46 6酰酰胺醇胺醇类类4 411111515多多肽类肽类与与肽类肽类4 42 24 42 28 84 4抗真菌抗真菌类类3 33 36 6抗抗肿肿瘤抗生素瘤抗生素类类6 62 26 61 112123 3磷霉素磷霉素类类3 35 58 8其他抗生素其他抗生素3 34 47 7喹诺酮类喹诺酮类12123 334345 546468 8总计总计120120242422822839393483486363l二、二、20102010年版药典抗生素类药标准增年版药典抗生素类药标准增修订要点修订要点: :l1 1、鉴别项下尽可能应用专属性强的鉴别、鉴别项下尽可能应用专属性强的鉴
3、别反应反应, , 如：光谱法：如：光谱法：IR IR 色谱法：色谱法：HPLC HPLC TLCTLC等，与钠、钾、盐酸盐、硫酸盐的鉴等，与钠、钾、盐酸盐、硫酸盐的鉴别反应别反应. . 标准中鉴别反应标准中鉴别反应HPLCHPLC与与TLCTLC二法二法并列。有利于基层检验机构的选择。并列。有利于基层检验机构的选择。l2. 2. 新方法新技术进一步在标准中扩大新方法新技术进一步在标准中扩大应用。应用。 2.1 2.1 应用应用HPLC-ELSDHPLC-ELSD测定氨基糖苷类抗生素测定氨基糖苷类抗生素的组分，有关物质，特定杂质及含量的品种进一的组分，有关物质，特定杂质及含量的品种进一步增加。步
4、增加。 同时又用该方法测定硫酸盐（同时又用该方法测定硫酸盐（SOSO4 4）的含量。）的含量。 用用HPLC-ELSDHPLC-ELSD替代替代TLCTLC检查有关物质与组分，可检查有关物质与组分，可 提高检测灵敏度。提高检测灵敏度。 如如: : 硫酸依替米星及制剂的有关物质硫酸依替米星及制剂的有关物质, ,硫酸盐及硫酸盐及含量测定。含量测定。 硫酸卡那霉素及制剂的有关物质卡硫酸卡那霉素及制剂的有关物质卡B B以及含以及含量测定，量测定， 硫酸庆大霉素及制剂的庆大霉素硫酸庆大霉素及制剂的庆大霉素C C组分及有组分及有关物质测定，关物质测定， 硫酸小诺霉素及其制剂的组分测定。硫酸小诺霉素及其制剂
5、的组分测定。 妥布霉素及制剂的有关物质测定等。妥布霉素及制剂的有关物质测定等。l2.2 2.2 本版药典使用本版药典使用HPCEHPCE方法的品种有方法的品种有2 2个，其个，其中一个为盐酸头孢吡肟中中一个为盐酸头孢吡肟中N N- -甲基吡咯烷的含量甲基吡咯烷的含量测定。测定。l3. 3. 本版药典抗生素类增修订有关物质项较多，本版药典抗生素类增修订有关物质项较多，-内酰胺类抗生素内酰胺类抗生素127127个品种中有个品种中有116116个品种个品种采用采用HPLCHPLC测定有关物质。测定有关物质。l 喹诺酮类喹诺酮类4646个品种就有个品种就有4040个品种用个品种用HPLCHPLC法测法
6、测定有关物质。定有关物质。l 其他如其他如: :l 氯霉素类，大环内酯类，氨基糖苷类氯霉素类，大环内酯类，氨基糖苷类, ,利利福平等均增修订了有关物质检查项。福平等均增修订了有关物质检查项。l3.1 3.1 对检查有关物质与含量测定的对检查有关物质与含量测定的HPLCHPLC方法的方法的系统适用性试验进行修改并完善。系统适用性试验进行修改并完善。l3.1.1 3.1.1 在系统适用性试验中均规定了主峰与指在系统适用性试验中均规定了主峰与指定杂质峰的分离度，定杂质峰的分离度，l 梯度洗脱时标明主峰的保留时间，使方法的梯度洗脱时标明主峰的保留时间，使方法的可操作性强，保证了结果的准确性。可操作性强
7、，保证了结果的准确性。l3.1.2 3.1.2 对杂质数多或多组分的、分离难度大对杂质数多或多组分的、分离难度大的品种，中检所提供混合杂质对照品，多组分的品种，中检所提供混合杂质对照品，多组分对照品及标准图谱对照品及标准图谱. .l 如阿莫西林、阿莫西林克拉维酸、氨苄西如阿莫西林、阿莫西林克拉维酸、氨苄西林、吉他霉素、乙酰螺旋霉素等。林、吉他霉素、乙酰螺旋霉素等。l l 该混合对照品用于系统适用性试验，测得该混合对照品用于系统适用性试验，测得的色谱图应与标准图谱一致。便于操作，保证的色谱图应与标准图谱一致。便于操作，保证了方法的有效性。了方法的有效性。l3.1.3 3.1.3 由于系统适用性对
8、照品及标准图谱的由于系统适用性对照品及标准图谱的提供，确定各杂质峰的保留时间，有利于制剂提供，确定各杂质峰的保留时间，有利于制剂的有关物质检查。可利用对照品溶液色谱图中的有关物质检查。可利用对照品溶液色谱图中杂质的保留时间，对特定杂质进行控制。杂质的保留时间，对特定杂质进行控制。l3.1.4 3.1.4 有关物质采用自身对照时，对本身纯有关物质采用自身对照时，对本身纯度低于度低于85%85%的品种，提出对自身对照溶液主峰的品种，提出对自身对照溶液主峰进行校正。以免纯度较低品种采用自身对照法进行校正。以免纯度较低品种采用自身对照法引起的结果偏高而影响正确性引起的结果偏高而影响正确性。l4. -4
9、. -内酰胺类抗生素的有关物质检查方法与国内酰胺类抗生素的有关物质检查方法与国外药典基本一致，在分离度试验中根据实际情况外药典基本一致，在分离度试验中根据实际情况进行修改，更有利方法的可操作性。进行修改，更有利方法的可操作性。l 有很多品种采用有很多品种采用HPLCHPLC梯度洗脱法测定有关物质，梯度洗脱法测定有关物质，如：头孢地尼，头孢唑林钠，拉氧头孢钠如：头孢地尼，头孢唑林钠，拉氧头孢钠, , 阿莫阿莫西林及其复方制剂，氨苄西林等。西林及其复方制剂，氨苄西林等。l5. 5. 喹诺酮类抗生素的有关物质检查，喹诺酮类抗生素的有关物质检查，EPEP、BPBP、USPUSP均采用均采用TLCTLC
10、、HPLCHPLC两种方法进行控制。两种方法进行控制。l 本版药典提出用本版药典提出用HPLCHPLC在主峰洗脱后梯度洗脱的方在主峰洗脱后梯度洗脱的方法，将法，将EPEP用用TLCTLC、HPLCHPLC两种方法检测的杂质在同一两种方法检测的杂质在同一HPLCHPLC系统中检测系统中检测. .l 同时根据各杂质最大吸收波长的不同，用双波长同时根据各杂质最大吸收波长的不同，用双波长检测，检测， l 对照品外标法与加校正因子与不加校正因子自对照品外标法与加校正因子与不加校正因子自身对照法同时并列。杂质身对照法同时并列。杂质A A用用HPLCHPLC检测检测, ,灵敏度与正灵敏度与正确性均优于确性均
11、优于TLCTLC法。使该类品种标准的技术含量高法。使该类品种标准的技术含量高于国外药典标准。于国外药典标准。l6. 6. 四环素类统一了该品种有关物质与含量测定的四环素类统一了该品种有关物质与含量测定的HPLCHPLC法色谱条件，与法色谱条件，与20052005年版方法比较有较大改进。年版方法比较有较大改进。l 检出的杂质与检出的杂质与EP6.0EP6.0规定的杂质有相关性。并根规定的杂质有相关性。并根据国内产品实际情况，制定合理的限度。据国内产品实际情况，制定合理的限度。l7. 7. 氨基糖苷类用氨基糖苷类用HPLC-ELSDHPLC-ELSD替代替代TLCTLC检查有关物质检查有关物质与组
12、分，提高检测灵敏度；与组分，提高检测灵敏度；l l 同时可用该方法测定硫酸盐（同时可用该方法测定硫酸盐（SOSO4 4）的含量。）的含量。l8. 8. 红霉素类经对几种红霉素类经对几种HPLCHPLC方法比较后，采用方法比较后，采用同一同一HPLCHPLC方法检查红霉素与其衍生物以及制剂方法检查红霉素与其衍生物以及制剂中红霉素中红霉素A A、B B、C C及有关物质。有利于同类品及有关物质。有利于同类品种间质量的比较。种间质量的比较。l9. 9. 有关物质含量采用多种计算方法，如：不有关物质含量采用多种计算方法，如：不加校正因子的自身对照法，加校正因子的自身加校正因子的自身对照法，加校正因子的
13、自身对照法，杂质对照品外标法。根据各品种杂质对照法，杂质对照品外标法。根据各品种杂质的情况，在同一品种中可以同时应用的情况，在同一品种中可以同时应用2 2种或种或3 3种种的计算方法。的计算方法。l10. 10. 增加有机溶媒检查的品种较多。增加有机溶媒检查的品种较多。l10.1 10.1 部分品种采用标准加入法，该方法可提高检部分品种采用标准加入法，该方法可提高检测灵敏度。测灵敏度。l10.2 10.2 另由于生产工艺的不同，各生产厂使用的有另由于生产工艺的不同，各生产厂使用的有机溶媒也不同，同一品种中可能有几十种的溶媒，机溶媒也不同，同一品种中可能有几十种的溶媒，为方便操作、经试验在标准中
14、规定各溶剂的相对调为方便操作、经试验在标准中规定各溶剂的相对调整保留时间（整保留时间（RARTRART），检查时可先做供试品，从供），检查时可先做供试品，从供试品中检出的溶媒的试品中检出的溶媒的RARTRART与规定的与规定的RARTRART比较，确定比较，确定为何种溶媒时，再进行对照品测定，可减少工作量，为何种溶媒时，再进行对照品测定，可减少工作量，大大降低检验大大降低检验成本成本，提高工作效率。提高工作效率。l11. 11. 为保证临床使用的安全有效，供注射用为保证临床使用的安全有效，供注射用-内酰胺抗生素，除检查有关物质外，增加高分子内酰胺抗生素，除检查有关物质外，增加高分子聚合物的检查
15、。在原来聚合物的检查。在原来2121个品种基础上增加至个品种基础上增加至4242个品种个品种. .l 20052005年版药典年版药典-内酰胺类抗生素品种进行高内酰胺类抗生素品种进行高分子杂质检查时，由于该方法的分析周期较长，分子杂质检查时，由于该方法的分析周期较长，本版药典对测定方法进一步完善，采用直径较细本版药典对测定方法进一步完善，采用直径较细内径为内径为1cm,1cm,长为长为30cm30cm的玻璃柱作为色谱柱。使分的玻璃柱作为色谱柱。使分析周期缩短至析周期缩短至45-6045-60分钟，为原来周期的分钟，为原来周期的1/31/3。l20052005年版药典方法色谱柱填充剂均为年版药典
16、方法色谱柱填充剂均为sephadex sephadex G10G10。本版药典增加球状蛋白亲水硅胶为色谱柱填。本版药典增加球状蛋白亲水硅胶为色谱柱填充剂的高分子聚合物分析方法充剂的高分子聚合物分析方法l12. 200512. 2005年版药典氨基糖苷类、大环内酯类的含年版药典氨基糖苷类、大环内酯类的含量测定方法为微生物检定法的管碟法，本版药典量测定方法为微生物检定法的管碟法，本版药典增加微生物检定法浊度法，二法并列。增加微生物检定法浊度法，二法并列。l13. 13. 更多的品种用细菌内毒素的检查替代热原检更多的品种用细菌内毒素的检查替代热原检查查。l14. 14. 大容量注射液与眼用制剂增加渗
17、透压摩尔浓度大容量注射液与眼用制剂增加渗透压摩尔浓度检查。检查。l15.15.眼用制剂增加防腐剂检查。眼用制剂增加防腐剂检查。 l16.16.标准中涉及的已知杂质，其化学命名均在标准标准中涉及的已知杂质，其化学命名均在标准最后列出，便于与国外药典的杂质比较。最后列出，便于与国外药典的杂质比较。l三、抗生素品种分类介绍三、抗生素品种分类介绍 下面将重点介绍下面将重点介绍-内酰胺类、大环内酯类、内酰胺类、大环内酯类、氨基糖苷类、四环素类、酰胺醇类、利福霉素类、氨基糖苷类、四环素类、酰胺醇类、利福霉素类、喹诺酮类、抗肿瘤类、肽类的抗生素在新版药典喹诺酮类、抗肿瘤类、肽类的抗生素在新版药典中的增修订的
18、情况。中的增修订的情况。l 1.-1.-内酰胺类抗生素内酰胺类抗生素 本类抗生素包括：头孢菌素类、青霉素类、酶本类抗生素包括：头孢菌素类、青霉素类、酶抑制剂类、碳青霉烯类与单环抑制剂类、碳青霉烯类与单环-内酰胺类共内酰胺类共127127个品种，占抗生素品种的个品种，占抗生素品种的36.8%36.8%。1.11.1品种收品种收载载情况情况： 表表1.1 1.1 头孢头孢菌素菌素类类品种收品种收载载情况情况 收收载载情况情况 原料原料 制剂制剂总计总计20102010年版年版药药典收典收载载品种品种 27 27 48 48 75 75新增品种新增品种 11 11 19 19 30 30l 头孢菌素
19、类新增品种：头孢菌素类新增品种：l原料：原料： 制剂：制剂：l1.1.头孢尼西钠头孢尼西钠 1. 1.注射用头孢尼西钠注射用头孢尼西钠l2.2.头孢地嗪钠头孢地嗪钠 2. 2.注射用头孢地嗪钠注射用头孢地嗪钠l3.3.头孢唑肟钠头孢唑肟钠 3. 3.注射用头孢唑肟钠注射用头孢唑肟钠l4.4.头孢吡肟钠头孢吡肟钠 4. 4.注射用头孢吡肟钠注射用头孢吡肟钠l5.5.头孢西丁钠头孢西丁钠 5. 5.注射用头孢西丁钠注射用头孢西丁钠l6.6.头孢克肟头孢克肟 6. 6.头孢克肟片；头孢克肟片；7.7.头孢克肟胶囊；头孢克肟胶囊；l 8. 8.头孢克肟头孢克肟颗颗粒粒l7.7.头孢丙烯头孢丙烯 9.
20、9.头孢丙烯片；头孢丙烯片；10.10.头孢丙烯干混悬剂头孢丙烯干混悬剂l8.8.拉氧头孢钠拉氧头孢钠 11. 11.注射用拉氧头孢钠注射用拉氧头孢钠l9.9.盐酸头孢他美酯盐酸头孢他美酯 12. 12.盐酸头孢他美酯片；盐酸头孢他美酯片；13.13.盐酸头孢他美干悬剂；盐酸头孢他美干悬剂；l 14. 14.盐酸头孢他美酯胶囊；盐酸头孢他美酯胶囊；15.15.盐酸头孢他美酯盐酸头孢他美酯颗颗粒粒l10.10.头孢孟多酯钠头孢孟多酯钠 16. 16.注射用头孢孟多酯钠注射用头孢孟多酯钠l11.11.头孢泊肟酯头孢泊肟酯 17. 17.头孢泊肟酯片；头孢泊肟酯片；18. 18. 头孢泊肟酯胶囊；头
21、孢泊肟酯胶囊；l 19. 19.头孢泊肟酯干混悬剂头孢泊肟酯干混悬剂 品种品种 收收载载情况情况 原料原料 制剂制剂 总计总计青霉素类青霉素类20102010年版年版药药典收典收载载品种品种新增品种新增品种 16 16 2 2 28 28 6 6 44 44 8 8酶酶抑制剂抑制剂类类20102010年版年版药药典收典收载载品种品种新增品种新增品种 4 4 1 1 4 4 1 1碳青霉烯类碳青霉烯类20102010年版年版药药典收典收载载品种品种新增品种新增品种 1 1 1 1 2 2单环单环-内内酰酰胺胺类类20102010年版年版药药典收典收载载品种品种新增品种新增品种 1 1 1 1 1
22、 1 1 1 2 2 2 2表表表表1.2 1.2 青霉素青霉素青霉素青霉素类类类类，酶酶酶酶抑制抑制抑制抑制剂剂剂剂，碳青霉，碳青霉，碳青霉，碳青霉烯类烯类烯类烯类与与与与单环单环单环单环-内内内内酰酰酰酰胺胺胺胺类类类类品种收品种收品种收品种收载载载载情况情况情况情况l青霉素类与酶抑制剂青霉素类与酶抑制剂:l新增品种：新增品种：l原料：原料：制剂：制剂：l1.阿洛西林钠阿洛西林钠1.注射用阿洛西林钠注射用阿洛西林钠l2.美洛西林钠美洛西林钠2.注射用美洛西林钠注射用美洛西林钠l3.他唑巴坦他唑巴坦3.注射用哌拉西林钠他唑巴坦注射用哌拉西林钠他唑巴坦l4.阿莫西林克拉维酸钾分散片；阿莫西林克
23、拉维酸钾分散片；l5.阿莫西林克拉维酸钾颗粒；阿莫西林克拉维酸钾颗粒；l6.阿莫西林克拉维酸钾干混悬剂阿莫西林克拉维酸钾干混悬剂l单环单环-内酰胺类新增品种：内酰胺类新增品种：l原料：原料：制剂：制剂：l氨曲南氨曲南注射用氨曲南注射用氨曲南l1.2 20101.2 2010年版药典本类抗生素药质量标年版药典本类抗生素药质量标准要点准要点 l1.2.1 1.2.1 性状性状 l 本类药物均为半合成的头孢菌素及其制剂，本类药物均为半合成的头孢菌素及其制剂，原料药外观性状一般为白色至微黄色粉末或结原料药外观性状一般为白色至微黄色粉末或结晶性粉末。晶性粉末。l 注射用粉针剂的外观性状与原料相同。注射用
24、粉针剂的外观性状与原料相同。l1.2.2 1.2.2 鉴别鉴别 l 原料药与注射用粉针的鉴别均采用色谱法原料药与注射用粉针的鉴别均采用色谱法HPLCHPLC，光谱法，光谱法IRIR以及钾、钠离子火焰反应，也以及钾、钠离子火焰反应，也有多个品种采用有多个品种采用HPLCHPLC与与TLCTLC二法并列。少数品二法并列。少数品种有用种有用UVUV鉴别。鉴别。 l 固体口服制剂一般用固体口服制剂一般用HPLCHPLC或或HPLCHPLC与与TLCTLC作作为鉴别，二法并列。少数有用为鉴别，二法并列。少数有用UVUV法作为鉴别。法作为鉴别。l1.2.31.2.3溶液的澄清度与颜色溶液的澄清度与颜色l
25、检查溶液的澄清度与颜色是控制检查溶液的澄清度与颜色是控制-内酰胺内酰胺类注射用的原料药与制剂内在质量的一个重要指类注射用的原料药与制剂内在质量的一个重要指标。标准中大部分采用与标准管进行比浊和比色标。标准中大部分采用与标准管进行比浊和比色的目测法。的目测法。l 本版药典有多个品种采用紫外本版药典有多个品种采用紫外- -可见分光光度可见分光光度法在特定的波长处测定吸光度，控制溶液的颜色，法在特定的波长处测定吸光度，控制溶液的颜色，如：头孢尼西钠、如：头孢尼西钠、 头孢噻肟钠。头孢噻肟钠。l1.2.4 1.2.4 有关物质有关物质 l1.2.4.1 1.2.4.1 头孢菌素类药物原料头孢菌素类药物
26、原料2727个品种均规定个品种均规定检查有关物质，制剂检查有关物质，制剂4242个品种除个品种除6 6个品种颗粒与个品种颗粒与干混悬剂由于辅料干扰未规定检查有关物质外干混悬剂由于辅料干扰未规定检查有关物质外, , 其他品种均有有关物质检查。其他品种均有有关物质检查。l 头孢菌素品种有关物质检查均采用头孢菌素品种有关物质检查均采用HPLCHPLC法，除法，除头孢西丁钠以苯基键合硅胶为填充剂外；其他均头孢西丁钠以苯基键合硅胶为填充剂外；其他均以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，反相色谱，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，反相色谱，紫外检测。紫外检测。l其中有头孢地尼、头孢克洛、头孢唑啉钠、其中有头孢地尼
27、、头孢克洛、头孢唑啉钠、 头孢西丁钠、头孢西丁钠、 头孢克肟、头孢噻肟钠、头孢克肟、头孢噻肟钠、 头孢头孢噻吩钠、噻吩钠、 拉氧头孢钠、拉氧头孢钠、 头孢呋辛钠、头孢丙头孢呋辛钠、头孢丙烯、头孢氨苄、头孢羟氨苄及其制剂共烯、头孢氨苄、头孢羟氨苄及其制剂共2929个品个品种用种用HPLCHPLC法梯度洗脱。法梯度洗脱。表表1.3头孢头孢菌素的有关物菌素的有关物质检查质检查 总总数数 有关物有关物质质 HPLC HPLC梯度洗脱梯度洗脱原料原料 27 27 27 27 12 12制制剂剂 42 42 36 36 17 17l1.2.4.2 1.2.4.2 青霉素类、酶抑制剂、碳青霉烯类与青霉素类、
28、酶抑制剂、碳青霉烯类与单环单环-内酰胺类原料内酰胺类原料2222个品种均规定检查有个品种均规定检查有关物质，关物质，l 制剂制剂2525个品种除个品种除5 5个品种片，颗粒与干混悬个品种片，颗粒与干混悬剂等由于辅料干扰未规定检查有关物质外剂等由于辅料干扰未规定检查有关物质外, , 其其他品种均有有关物质检查。他品种均有有关物质检查。l l有关物质检查均采用有关物质检查均采用HPLCHPLC法，法，l 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，反相色以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，反相色谱，紫外检测。谱，紫外检测。l 其中有阿莫西林、阿莫西林钠、青霉素钠其中有阿莫西林、阿莫西林钠、青霉素钠( (钾钾) )
29、、青霉素、青霉素V V钾、氨苄西林、氨苄西林钠、钾、氨苄西林、氨苄西林钠、氨曲南等原料及其制剂共氨曲南等原料及其制剂共2727个品种采用梯度洗个品种采用梯度洗脱方法。脱方法。 总总数数 有关物有关物质质 HPLC HPLC梯度洗脱梯度洗脱 原料原料 20 20 20 20 11 11 制制剂剂 28 28 23 23 15 15 表表1.5 1.5 碳青霉烯类与单环碳青霉烯类与单环-内内酰酰胺胺类类 有关物有关物质检查质检查 总总数数 有关物有关物质质 HPLC HPLC梯度洗脱梯度洗脱 原料原料 2 2 2 2 1 1 制制剂剂 2 2 2 2 1 1表表表表1.4 1.4 青霉素类与酶青霉
30、素类与酶青霉素类与酶青霉素类与酶抑制剂抑制剂抑制剂抑制剂有关物有关物有关物有关物质检查质检查质检查质检查l1.2.4.31.2.4.3 采用梯度洗脱时，由于不同色谱柱采用梯度洗脱时，由于不同色谱柱的行为略有差异，故在系统适用性试验中，应的行为略有差异，故在系统适用性试验中，应规定主峰的出峰时间，主峰与已知杂质的分离规定主峰的出峰时间，主峰与已知杂质的分离度等要求。度等要求。l 如：头孢地尼规定如：头孢地尼规定: :l 主成分头孢地尼峰保留时间约为主成分头孢地尼峰保留时间约为2222分钟分钟，E-E-异构体峰异构体峰保留时间约为头孢地尼峰保留时间的保留时间约为头孢地尼峰保留时间的1.51.5倍，
31、理论板数倍，理论板数按头孢地尼峰计算不低于按头孢地尼峰计算不低于70007000，头孢地尼峰与其相对保头孢地尼峰与其相对保留时间留时间0.950.95和和1.11.1处杂质峰的分离度均应不小于处杂质峰的分离度均应不小于1.01.0。l 如：头孢丙烯规定：如：头孢丙烯规定：l 头孢丙烯头孢丙烯(Z)(Z)异构体峰的保留时间约为异构体峰的保留时间约为23233030分钟，分钟，头孢丙烯（头孢丙烯（E E）异构体峰的保留时间约为）异构体峰的保留时间约为30304040分钟，分钟，理论板数按头孢丙烯（理论板数按头孢丙烯（Z Z）异构体峰计算应不小于）异构体峰计算应不小于1000010000，头孢丙烯（
32、头孢丙烯（Z Z）异构体峰与相邻杂质峰间的分离度应）异构体峰与相邻杂质峰间的分离度应符合要求。符合要求。 l如：头孢克洛规定如：头孢克洛规定: : l 头孢克洛峰的保留时间约为头孢克洛峰的保留时间约为2323分钟，头孢克洛峰分钟，头孢克洛峰与头孢克洛与头孢克洛-3-3-异构体峰的分离度应不小于异构体峰的分离度应不小于2.02.0，头孢，头孢克洛峰的拖尾因子应小于克洛峰的拖尾因子应小于1.21.2。l1.2.4.4 1.2.4.4 由于梯度洗脱基线噪音相对较大，故由于梯度洗脱基线噪音相对较大，故规定供试品溶液色谱图中小于对照溶液主峰面积规定供试品溶液色谱图中小于对照溶液主峰面积0.050.05倍
33、或倍或0.10.1倍的峰可忽略不计。以免基线噪音倍的峰可忽略不计。以免基线噪音影响结果正确性。影响结果正确性。l1.2.4.5 1.2.4.5 有关物质测定结果计算可分为三种方法：有关物质测定结果计算可分为三种方法：l(1). (1). 不加校正因子的自身对照法；不加校正因子的自身对照法；l(2). (2). 加校正因子的自身对照法；加校正因子的自身对照法；l(3). (3). 已知杂质对照品外标法已知杂质对照品外标法。l用杂质对照品外标法计算已知杂质的含量用杂质对照品外标法计算已知杂质的含量, ,用加校正因子与不加校正因子的自身对照法用加校正因子与不加校正因子的自身对照法计算已知杂质和未知杂
34、质的含量和杂质的总计算已知杂质和未知杂质的含量和杂质的总量。量。l 有关物质包括已知杂质与未知杂质，故在有关物质包括已知杂质与未知杂质，故在方法中可分别规定用杂质对照品外标法、加方法中可分别规定用杂质对照品外标法、加校正因子与不加校正因子的自身对照法计算。校正因子与不加校正因子的自身对照法计算。l如：头孢他啶中吡啶与头孢拉定中头孢氨苄均如：头孢他啶中吡啶与头孢拉定中头孢氨苄均采用杂质对照品外标法。采用杂质对照品外标法。l 头孢拉定、头孢氨苄、头孢羟氨苄中头孢拉定、头孢氨苄、头孢羟氨苄中7-7-氨基氨基去乙酰氧基头孢烷酸（去乙酰氧基头孢烷酸（7-ADCA7-ADCA）及头孢哌酮钠）及头孢哌酮钠中
35、杂质中杂质A A等均采用杂质对照品外标法。等均采用杂质对照品外标法。l如：头孢拉定中已知杂质：如：头孢拉定中已知杂质：l 7-7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸（氨基去乙酰氧基头孢烷酸（7-ADCA7-ADCA）l 双氢苯苷氨酸（双氢苯苷氨酸（220nm220nm）l 头孢氨苄头孢氨苄l 头孢氨苄中已知杂质：头孢氨苄中已知杂质：l 7-7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸（氨基去乙酰氧基头孢烷酸（7-ADCA7-ADCA）l - -苯苷氨酸苯苷氨酸l 头孢羟氨苄中已知杂质：头孢羟氨苄中已知杂质：l 7-7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸（氨基去乙酰氧基头孢烷酸（7-ADCA7-ADCA）l - -对羟基苯苷氨酸对羟基苯
36、苷氨酸l 头孢哌酮钠中已知杂质：头孢哌酮钠中已知杂质：l 杂质杂质A A（原称为头孢哌酮降介物（原称为头孢哌酮降介物）l如：头孢羟氨苄如：头孢羟氨苄: : l 供试品溶液色谱图中如有杂质峰，含供试品溶液色谱图中如有杂质峰，含-对羟对羟基苯甘氨酸和基苯甘氨酸和7-7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸按外标氨基去乙酰氧基头孢烷酸按外标法以峰面积计算，法以峰面积计算，均不得过均不得过1.0%1.0%；其他单个杂质；其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面（峰面积不得大于对照溶液主峰面（1.0%1.0%），其他），其他各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的3 3倍（
37、倍（3.0%3.0%）, ,供试品溶液色谱图中任何小于对照供试品溶液色谱图中任何小于对照溶液主峰面积溶液主峰面积0.050.05倍的峰可忽略不计倍的峰可忽略不计. .l如：头孢哌酮钠如：头孢哌酮钠l 供试品溶液色谱图中如有杂质峰，含供试品溶液色谱图中如有杂质峰，含杂质杂质A A按按外标法以峰面积计算，外标法以峰面积计算，不得过不得过3.0%3.0%，其他单个，其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的2 2倍倍（2 2），其他各杂质峰面积的和不得大于对），其他各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的照溶液主峰面积的3 3倍（倍（3.0%3.0%）, ,供
38、试品溶液色供试品溶液色谱图中任何小于对照溶液主峰面积谱图中任何小于对照溶液主峰面积0.10.1倍的峰倍的峰可忽略不计。可忽略不计。l1.2.4.6 1.2.4.6 在检测中根据杂质最大吸收波长的在检测中根据杂质最大吸收波长的不同，采用双波长测定，不同，采用双波长测定，l 如：头孢拉定有关物质测定时，用不同波长如：头孢拉定有关物质测定时，用不同波长 测定不同杂质，测定不同杂质，l 用用220nm220nm波长检测双氢苯苷氨酸，波长检测双氢苯苷氨酸，l 用用254nm254nm波长检测其他杂质。波长检测其他杂质。l1.2.5 1.2.5 高分子聚合物高分子聚合物l1.2.5.1 1.2.5.1 高
39、分子聚合物是高分子聚合物是-内酰胺类抗生素临内酰胺类抗生素临床过敏反应的一个主要因素，故在注射用原料及床过敏反应的一个主要因素，故在注射用原料及其制剂标准中增加检查高分子聚合物，控制一定其制剂标准中增加检查高分子聚合物，控制一定的限度，对临床用药安全有效具有重大的意义。的限度，对临床用药安全有效具有重大的意义。l 20052005年版药典已有个品种收载高分子聚年版药典已有个品种收载高分子聚合物检查，本版药典增加到合物检查，本版药典增加到 42 42 个品种。个品种。l 其中其中4040个品种以葡聚糖凝胶个品种以葡聚糖凝胶G-10(40G-10(40120m)120m)为填充剂的玻璃柱（为填充剂
40、的玻璃柱（1.01.01.430cm1.430cm）色谱柱的凝胶色谱法测定，）色谱柱的凝胶色谱法测定，l 2 2个品种以球状蛋白色谱用亲水硅胶（分子个品种以球状蛋白色谱用亲水硅胶（分子量为量为1000100050005000）为填充剂为色谱柱的）为填充剂为色谱柱的HPLCHPLC法法测定。测定。表表1.6 1.6 凝胶色凝胶色谱测谱测定高分子聚合物定高分子聚合物（200年版已收载21个品种） 原料原料 制制剂剂 头孢哌酮钠头孢哌酮钠 注射用注射用头孢哌酮钠头孢哌酮钠 头孢唑头孢唑林林钠钠 注射用注射用头孢唑头孢唑林林钠钠 头孢头孢曲松曲松钠钠 注射用注射用头孢头孢曲松曲松钠钠 头孢噻肟钠头孢噻
41、肟钠 注射用注射用头孢噻肟钠头孢噻肟钠 头孢呋头孢呋辛辛钠钠 注射用注射用头孢呋头孢呋辛辛钠钠 头孢头孢他他啶啶 注射用注射用头孢头孢他他啶啶 青霉素青霉素钠钠 注射用青霉素注射用青霉素钠钠 青霉素青霉素V V钾钾 青霉素青霉素V V钾钾胶囊胶囊 阿莫西林阿莫西林 阿莫西林胶囊阿莫西林胶囊 头孢头孢拉定拉定表表1.7.凝胶色凝胶色谱测谱测定高分子聚合物定高分子聚合物 （2010年版新增19个品种） 原料原料 制制剂剂 头孢唑肟钠头孢唑肟钠 注射用头孢唑肟钠注射用头孢唑肟钠 头孢替唑钠头孢替唑钠 注射用头孢替唑钠注射用头孢替唑钠 头孢尼西钠头孢尼西钠 注射用头孢尼西钠注射用头孢尼西钠 头孢噻吩钠
42、头孢噻吩钠 注射用头孢噻吩注射用头孢噻吩 磺苄西林钠磺苄西林钠 注射用磺苄西林钠注射用磺苄西林钠 阿洛西林钠阿洛西林钠 注射用阿洛西林钠注射用阿洛西林钠 美洛西林钠美洛西林钠 注射用美洛西林钠注射用美洛西林钠 氯唑西林钠氯唑西林钠 注射用氯唑西林钠注射用氯唑西林钠 苯唑西林钠苯唑西林钠 注射用苯唑西林钠注射用苯唑西林钠 普鲁卡因青霉素普鲁卡因青霉素 表表1.8 HPLC1.8 HPLC测测定高分子聚合物定高分子聚合物 （2010年版新增2个品种） 原料原料 制制剂剂 头孢头孢地地嗪钠嗪钠 注射用注射用头孢头孢地地嗪钠嗪钠l1.2.5.2 1.2.5.2 国内关于国内关于-内酰胺类抗生素高分子内
43、酰胺类抗生素高分子杂质的研究工作是于杂质的研究工作是于7070年代开始，经历了近年代开始，经历了近4040年的研究，于年的研究，于20002000年版药典在年版药典在4 4个品种个品种8 8个药品个药品标准中正式收载了高分子杂质检查。标准中正式收载了高分子杂质检查。l 2005 2005年版药典扩大到年版药典扩大到1111个品种的个品种的2121个药品标个药品标准中均有高分子杂质检查。准中均有高分子杂质检查。 l 但在但在20052005年版药典年版药典-内酰胺类抗生素品种内酰胺类抗生素品种进行高分子杂质检查时，由于该方法的分析周进行高分子杂质检查时，由于该方法的分析周期较长，加之在执行过程中
44、涉及到较多生产厂期较长，加之在执行过程中涉及到较多生产厂与检验部门，工作量大幅度增加。与检验部门，工作量大幅度增加。l 作为常规检验方法有必要进行改进，考虑到作为常规检验方法有必要进行改进，考虑到原药典收载的方法在原理，系统适用性试验，原药典收载的方法在原理，系统适用性试验，以及方法验证专属性、重现性、准确性等方面以及方法验证专属性、重现性、准确性等方面均符合要求，而仅仅是分析周期过长均符合要求，而仅仅是分析周期过长. . l因此在研究建立新的方法时，我们仍采用凝胶色因此在研究建立新的方法时，我们仍采用凝胶色谱的分离模式，并采用原方法中的自身对照外标法，谱的分离模式，并采用原方法中的自身对照外
45、标法，进行高分子聚合物杂质的测定。在上述二个基本条进行高分子聚合物杂质的测定。在上述二个基本条件不变的前提下进行方法学的改进件不变的前提下进行方法学的改进, ,完善。完善。l1.2.5.2.1 1.2.5.2.1 拟采用直径较细，内径为拟采用直径较细，内径为1cm,1cm,长为长为30cm30cm的玻璃柱作为色谱柱。以的玻璃柱作为色谱柱。以sephadexG10sephadexG10为填充剂，柱为填充剂，柱内径的缩小，柱床体积随之也变小。内径的缩小，柱床体积随之也变小。Kv=0Kv=0也降低。也降低。分析周期缩短至分析周期缩短至45-6045-60分钟，是原方法周期的分钟，是原方法周期的1/3
46、1/3。（见图（见图1.11.1，图，图1.31.3）l1.2.5.2.21.2.5.2.2 在系统适用性试验中规定分离度的在系统适用性试验中规定分离度的要求，在高分子杂质检查时，某些药物分子单体要求，在高分子杂质检查时，某些药物分子单体与高聚物不能达到基线分离时，其分离度计算公与高聚物不能达到基线分离时，其分离度计算公式为：式为：l R=R=聚合体的峰高聚合体的峰高/ /单体与聚合体之间的谷单体与聚合体之间的谷高高l（分离度（分离度R R应大于应大于2.02.0）。）。l 由于高分子聚合物的对照品不易获得，样品由于高分子聚合物的对照品不易获得，样品中的高聚物量较少，故不能直接用样品与聚合中的
47、高聚物量较少，故不能直接用样品与聚合物对照品配制分离度试验用溶液，物对照品配制分离度试验用溶液，l 根据本方法的分离原理，拟加入一定量的蓝根据本方法的分离原理，拟加入一定量的蓝色葡聚糖色葡聚糖20002000，制成含一定浓度蓝色葡聚糖，制成含一定浓度蓝色葡聚糖20002000的样品溶液来进行分离度试验。的样品溶液来进行分离度试验。l根据上面公式，分离度随着聚合物峰高的增大根据上面公式，分离度随着聚合物峰高的增大而增大，故加入蓝色葡聚糖而增大，故加入蓝色葡聚糖20002000的量应该有一的量应该有一定的要求，在研究方法时，根据品种项下规定定的要求，在研究方法时，根据品种项下规定的限度及蓝色葡聚糖
48、的限度及蓝色葡聚糖20002000在该系统中的响应值在该系统中的响应值, ,般加入的量为聚合物规定限度响应值的般加入的量为聚合物规定限度响应值的1-21-2倍即可。（见图倍即可。（见图1.21.2，图，图1.41.4）图图1.1阿莫西林样品分析全程色谱图阿莫西林样品分析全程色谱图图图1.2 阿莫西林分离度计算色谱图阿莫西林分离度计算色谱图 图图1.3 头孢他啶样品分析全程色谱图头孢他啶样品分析全程色谱图(流速流速:0.8ml/min)图图1.4 1.4 头孢他啶分离度计算色谱图头孢他啶分离度计算色谱图 l1.2.5.2.3 1.2.5.2.3 方法比较方法比较 l 用用20052005年版药典
49、方法和改进后的方法测定年版药典方法和改进后的方法测定20052005年版药典收载年版药典收载1111个品种的个品种的F F值与高聚物的含值与高聚物的含量量, ,结果基本一致（见表结果基本一致（见表1.9,1.101.9,1.10）。）。l 因此本版药典凝胶色谱高分子聚合物项下仅因此本版药典凝胶色谱高分子聚合物项下仅将色谱柱修订为内径将色谱柱修订为内径1.01.01.4cm,1.4cm,长为长为303040cm40cm的玻璃柱。即两种不同规格柱并列，可根据实的玻璃柱。即两种不同规格柱并列，可根据实际条件选择，测定结果是一致的。际条件选择，测定结果是一致的。 品种品种20052005年版年版药药典
50、方法典方法 F F值值改改进进后的方法后的方法F F值值相相对对偏差偏差 阿莫西林阿莫西林均均值值：F=42.63*10F=42.63*10-3-3 (n=36) (n=36)均均值值：F=41.0236*10F=41.0236*10-3-3 (n=31)(n=31)1.92%1.92% 头孢唑头孢唑林林钠钠均均值值：F=1.3807*10F=1.3807*10-3-3 (n=11)(n=11)均均值值：F=1.3794*10F=1.3794*10-3-3 (n=33)(n=33)0.17%0.17% 头孢头孢拉定拉定均均值值 F=0.815010 F=0.815010-3-3 (n=5)(n
51、=5)均均值值：F=1.676810F=1.676810-3-3(n=5)(n=5)1.42%1.42% 头孢头孢他他啶啶均均值值:F= 0.868210:F= 0.868210-3-3 (n=5)(n=5)均均值值：F=0.898410F=0.898410-3-3(n=5)(n=5)1.71%1.71%* F* F值为对照品溶液浓度值为对照品溶液浓度(g/ml)(g/ml)与峰面积的比值与峰面积的比值表表表表1.9 F1.9 F1.9 F1.9 F值值值值的比的比的比的比较较较较表表1.10高分子聚合物高分子聚合物测测定定结结果的比果的比较较 品种品种 批号批号20052005年版年版药药典
52、方法典方法高聚物含量（高聚物含量（% %）改改进进后的方法后的方法高聚物含量（高聚物含量（% %） 相相对对偏差偏差阿莫西林囊阿莫西林囊05075010507501（联联邦制邦制药药）均均值值：0.056%0.056% (n=2) (n=2)均均值值：0.0506%0.0506% (n=4) (n=4)5.15.1阿莫西林阿莫西林308507016A308507016A（联联邦制邦制药药厂）厂） 均均值值：0.0355%0.0355% (n=2) (n=2)均均值值：0.033%0.033% (n=3) (n=3)2.92.9头孢唑头孢唑林林钠钠比比对样对样品品（苏苏州制州制药药） 均均值值：
53、0.0093%0.0093% (n=2) (n=2)均均值值：0.011%0.011% (n=6) (n=6)8.38.3头孢唑头孢唑林林钠钠比比对样对样品品（上海新先（上海新先锋锋 ） 均均值值：0.0154%0.0154% (n=2) (n=2)均均值值：0.0148%0.0148% (n=5) (n=5)2.02.0头孢唑头孢唑林林钠钠CZSS051142CZSS051142（奥奇特）（奥奇特） 均均值值：0.016%0.016% (n=3) (n=3)均均值值：0.017%0.017% (n=3) (n=3)0.30.3l1.2.61.2.6 应用应用HPCEHPCE测定盐酸头孢吡肟中
54、测定盐酸头孢吡肟中N N- -甲甲基吡咯烷的含量，是本版药典正文收载应用基吡咯烷的含量，是本版药典正文收载应用HPCEHPCE的的2 2个品种之一。个品种之一。l1.2.7 1.2.7 标准中增加有机溶媒检查的品种较多标准中增加有机溶媒检查的品种较多l1.2.7.1 1.2.7.1 本检查法大多采用涂层毛细管柱为本检查法大多采用涂层毛细管柱为色谱柱，等温，程序升温，顶空进样，色谱柱，等温，程序升温，顶空进样，l 内标法，外标法计算结果。本版药典部分品内标法，外标法计算结果。本版药典部分品种溶媒残留检查项下采用标准加入法计算，该种溶媒残留检查项下采用标准加入法计算，该方法可提高检测灵敏度。方法可
55、提高检测灵敏度。l1.2.7.2 1.2.7.2 由于生产工艺的不同，各厂使用的有机由于生产工艺的不同，各厂使用的有机溶媒也不同，同一品种中可能有几十种的溶媒，溶媒也不同，同一品种中可能有几十种的溶媒，为方便操作、经试验在标准中规定各溶剂的相对为方便操作、经试验在标准中规定各溶剂的相对调整保留时间（调整保留时间（RARTRART），），l 检查时可先做供试品，从供试品中检出的溶媒检查时可先做供试品，从供试品中检出的溶媒的的RARTRART与规定的与规定的RARTRART比较，确定为何种溶媒时，比较，确定为何种溶媒时，再进行对照品测定，可减少工作量，大大降低检再进行对照品测定，可减少工作量，大大
56、降低检验成本，提高工作效率。验成本，提高工作效率。l如：头孢泊肟酯如：头孢泊肟酯l残留溶剂残留溶剂 甲醇、乙腈、丙酮、二氯甲烷、异丙甲醇、乙腈、丙酮、二氯甲烷、异丙醇、丁酮、乙酸乙酯、四氢呋喃、乙酸丁酯、醇、丁酮、乙酸乙酯、四氢呋喃、乙酸丁酯、1,2-1,2-二氯乙烷、乙酸异丙酯、苯、四氯化碳、环二氯乙烷、乙酸异丙酯、苯、四氯化碳、环己烷、二氧六环、甲基异丁基酮、吡啶、甲苯己烷、二氧六环、甲基异丁基酮、吡啶、甲苯 照残留溶剂测定法（附录照残留溶剂测定法（附录 P P）测定。）测定。l色谱条件与系统适用性试验色谱条件与系统适用性试验 以以6%6%氰丙基苯基氰丙基苯基- -94%94%二甲基聚硅氧
57、烷为固定液（或极性相近）的二甲基聚硅氧烷为固定液（或极性相近）的毛细管柱为色谱柱，柱温毛细管柱为色谱柱，柱温4040，维持，维持2222分钟，以分钟，以每分钟每分钟100100速率升温至速率升温至120120，维持，维持1010分钟。进分钟。进样口温度为样口温度为200200，检测器温度为，检测器温度为250250，顶空瓶，顶空瓶平衡温度为平衡温度为7070，平衡时间为，平衡时间为3030分钟，取系统适分钟，取系统适用性溶液顶空进样，按正丙醇（内标）、丁酮、用性溶液顶空进样，按正丙醇（内标）、丁酮、乙酸乙酯的顺序出峰，各峰间的分离度均应符合乙酸乙酯的顺序出峰，各峰间的分离度均应符合要求。要求。
58、l内标溶液的制备内标溶液的制备 取正丙醇适量，用二甲基亚砜取正丙醇适量，用二甲基亚砜稀释制成每稀释制成每1ml1ml中约含中约含200g200g的溶液，作为内标的溶液，作为内标溶液。溶液。l系统适用性溶液的制备系统适用性溶液的制备 取丁酮和乙酸乙酯各适取丁酮和乙酸乙酯各适量，用内标溶液定量稀释成每量，用内标溶液定量稀释成每1ml1ml中约含丁酮和中约含丁酮和乙酸乙酯各乙酸乙酯各1mg1mg的溶液，精密量取的溶液，精密量取1.0ml1.0ml，置顶空，置顶空瓶中，密封瓶口，作为系统适用性溶液。瓶中，密封瓶口，作为系统适用性溶液。l供试品溶液的制备供试品溶液的制备 取本品约取本品约0.2g0.2g
59、，精密称定，精密称定，置顶空瓶中，精密加入内标溶液置顶空瓶中，精密加入内标溶液1.0ml1.0ml使溶解，使溶解，密封瓶口，作为供试品溶液。密封瓶口，作为供试品溶液。l对照品溶液的制备对照品溶液的制备 根据试验确定的具体检测对根据试验确定的具体检测对象，制备对照品溶液。分别精密称取各溶剂适量，象，制备对照品溶液。分别精密称取各溶剂适量，用内标溶液定量稀释制成规定浓度的溶液，作为用内标溶液定量稀释制成规定浓度的溶液，作为混合对照品溶液，混合对照品溶液中各溶剂的浓混合对照品溶液，混合对照品溶液中各溶剂的浓度分别为每度分别为每1ml1ml中含甲醇中含甲醇600 ug600 ug、丙酮、丙酮1mg1m
60、g、异丙、异丙醇醇1mg1mg、乙腈、乙腈82ug82ug、二氯甲烷、二氯甲烷120ug120ug、丁酮、丁酮1mg1mg、乙酸乙酯乙酸乙酯1mg1mg，四氢呋喃，四氢呋喃150 ug150 ug、四氯化碳、四氯化碳1 ug1 ug、环己烷环己烷760 ug760 ug、苯、苯1 ug1 ug、1,2-1,2-二氯乙烷二氯乙烷1 ug1 ug、乙、乙酸异丙酯酸异丙酯1mg1mg、二氧六环、二氧六环76 ug76 ug、甲基异丁基酮、甲基异丁基酮1mg1mg、吡啶、吡啶40 ug40 ug、甲苯、甲苯178 ug178 ug。乙酸丁酯。乙酸丁酯1mg1mg、精密量取混合对照品溶液精密量取混合对照
61、品溶液1.0ml1.0ml，置顶空瓶中，置顶空瓶中，密封，作为对照品溶液密封，作为对照品溶液。l测定法测定法 首先取甲烷气体顶空进样，记录甲烷的首先取甲烷气体顶空进样，记录甲烷的保留时间作为色谱系统的死时间（保留时间作为色谱系统的死时间（t0t0）再取供试）再取供试品溶液顶空进样，记录色谱图，供试品溶液色谱品溶液顶空进样，记录色谱图，供试品溶液色谱图中如有色谱峰，按下式计算各色谱峰的保留时图中如有色谱峰，按下式计算各色谱峰的保留时间（间（tRtR）相对于正丙醇保留时间（）相对于正丙醇保留时间（tRtR（正丙醇）（正丙醇）的相对调整保留时间（的相对调整保留时间（RARTRART）；）；l将得到的
62、将得到的RARTRART值与下表的值与下表的RARTRART值比较，确定供值比较，确定供试品中的残留溶剂种类；再制备相应的对照品试品中的残留溶剂种类；再制备相应的对照品溶液，取对照品溶液顶空进样，记录色谱图，溶液，取对照品溶液顶空进样，记录色谱图，按内标法以峰面积比值计算，甲基异丁基酮不按内标法以峰面积比值计算，甲基异丁基酮不得过得过0.5%0.5%；、其他均应符合规定。；、其他均应符合规定。溶溶剂剂RARTRART值值甲醇甲醇丙丙酮酮异丙醇异丙醇乙乙腈腈二二氯氯甲甲烷烷正丙醇正丙醇丁丁酮酮乙酸乙乙酸乙酯酯四四氢呋氢呋喃喃四四氯氯化碳化碳环环己己烷烷苯苯1,2-1,2-二二氯氯乙乙烷烷乙酸异丙
63、乙酸异丙酯酯甲基异丁基甲基异丁基酮酮二氧六二氧六环环吡吡啶啶甲苯甲苯乙酸丁乙酸丁酯酯0.1820.1820.4820.4820.5290.5290.5710.5710.6490.6491.0001.0001.2641.2641.3431.3431.4541.4541.6861.6861.7011.7011.9411.9411.8791.8792.0142.0142.4042.4042.8382.8383.0233.0233.0533.0533.3863.386l1.2.8.2-1.2.8.2-乙基己酸乙基己酸 l 对生产工艺过程中使用对生产工艺过程中使用2-2-乙基己酸的原料，乙基己酸的原料，
64、增加增加2-2-乙基己酸检查，采用气相色谱法测定。乙基己酸检查，采用气相色谱法测定。方法也收载在方法也收载在20102010年版药典二部（附录年版药典二部（附录 L L）. .l如如: :头孢地嗪钠、头孢地嗪钠、l 头孢呋辛钠、头孢呋辛钠、l 头孢孟多酯钠、头孢孟多酯钠、l 氨苄西林钠等。氨苄西林钠等。l1.2.9 1.2.9 水分水分 l 本类药物原料药均采用水分测定法第一法本类药物原料药均采用水分测定法第一法A A测测定水分，定水分，l 制剂中辅料对水分测定法有干扰时，则改为制剂中辅料对水分测定法有干扰时，则改为干燥失重。干燥失重。l 如如: :注射用头孢他啶，因含有注射用头孢他啶，因含有
65、10%10%的碳酸钠对的碳酸钠对水分测定有干扰，改为水分测定有干扰，改为6060真空减压干燥，真空减压干燥，l 头孢地尼胶囊也改为头孢地尼胶囊也改为6060真空减压干燥。真空减压干燥。l1.2.10 1.2.10 不溶性微粒与可见异物不溶性微粒与可见异物 l 供注射用的原料药增加不溶性微粒与可见异供注射用的原料药增加不溶性微粒与可见异物检查物检查, ,以保证制剂能符合注射剂的要求。以保证制剂能符合注射剂的要求。l 由于不溶性微粒光阻法测定结果仅与一定浓由于不溶性微粒光阻法测定结果仅与一定浓度范围内的样品溶液成正比关系，因此在标准度范围内的样品溶液成正比关系，因此在标准中规定不溶性微粒检查供试品
66、溶液浓度。中规定不溶性微粒检查供试品溶液浓度。 l 本类药物制剂规格较多，最多有本类药物制剂规格较多，最多有1111个规格。个规格。考虑临床使用的安全性，在标准中规定：考虑临床使用的安全性，在标准中规定：l 规格规格1.0g1.0g以下的制剂按标示量折算，每以下的制剂按标示量折算，每1g1g样样品中，含品中，含10m10m以上的微粒不得过以上的微粒不得过60006000粒，含粒，含25m25m以上的微粒不得过以上的微粒不得过600600粒；粒；l 规格规格1.0g1.0g以上（包括以上（包括1.0g1.0g）的制剂按每）的制剂按每1 1个个供试品容器中含供试品容器中含10m10m以上的微粒不得
67、过以上的微粒不得过60006000粒，粒，含含25m25m以上的微粒不得过以上的微粒不得过600600粒。粒。l1.2.11 1.2.11 含量测定含量测定l 本类共本类共127127个品种的含量测定均采用个品种的含量测定均采用HPLCHPLC法或法或HPLCHPLC梯度洗脱。梯度洗脱。l 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，反相色谱，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，反相色谱，紫外检测。紫外检测。l 为保证方法的专属性与结果的正确性。利用该为保证方法的专属性与结果的正确性。利用该类药物遇光照或加热能产生反式异构体或类药物遇光照或加热能产生反式异构体或E E异构异构体等有关物质。用于制备系统适用性试
68、验用分离体等有关物质。用于制备系统适用性试验用分离度溶液度溶液，测定分离度，测定分离度，l 结果按外标法以峰面积计算结果按外标法以峰面积计算, ,即得。即得。 l如：拉氧头孢钠如：拉氧头孢钠l【含量测定】【含量测定】 照高效液相色谱法（附录照高效液相色谱法（附录 D D）测定。）测定。l色谱条件与系统适用性试验色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以键合硅胶为填充剂；以0.01mol/L0.01mol/L醋酸铵溶液醋酸铵溶液- -甲醇（甲醇（19:119:1）为流动相；检测波长为）为流动相；检测波长为254nm254nm。取拉氧头孢对照品适量，加水溶解并稀释制
69、成取拉氧头孢对照品适量，加水溶解并稀释制成每每1ml1ml中约含中约含0.25mg0.25mg的溶液，的溶液，取上述溶液适量，取上述溶液适量，在在8080水浴中加热水浴中加热3030分钟，冷却，取分钟，冷却，取10l10l注注入液相色谱仪，记录色谱图，拉氧头孢入液相色谱仪，记录色谱图，拉氧头孢R R异构异构体、拉氧头孢体、拉氧头孢S S异构体依次流出；拉氧头孢异构体依次流出；拉氧头孢R R异异构体和拉氧头孢构体和拉氧头孢S S异构体的分离度应不小于异构体的分离度应不小于4.04.0，两主峰与相邻杂质峰的分离度均应符合要求，两主峰与相邻杂质峰的分离度均应符合要求。l测定法测定法 取本品适量（约相
70、当于拉氧头孢取本品适量（约相当于拉氧头孢25mg25mg），精密称定，置），精密称定，置100ml100ml量瓶中，加水溶量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取解并稀释至刻度，摇匀；精密量取10l10l注入注入液相色谱仪，记录色谱图；另取拉氧头孢对照液相色谱仪，记录色谱图；另取拉氧头孢对照品适量，同法测定，按外标法以峰面积计算供品适量，同法测定，按外标法以峰面积计算供试品中试品中C C2020H H2020N N6 6O O9 9S S的含量。的含量。l如：头孢地尼如：头孢地尼l【含量测定】【含量测定】 照高效液相色谱法（附录照高效液相色谱法（附录 D D）测）测定。定。l色谱条件与系统
71、适用性试验色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以硅胶为填充剂；以0.25%0.25%四甲基氢氧化铵溶液（用四甲基氢氧化铵溶液（用磷酸调节磷酸调节pHpH值至值至5.55.5）- -乙腈乙腈- -甲醇（甲醇（900900：6060：4040），），每每1000ml1000ml中加入中加入0.1mol/L0.1mol/L乙二胺四醋酸二钠溶液乙二胺四醋酸二钠溶液0.4ml0.4ml为流动相，检测波长为为流动相，检测波长为254nm254nm。取头孢地尼对取头孢地尼对照品约照品约20mg20mg，置，置100ml100ml量瓶中，加上述量瓶中，加上述0.1mol
72、/L0.1mol/L磷磷酸盐缓冲液酸盐缓冲液2ml2ml溶解后，用流动相稀释至刻度，摇溶解后，用流动相稀释至刻度，摇匀，在水浴中加热不少于匀，在水浴中加热不少于3030分钟，放冷，得每分钟，放冷，得每1ml1ml中约含中约含0.2mg0.2mg头孢地尼与其降解杂质的混合溶液头孢地尼与其降解杂质的混合溶液（其中相对主峰保留时间（其中相对主峰保留时间0.90.9与与1.21.2处杂质的量各约处杂质的量各约为为2%2%），），l取取20l20l注入液相色谱仪，记录色谱图，头孢注入液相色谱仪，记录色谱图，头孢地尼峰保留时间约为地尼峰保留时间约为8 8分钟，分钟，E-E-异构体峰保留异构体峰保留时间约为
73、头孢地尼峰保留时间的时间约为头孢地尼峰保留时间的3.53.5倍，理论倍，理论板数按头孢地尼峰计算不低于板数按头孢地尼峰计算不低于20002000，头孢地尼，头孢地尼峰与其相对保留时间峰与其相对保留时间0.90.9和和1.21.2处杂质峰的分离处杂质峰的分离度均应不小于度均应不小于1.21.2。l测定法测定法 取本品约取本品约20mg20mg，精密称定，置，精密称定，置100ml100ml棕色量瓶中，加上述棕色量瓶中，加上述0.1mol/L0.1mol/L磷酸盐缓冲液磷酸盐缓冲液2ml2ml溶解后，用流动相稀释至刻度，摇匀，精溶解后，用流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取密量取20l20l注入液相色
74、谱仪，记录色谱图；注入液相色谱仪，记录色谱图；另取头孢地尼对照品适量，同法测定。按外标另取头孢地尼对照品适量，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。法以峰面积计算，即得。l如：如： 氨曲南氨曲南 l【含量测定】【含量测定】 照高效液相色谱法（附录照高效液相色谱法（附录 D D）测定。）测定。l色谱条件与系统适用性试验色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以键合硅胶为填充剂；以0.05mol/L0.05mol/L磷酸二氢钾溶磷酸二氢钾溶液（用液（用1mol/L1mol/L磷酸溶液调节磷酸溶液调节pHpH值至值至3.00.13.00.1）- -甲醇（甲醇（8080
75、：2020）为流动相；检测波长为）为流动相；检测波长为270nm.270nm.取经紫外光灯（取经紫外光灯（254nm254nm）下照射）下照射2424小时后的本品小时后的本品适量，加流动相溶解并稀释制成每适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml1ml中约含中约含1mg1mg的溶液，量取的溶液，量取20l20l注入液相色谱仪，记录注入液相色谱仪，记录色谱图，氨曲南峰与氨曲南色谱图，氨曲南峰与氨曲南E E异构体峰（相对保异构体峰（相对保留时间约留时间约1.61.6）的分离度应大于）的分离度应大于3.03.0。 l测定法测定法 取本品约取本品约50mg50mg，精密称定，置，精密称定，置50ml50ml
76、量量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，精瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取密量取20l20l注入液相色谱仪，记录色谱图；另注入液相色谱仪，记录色谱图；另取氨曲南对照品适量，同法测定。按外标法以取氨曲南对照品适量，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。峰面积计算，即得。l1.3 1.3 标准中涉及的已知杂质，在标准最后列出标准中涉及的已知杂质，在标准最后列出其化学命名，便于与国外药典标准中的杂质比较。其化学命名，便于与国外药典标准中的杂质比较。l如：头孢哌酮钠如：头孢哌酮钠l杂质杂质A A：(5a(5aR R,6,6R R)-6-(2)-6-(2R R)-2-(4-ethyl-2
77、,3-)-2-(4-ethyl-2,3-dioxopiperazin-1-yl)carbonylaminodioxopiperazin-1-yl)carbonylamino -2-(4-hydroxyphenyl)acetylamino-5a,6- -2-(4-hydroxyphenyl)acetylamino-5a,6-dihydro-3dihydro-3H H,7,7H H-azeto2,1-azeto2,1-b bfuro3,4-furo3,4-d d1,3thiazine-1,7(41,3thiazine-1,7(4H H)-dione)-dionel中文名：中文名：(5a(5aR R
78、,6,6R R)-6-(2)-6-(2R R)-2-(4-)-2-(4-乙基乙基-2,3-2,3-二氧代二氧代哌嗪哌嗪-1-1-基基) )甲酰基甲酰基 氨基氨基-2-(4-2-(4-羟基苯基羟基苯基) )乙酰基乙酰基 氨基氨基 -5a,6-5a,6-二氢二氢-3-3H H,7,7H H- -氮杂环丁烷并氮杂环丁烷并2,1-2,1-b b 呋喃并呋喃并3,4-3,4-d d1,31,3噻嗪噻嗪-1,7(4-1,7(4H H)-)-二酮二酮l如：头孢唑林钠如：头孢唑林钠l杂质杂质 A A：R=H: (6R=H: (6R R,7,7R R)-7-amino-3-(5-)-7-amino-3-(5-m
79、ethyl-1,3,4-thiadiazol-2-yl)sulphanyl methyl-1,3,4-thiadiazol-2-yl)sulphanyl methyl-8-oxo-5-thia-1-methyl-8-oxo-5-thia-1-azabicyclo4.2.0oct-2-ene-2-carboxylic azabicyclo4.2.0oct-2-ene-2-carboxylic acidacid 中文名：中文名：(6(6R R,7,7R R)-7-)-7-氨基氨基-3-(5-3-(5-甲基甲基- -1,3,4-1,3,4-噻二唑噻二唑-2-2-基基) )硫代硫代 甲基甲基-8-8-
80、氧代氧代-5-5-硫硫代代-1-1-氮杂双环氮杂双环4.2.04.2.0辛辛-2-2-烯烯-2-2-羧酸羧酸l杂质杂质E E：5-methyl-1,3,4-thiadiazol-2-thiol 中文名：中文名：5-5-甲基甲基-1,3,4-1,3,4-噻二唑噻二唑-2-2-甲硫醇甲硫醇l2 2大环内酯类抗生素大环内酯类抗生素l 该类抗生素可分为十四元环、十五元环和该类抗生素可分为十四元环、十五元环和十六元环三类。它们均为多组分抗生素。十六元环三类。它们均为多组分抗生素。l 十四元环有红霉素及其衍生物，具有结构相十四元环有红霉素及其衍生物，具有结构相近近, ,无紫外吸收无紫外吸收, ,特征性反应
81、不明显的特点，以特征性反应不明显的特点，以红霉素、琥乙红霉素、克拉霉素、罗红霉素为红霉素、琥乙红霉素、克拉霉素、罗红霉素为代表代表. .l 十五元环有阿奇霉素；十五元环有阿奇霉素；l 十六元环有乙酰螺旋霉素、吉他霉素等，十六元环有乙酰螺旋霉素、吉他霉素等， 收收载载情况情况 原料原料 制剂制剂 总计总计20102010年版药典收载品种年版药典收载品种 13 13 35 35 48 48其中其中新增品种新增品种 2 2 4 4 6 62.1 2.1 2.1 2.1 品种收品种收品种收品种收载载载载情况情况情况情况见见见见表表表表2.12.12.12.1表表表表2.1 20102.1 20102.
82、1 20102.1 2010年版年版年版年版药药药药典大典大典大典大环环环环内内内内酯类酯类酯类酯类品种收品种收品种收品种收载载载载情况情况情况情况l新增品种：新增品种：l原料：原料： 制剂：制剂：l交沙霉素、交沙霉素、 交沙霉素片、交沙霉素片、l丙酸交沙霉素、丙酸交沙霉素、 丙酸交沙霉素颗粒、丙酸交沙霉素颗粒、l 麦白霉素胶囊。麦白霉素胶囊。l 红霉素肠溶胶囊红霉素肠溶胶囊 2.22.2增修增修订项订项目概况目概况见见表表2.22.2表表2.2 20102.2 2010年版年版药药典大典大环环内内酯类酯类品种增修品种增修订项订项目目 项目项目 修订修订 增订增订删去删去结结构式构式1 1含量
83、限度含量限度5 5性状性状3 3鉴别鉴别3 3（HPLC 1HPLC 1项项 和和IR IR 2 2 项项）23(HPLC 1123(HPLC 11项项，颜颜色反色反应应和和TLCTLC各各6 6项项) ) 3 3（IRIR）释释放度放度/ /溶出度溶出度13131 1组分与有关物质组分与有关物质26263 3残留溶残留溶剂剂1 1干燥失重干燥失重2 2可可见见异物和不溶性微粒异物和不溶性微粒1 1含量含量3737其中其中浊浊度法增度法增订订2121项项 l2.3 2.3 本类抗生素质量标准要点本类抗生素质量标准要点l2.3.1 2.3.1 鉴别鉴别 l 标准中凡用标准中凡用HPLCHPLC法
84、测定组分含量以及有关物法测定组分含量以及有关物质的品种均采用质的品种均采用HPLCHPLC法作为鉴别，并增加部分法作为鉴别，并增加部分品种的品种的TLCTLC法鉴别，大部分品种法鉴别，大部分品种HPLCHPLC法和法和TLCTLC法法并列，可任选一项；并列，可任选一项；l 原料药也有用原料药也有用IRIR作为鉴别，如罗红霉素；作为鉴别，如罗红霉素；l 有紫外吸收特性的品种也可用有紫外吸收特性的品种也可用UVUV法作为鉴别，法作为鉴别，如麦白霉素、交沙霉素；如麦白霉素、交沙霉素；l 部分品种采用显色反应。部分品种采用显色反应。l2.3.22.3.2组分测定与有关物质组分测定与有关物质l2.3.2
85、.12.3.2.1组分测定组分测定 l 采用采用HPLCHPLC法测定，组分测定标准品和标准法测定，组分测定标准品和标准图谱由中检所提供，作为系统适用性试验的参图谱由中检所提供，作为系统适用性试验的参比。如图比。如图2.12.1。图图2.1 130347-2004032.1 130347-200403批乙酰螺旋霉素标准品组分测定典型色谱图批乙酰螺旋霉素标准品组分测定典型色谱图l组分测定涉及品种共计组分测定涉及品种共计1717个，较个，较20052005年版增年版增加加8 8个品种，个品种，l分别为分别为: :l麦白霉素胶囊、麦白霉素胶囊、l乳糖酸红霉素、乳糖酸红霉素、 注射用乳糖酸红霉素、注射
86、用乳糖酸红霉素、l硬脂酸红霉素、硬脂酸红霉素、 硬脂酸红霉素片、硬脂酸红霉素片、l硬脂酸红霉素胶囊、硬脂酸红霉素颗粒、硬脂酸红霉素胶囊、硬脂酸红霉素颗粒、l红霉素肠溶胶囊，红霉素肠溶胶囊，l l首次对红霉素及其衍生物组分检测方法进行了首次对红霉素及其衍生物组分检测方法进行了统一，在其盐类及制剂中均增加了红霉素统一，在其盐类及制剂中均增加了红霉素A A组组分的检查。具体见分的检查。具体见表2.32.3。表表2.3 2.3 组组分分测测定定 品种品种 组组分分测测定定 方法方法 系系统统适用性要求适用性要求 乙乙酰酰螺旋霉素螺旋霉素乙乙酰酰螺旋霉素片螺旋霉素片乙乙酰酰螺旋霉素胶囊螺旋霉素胶囊单单乙
87、乙酰酰螺旋霉素螺旋霉素IIII与与IIIIII双乙双乙酰酰螺旋霉素螺旋霉素IIII与与IIIIII同同20052005年年版版修修订为订为：系系统统适用性适用性对对照品溶液色照品溶液色谱图应谱图应与与标标准准图谱图谱一致一致吉他霉素吉他霉素吉他霉素片吉他霉素片吉他霉素吉他霉素A5A5、A4A4、A1A1、A13A13以及以及总组总组分分同同20052005年年版版修修订为订为：系系统统适用性适用性对对照品溶液色照品溶液色谱图应谱图应与与标标准准图谱图谱一致一致麦白霉素麦白霉素麦白霉素片麦白霉素片麦白霉素胶囊麦白霉素胶囊修修订为订为：麦迪霉素麦迪霉素A1A1、A2A2和吉他和吉他霉素霉素A4A4
88、、A6A6、A8A8同同20052005年年版版修修订为订为：系系统统适用性适用性对对照品溶液色照品溶液色谱图应谱图应与与标标准准图谱图谱一致，一致，并并规规定定组组分出峰分出峰顺顺序。序。红红霉素霉素红红霉素霉素肠肠溶片溶片红红霉素霉素肠肠溶胶囊溶胶囊红红霉素霉素A A红红霉素霉素B B红红霉素霉素C C修修订订HPLCHPLC法法红红霉素霉素A A：对对照品外照品外标标法法计计算；算；红红霉素霉素B B：加校正因子：加校正因子自身自身对对照照计计算；算；红红霉素霉素C C：自身：自身对对照法照法计计算。算。同同红红霉素霉素按按红红霉素霉素C C、红红霉素霉素A A、杂杂质质1 1、红红霉素
89、霉素B B、红红霉素霉素烯烯醇醇醚醚峰的峰的顺顺序出峰（必要序出峰（必要时时，用，用红红霉素霉素C C、红红霉素霉素B B、红红霉素霉素烯烯醇醇醚对醚对照品照品进进行峰定位）。行峰定位）。红红霉素峰霉素峰与与红红霉素霉素烯烯醇醇醚醚峰的分离峰的分离度度应应大于大于14.014.0，红红霉素霉素A A的拖尾因子的拖尾因子应应小于小于2.02.0。同同红红霉素霉素硬脂酸硬脂酸红红霉素霉素硬脂酸硬脂酸红红霉素片霉素片硬脂酸硬脂酸红红霉素胶囊霉素胶囊硬脂酸硬脂酸红红霉素霉素颗颗粒粒红红霉素霉素A A红红霉素霉素B B红红霉素霉素C C乳糖酸乳糖酸红红霉素霉素注射用乳糖酸注射用乳糖酸红红霉素霉素红红霉素
90、霉素A A红红霉素霉素B B红红霉素霉素C Cl2.3.2.1.1 2.3.2.1.1 乙酰螺旋霉素与吉他霉素的组分乙酰螺旋霉素与吉他霉素的组分 l测定方法同测定方法同20052005年版版, , l 修订系统适用性试验，系统适用性对照品溶修订系统适用性试验，系统适用性对照品溶液的色谱图应与标准图谱一致液的色谱图应与标准图谱一致. .l 2.3.2.1.2 2.3.2.1.2 麦白霉素的组分麦白霉素的组分l 主要组分有主要组分有5 5个，个，20052005年版仅控制麦迪霉年版仅控制麦迪霉素素A1, 2010A1, 2010版全面控制麦迪霉素版全面控制麦迪霉素A1A1、A2A2和吉和吉他霉素他
91、霉素A4A4、A6A6、A8A8；l 本品主成分为麦迪霉素本品主成分为麦迪霉素A1A1，故采用麦迪霉素，故采用麦迪霉素A1A1的标准品为基准的标准品为基准, , 以外标法计算各组分含量以外标法计算各组分含量. .l规定（按干燥品计）：规定（按干燥品计）：l麦迪霉素麦迪霉素A1 A1 不得低于不得低于48%48%l吉他霉素吉他霉素A6 A6 不得低于不得低于12%12%l5 5个组分总含量不得低于个组分总含量不得低于70%70%。l测定方法测定方法:HPLC:HPLC，色谱柱，色谱柱C18C18、检测波长、检测波长232nm232nml2.3.2.1.3 2.3.2.1.3 红霉素、乳糖酸红霉素
92、、硬脂酸红霉素、乳糖酸红霉素、硬脂酸红霉素红霉素l 红霉素、乳糖酸红霉素、硬脂酸红霉素主要红霉素、乳糖酸红霉素、硬脂酸红霉素主要组分均为红霉素组分均为红霉素A A、B B、C .C .l 测定方法：测定方法：HPLCHPLC法，色谱柱法，色谱柱C C1818 , , l 检测波长检测波长215 nm215 nm；l l3 3个品种规定限度相同：个品种规定限度相同：l 红霉素红霉素A: A: 以无水物计不得少于以无水物计不得少于88.0%88.0%，用对照，用对照品外标法计算品外标法计算. .l 红霉素红霉素B: B: 不得大于不得大于5%,5%,用加校正因子（用加校正因子（0.70.7）的自身
93、对照法计算。的自身对照法计算。l 红霉素红霉素C: C: 不得大于不得大于5% ,5% ,用自身对照法计算。用自身对照法计算。l2.3.2.2 2.3.2.2 有关物质有关物质l 除琥乙红霉素仍采用除琥乙红霉素仍采用TLCTLC法外，法外，20052005年版采年版采用用TLCTLC法的品种均修订为法的品种均修订为HPLCHPLC法，共法，共2626个品种个品种采用采用HPLCHPLC法；法；l 完善了完善了HPLCHPLC系统适用性要求，明确主峰与系统适用性要求，明确主峰与指定杂质的分离度，确保方法的有效性和准确指定杂质的分离度，确保方法的有效性和准确性；性；l l 增加特定杂质的控制（如阿
94、奇霉素）和总杂增加特定杂质的控制（如阿奇霉素）和总杂的控制（如罗红霉素）；的控制（如罗红霉素）；l 首次对红霉素及其衍生物有关物质检测方法首次对红霉素及其衍生物有关物质检测方法进行了统一。见表进行了统一。见表2.42.4。表表2.4 2.4 有关物质测定有关物质测定(1) (1) 品种品种方法（方法（HPLCHPLC）丙酸交沙霉素丙酸交沙霉素1.1.不加校正因子的自身不加校正因子的自身对对照照 2. 2.检测检测波波长长231nm231nm交沙霉素交沙霉素1.1.不加校正因子的自身不加校正因子的自身对对照照 2. 2.检测检测波波长长231nm231nm克拉霉素克拉霉素 克拉霉素片克拉霉素片克
95、拉霉素胶囊克拉霉素胶囊克拉霉素克拉霉素颗颗粒粒1.1.不加校正因子的自身不加校正因子的自身对对照照2 2检测检测波波长长210nm210nm阿奇霉素阿奇霉素阿奇霉素干混阿奇霉素干混悬剂悬剂阿奇霉素片阿奇霉素片阿奇霉素分散片阿奇霉素分散片阿奇霉素胶囊阿奇霉素胶囊阿奇霉素阿奇霉素颗颗粒粒1.1.原原TLCTLC法修法修订为订为HPLCHPLC法，无法，无该项检查该项检查的已增的已增订订2.2.加校正因子（阿奇霉素加校正因子（阿奇霉素GxGx为为0.10.1与与红红霉素霉素A A偕偕亚亚胺胺醚为醚为0.40.4）与不）与不加校正因子（阿奇霉素加校正因子（阿奇霉素B B和其他和其他单单个个杂质杂质）的
96、自身）的自身对对照照3.3.检测检测波波长长210nm210nm4.4.供注射用和供口服制供注射用和供口服制剂剂用，不同限度用，不同限度5.5.制制剂剂扣除相扣除相对对保留保留时间时间0.150.15之前的之前的辅辅料峰料峰红红霉素霉素1.1.加校正因子（加校正因子（红红霉素霉素烯烯醇醇醚为醚为0.090.09和和杂质杂质1 1为为0.150.15）与不加校正）与不加校正因子的自身因子的自身对对照照 2. 2.检测检测波波长长215nm215nm乳糖酸乳糖酸红红霉素霉素注射用乳糖酸注射用乳糖酸红红霉霉素素1.1.加校正因子（加校正因子（红红霉素霉素烯烯醇醇醚为醚为0.090.09和和杂质杂质1
97、 1为为0.150.15）与不加校正）与不加校正因子的自身因子的自身对对照照2.2.检测检测波波长长215nm215nm表表2.4 2.4 有关物质测定有关物质测定(2) (2) 品种品种方法（方法（HPLCHPLC）硬脂酸硬脂酸红红霉素霉素硬脂酸硬脂酸红红霉素片霉素片硬脂酸硬脂酸红红霉素胶霉素胶囊囊1.1.加校正因子（加校正因子（红红霉素霉素烯烯醇醇醚为醚为0.090.09和和杂质杂质1 1为为0.150.15）与不加校正因）与不加校正因子的自身子的自身对对照照2.2.检测检测波波长长215nm215nm依托依托红红霉素霉素1.1.游离游离红红霉素霉素2.2.外外标标法法计计算算 检测检测波
98、波长长190nm190nm麦白霉素麦白霉素1.1.以麦迪霉素以麦迪霉素A A1 1为为基准基准, ,外外标标法法计计算各有关物算各有关物质总质总量（不得量（不得过过25%25%）检测检测波波长长232nm232nm麦白霉素片麦白霉素片1.1.以麦迪霉素以麦迪霉素A A1 1为为基准基准, ,外外标标法法计计算各有关物算各有关物质总质总量（不得量（不得过过30%30%）2.2.检测检测波波长长232nm232nm麦白霉素胶囊麦白霉素胶囊1.1.以麦迪霉素以麦迪霉素A A1 1为为基准基准, ,外外标标法法计计算各有关物算各有关物质总质总量（不得量（不得过过30%30%）2.2.检测检测波波长长2
99、32nm232nm罗红罗红霉素霉素罗红罗红霉素片霉素片罗红罗红霉素分散片霉素分散片罗红罗红霉素胶囊霉素胶囊1.1.不加校正因子的自身不加校正因子的自身对对照照2.2.原料明确除二甲基甲原料明确除二甲基甲酰酰胺峰外，并胺峰外，并对该对该峰定位。峰定位。3.3.制制剂剂扣除相扣除相对对保留保留时间时间0.30.3之前的峰。之前的峰。4. 4. 检测检测波波长长210nm210nm5.5.系系统统适用性增加主峰与适用性增加主峰与红红霉素的分离度，并明确前相霉素的分离度，并明确前相邻杂质邻杂质峰（相峰（相对对保留保留时间为时间为0.950.95）和后相）和后相邻杂质邻杂质峰（相峰（相对对保留保留时间为
100、时间为1.21.2）位置）位置琥乙琥乙红红霉素霉素方法（方法（TLCTLC法）法）l2.3.3 2.3.3 溶出度溶出度l 除乳糖酸红霉素是供注射用外，其他均为除乳糖酸红霉素是供注射用外，其他均为口服制剂（片、胶囊、干混悬剂、颗粒）。由口服制剂（片、胶囊、干混悬剂、颗粒）。由于原料的水溶性较差，因此要求口服制剂检查于原料的水溶性较差，因此要求口服制剂检查溶出度或释放度。溶出度或释放度。l 共共2525个制剂，其中个制剂，其中2 2个红霉素肠溶制剂检查个红霉素肠溶制剂检查释放度，其他均检查溶出度；释放度，其他均检查溶出度；l 颗粒剂中包衣颗粒和非包衣颗粒制订了相应颗粒剂中包衣颗粒和非包衣颗粒制订
101、了相应的溶出度检查法（如罗红霉素颗粒）；的溶出度检查法（如罗红霉素颗粒）；l 混悬颗粒和干混悬剂根据溶出曲线考察结果混悬颗粒和干混悬剂根据溶出曲线考察结果决定是否定入标准。决定是否定入标准。l溶出度项下溶出液的测定，溶出度项下溶出液的测定，l 6 6个品种采用直接紫外个品种采用直接紫外可见分光光度法可见分光光度法（231231235nm235nm波长处）、波长处）、l 9 9个品种采用硫酸显色反应后紫外个品种采用硫酸显色反应后紫外可见分可见分光光度法（光光度法（482nm482nm波长处）、波长处）、l 10 10个品种则采用个品种则采用HPLCHPLC法（阿奇霉素、克拉霉法（阿奇霉素、克拉霉
102、素和罗红霉素由硫酸显色法修订成素和罗红霉素由硫酸显色法修订成HPLCHPLC法）。法）。l l 因制剂中某些辅料与硫酸也会发生显色反应，因制剂中某些辅料与硫酸也会发生显色反应，采用硫酸显色法时采用硫酸显色法时, ,采用自身对照法，以抵消采用自身对照法，以抵消辅料的干扰；辅料的干扰；l 同时多组分品种亦采用自身对照法，以消除同时多组分品种亦采用自身对照法，以消除组分比例差异对结果的影响。组分比例差异对结果的影响。l如如: :麦白霉素片麦白霉素片, ,麦白霉素胶囊麦白霉素胶囊, ,吉他霉素片吉他霉素片l 溶出度介质可加酶，如麦白霉素胶囊和罗红溶出度介质可加酶，如麦白霉素胶囊和罗红霉素胶囊，后者还规
103、定了胰酶的加量以单位表霉素胶囊，后者还规定了胰酶的加量以单位表示（每示（每1ml1ml中含胰蛋白酶不少于中含胰蛋白酶不少于0.080.08活性单位、活性单位、胰淀粉酶不少于胰淀粉酶不少于1.11.1活性单位和胰脂肪酶不少活性单位和胰脂肪酶不少于于0.40.4活性单位活性单位 ）, ,更为科学合理。见表更为科学合理。见表2.52.5。 品种品种 方法方法乙乙酰酰螺旋霉素片螺旋霉素片乙乙酰酰螺旋霉素胶囊螺旋霉素胶囊1.1.一法一法 , 2.uv , 2.uv法法检测检测波波长长231nm , 3.231nm , 3.自身自身对对照法照法吉他霉素片吉他霉素片1.1.二法二法 , 2.uv , 2.u
104、v法法. .检测检测波波长长231nm , 3.231nm , 3.自身自身对对照法照法交沙霉素片交沙霉素片1.1.二法二法 . 2.uv . 2.uv法法. .检测检测波波长长231nm , 3.231nm , 3.自身自身对对照法照法麦白霉素片麦白霉素片1.1.一法一法, 2.uv, 2.uv法法. .检测检测波波长长232nm , 3.232nm , 3.自身自身对对照法照法麦白霉素胶囊麦白霉素胶囊1.1.一法一法 , 2.uv , 2.uv法法检测检测波波长长235nm , 3.235nm , 3.自身自身对对照法照法 4. 4.盐盐酸酸- -胃蛋白胃蛋白酶酶为为介介质质表表表表2.5
105、 (1)2.5 (1)2.5 (1)2.5 (1)溶出度测定溶出度测定溶出度测定溶出度测定 （溶出液溶出液uvuv法测定）法测定）表表2.5 (1)2.5 (1)溶出度测定溶出度测定 （溶出液溶出液硫酸溶液硫酸溶液显显色色, ,uvuv法测定）法测定） 品种品种方法方法红红霉素霉素肠肠溶片溶片红红霉素霉素肠肠溶胶囊溶胶囊1.1.释释放度放度, 2., 2.硫酸溶液（硫酸溶液（7510075100）显显色，色，uvuv法法检检测测波波长长482nm 482nm 3. 3. 自身自身对对照法照法罗红罗红霉素霉素颗颗粒（包粒（包衣）衣）1.1.一法一法, 2., 2.硫酸溶液（硫酸溶液（751007
106、5100）显显色，色，uvuv法法检检测测波波长长482nm 3. 482nm 3. 自身自身对对照法照法琥乙琥乙红红霉素片霉素片琥乙琥乙红红霉素分散片霉素分散片琥乙琥乙红红霉素胶囊霉素胶囊1.1.二法二法 , 2. , 2.硫酸溶液（硫酸溶液（7510075100）显显色，色，uvuv法法检检测测波波长长482nm 482nm 3. 3. 自身自身对对照法照法依托依托红红霉素片霉素片依托依托红红霉素胶囊霉素胶囊1.1.二法二法, 2., 2.硫酸溶液（硫酸溶液（7510075100）显显色，色，uvuv法法检检测测波波长长482nm 482nm 3. 3. 自身自身对对照法照法克拉霉素克拉霉
107、素颗颗粒粒1.1.二法二法, 2., 2.硫酸溶液（硫酸溶液（7510075100）显显色，色，uvuv法法检检测测波波长长482nm 3. 482nm 3. 自身自身对对照法照法 品种品种 方法方法阿奇霉素片阿奇霉素片阿奇霉素分散片阿奇霉素分散片阿奇霉素胶囊阿奇霉素胶囊 1.1.二法二法, ,2.HPLC2.HPLC法法,3.3.对对照品外照品外标标法法计计算算罗红罗红霉素片霉素片罗红罗红霉素分散片霉素分散片1.1.一法一法 , 2.HPLC , 2.HPLC法法 3. 3.对对照品外照品外标标法法计计算算, ,罗红罗红霉素干混霉素干混悬剂悬剂1.1.二法二法, 2.HPLC, 2.HPLC
108、法法 , 3. , 3.对对照品外照品外标标法法计计算算, ,罗红罗红霉素胶囊霉素胶囊1.1.一法一法, 2.HPLC, 2.HPLC法法 , 3. , 3.对对照品外照品外标标法法计计算算 , , 4. 4.明确明确酶酶的加量以的加量以单单位表示位表示, ,罗红罗红霉素霉素颗颗粒（非粒（非包衣）包衣）1.1.二法二法 , 2.HPLC , 2.HPLC法法 , 3. , 3.对对照品外照品外标标法法计计算算, ,克拉霉素片克拉霉素片1.1.一法一法 , 2.HPLC , 2.HPLC法法 , 3. , 3.对对照品外照品外标标法法计计算算, ,克拉霉素胶囊克拉霉素胶囊1.1.二法二法, 2.
109、HPLC, 2.HPLC法法 , 3. , 3.对对照品外照品外标标法法计计算算, ,表表表表2.5 (2) 2.5 (2) 2.5 (2) 2.5 (2) 溶出度溶出度溶出度溶出度测测测测定定定定 ( ( ( (溶出液溶出液溶出液溶出液HPLCHPLCHPLCHPLC法法法法测测测测定定定定) ) ) )l2.3.4 2.3.4 含量测定含量测定l 除个别品种（如克拉霉素、罗红霉素、阿奇除个别品种（如克拉霉素、罗红霉素、阿奇霉素）采用霉素）采用HPLCHPLC法外，其他品种均采用微生物法外，其他品种均采用微生物检定法测定效价，见表检定法测定效价，见表2.62.6。l 20052005版药典采
110、用管碟法，本版药典增加浊度版药典采用管碟法，本版药典增加浊度法，两法并列供选择，在附录中明确仲裁方法法，两法并列供选择，在附录中明确仲裁方法为为管碟法；管碟法；l 阿奇霉素系列由微生物法修订为阿奇霉素系列由微生物法修订为HPLCHPLC法，系法，系统适用性试验规定统适用性试验规定“标准品溶液色谱图应与标标准品溶液色谱图应与标准图谱一致准图谱一致”；l罗红霉素系列完善系统适用性实验，增加主罗红霉素系列完善系统适用性实验，增加主峰与红霉素的分离度，并明确与前相邻杂质峰峰与红霉素的分离度，并明确与前相邻杂质峰（相对保留时间为（相对保留时间为0.95）和后相邻杂质峰（相）和后相邻杂质峰（相对保留时间为
111、对保留时间为1.2）位置；）位置；l依托红霉素为红霉素酯类衍生物，故在微生依托红霉素为红霉素酯类衍生物，故在微生物法测定含量时，必须使药物完全水解成红霉物法测定含量时，必须使药物完全水解成红霉素，有抗菌活性后，方能测定抑菌能力，素，有抗菌活性后，方能测定抑菌能力，l本版药典进行了充分研究后将水解条件由本版药典进行了充分研究后将水解条件由“37水浴中放置水浴中放置6小时小时”修订为修订为“60水浴水浴中放置中放置4小时小时”，缩短实验时间。，缩短实验时间。表表2.6 2.6 含量含量测测定定 品种品种 HPLC HPLC 微生物法微生物法( ( 管碟法管碟法或或 浊浊度法度法) ) 48 48
112、10 10 38 38l3、氨基糖苷类抗生素、氨基糖苷类抗生素l3.1氨基糖苷类抗生素的特点氨基糖苷类抗生素的特点l3.1.1本类药物结构中都有以氨基环己醇与氨基本类药物结构中都有以氨基环己醇与氨基糖缩合而成的苷，结构中没有共轭双键所以没糖缩合而成的苷，结构中没有共轭双键所以没有可供分析用的特征的紫外吸收仅有末端吸收，有可供分析用的特征的紫外吸收仅有末端吸收，结构中具有不对称碳原子有旋光性。结构中具有不对称碳原子有旋光性。l3.1.2本类抗生素相对其他类抗生素而言稳定性本类抗生素相对其他类抗生素而言稳定性较好，制剂为注射液品种较多较好，制剂为注射液品种较多 。l3.1.3 本类抗生素有效成分为
113、游离硷，一般均本类抗生素有效成分为游离硷，一般均以硫酸盐形式存在作为药物，由于都含有易溶以硫酸盐形式存在作为药物，由于都含有易溶于水的氨基糖碱性苷，故均能以分子中的碱性于水的氨基糖碱性苷，故均能以分子中的碱性基团（基团（-NH2基）与无机酸结合成可溶于水、但基）与无机酸结合成可溶于水、但几乎不溶于有机溶剂的盐类。几乎不溶于有机溶剂的盐类。3.2 3.2 品种收载情况：品种收载情况： 表表3.1 3.1 品种收载情况品种收载情况原料原料制剂制剂注射液注射液注射用注射用滴眼液滴眼液口服液口服液片片缓释片缓释片颗粒颗粒妥布霉素妥布霉素*硫酸小诺霉素硫酸小诺霉素硫酸巴龙霉素硫酸巴龙霉素硫酸卡那霉素硫酸
114、卡那霉素硫酸西索霉素硫酸西索霉素硫酸庆大霉素硫酸庆大霉素硫酸阿米卡星硫酸阿米卡星*为新增品种为新增品种原料原料制制剂剂注射液注射液注射用注射用滴眼液滴眼液口服口服液液片片缓释缓释片片颗颗粒粒阿米卡星阿米卡星硫酸奈替米星硫酸奈替米星硫酸依替米星硫酸依替米星硫酸核糖霉素硫酸核糖霉素硫酸硫酸链链霉素霉素硫酸新霉素硫酸新霉素盐盐酸大酸大观观霉素霉素总计总计14148 86 64 41 14 41 11 13.3 3.3 关键检测项目方法一览：关键检测项目方法一览：表表3.2 3.2 检测项目方法检测项目方法原料原料有关物有关物质质（包括特定（包括特定杂杂质质）组组分分硫酸硫酸盐盐含量含量测测定定TLC
115、TLCHPLC-HPLC-ELSDELSDHPLC-UVHPLC-UVHPLC-HPLC-ELSDELSDHPLC-HPLC-UVUVHPLC-HPLC-ELSDELSD滴滴定定妥布霉素妥布霉素微生物（微生物（、）硫酸小硫酸小诺诺霉素霉素微生物（微生物（、）硫酸巴硫酸巴龙龙霉素霉素无无微生物（微生物（、）硫酸卡那霉素硫酸卡那霉素卡卡B BELSDELSD硫酸西索霉素硫酸西索霉素微生物（微生物（、）硫酸硫酸庆庆大霉素大霉素微生物（微生物（、）硫酸阿米卡星硫酸阿米卡星HPLC-UVHPLC-UV阿米卡星阿米卡星HPLC-UVHPLC-UV原料原料有关物有关物质质（包括特定（包括特定杂杂质质）组组分
116、分硫酸硫酸盐盐含量含量测测定定TLCTLCHPLC-HPLC-ELSDELSDHPLC-HPLC-UVUVHPLC-HPLC-ELSDELSDHPLC-HPLC-UVUVHPLC-HPLC-ELSDELSD滴滴定定硫酸奈替米星硫酸奈替米星微生物（微生物（、）硫酸依替米星硫酸依替米星HPLC-ELSDHPLC-ELSD硫酸核糖霉素硫酸核糖霉素微微1 1硫酸硫酸链链霉素霉素微生物（微生物（、）硫酸新霉素硫酸新霉素新新霉霉胺胺微生物微生物（）盐盐酸大酸大观观霉素霉素微生物微生物（）l3.4修订情况概要修订情况概要l3.4.1鉴别鉴别l 一般采用一般采用TLC法与硫酸盐反应，法与硫酸盐反应，l含量测定
117、或组分采用含量测定或组分采用HPLC-ELSD的方法时，的方法时，也可用也可用HPLC作为鉴别，作为鉴别，l个别品种也有用个别品种也有用IR作为鉴别反应，作为鉴别反应，l少数品种有显色反应鉴别。少数品种有显色反应鉴别。l在鉴别试验中规定在鉴别试验中规定TLC和和HPLC两个色谱鉴两个色谱鉴别项，可根据实验室条件任选其中之一，便于别项，可根据实验室条件任选其中之一，便于灵活操作。灵活操作。l例例1.硫酸依替米星硫酸依替米星l【鉴别】【鉴别】（1）TLCl（2）HPLCl（3）硫酸盐鉴别反应。）硫酸盐鉴别反应。l以上（以上（1）、（）、（2）两项可选做一项。）两项可选做一项。l例例2.阿米卡星阿米
118、卡星l【鉴别】【鉴别】（1）TLCl（2）HPLCl（3）IRl（4）硫酸盐鉴别反应。）硫酸盐鉴别反应。l以上（以上（1）、（）、（2）两项可选做一项）两项可选做一项。l3.4.2、检查、检查l3.4.2.1供无菌分装的原料标准正文中增加了供无菌分装的原料标准正文中增加了(1)可见异物、可见异物、(2)、不溶性微粒、不溶性微粒、(3)无菌。无菌。l例例1.硫酸阿米卡星硫酸阿米卡星l可见异物可见异物取本品取本品5份，各份，各0.6g，分别加微粒检，分别加微粒检查用水查用水5ml使溶解，依法检查（附录使溶解，依法检查（附录IXH），），应符合规定。（供注射用）应符合规定。（供注射用）ll不溶性微粒
119、不溶性微粒取本品取本品3g，加微粒检查用水，加微粒检查用水100ml，制成每，制成每1ml中含中含30mg的溶液，依法检查（附的溶液，依法检查（附录录IXC）。每）。每1g供试品中，含供试品中，含10m以上的微以上的微粒不得过粒不得过6000粒，含粒，含25m以上的微粒不得过以上的微粒不得过600粒。（供注射用）粒。（供注射用）l无菌无菌取本品，加取本品，加0.9无菌氯化钠溶液制成每无菌氯化钠溶液制成每1ml中含阿米卡星中含阿米卡星8mg的供试液，经薄膜过滤的供试液，经薄膜过滤法处理，用法处理，用pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液无菌氯化钠蛋白胨缓冲液分次冲洗（每膜不少于分次冲洗（每膜不少于50
120、0ml），以金黄色葡），以金黄色葡萄球菌为阳性对照菌，依法检查（附录萄球菌为阳性对照菌，依法检查（附录XIH），），应符合规定。（供注射用）。应符合规定。（供注射用）。l3.4.2.2渗透压摩尔浓度渗透压摩尔浓度l2005年版药典首先在抗生素类滴眼液年版药典首先在抗生素类滴眼液-硫酸硫酸卡那霉素滴眼液标准中列入渗透压检查，卡那霉素滴眼液标准中列入渗透压检查，l本版药典将其扩大为本版药典将其扩大为4个滴眼液，个滴眼液，l两种表示方法并列两种表示方法并列:l妥布霉素滴眼液、庆大霉素滴眼液和硫酸卡妥布霉素滴眼液、庆大霉素滴眼液和硫酸卡那霉素滴眼液（均为渗透压摩尔浓度为那霉素滴眼液（均为渗透压摩尔浓度
121、为260-320mOsmol/kg）l硫酸新霉素滴眼液（渗透压摩尔浓度比为硫酸新霉素滴眼液（渗透压摩尔浓度比为0.95-1.15）。）。l3.4.2.3防腐剂防腐剂l本版药典对氨基糖苷类抗生素滴眼液中常用本版药典对氨基糖苷类抗生素滴眼液中常用防腐剂如羟苯乙酯、丙酯、苯扎氯胺等进行检防腐剂如羟苯乙酯、丙酯、苯扎氯胺等进行检查。查。l例例1.硫酸新霉素硫酸新霉素l检查羟苯乙酯检查羟苯乙酯方法为方法为HPLC（限度：（限度：80%-120%）l例例2.妥布霉素滴眼液妥布霉素滴眼液l检查羟苯乙酯、羟苯丙酯、苯扎氯铵，检查羟苯乙酯、羟苯丙酯、苯扎氯铵，方法为方法为HPLC（限度：（限度：80%-120%
122、）l3.4.2.4有关物质、组分有关物质、组分l有关物质、组分、特定杂质检查方法修改为有关物质、组分、特定杂质检查方法修改为HPLC-ELSD方法的品种较多方法的品种较多 ，l但有些品种如新霉素、盐酸大观霉素仍采用但有些品种如新霉素、盐酸大观霉素仍采用TLC法。法。l3.4.2.4.1HPLC-ELSD方法扩大应用，方法扩大应用，l2005年版药典除硫酸卡那霉素，硫酸庆大霉年版药典除硫酸卡那霉素，硫酸庆大霉素素,硫酸小诺霉素三个原料及其制剂共硫酸小诺霉素三个原料及其制剂共9个品种个品种的组分、特定杂质检查方法为的组分、特定杂质检查方法为HPLC-ELSD方方法，法，ll2010年年版药典有版药
123、典有7个原料及其制剂共个原料及其制剂共23品种采用品种采用HPLC-ELSD方法检查有关物质、组分、特定方法检查有关物质、组分、特定杂质。杂质。l2005年版药典采用的薄层色谱法年版药典采用的薄层色谱法(TLC)测定有测定有关物质，属于半定量方法，只能对杂质进行限关物质，属于半定量方法，只能对杂质进行限度检查，不能准确测定样品中单个杂质和总杂度检查，不能准确测定样品中单个杂质和总杂质量。质量。llELSD属于通用型检测器属于通用型检测器,几乎对所有的化几乎对所有的化合物均有响应，流动相和环境温度对响应值的合物均有响应，流动相和环境温度对响应值的影响小影响小,适宜用于无特征紫外吸收化合物的定适宜
124、用于无特征紫外吸收化合物的定性和定量分析，性和定量分析，l由于其色谱响应值由于其色谱响应值(峰面积的对数值峰面积的对数值)与对应与对应的质量（溶液浓度的对数值）呈线性关系，因的质量（溶液浓度的对数值）呈线性关系，因此用回归方程计算含量。此用回归方程计算含量。l尽管尽管ELSD检测器在灵敏度上不如检测器在灵敏度上不如UV检测器，检测器，但较之但较之TLC其灵敏度要高得多。其灵敏度要高得多。ll3.4.2.4.2柱前衍生柱前衍生HPLCHPLC方法首次应用在中国方法首次应用在中国药典氨基糖苷类抗生素有关物质检查项中，药典氨基糖苷类抗生素有关物质检查项中，l阿米卡星和硫酸阿米卡星阿米卡星和硫酸阿米卡
125、星:l柱前衍生柱前衍生HPLCHPLC法可以在同一色谱条件下同时检出法可以在同一色谱条件下同时检出卡那霉素、杂质卡那霉素、杂质B、杂质、杂质A以及其它杂质，并可参以及其它杂质，并可参考考BP2009阿米卡星项下系统适用性色谱图定位，且阿米卡星项下系统适用性色谱图定位，且药厂出口采用此法，对本法的可行性已有数据可证药厂出口采用此法，对本法的可行性已有数据可证明。明。 图图3.1阿米卡星混合溶液的分离色谱图阿米卡星混合溶液的分离色谱图图图3.2BP2009阿米卡星项下系统适用性色谱阿米卡星项下系统适用性色谱l3.4.2.4.3硫酸盐硫酸盐l除部分品种仍采用原滴定方法，本版药典首除部分品种仍采用原滴
126、定方法，本版药典首次采用次采用HPLC-ELSD方法对其进行测定。方法对其进行测定。l2005年版中测定硫酸盐含量采用的是容量法年版中测定硫酸盐含量采用的是容量法与传统的重量法测定相比，有其先进性，但滴与传统的重量法测定相比，有其先进性，但滴定终点突跃不明显定终点突跃不明显.l本版药典建立的本版药典建立的HPLC-ELSD方法测定硫酸盐方法测定硫酸盐含量，采用硫酸滴定液作为对照品，解决了对含量，采用硫酸滴定液作为对照品，解决了对照品的问题，该方法方便、准确。照品的问题，该方法方便、准确。l例如：例如：2010年版药典中年版药典中;l硫酸西索霉素、硫酸西索霉素、l硫酸庆大霉素、硫酸庆大霉素、l硫
127、酸奈替米星硫酸奈替米星l硫酸依替米星硫酸依替米星l均采用均采用HPLC-ELSD方法测定硫酸盐含量。方法测定硫酸盐含量。l3.4.4含量测定含量测定有以下五种形式，表有以下五种形式，表3.3l（1）硫酸卡那霉素，硫酸依替米星及其制剂）硫酸卡那霉素，硫酸依替米星及其制剂共共7个标准的含量测定为个标准的含量测定为HPLC-ELSD方法。方法。l（2）阿米卡星和硫酸阿米卡星及其制剂共）阿米卡星和硫酸阿米卡星及其制剂共4个个标准的含量测定采用柱前衍生化标准的含量测定采用柱前衍生化HPLC-UV方方法。法。l（3）硫酸新霉素）硫酸新霉素硫酸核糖霉素及其制剂共硫酸核糖霉素及其制剂共5个个标准的含量测定采用
128、微生物检定法管碟法标准的含量测定采用微生物检定法管碟法.l（4）盐酸大观霉素及其制剂共）盐酸大观霉素及其制剂共2个标准的含量个标准的含量测定采用微生物检定法浊度法测定采用微生物检定法浊度法l（5）其他）其他21个标准的含量测定均采用微生物个标准的含量测定均采用微生物检定法管碟法和微生物检定法浊度法两法并列，检定法管碟法和微生物检定法浊度法两法并列，可任选一方法。可任选一方法。 表表3.33.3 含量测定含量测定HPLC- HPLC- ELSDELSD法法柱前衍生化柱前衍生化 HPLC-UVHPLC-UV法法微生物微生物检检定法定法 ( ( 管碟法管碟法) )微生物微生物检检定法定法 ( (浊浊
129、度法度法) ) 微生物微生物检检定法定法 ( ( 管碟法管碟法或或 浊浊度法度法) ) 7 7 4 4 5 5 2 2 21 21l4、四环素类抗生素、四环素类抗生素l4.1 四环类抗生素的基本特点，四环类抗生素的基本特点，l4.1.1结构特点结构特点 l 四环素类抗生素为四骈苯或萘骈萘的衍生物，四环素类抗生素为四骈苯或萘骈萘的衍生物，是两性化合物。分子中存在酚羟基和烯醇型羟是两性化合物。分子中存在酚羟基和烯醇型羟基，显弱酸性；同时含有二甲胺基，显弱碱性，基，显弱酸性；同时含有二甲胺基，显弱碱性，故遇酸及碱，均能生成相应的盐，临床上大多故遇酸及碱，均能生成相应的盐，临床上大多采用盐酸盐。采用盐
130、酸盐。l本品分子结构中具有多个不对称碳原子，因本品分子结构中具有多个不对称碳原子，因此有旋光性。此有旋光性。l4.1.2性状性状l四环类抗生素都是结晶型物质，分子内含有四环类抗生素都是结晶型物质，分子内含有蒽酮类发色团，一般为黄色结晶性粉末，干燥蒽酮类发色团，一般为黄色结晶性粉末，干燥的四环类游离碱和它们的盐类都比较稳定，但的四环类游离碱和它们的盐类都比较稳定，但在贮存中遇光促使颜色变深，可能有降解物产在贮存中遇光促使颜色变深，可能有降解物产生。生。l四环类抗生素的游离碱，在水中的溶解度很四环类抗生素的游离碱，在水中的溶解度很小，当小，当pH值低于值低于4或高于或高于8时，可以得到高浓度时，可
131、以得到高浓度的四环类化合物的水溶液。的四环类化合物的水溶液。l4.1.3.化学性质化学性质l4.1.3.1差向异构化性质差向异构化性质l四环类抗生素在酸性（四环类抗生素在酸性（pH2.06.0）溶液中，）溶液中，A环上环上4位手性碳原子构型易发生差向异构化反位手性碳原子构型易发生差向异构化反应，形成差向化合物，四环素、金霉素、去甲应，形成差向化合物，四环素、金霉素、去甲环素等很容易差向化，形成环素等很容易差向化，形成4-差向异构体，差向异构体，l土霉素由于土霉素由于5位上的羟基和位上的羟基和4位上的二甲胺基位上的二甲胺基易形成氢键，因而较稳定，不易发生差向异构易形成氢键，因而较稳定，不易发生差
132、向异构化。化。ll四环类抗生素的差向异构化反应，可用四环类抗生素的差向异构化反应，可用下式表示：下式表示：l4.1.3.2降解反应降解反应l(1)酸性条件下酸性条件下:l四环类在较酸溶液中特别在加热情况下，四环类在较酸溶液中特别在加热情况下，产产生脱水四环类降解产物，脱水产物的共轭双键生脱水四环类降解产物，脱水产物的共轭双键的数目增多，因此色泽加深。的数目增多，因此色泽加深。l(2)碱性条件下碱性条件下:l四环类抗生素在碱性溶液中放置一段时间，四环类抗生素在碱性溶液中放置一段时间，C环打开，生成无活性的具有内酯结构的异四环打开，生成无活性的具有内酯结构的异四环类抗生素。在紫外光照射下具有强烈荧
133、光。环类抗生素。在紫外光照射下具有强烈荧光。l(3) 四环类抗生素能与许多金属离子形成有四环类抗生素能与许多金属离子形成有色络合物。色络合物。l在无菌检查去抑菌作用时可以利用该性质。在无菌检查去抑菌作用时可以利用该性质。l也可用于四环类抗生素的分析和鉴定。也可用于四环类抗生素的分析和鉴定。4.2 4.2 品种收载情况品种收载情况： 表表4.1 4.1 品种收载情况品种收载情况原料原料制制剂剂(12)(12)注射用注射用眼膏眼膏胶囊胶囊软软膏膏片片盐盐酸土霉素酸土霉素盐盐酸四酸四环环素素盐盐酸多西酸多西环环素素盐盐酸米酸米诺环诺环素素盐盐酸金霉素酸金霉素盐盐酸美他酸美他环环素素6 61 11 1
134、4 41 15 5l4.3本版四环类抗生素修订情况概要本版四环类抗生素修订情况概要l4.3.1性状性状 基本未修订。基本未修订。l4.3.2鉴别鉴别l一般采用一般采用TLC/HPLC、IR和氯化物反应，和氯化物反应，部分品种增加了紫外鉴别。部分品种增加了紫外鉴别。l如如:盐酸多西环素在甲醇溶液中紫外特征较盐酸多西环素在甲醇溶液中紫外特征较强强,故增加了紫外鉴别：故增加了紫外鉴别：20ug/ml甲醇溶液在甲醇溶液在269nm和和354nm处有最大吸收，在处有最大吸收，在234nm和和296nm处有最小吸收。处有最小吸收。l4.3.3检查检查l4.3.3.1有关物质有关物质l有关物质测定方法仍以有
135、关物质测定方法仍以HPLC为主，但测定为主，但测定条件随含量测定方法修改有所改变。条件随含量测定方法修改有所改变。色谱条件色谱条件同修改后含量测定的色谱条件（见表），同修改后含量测定的色谱条件（见表），l4.3.3.1.1杂质含量计算方法杂质含量计算方法l四环素已知杂质含量用加校正因子的自身对四环素已知杂质含量用加校正因子的自身对照法计算，照法计算，l米诺环素、土霉素、多西环素用已知杂质对米诺环素、土霉素、多西环素用已知杂质对照品定位，用不加校正因子的自身对照法计算，照品定位，用不加校正因子的自身对照法计算，l金霉素用杂质对照品外标法计算已知杂质的金霉素用杂质对照品外标法计算已知杂质的含量。含
136、量。l4.3.3.1.2限度的确定限度的确定l限度是参考限度是参考EP6.0及结合国内样品情况而确定。及结合国内样品情况而确定。l如：盐酸多西环素欧洲药典如：盐酸多西环素欧洲药典6.0报道，盐酸报道，盐酸多西环素（多西环素（DoxycyclineHyclate）中有）中有6个潜在杂个潜在杂质，分别命名为杂质质，分别命名为杂质A、B、C、D、E、F，其中，其中杂质杂质A(-多西环素，又称为多西环素，又称为6-表多西环素，表多西环素，6-epidoxycycline)，是合成过程中美他环素转变为，是合成过程中美他环素转变为多西环素时产生的多西环素时产生的6-差向副产物，杂质差向副产物，杂质B美他环
137、美他环素是合成中间体，杂质素是合成中间体，杂质E土霉素为合成起始原料，土霉素为合成起始原料，杂质杂质F可能是土霉素中的杂质可能是土霉素中的杂质2-乙酰乙酰-2-去酰胺土去酰胺土霉素在合成多西环素过程的共存物，杂质霉素在合成多西环素过程的共存物，杂质C、D可能是多西环素在溶液或放置过程中生成的差向可能是多西环素在溶液或放置过程中生成的差向异构体。异构体。l2005年版药典标准中土霉素作为特定杂质的年版药典标准中土霉素作为特定杂质的单独规定限度，因多批原料及片剂中均未检出单独规定限度，因多批原料及片剂中均未检出土霉素，故将土霉素作为其他杂质控制，另增土霉素，故将土霉素作为其他杂质控制，另增加对其他
138、单个杂质和总杂质的限度控制。加对其他单个杂质和总杂质的限度控制。l如：盐酸土霉素欧洲药典如：盐酸土霉素欧洲药典6.0规定：规定：4-差向差向土霉素土霉素0.5%，四环素，四环素2.0%，2-乙酰乙酰-2去酰去酰胺土霉素胺土霉素2.0%，其他杂质总和，其他杂质总和2.0%，l国内样品国内样品4-差向土霉素和四环素的含量很少，差向土霉素和四环素的含量很少，故将其作为其他杂质控制，不再单独规定限度，故将其作为其他杂质控制，不再单独规定限度，其他杂质总和其他杂质总和2.0%；l三批样品中三批样品中2-乙酰乙酰-2-去酰胺土霉素的含量约去酰胺土霉素的含量约为为2.5%，有文献报道，有文献报道2-乙酰乙酰
139、-2-去酰胺土霉素去酰胺土霉素的抗菌活性很低的抗菌活性很低2，但未见其毒性的相关报道，但未见其毒性的相关报道，故本标准规定其限度为故本标准规定其限度为3.5%，l限度为：限度为：供试品溶液色谱图中如有杂质峰，供试品溶液色谱图中如有杂质峰，2-乙酰乙酰-2-去酰胺土霉素杂质峰面积不得大于对去酰胺土霉素杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的照溶液主峰面积的1.75倍（倍（3.5%），其他各杂），其他各杂质峰峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积质峰峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积（2.0%）。）。l如：盐酸四环素欧洲药典如：盐酸四环素欧洲药典6.0版规定：版规定：4-差向四环素差向四环素3.0%，2-
140、乙酰乙酰-2去酰胺四环素去酰胺四环素1.5%（该杂质在四环素的峰尾流出），脱水（该杂质在四环素的峰尾流出），脱水四环素四环素0.5%，差向脱水四环素，差向脱水四环素0.5%。l经试验，国内样品经试验，国内样品4-差向四环素的含量均小差向四环素的含量均小于于3.0%，故将中国药典，故将中国药典2005年版标准规定年版标准规定的的4-差向四环素差向四环素4.0%的限度改为的限度改为3.0%。l该色谱条件下首次检出了土霉素，含量很少，该色谱条件下首次检出了土霉素，含量很少，三批样品均在三批样品均在0.1%以下，以下，l三批样品中不存在三批样品中不存在2-乙酰乙酰-2去酰胺四环素杂去酰胺四环素杂质，如
141、其他样品含有质，如其他样品含有2-乙酰乙酰-2去酰胺四环素时，去酰胺四环素时，可将该杂质作为其他杂质控制，规定其他杂质可将该杂质作为其他杂质控制，规定其他杂质限度为限度为1.0%，l限度为：供试品溶液色谱图中如有杂质峰，限度为：供试品溶液色谱图中如有杂质峰，土霉素、土霉素、4-差向四环素、盐酸金霉素、脱水四差向四环素、盐酸金霉素、脱水四环素、差向脱水四环素按校正后的峰面积计算环素、差向脱水四环素按校正后的峰面积计算（分别乘以校正因子（分别乘以校正因子1.0、1.42、1.39、0.48和和0.62）分别不得大于对照溶液主峰面积的）分别不得大于对照溶液主峰面积的0.25倍（倍（0.5%）、）、1
142、.5倍（倍（3.0%）、）、0.5倍（倍（1.0%）、）、0.25倍（倍（0.5%）、）、0.25倍（倍（0.5%），其他各杂），其他各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的0.5倍（倍（1.0%）。）。l4.3.4含量测定含量测定l4.3.4.1盐酸多西环素盐酸多西环素,盐酸四环素盐酸四环素,盐酸土霉盐酸土霉素等素等l 由于由于2005年版药典测定四环素类的流动相中年版药典测定四环素类的流动相中的草酸铵容易结晶析出造成系统堵塞，加之流的草酸铵容易结晶析出造成系统堵塞，加之流动相中的二甲基甲酰胺容易吸附在管路和检测动相中的二甲基甲酰胺容易吸附在管路和检测
143、池中，影响后续品种的检测，池中，影响后续品种的检测，l2010年版药典的起草时对流动相作了较大修年版药典的起草时对流动相作了较大修改，对多西环素及其制剂色谱分离的影响因素改，对多西环素及其制剂色谱分离的影响因素包括水相缓冲盐的种类和浓度、包括水相缓冲盐的种类和浓度、pH值、扫尾剂、值、扫尾剂、有机相、柱温等进行了系统的考察，确定了新有机相、柱温等进行了系统的考察，确定了新的流动相的流动相. l用醋酸铵和乙腈替代草酸胺及用醋酸铵和乙腈替代草酸胺及N,N二甲基二甲基甲酰胺，甲酰胺，l并在流动相中添加了少量的并在流动相中添加了少量的EDTA，用经于，用经于竞争性抑制色谱填料中残留重金属离子与四环竞争
144、性抑制色谱填料中残留重金属离子与四环素类及杂质的络合，素类及杂质的络合，l添加了少量三乙胺可以封闭柱填料中部分残添加了少量三乙胺可以封闭柱填料中部分残余硅羟基的影响，减少拖尾。余硅羟基的影响，减少拖尾。l土霉素，四环素等同系品种经系统考察后也土霉素，四环素等同系品种经系统考察后也采用了上述流动相系统，仅在醋酸铵的浓度、采用了上述流动相系统，仅在醋酸铵的浓度、比例以及比例以及pH值等条件进行了调整。值等条件进行了调整。表表4.2 流动相配比见下表流动相配比见下表: : 表表4.2 4.2 含量测定流动相含量测定流动相（2010年版）年版）盐酸土霉素盐酸土霉素醋酸盐缓冲液醋酸盐缓冲液0.25mol
145、L0.25molL-1-1醋酸铵醋酸铵-0.1molL-0.1molL-1-1EDTAEDTA钠盐钠盐- -三乙三乙胺（胺（100100：1010：1 1）用醋酸调节）用醋酸调节pHpH值至值至7.57.5乙腈乙腈(88(88：12) 12) 盐酸四环素盐酸四环素醋酸盐缓冲液醋酸盐缓冲液0.15molL0.15molL-1-1醋酸铵醋酸铵-0.1molL-0.1molL-1-1EDTAEDTA钠盐钠盐- -三乙三乙胺（胺（100100：1010：1 1）用醋酸调节）用醋酸调节pHpH值至值至8.58.5乙腈乙腈(83(83：17) 17) 盐酸多西环素盐酸多西环素醋酸盐缓冲液醋酸盐缓冲液0.2
146、5molL0.25molL-1-1醋酸铵醋酸铵-0.1molL-0.1molL-1-1EDTAEDTA钠盐钠盐- -三乙三乙胺（胺（100100：1010：1 1）用冰醋酸调节）用冰醋酸调节pHpH值至值至8.88.8乙腈乙腈(85(85：15) 15) 盐酸美他环素盐酸美他环素醋酸盐缓冲液醋酸盐缓冲液0.25molL0.25molL-1-1醋酸铵醋酸铵-0.1molL-0.1molL-1-1EDTAEDTA钠盐钠盐- -三乙三乙胺（胺（100100：1010：1 1）用冰醋酸调节）用冰醋酸调节pHpH值至值至8.38.3乙腈乙腈(85(85：15) 15) 盐酸米诺环素盐酸米诺环素0.2mo
147、lL0.2molL-1-1醋酸铵醋酸铵- -二甲基甲酰胺二甲基甲酰胺- -四氢呋喃四氢呋喃 (600 (600：398398：2)2)，内含内含0.01mol0.01mol的的EDTAEDTA钠（与钠（与20052005年版）年版）盐酸金霉素盐酸金霉素高氯酸高氯酸- -二甲亚砜二甲亚砜- -水水(8:525:467)(pH(8:525:467)(pH小于小于2.0)2.0)l按上述流动相对多西环素、四环素、土霉素按上述流动相对多西环素、四环素、土霉素进行分离研究，可以使主成分与杂质达到良好进行分离研究，可以使主成分与杂质达到良好分离，分离的杂质数基本与分离，分离的杂质数基本与EP6.0报导的一
148、致。报导的一致。图中代号图中代号EPEP代号代号峰名称峰名称1 1E E杂质杂质E(E(土霉素土霉素) )2 2D D杂质杂质D D（4-4-差向差向-6-6-差向多西环素差向多西环素, ,3 3C C杂质杂质C C（4-4-差向多西环素）差向多西环素）4 4B B杂质杂质B B（美他环素）（美他环素）5 5A A杂质杂质A(-A(-多西环素多西环素) )多西环素多西环素6 6F F杂质杂质F(2-F(2-乙酰乙酰-6-6-脱碳酰胺多西环素脱碳酰胺多西环素) )图图4.1.多西环素分离图多西环素分离图 出峰顺序出峰顺序(Rt)(Rt)峰名称峰名称5.4715.4714 4差向四环素差向四环素6
149、.1486.148土霉素土霉素9.5889.588差向脱水四环素差向脱水四环素14.21014.210盐酸四环素盐酸四环素23.14723.147盐酸金霉素盐酸金霉素26.58126.581脱水四环素脱水四环素 图图4.2.四环素分离图四环素分离图出峰顺序出峰顺序(RT)(RT)峰名称峰名称9.1959.1954-4-差向四环素峰（与土霉素色谱峰相对保留时间约为差向四环素峰（与土霉素色谱峰相对保留时间约为0.90.9）1078910789土霉素峰土霉素峰12.19412.1942-2-乙酰乙酰-2-2-去酰胺土霉素峰（与土霉素色谱峰相对去酰胺土霉素峰（与土霉素色谱峰相对 保留时间约为保留时间约
150、为1.11.1）图图4.3.土霉素分离图土霉素分离图l几点注意：几点注意：l(1)由于流动相由于流动相pH值在值在7.5-8.8，因此需要选择耐，因此需要选择耐碱性的色谱柱。碱性的色谱柱。l(2)主峰与其有关物质的峰形和分离效果受柱温主峰与其有关物质的峰形和分离效果受柱温影响较大，本品检测时控制柱温是有必要的。影响较大，本品检测时控制柱温是有必要的。l(3)与主峰相对保留时间为与主峰相对保留时间为1.1处的杂质可能为处的杂质可能为2-乙酰乙酰-2-去酰胺四环类杂质。在土霉素、多西环素去酰胺四环类杂质。在土霉素、多西环素中都存在，故在系统适用性试验中应规定与其的中都存在，故在系统适用性试验中应规
151、定与其的分离度。分离度。l4.3.4.2金霉素金霉素l采用酸性流动相：氯酸采用酸性流动相：氯酸-二甲亚砜二甲亚砜-水水(8:525:467)(pH小于小于2.0)取代了取代了2005年版的流年版的流动相，分离效果如下。试验过碱性流动相，效动相，分离效果如下。试验过碱性流动相，效果不理想。注意：采用耐酸的色谱柱。果不理想。注意：采用耐酸的色谱柱。出峰出峰顺顺序序(RT)(RT) 峰名称峰名称8.3298.329 盐盐酸四酸四环环素素9.3669.366 4- 4-差向异金霉素（差向异金霉素（EICTCEICTC）11.24511.245 去甲基金霉素去甲基金霉素14.26714.267 4- 4
152、-差向金霉素差向金霉素16.97916.979 盐盐酸金霉素酸金霉素20.78320.783 乙乙酰酰-2-2-脱氨甲脱氨甲酰酰金霉素（金霉素（ADCTCADCTC）20.78320.783 2- 2-脱水四脱水四环环素素图图4.4.金霉素分离图金霉素分离图图4.4图4. 金霉素分离图 金霉素分离图l5、酰胺醇类抗生素、酰胺醇类抗生素本类品种包括：氯本类品种包括：氯霉素类，甲砜霉素类。霉素类，甲砜霉素类。l5.1氯霉素类氯霉素类l5.1.1基本特点基本特点l本品由本品由J.Ehlrich于于1947年发现，从链霉菌年发现，从链霉菌StreptomycesVenezuela的培养液中得到，的培养
153、液中得到，1949年开始化学合成。氯霉素中含有两个不对称的年开始化学合成。氯霉素中含有两个不对称的碳原子，有四个立体异构体，一对赤式异构体碳原子，有四个立体异构体，一对赤式异构体无活性；无活性；L-(+)-苏式异构体的抗菌作用仅相当苏式异构体的抗菌作用仅相当于于D-(-)-苏式异构体的苏式异构体的0.5。化学合成法得。化学合成法得D,L-苏式混旋体，又称合霉素，进一步拆分得苏式混旋体，又称合霉素，进一步拆分得氯霉素。氯霉素。l本品在醋酸乙酯中呈左旋，在无水乙醇中呈本品在醋酸乙酯中呈左旋，在无水乙醇中呈右旋，这一特征为琥珀氯霉素和无味氯霉素所右旋，这一特征为琥珀氯霉素和无味氯霉素所不具备的。不具
154、备的。l氯霉素水溶液不稳定，水溶液易水解，氯霉素水溶液不稳定，水溶液易水解，得得2-氨基氨基-1-（4-硝基苯）硝基苯）-1，3-丙二醇。丙二醇。5.1.25.1.2品种收载情况：未新增品种收载情况：未新增 品种品种原料原料 制剂制剂 12 12 3 3 9 9l5.1.32010年版药典本类药品质量标准要点年版药典本类药品质量标准要点l5.1.3.1性状性状l氯霉素为白色或微带黄绿色结晶或结晶性粉末氯霉素为白色或微带黄绿色结晶或结晶性粉末.l棕榈氯霉素为白色或类白色粉末。棕榈氯霉素为白色或类白色粉末。l琥珀氯霉素为白色或类白色结晶性粉末琥珀氯霉素为白色或类白色结晶性粉末.l5.1.3.2鉴别
155、鉴别l采用采用HPLC、TLC以及以及IR等方法作为鉴别反应，等方法作为鉴别反应，也有用也有用UV法作为鉴别反应。法作为鉴别反应。l5.1.3.3.1有关物质有关物质l在在2005年版药典执行过程中发现在规定的色年版药典执行过程中发现在规定的色谱条件下，杂质对硝基苯甲醛峰的峰形严重前谱条件下，杂质对硝基苯甲醛峰的峰形严重前倾，对称性差，导致测定结果的误差很大。倾，对称性差，导致测定结果的误差很大。l在原色谱条件的基础上进行了修改，修订了在原色谱条件的基础上进行了修改，修订了流动相系统与检测波长。流动相系统与检测波长。l氯霉素及其滴耳液，滴眼液中的二醇物与对氯霉素及其滴耳液，滴眼液中的二醇物与对
156、硝基苯甲醛测定照含量测定项下硝基苯甲醛测定照含量测定项下HPLC法的色法的色谱条件测定，用对照品以外标法计算杂质含量。谱条件测定，用对照品以外标法计算杂质含量。图图5.1.氯霉素分离图（优化前）氯霉素分离图（优化前）图图5.2.氯霉素分离图（优化后）氯霉素分离图（优化后）l5.1.3.3.2残留溶剂残留溶剂l由于氯霉素在生产过程中使用了二类溶剂氯由于氯霉素在生产过程中使用了二类溶剂氯苯与三类溶剂乙醇，新增了苯与三类溶剂乙醇，新增了2种溶剂的检查，种溶剂的检查，采用残留溶剂检查法的第二法。采用残留溶剂检查法的第二法。l5.1.3.3.3防腐剂防腐剂l氯霉素滴眼液新增羟苯甲酯、羟苯乙酯与羟氯霉素滴
157、眼液新增羟苯甲酯、羟苯乙酯与羟苯丙酯的检查，用苯丙酯的检查，用HPLC法与有关物质同时检法与有关物质同时检出，限度出，限度80%-120%。出峰顺序出峰顺序 峰名称峰名称 1 1羟苯甲酯羟苯甲酯 2 2羟苯乙酯羟苯乙酯 3 3羟苯丙酯羟苯丙酯 4 4氯霉素二醇物；氯霉素二醇物； 5 5对硝基苯甲醛对硝基苯甲醛 6 6氯霉素氯霉素 图图5.3.氯霉素有关物质与防腐剂分离图氯霉素有关物质与防腐剂分离图l5.1.3.3.4琥珀氯霉素与棕榈氯霉素中的游离氯琥珀氯霉素与棕榈氯霉素中的游离氯霉素霉素l用用TLC法检查，与氯霉素对照品溶液主斑点法检查，与氯霉素对照品溶液主斑点比较比较l5.1.3.3.5琥珀
158、氯霉素琥珀氯霉素l在正文下新增可见异物、不溶性微粒和细菌在正文下新增可见异物、不溶性微粒和细菌内毒素。内毒素。表表5.1 5.1 色谱条件比较色谱条件比较 流动相流动相检测波长检测波长20052005年版年版药典色谱药典色谱条件条件含含0.1%0.1%庚烷磺酸钠的溶液（取庚烷磺酸钠的溶液（取0.01%0.01%庚烷磺酸钠溶液庚烷磺酸钠溶液500ml500ml与二甲基甲酰胺与二甲基甲酰胺5ml5ml、冰醋酸、冰醋酸0.5ml0.5ml，混匀），混匀）- -乙醇（乙醇（7575：2525）272nm272nm20102010年版年版药典色谱药典色谱条件条件含含0.1%0.1%庚烷磺酸钠的溶液（取磷
159、酸二氢钾庚烷磺酸钠的溶液（取磷酸二氢钾6.8g6.8g，用，用0.1%0.1%庚庚烷磺酸钠溶液稀释至烷磺酸钠溶液稀释至1000ml1000ml，再加三乙胺，再加三乙胺5ml5ml，混匀，用，混匀，用磷酸调节磷酸调节pHpH值至值至2.52.5）277nm277nm5.1.4含量测定含量测定5.1.4.1色谱条件色谱条件对对HPLC法测定含量的色谱条件法测定含量的色谱条件进行了优化：进行了优化：l5.1.4.22005年版药典规定氯霉素滴眼液标示年版药典规定氯霉素滴眼液标示量为：不得少于标示量的量为：不得少于标示量的85.0%，l现修订为：应为标示量的现修订为：应为标示量的90.0-120.0%
160、l5.1.4.3琥珀氯霉素及注射用琥珀氯霉素，琥珀氯霉素及注射用琥珀氯霉素，棕榈氯霉素及其制剂采用紫外一可见光分光光棕榈氯霉素及其制剂采用紫外一可见光分光光度法测定含量，未修订。度法测定含量，未修订。l5.2甲砜霉素类甲砜霉素类l5.2.1品种收载情况：品种收载情况：l甲砜霉素、甲砜霉素、甲砜霉素肠溶片和甲砜霉素胶囊甲砜霉素肠溶片和甲砜霉素胶囊l5.2.2增、修订情况增、修订情况l5.2.2.1 鉴别鉴别l原料项下的原料项下的TLC鉴别中的展开剂比例参照鉴别中的展开剂比例参照BP2008进行了修订，由乙酸乙酯进行了修订，由乙酸乙酯-甲醇（甲醇（97：13）修订为）修订为;乙酸乙酯乙酸乙酯-甲醇
161、（甲醇（97：3）。）。l5.2.2.2吸收系数吸收系数增订了吸收系数检查项增订了吸收系数检查项,l其他项目均未做修改。其他项目均未做修改。l6、利福霉素类、利福霉素类l6.1、基本特点、基本特点l利福平系由链霉菌利福平系由链霉菌S.mediterranei发酵培养的代发酵培养的代谢产物利福霉素谢产物利福霉素SV合成的半合成抗结核抗生素，合成的半合成抗结核抗生素，在其发酵和合成过程中可能产生利福霉素在其发酵和合成过程中可能产生利福霉素SV、醌式利福平、醌式利福平、N-氧化利福平及氧化利福平及3-甲酰利福霉素甲酰利福霉素等杂质。等杂质。l6.2、品种收载情况：、品种收载情况：l利福平利福平l利福
162、平片、利福平片、l利福平胶囊、利福平胶囊、l利福平滴眼液利福平滴眼液l异福片异福片(利福平与异烟肼的复方制剂利福平与异烟肼的复方制剂)l异福胶囊异福胶囊l异福酰胺片（利福平与异烟肼与吡嗪酰胺的复异福酰胺片（利福平与异烟肼与吡嗪酰胺的复方制剂）方制剂）l异福酰胺胶囊异福酰胺胶囊l本类药物为抗结核病药本类药物为抗结核病药,以利福平为原料制成以利福平为原料制成的单方制剂及滴眼用制剂；的单方制剂及滴眼用制剂；l为适合不同结核病人的需要制成各成分比例不为适合不同结核病人的需要制成各成分比例不同规格的复方制剂。同规格的复方制剂。l6.3修订和增订项目概况修订和增订项目概况l6.3.1鉴别鉴别l6.3.1.
163、1用含量测定项下的用含量测定项下的HPLC方法记录的色方法记录的色谱图中，供试品溶液主峰（或几个主峰）的保谱图中，供试品溶液主峰（或几个主峰）的保留时间与对照品溶液主峰（或几个主峰）的保留时间与对照品溶液主峰（或几个主峰）的保留时间一致作为鉴别。留时间一致作为鉴别。ll6.3.1.2利福平原料及其制剂均相应增加利福平原料及其制剂均相应增加TLC鉴鉴别，别，HPLC与与TLC两项鉴别任选一项。两项鉴别任选一项。l6.3.1.3滴眼液中如含有聚维酮，对滴眼液中如含有聚维酮，对TLC展开有展开有影响，建议用影响，建议用HPLC鉴别。鉴别。l6.3.2有关物质有关物质l利福平中存在各种已知杂质，如：醌
164、式利福平，利福平中存在各种已知杂质，如：醌式利福平，N-氧化利福平，氧化利福平，3-甲酰利福霉素甲酰利福霉素SV,l在在2005年版药典利福平的有关物质检查，用年版药典利福平的有关物质检查，用HPLC方法并利用上述已知杂质与主成分的校方法并利用上述已知杂质与主成分的校正因子，对各杂质进行校正，用加校正因子的正因子，对各杂质进行校正，用加校正因子的自身对照法计算含量。自身对照法计算含量。l2010年版药典修改为采用杂质对照品按外标年版药典修改为采用杂质对照品按外标法计算含量，结果更准确。法计算含量，结果更准确。l6.3.4、溶出度、溶出度l本品为难溶于水的药物，故口服制剂均进行溶本品为难溶于水的
165、药物，故口服制剂均进行溶出度检查。出度检查。l对复方制剂异福片（胶囊）项下的溶出度，除对复方制剂异福片（胶囊）项下的溶出度，除测定利福平外，增加了异烟肼的测定，测定利福平外，增加了异烟肼的测定，l异福酰胺片（胶囊）增加吡嗪酰胺和异烟肼异福酰胺片（胶囊）增加吡嗪酰胺和异烟肼的测定，用紫外一可见分光光度法测定利福平，的测定，用紫外一可见分光光度法测定利福平，用用HPLC测定吡嗪酰胺和异烟肼。测定吡嗪酰胺和异烟肼。l6.3.5渗透压摩尔浓度渗透压摩尔浓度滴眼制剂新增渗透压摩滴眼制剂新增渗透压摩尔浓度检查。尔浓度检查。为为260-320mOsml/kg。ll6.3.6含量测定含量测定l6.3.6.1滴
166、眼用利福平修订了含量测定中系统适滴眼用利福平修订了含量测定中系统适用性分离度试验用的对照物，原标准为利福平用性分离度试验用的对照物，原标准为利福平与醌式利福平的分离度，新标准为利福平与利与醌式利福平的分离度，新标准为利福平与利福霉素福霉素SV的分离度。的分离度。l6.3.5.2本类药物含量测定均采用本类药物含量测定均采用HPLC法测定，法测定，在系统适用性试验中用已知杂质制备分离度试在系统适用性试验中用已知杂质制备分离度试验用溶液，保证了方法的专属性，准确性。验用溶液，保证了方法的专属性，准确性。l6.3.5.3复方制剂中用几个主成分与醌式利福复方制剂中用几个主成分与醌式利福平制备分离度试验用
167、溶液，进行系统适用性试平制备分离度试验用溶液，进行系统适用性试验，保证结果的准确性。验，保证结果的准确性。7. 7. 喹诺酮类抗生素喹诺酮类抗生素7.1 7.1 品种收载情况品种收载情况 表表7.1 20107.1 2010年版药典喹诺酮类品种收载情况年版药典喹诺酮类品种收载情况 原料原料 制剂制剂 总计总计收载品种收载品种 12 12 34 34 46 46新增品种新增品种 3 3 5 5 8 8l新增品种：新增品种：l原料：原料：制剂制剂:l左氧氟沙星左氧氟沙星左氧氟沙星片左氧氟沙星片l盐酸左氧氟沙星盐酸左氧氟沙星盐酸左氧氟沙片，盐酸左氧氟沙片，l盐酸左氧氟沙星胶囊盐酸左氧氟沙星胶囊l盐酸
168、洛美沙星盐酸洛美沙星盐酸洛美沙星片，盐酸洛美沙星片，l盐酸洛美沙星胶囊盐酸洛美沙星胶囊l7.22005年版药典本类抗菌药质量标准年版药典本类抗菌药质量标准要点要点l7.2.1喹诺酮类抗生素是一类全合成的新型抗生素药，喹诺酮类抗生素是一类全合成的新型抗生素药，本版药典规定原料药均以有效成分计算含量。本版药典规定原料药均以有效成分计算含量。l7.2.2由于本类药品含量测定与有关物质大多采用由于本类药品含量测定与有关物质大多采用HPLC法与法与HPLC梯度洗脱，故鉴别采用梯度洗脱，故鉴别采用HPLC法并法并附加其他方法附加其他方法。l在鉴别试验中规定在鉴别试验中规定TLC和和HPLC两个色谱鉴别项，
169、两个色谱鉴别项，可根据实验室条件任选其中之一，便于灵活操作。可根据实验室条件任选其中之一，便于灵活操作。l7.2.3有关物质有关物质l7.2.3.1本类药品有关物质采用本类药品有关物质采用HPLC法与法与HPLC梯度洗脱。均以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，梯度洗脱。均以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，反相色谱，紫外检测。反相色谱，紫外检测。l原料原料12个品种均规定检查有关物质，制剂个品种均规定检查有关物质，制剂34个个品种除品种除6个品种乳膏剂，胶囊，片未规定检查有个品种乳膏剂，胶囊，片未规定检查有关物质外关物质外,其他品种均有有关物质检查。其他品种均有有关物质检查。l其中除吡哌酸，甲磺酸培氟
170、沙星，氟罗沙星外，其中除吡哌酸，甲磺酸培氟沙星，氟罗沙星外，其他原料及其制剂共其他原料及其制剂共31个品种采用个品种采用HPLC梯度洗梯度洗脱方法脱方法.表表7.2 7.2 喹诺酮类抗生素有关物质检查喹诺酮类抗生素有关物质检查 总计总计HPLC等度洗脱等度洗脱HPLC梯度洗脱梯度洗脱原料原料 12 12 3 3 9 9制剂制剂 34 34 5 5 23 23l7.2.3.2环丙沙星，盐酸环丙沙星，氧氟沙星，环丙沙星，盐酸环丙沙星，氧氟沙星，诺氟沙星的有关物质检查，诺氟沙星的有关物质检查，EP、BP、USP均采均采用用TLC、HPLC两种方法进行控制。两种方法进行控制。l本版药典用本版药典用HP
171、LC梯度洗脱方法，将梯度洗脱方法，将EP6.0用用TLC、HPLC两种方法检测的杂质两种方法检测的杂质,一次检测，一次检测，提高了工作效率提高了工作效率，l在检测中根据杂质最大吸收波长的不同，用在检测中根据杂质最大吸收波长的不同，用双波长测定，双波长测定，l用杂质对照品法与自身对照法计算杂质的含用杂质对照品法与自身对照法计算杂质的含量。量。l杂质杂质A用用HPLC检测的灵敏度、正确性优于检测的灵敏度、正确性优于TLC法。法。l如：环丙沙星如：环丙沙星EP6.0/BP2008、USP31和中和中国药典国药典2005年版二部均以高效液相等度洗脱年版二部均以高效液相等度洗脱方法检查有关物质，方法检查
172、有关物质，l国外药典均采用磷酸三乙胺系统等度洗脱，国外药典均采用磷酸三乙胺系统等度洗脱，中国药典采用枸橼酸三乙胺系统等度洗脱；中国药典采用枸橼酸三乙胺系统等度洗脱；l另各国药典均采用薄层色谱法检查氟喹啉酸另各国药典均采用薄层色谱法检查氟喹啉酸（杂质（杂质A）。）。l本标准在参考磷酸三乙胺系统基础上，在环本标准在参考磷酸三乙胺系统基础上，在环丙沙星主峰被洗脱后，采用梯度洗脱方式，增丙沙星主峰被洗脱后，采用梯度洗脱方式，增加有机相比例，使脂溶性杂质氟喹啉酸（杂质加有机相比例，使脂溶性杂质氟喹啉酸（杂质A）得到有效洗脱。）得到有效洗脱。l本标准确定的梯度洗脱系统能有效分离杂质本标准确定的梯度洗脱系统
173、能有效分离杂质A、B、lC、E、I、D和和H，图图7.1环丙沙星有关物质检查供试品溶液色谱图（梯度洗脱）环丙沙星有关物质检查供试品溶液色谱图（梯度洗脱）278nmll根据杂质在根据杂质在278nm和和262nm不同波长的不同波长的响应情况，分别以响应情况，分别以278n检测杂质检测杂质B、C、D、E、I和其他杂质，以和其他杂质，以262nm检测杂质检测杂质A，l杂质杂质A用杂质对照品外标法计算含量用杂质对照品外标法计算含量.。l杂质杂质B、C、E、I、D和和H，用加校正因，用加校正因子与不加校正因子的自身对照法计算已子与不加校正因子的自身对照法计算已知杂质和未知杂质的含量和杂质的总量。知杂质和
174、未知杂质的含量和杂质的总量。图图7.2环丙沙星有关物质检查供试品溶液色谱图（梯度洗脱）环丙沙星有关物质检查供试品溶液色谱图（梯度洗脱）278nm图图7.2环丙沙星有关物质检查供试品溶液色谱图（梯度洗脱）环丙沙星有关物质检查供试品溶液色谱图（梯度洗脱）262nml7.2.3.3采用梯度洗脱时，由于不同色谱柱的采用梯度洗脱时，由于不同色谱柱的行为略有差异，故在系统适用性试验中，应规行为略有差异，故在系统适用性试验中，应规定主峰的出峰时间，主峰与已知杂质的分离度。定主峰的出峰时间，主峰与已知杂质的分离度。l如：盐酸环丙沙星如：盐酸环丙沙星l称取氧氟沙星对照品、环丙沙星对照品和杂质称取氧氟沙星对照品、
175、环丙沙星对照品和杂质I对照品各适量，加流动相对照品各适量，加流动相A溶解并稀释制成每溶解并稀释制成每1ml中约含氧氟沙星中约含氧氟沙星5g、环丙沙星、环丙沙星0.5mg和杂和杂质质I10g的混合溶液，取的混合溶液，取20l注入液相色谱仪，注入液相色谱仪，以以278nm为检测波长，记录色谱图，为检测波长，记录色谱图，环丙沙星环丙沙星峰的保留时间约为峰的保留时间约为12分。环丙沙星峰与氧氟沙分。环丙沙星峰与氧氟沙星峰和杂质星峰和杂质I峰的分离度均应符合要求。峰的分离度均应符合要求。 图图7.3有关物质检查系统适用性溶液色谱图（梯度洗脱）有关物质检查系统适用性溶液色谱图（梯度洗脱）(盐酸环丙沙星盐酸
176、环丙沙星)l如：盐酸洛美沙星如：盐酸洛美沙星l取洛美沙星对照品适量，加水溶解并稀释制成取洛美沙星对照品适量，加水溶解并稀释制成每每1ml中约含中约含1.0mg的溶液，水浴加热的溶液，水浴加热60分钟，分钟，冷却，取此液冷却，取此液20l注入液相色谱仪，记录色谱注入液相色谱仪，记录色谱图，图，洛美沙星峰保留时间约为洛美沙星峰保留时间约为9分钟，分钟，与主峰与主峰相对保留时间分别约相对保留时间分别约0.8和和1.1处应能检测到杂处应能检测到杂质峰，且洛美沙星峰与两杂质峰的分离度均应质峰，且洛美沙星峰与两杂质峰的分离度均应符合要求。符合要求。l如如: :氧氟沙星氧氟沙星l称取氧氟沙星对照品、环丙沙星
177、对照品和杂质称取氧氟沙星对照品、环丙沙星对照品和杂质E E对照品各适量，用对照品各适量，用0.1mol/L0.1mol/L盐酸溶液溶解并盐酸溶液溶解并稀释制成每稀释制成每1ml1ml中约含氧氟沙星中约含氧氟沙星1.2mg1.2mg、环丙沙、环丙沙星和杂质星和杂质E E各各6g6g的混合溶液，取的混合溶液，取10l10l注入液注入液相色谱仪，以相色谱仪，以294nm294nm为检测波长，记录色谱图，为检测波长，记录色谱图，氧氟沙星峰的保留时间约为氧氟沙星峰的保留时间约为1515分钟。氧氟沙星分钟。氧氟沙星峰与杂质峰与杂质E E峰和氧氟沙星峰与环丙沙星峰的分峰和氧氟沙星峰与环丙沙星峰的分离度应分别
178、大于离度应分别大于2.02.0与与2.52.5。图图7.4氧氟沙星系统适用性试验分离度测试溶液色谱图氧氟沙星系统适用性试验分离度测试溶液色谱图（含杂质（含杂质A和杂质和杂质B）（梯度洗脱）（梯度洗脱）l7.2.3.4由于梯度洗脱基线噪音相对较大，故由于梯度洗脱基线噪音相对较大，故规定供试品溶液色谱图中小于对照溶峰面规定供试品溶液色谱图中小于对照溶峰面0.05倍或倍或0.1倍的峰可忽略不计。以免基线噪音影响倍的峰可忽略不计。以免基线噪音影响结果正确性。结果正确性。l7.2.3.5有关物质测定，结果计算分为三种方法：有关物质测定，结果计算分为三种方法：l（1）不加校正因子的自身对照法；）不加校正因
179、子的自身对照法；l（2）加校正因子的自身对照法；）加校正因子的自身对照法；l（3）已知杂质对照品外标法。）已知杂质对照品外标法。l用杂质对照品外标法计算已知杂质的含量用杂质对照品外标法计算已知杂质的含量.l用加校正因子与不加校正因子的自身对照法计用加校正因子与不加校正因子的自身对照法计算已知杂质和未知杂质的含量和杂质的总量。算已知杂质和未知杂质的含量和杂质的总量。l如：盐酸环丙沙星如：盐酸环丙沙星l供试品溶液色谱图中如有杂质峰，杂质供试品溶液色谱图中如有杂质峰，杂质A（262nm检测）按外标法以峰面积计算，不检测）按外标法以峰面积计算，不得过得过0.3%。杂质。杂质B、C、D和和E峰（峰（27
180、8nm检测）检测）按校正后的峰面积计算（分别乘以校正因子按校正后的峰面积计算（分别乘以校正因子0.7、0.6、1.4和和6.7），均不得大于对照溶液主峰面），均不得大于对照溶液主峰面积（积（0.2%）；其他单个杂质（）；其他单个杂质（278nm检测）峰检测）峰面积不得大于对照溶液主峰面积（面积不得大于对照溶液主峰面积（0.2%）。各）。各杂质（杂质（278nm检测）校正后峰面积的和不得大检测）校正后峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的于对照溶液主峰面积的3.5倍（倍（0.7%），供试），供试品溶液色谱图中任何小于对照溶液主峰面积品溶液色谱图中任何小于对照溶液主峰面积0.1倍的峰可忽略不计。倍的
181、峰可忽略不计。l如如:氧氟沙星氧氟沙星l供试品溶液色谱图中如有杂质峰，杂质供试品溶液色谱图中如有杂质峰，杂质A（238nm检测）按外标法以峰面积计算，不检测）按外标法以峰面积计算，不得过得过0.3%。其他单个杂质（。其他单个杂质（294nm检测）峰面检测）峰面积不得大于对照溶液主峰面积（积不得大于对照溶液主峰面积（0.2%），其他），其他各杂质峰面积的和（各杂质峰面积的和（294nm检测）不得大于对检测）不得大于对照溶液主峰面积的照溶液主峰面积的2.5倍（倍（0.5%），供试品溶），供试品溶液色谱图中任何小于对照溶液主峰面积液色谱图中任何小于对照溶液主峰面积0.1倍的倍的峰可忽略不计。峰可忽略
182、不计。 图图7.5有关物质检查供试品溶液色谱图（梯度洗脱）有关物质检查供试品溶液色谱图（梯度洗脱）238n图图7.5有关物质检查供试品溶液色谱图（梯度洗脱）有关物质检查供试品溶液色谱图（梯度洗脱）294nml7.2.4大容量注射液与滴眼液增加渗透压摩尔大容量注射液与滴眼液增加渗透压摩尔浓度检查。浓度检查。l如如:乳酸环丙沙星氯化钠注射液乳酸环丙沙星氯化钠注射液,l氧氟沙星氯化钠注射液氧氟沙星氯化钠注射液l7.2.5滴眼液增加防腐剂如：苯扎溴铵，羟苯滴眼液增加防腐剂如：苯扎溴铵，羟苯甲酯、羟苯乙酯，羟苯丙酯，硫柳汞等的检查。甲酯、羟苯乙酯，羟苯丙酯，硫柳汞等的检查。l用用HPLC法与有关物质同时
183、检出，法与有关物质同时检出，l限度限度:80%-120%。l7.2.6含量测定含量测定l本类共本类共46个品种的含量测定均采用个品种的含量测定均采用HPLC法或法或HPLC梯度洗脱。梯度洗脱。l均以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，反相均以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，反相色谱，紫外检测。色谱，紫外检测。l为保证方法的专属性与结果的正确性。利用为保证方法的专属性与结果的正确性。利用该类药物已知杂质对照品，同系物或加热能产该类药物已知杂质对照品，同系物或加热能产生降解物质。用于制备系统适用性试验用分离生降解物质。用于制备系统适用性试验用分离度溶液，测定分离度，保证了结果的准确性。度溶液，测定分离度，
184、保证了结果的准确性。l按外标法以峰面积计算供试品中的含量。按外标法以峰面积计算供试品中的含量。l如如甲磺酸培氟沙星甲磺酸培氟沙星l【含量测定】【含量测定】照高效液相色谱法（附录照高效液相色谱法（附录D）测）测定定l色谱条件与系统适用性试验色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂合硅胶为填充剂;以以0.04mol/L磷酸二氢钾溶液磷酸二氢钾溶液-0.05mol/L四丁基溴化铵溶液四丁基溴化铵溶液-乙腈乙腈（80 8 9）（用磷酸调节）（用磷酸调节pH值至值至4.0）为流动相）为流动相;柱温柱温40；检测波长为；检测波长为273nm.取培氟沙星对照取培氟沙星对照品与诺
185、氟沙星对照品各适量，加流动相溶解并稀品与诺氟沙星对照品各适量，加流动相溶解并稀释制成每释制成每1ml中含培氟沙星与诺氟沙星各约中含培氟沙星与诺氟沙星各约20g的混合溶液，取的混合溶液，取20l注入液相色谱仪，出峰顺序注入液相色谱仪，出峰顺序依次为诺氟沙星、培氟沙星，培氟沙星峰的保留依次为诺氟沙星、培氟沙星，培氟沙星峰的保留时间约为时间约为15分钟，分钟，诺氟沙星峰与培氟沙星峰的分诺氟沙星峰与培氟沙星峰的分离度应大于离度应大于6.0,培氟沙星峰与相邻峰间的分离度培氟沙星峰与相邻峰间的分离度应符合要求。应符合要求。l测定法测定法取本品适量，精密称定，加水溶解并取本品适量，精密称定，加水溶解并定量稀
186、释制成每定量稀释制成每1m中约含培氟沙星中约含培氟沙星20g的溶的溶液，精密量取液，精密量取20l注入液相色谱仪，记录色谱注入液相色谱仪，记录色谱图；另取培氟沙星对照品，同法测定，按外标图；另取培氟沙星对照品，同法测定，按外标法以峰面积计算出供试品中法以峰面积计算出供试品中C17H20FN3O3的含的含量。量。图图7.6诺氟沙星和培氟沙星的分离情况诺氟沙星和培氟沙星的分离情况l 如：如：左氧氟沙星左氧氟沙星l【含量测定】【含量测定】照高效液相色谱法（附录照高效液相色谱法（附录D）测定。）测定。l色谱条件与系统适用性试验色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以醋酸
187、铵高氯酸钠溶液键合硅胶为填充剂；以醋酸铵高氯酸钠溶液（取醋酸铵（取醋酸铵4.0g和高氯酸钠和高氯酸钠7.0g，加水，加水1300ml使溶解，用磷酸调节使溶解，用磷酸调节pH值至值至2.2）-乙腈（乙腈（85：15）为流动相；检测波长为）为流动相；检测波长为294nm。称取左氧。称取左氧氟沙星对照品、环丙沙星对照品和杂质氟沙星对照品、环丙沙星对照品和杂质E对照对照品各适量，加品各适量，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释制盐酸溶液溶解并稀释制成每成每1ml中约含左氧氟沙星中约含左氧氟沙星0.12mg、环丙沙星、环丙沙星和杂质和杂质E各各6g的混合溶液，取的混合溶液，取10l注入液相色注入液相色谱
188、仪，记录色谱图，左氧氟沙星峰的保留时间谱仪，记录色谱图，左氧氟沙星峰的保留时间约为约为15分钟，左氧氟沙星峰与杂质分钟，左氧氟沙星峰与杂质E峰和左氧峰和左氧氟沙星峰与环丙沙星峰间的分离度应分别大于氟沙星峰与环丙沙星峰间的分离度应分别大于2.0与与2.5。l测定法测定法取本品约取本品约60mg，精密称定，置，精密称定，置50ml量量瓶中，加瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并定量稀释至盐酸溶液溶解并定量稀释至刻度，摇匀，精密量取刻度，摇匀，精密量取5ml，置，置50ml量瓶中，量瓶中，用用0.1mol/L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，精密盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取量取10l注入液相色谱仪，
189、记录色谱图；另取注入液相色谱仪，记录色谱图；另取左氧氟沙星对照品适量，同法测定，按外标法左氧氟沙星对照品适量，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。以峰面积计算，即得。l7.3标准中涉及的已知杂质，在标准最后列出标准中涉及的已知杂质，在标准最后列出其化学命名，便于与国外药典标准中的杂质比其化学命名，便于与国外药典标准中的杂质比较。较。l如：氧氟沙星如：氧氟沙星l杂质A. l（）9,10-二氟-3-甲基-7-氧代-2,3-二氢-7H-吡啶并1,2,3-de-1,4-苯并恶唑-6-羧酸l杂质E.l（）9 -氟-3-甲基-7-氧代-10-（1-哌嗪基）-2,3-二氢-7H-吡啶并1,2,3-de-1
190、,4-苯并恶唑-6-羧酸l如：盐酸环丙沙星如：盐酸环丙沙星l杂质杂质A.l1-环丙基环丙基-6-氟氟-7-氯氯-4-氧代氧代-1,4-二氢喹啉二氢喹啉-3-羧羧酸酸（氟喹啉酸）（氟喹啉酸）l杂质杂质B.l1-环丙基环丙基-4-氧代氧代-7-（1-哌嗪基）哌嗪基）-1,4-二氢喹二氢喹啉啉-3-羧酸羧酸l杂质杂质C.l1-环丙基环丙基-6-氟氟-7-(2-氨乙基氨乙基)氨基氨基-4-氧代氧代-1,4-二氢喹啉二氢喹啉-3-羧酸羧酸l杂质杂质D.l1-环丙基环丙基-7-氯氯-4-氧代氧代-6-（1-哌嗪基）哌嗪基）-1,4-二二氢喹啉氢喹啉-3-羧酸羧酸l杂质杂质E.l1-环丙基环丙基-6-氟氟-
191、7-（1-哌嗪基）哌嗪基）4-（1H）喹）喹啉酮啉酮l杂质杂质I.l1-环丙基环丙基-7-氯氯-6-(2-氨乙基氨乙基)氨基氨基-4-氧代氧代-1,4-二氢二氢-3-喹啉甲酸喹啉甲酸l8、抗肿瘤抗生素类、抗肿瘤抗生素类l2010年版药典共收载丝裂霉素、放线菌素年版药典共收载丝裂霉素、放线菌素D、盐酸平阳霉素、盐酸多柔比星、盐酸表柔比星、盐酸平阳霉素、盐酸多柔比星、盐酸表柔比星、盐酸柔红霉素及其注射用制剂共盐酸柔红霉素及其注射用制剂共12个品种，个品种，l盐酸平阳霉素，盐酸表柔比星及注射用盐酸表盐酸平阳霉素，盐酸表柔比星及注射用盐酸表柔比星为新增品种。柔比星为新增品种。表表8.1 8.1 品种收
192、载情况品种收载情况 原料原料制剂制剂 总计总计20102010年版药典收载品种年版药典收载品种 6 6 6 6 12 12新增品种新增品种 2 2 1 1 3 38.18.1 增修订项目概况见表增修订项目概况见表8.28.2， 表表8.2 20108.2 2010年版药典抗肿瘤抗生素类品种增修订项目年版药典抗肿瘤抗生素类品种增修订项目项目项目修订修订增订增订鉴别鉴别2 2（UVUV）pHpH1 1/ /有关物质有关物质2 24 4防腐剂（羟苯甲酯）防腐剂（羟苯甲酯） / /1 1降压物质降压物质/ /6 6含量含量2 2l8.2本类抗生素质量标准要点本类抗生素质量标准要点l本类抗生素除盐酸平阳
193、霉素是博莱霉素类抗生本类抗生素除盐酸平阳霉素是博莱霉素类抗生素中的素中的A5组分，国外药典收载的硫酸组分，国外药典收载的硫酸/盐酸博盐酸博莱霉素主组分为莱霉素主组分为A2、B2，l其他品种国外药典均有收载，增修订后的质量其他品种国外药典均有收载，增修订后的质量标准已与国际药典接轨，有的已超过国外药典。标准已与国际药典接轨，有的已超过国外药典。l8.2.1性状性状盐酸平阳霉素为白色或类白色疏盐酸平阳霉素为白色或类白色疏松块状物或粉末，其余品种颜色较深，松块状物或粉末，其余品种颜色较深，l如丝裂霉素为深紫色结晶性粉末；如丝裂霉素为深紫色结晶性粉末；l放线菌素放线菌素D为鲜红色或深红色结晶，或橙红色
194、为鲜红色或深红色结晶，或橙红色结晶性粉末；结晶性粉末；l盐酸多柔比星为橙红色结晶性粉末。盐酸多柔比星为橙红色结晶性粉末。l对光均不稳定，尤其是放线菌素对光均不稳定，尤其是放线菌素D，需避光或，需避光或遮光储存。遮光储存。l8.2.2含量限度含量限度l各品种纯度相差较大，各品种纯度相差较大，l其中盐酸平阳霉素纯度较低，含量限度为其中盐酸平阳霉素纯度较低，含量限度为85%,l丝裂霉素限度为丝裂霉素限度为90%，l放线菌素放线菌素D限度为限度为95%，l其余则为其余则为97%或或98%。l8.2.3鉴别鉴别l原料大多收载了原料大多收载了HPLC法（除放线菌素法（除放线菌素D）、）、IR法（除盐酸平阳
195、霉素），法（除盐酸平阳霉素），l由于具有紫外吸收，该类原料均收载了由于具有紫外吸收，该类原料均收载了UV法，法，专属性较强；专属性较强；l个别采用显色反应。个别采用显色反应。l该类注射用制剂大多加了适量辅料，故未收该类注射用制剂大多加了适量辅料，故未收载载IR鉴别。鉴别。l8.2.4有关物质有关物质l8.2.4.1盐酸多柔比星、盐酸表柔比星、盐酸柔红盐酸多柔比星、盐酸表柔比星、盐酸柔红霉素采用霉素采用HPLC等度洗脱法，等度洗脱法，l丝裂霉素、放线菌素丝裂霉素、放线菌素D、盐酸平阳霉素则采用、盐酸平阳霉素则采用HPLC梯度洗脱法，梯度洗脱法，l分别规定了系统适用性试验分别规定了系统适用性试验,
196、确保有关物质有效确保有关物质有效分离和检出。分离和检出。ll1.主峰与破坏溶液降解产物的分离度（如盐酸主峰与破坏溶液降解产物的分离度（如盐酸平阳霉素）、平阳霉素）、l2.主峰与特定杂质的分离度（如丝裂霉素、盐主峰与特定杂质的分离度（如丝裂霉素、盐酸多柔比星、盐酸表柔比星）酸多柔比星、盐酸表柔比星）l3.梯度洗脱规定主峰保留时间范围、梯度洗脱规定主峰保留时间范围、l4.采用系统适用性对照品溶液色谱图与标准图采用系统适用性对照品溶液色谱图与标准图谱比较（如放线菌素谱比较（如放线菌素D）等方式）等方式， HPLC HPLC等度洗脱法等度洗脱法 HPLC HPLC梯度洗脱法梯度洗脱法盐盐酸多柔比星酸多
197、柔比星注射用注射用盐盐酸多柔比星酸多柔比星丝丝裂霉素裂霉素注射用注射用丝丝裂霉素裂霉素盐盐酸表柔比星酸表柔比星注射用注射用盐盐酸表柔比星酸表柔比星放放线线菌素菌素D D注射用注射用放放线线菌素菌素D D盐盐酸柔酸柔红红霉素霉素注射用注射用盐盐酸柔酸柔红红霉素霉素盐盐酸平阳霉素酸平阳霉素注射用注射用盐盐酸平阳霉素酸平阳霉素表表表表8.3 8.3 8.3 8.3 有关物质有关物质有关物质有关物质l8.2.4.2有关物质测定结果计算有关物质测定结果计算:l采用不加校正因子的主成分自身对照法和加采用不加校正因子的主成分自身对照法和加校正因子的主成分自身对照法。根据品种不同校正因子的主成分自身对照法。根
198、据品种不同选择合适的方法，或结合使用。选择合适的方法，或结合使用。l盐酸平阳霉素，由于其纯度较低，在应用自盐酸平阳霉素，由于其纯度较低，在应用自身对照法时，起草所天津所创造性地对自身对身对照法时，起草所天津所创造性地对自身对照溶液峰面积进行校正，克服了主成分纯度低照溶液峰面积进行校正，克服了主成分纯度低对结果的影响。对结果的影响。l例例8.1盐酸平阳霉素有关物质检查盐酸平阳霉素有关物质检查l有关物质有关物质取本品适量，加水溶解并稀释制成每取本品适量，加水溶解并稀释制成每1ml中中含含2.0mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取的溶液，作为供试品溶液；精密量取2ml，置，置100ml量瓶中，用水稀
199、释至刻度，摇匀，作为对照溶液。量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。照含量测定项下色谱条件，量取对照溶液照含量测定项下色谱条件，量取对照溶液20l注入液注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的约为满量程的20%，精密量取供试品溶液与对照溶液，精密量取供试品溶液与对照溶液各各20l，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品溶液色谱图中如有杂质峰，最大杂质峰面积不得大于溶液色谱图中如有杂质峰，最大杂质峰面积不得大于校正后对照溶液主峰面积校正后对照溶液主峰面积的的3.5倍（倍（7.0%）
200、，其它单个），其它单个杂质峰面积不得大于杂质峰面积不得大于校正后对照溶液主峰面积校正后对照溶液主峰面积的的2.5倍倍（5.0%），各杂质峰面积和不得大于），各杂质峰面积和不得大于校正后对照溶液校正后对照溶液主峰面积主峰面积的的7.5倍（倍（15.0%），供试品溶液色谱图中任），供试品溶液色谱图中任何小于对照品溶液主峰面积何小于对照品溶液主峰面积0.025倍的峰可忽略不计。倍的峰可忽略不计。（对照溶液主峰面积除以供试品的含量，即为校正后对照溶液主峰面积除以供试品的含量，即为校正后的对照溶液主峰面积）。的对照溶液主峰面积）。三批测定结果见表三批测定结果见表8.48.4表表8.4 8.4 三批样品测
201、定结果三批样品测定结果结果计算结果计算061101080105080302峰面积归一化法峰面积归一化法最大单一杂质最大单一杂质（%）5.05.86.6总杂质（总杂质（%）13.314.614.2不加校正因子自身对不加校正因子自身对照法照法最大单一杂质最大单一杂质（%）5.66.77.6总杂质（总杂质（%）14.916.716.2加校正因子自身对照加校正因子自身对照法法最大单一杂质最大单一杂质（%）4.95.76.5总杂质（总杂质（%）12.914.313.9l采用中国药典采用中国药典2005年版的液相色谱条件年版的液相色谱条件测定盐酸平阳霉素有关物质，按峰面积归一化测定盐酸平阳霉素有关物质，按
202、峰面积归一化法计算，三批样品有关物质量均小于法计算，三批样品有关物质量均小于8%，l原因在于原方法未能实现主峰前后两个较大原因在于原方法未能实现主峰前后两个较大的杂质与主峰的分离。的杂质与主峰的分离。l经考察，这两个杂质经过酸破坏和氧化破坏经考察，这两个杂质经过酸破坏和氧化破坏后分别有所增加。后分别有所增加。ll有研究表明博莱霉素类物质易在分析过程中产有研究表明博莱霉素类物质易在分析过程中产生异构化，生异构化，l因此，起草所分别收集了主峰及主峰前后两因此，起草所分别收集了主峰及主峰前后两个杂质峰，在相同的色谱条件下单独进样分析，个杂质峰，在相同的色谱条件下单独进样分析，l结果，主峰及两个杂质均
203、呈单一色谱峰，保结果，主峰及两个杂质均呈单一色谱峰，保留时间与有关物质检查色谱图中相应峰的保留留时间与有关物质检查色谱图中相应峰的保留时间相同。时间相同。l后对收集的主成分及两个杂质进行了质谱扫后对收集的主成分及两个杂质进行了质谱扫描，发现三者的质谱图有差异，描，发现三者的质谱图有差异，l初步可以判定本法色谱图中新增的两个杂质初步可以判定本法色谱图中新增的两个杂质不是异构化产生，不是异构化产生，l而是盐酸平阳霉素的酸降解物和氧化降解物，而是盐酸平阳霉素的酸降解物和氧化降解物，两个杂质的结构有待进一步确证。两个杂质的结构有待进一步确证。l系统适用性实验规定为：取本品两份，每份约系统适用性实验规定
204、为：取本品两份，每份约8mg，一份加，一份加1mol/L盐酸溶液盐酸溶液1.0ml，另一份加，另一份加30%过氧化氢溶液过氧化氢溶液1.0ml，摇匀，放置，摇匀，放置1小时后，小时后，混合，加水混合，加水2ml，摇匀，得每，摇匀，得每1ml中约含盐酸平中约含盐酸平阳霉素阳霉素2.0mg及其酸降解物（约含及其酸降解物（约含10%）与氧）与氧化降解物（约含化降解物（约含15%）的混合溶液，取）的混合溶液，取20l注注入液相色谱仪，记录色谱图，出峰顺序为酸降入液相色谱仪，记录色谱图，出峰顺序为酸降解物峰、平阳霉素峰、氧化降解物峰（相对保解物峰、平阳霉素峰、氧化降解物峰（相对保留时间分别约为留时间分别
205、约为0.94，1.0，1.1），平阳霉素峰），平阳霉素峰的保留时间约为的保留时间约为20分钟。酸降解物峰与平阳霉分钟。酸降解物峰与平阳霉素峰分离度应不小于素峰分离度应不小于1.0，平阳霉素峰与氧化降，平阳霉素峰与氧化降解物峰分离度应不小于解物峰分离度应不小于1.5。色谱图见图。色谱图见图8.1。图图8.1盐酸平阳霉素分离度实验盐酸平阳霉素分离度实验HPLC图谱图谱l采用新建立的色谱方法分析博莱霉素、博安霉采用新建立的色谱方法分析博莱霉素、博安霉素及盐酸平阳霉素的混合液，在该色谱条件下素及盐酸平阳霉素的混合液，在该色谱条件下三者均能得到较好分离，见图三者均能得到较好分离，见图8.2。图图8.2博
206、莱霉素类抗生素混合溶液博莱霉素类抗生素混合溶液HPLC图谱图谱l8.2.5特定成分特定成分l对丝裂霉素中肉桂酰胺、注射用盐酸多柔比对丝裂霉素中肉桂酰胺、注射用盐酸多柔比星及盐酸表柔比星中多柔比星酮特定杂质进行星及盐酸表柔比星中多柔比星酮特定杂质进行控制；增订了注射用盐酸表柔比星中羟苯甲酯控制；增订了注射用盐酸表柔比星中羟苯甲酯检查。检查。l8.2.6降压物质降压物质l所有品种均收载该项检查，所设定的降压物所有品种均收载该项检查，所设定的降压物质检查项严于临床使用剂量，符合注射剂安全质检查项严于临床使用剂量，符合注射剂安全性检查法应用指导原则的要求，具有一定的安性检查法应用指导原则的要求，具有一
207、定的安全性。全性。l8.2.7细菌内毒素细菌内毒素所有品种均收载该项检查所有品种均收载该项检查l8.2.8含量测定含量测定l除放线菌素除放线菌素D采用采用UV法外，其余均采用法外，其余均采用HPLC，色谱条件有同有关物质项下的，也可，色谱条件有同有关物质项下的，也可与有关物质不同（如丝裂霉素）。与有关物质不同（如丝裂霉素）。l该类注射用制剂规格较小，故控制含量均匀该类注射用制剂规格较小，故控制含量均匀度，含量测定分别测定度，含量测定分别测定10瓶含量，求平均值即瓶含量，求平均值即得。得。l9、多肽类与肽类抗生素、多肽类与肽类抗生素l2010年版药典共收载硫酸多粘菌素年版药典共收载硫酸多粘菌素B
208、、盐酸、盐酸去甲万古霉素、盐酸万古霉素、替考拉宁及其去甲万古霉素、盐酸万古霉素、替考拉宁及其注射用制剂共注射用制剂共8个品种，个品种，l盐酸万古霉素和替考拉宁及其制剂共盐酸万古霉素和替考拉宁及其制剂共4个品个品种为新增品种，种为新增品种，l盐酸去甲万古霉素则为我国特有。盐酸去甲万古霉素则为我国特有。项目项目修订修订增订增订删去删去鉴别鉴别2 2（HPLC HPLC 与与TLCTLC二选一）二选一）2 (HPLC)2 (HPLC)2 2（显色）（显色）溶液澄清度与颜色溶液澄清度与颜色2 2/ / /组分与有关物质组分与有关物质2 22 2/ /残留溶剂残留溶剂1 1/ / /苯丙氨酸苯丙氨酸1
209、1（原计算公式有误）（原计算公式有误）/ / /炽灼残渣炽灼残渣/ / /1 1热原热原2 2（细菌内毒素）（细菌内毒素）/ / /可见异物和不溶性微粒可见异物和不溶性微粒1 1/ / /重金属重金属/ /1 1/ /硫酸盐硫酸盐/ /1 1（EDTAEDTA滴定）滴定） / /含量含量1 1/ / / 9.1 9.1 9.1 9.1 增修订项目概况见表增修订项目概况见表增修订项目概况见表增修订项目概况见表9.19.19.19.1 表表表表9.1 20109.1 20109.1 20109.1 2010年版药典多肽类与肽类品种增修订项目年版药典多肽类与肽类品种增修订项目年版药典多肽类与肽类品种
210、增修订项目年版药典多肽类与肽类品种增修订项目l9.2本类抗生素质量标准要点本类抗生素质量标准要点l盐酸去甲万古霉素为我国特有品种，其质量盐酸去甲万古霉素为我国特有品种，其质量标准参照盐酸万古霉素并结合自身特点制订，标准参照盐酸万古霉素并结合自身特点制订，l其他品种国外药典均有收载，增修订后的质其他品种国外药典均有收载，增修订后的质量标准已与国际药典接轨，有的已超过国外药量标准已与国际药典接轨，有的已超过国外药典。典。l9.2.1鉴别鉴别l上述品种均收载了上述品种均收载了HPLC法，原标准收载法，原标准收载TLC法的（硫酸多黏菌素），则与其并列，可法的（硫酸多黏菌素），则与其并列，可任选一项；任
211、选一项；l盐酸万古霉素、替考拉宁同时收载盐酸万古霉素、替考拉宁同时收载IR法；法；l盐酸去甲万古霉素则同时采用盐酸去甲万古霉素则同时采用UV法，专属性法，专属性均较强。均较强。l9.2.2组分测定与有关物质组分测定与有关物质l9.2.2.1组分测定组分测定 l上述品种有的纯度较高，如盐酸万古霉素和上述品种有的纯度较高，如盐酸万古霉素和盐酸去甲万古霉素，盐酸去甲万古霉素，l有的则为多组分，如替考拉宁和硫酸多黏菌有的则为多组分，如替考拉宁和硫酸多黏菌素素B，但均采用，但均采用HPLC法控制组分含量，法控制组分含量，l除硫酸多粘菌素采用等度洗脱外，其他品种除硫酸多粘菌素采用等度洗脱外，其他品种则采用
212、梯度洗脱法，则采用梯度洗脱法，ll系统适用性试验规定了系统适用性试验规定了l降解产物与主峰的分离度、降解产物与主峰的分离度、l主峰保留时间范围、各组分相对保留时间等，主峰保留时间范围、各组分相对保留时间等，确保组分有效分离和检出。确保组分有效分离和检出。l典型色谱图见图典型色谱图见图9.1、9.2、9.3，l图图9.1样品万古霉素样品万古霉素B和有关物质检查色谱图和有关物质检查色谱图图图9.2中检所替考拉宁标准品组分测定的色谱图中检所替考拉宁标准品组分测定的色谱图 图图9.3硫酸多黏菌素硫酸多黏菌素B组分测定的典型色谱图组分测定的典型色谱图 （色谱柱：shim-pack VP-ODS色谱250
213、4.6mm；） 保留时间保留时间 组分组分 15.906min 15.906min 多粘菌素多粘菌素B2B2 17.932min 17.932min 多黏菌素多黏菌素B3B3 26.178min 26.178min 多粘菌素多粘菌素B1-B1-I I 31.996min 31.996min 多粘菌素多粘菌素B1B1l9.2.2.2有关物质有关物质l替考拉宁在组分测定中规定其他组分不得大替考拉宁在组分测定中规定其他组分不得大于于5%，未收载有关物质外，未收载有关物质外，l其他品种均收载该项检查，色谱条件同组分其他品种均收载该项检查，色谱条件同组分项下，但分列有关物质项目，并增加总杂控制。项下，但
214、分列有关物质项目，并增加总杂控制。l9.2.2.3特定成分特定成分l9.2.2.3.1替考拉宁中氯化钠替考拉宁中氯化钠l本品工艺含氯化钠，含量较低，直接滴定法本品工艺含氯化钠，含量较低，直接滴定法消耗硝酸银滴定液的体积较小，而且铬酸钾指消耗硝酸银滴定液的体积较小，而且铬酸钾指示剂法指示终点突跃时颜色变化比较迟缓。示剂法指示终点突跃时颜色变化比较迟缓。l为减小实验误差，采用自动电位滴定法，克为减小实验误差，采用自动电位滴定法，克服了终点颜色判断不易掌握的难题，服了终点颜色判断不易掌握的难题，ll并采取加量法，即精确预加一定量的氯化钠并采取加量法，即精确预加一定量的氯化钠（如（如0.9%氯化钠注射
215、液氯化钠注射液10.0ml）进行滴定，再）进行滴定，再以空白对照试验扣减本底测得样品中氯化钠的以空白对照试验扣减本底测得样品中氯化钠的实际含量。实际含量。l9.2.2.3.2硫酸多黏菌素硫酸多黏菌素B中苯丙氨酸中苯丙氨酸l取本品约取本品约0.375g，精密称定，置，精密称定，置100ml量瓶量瓶中，加中，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，盐酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀。照紫外摇匀。照紫外-可见分光光度法（附录可见分光光度法（附录A），），在在264nm(A264)、258nm(A258)和和252nm(A252)、280nm(A280)和和300nm(A300)的波长处分别测的波长处分别测定吸光度。定吸光度。l按下式计算硫酸多黏菌素按下式计算硫酸多黏菌素B中的苯丙氨酸的百中的苯丙氨酸的百分含量（分含量（%）：）：l(9.4787/W）(A2580.5A2520.5A2641.84A2800.8A300)l式中式中W为硫酸多黏菌素为硫酸多黏菌素B供试品的重量供试品的重量(g)。l按干燥品计算，含苯丙氨酸应为按干燥品计算，含苯丙氨酸应为9.012.0。l9.2.2.3含量测定含量测定l除盐酸去甲万古霉素采用除盐酸去甲万古霉素采用HPLC法外，其余法外，其余均采用微生物效价检定法管碟法。均采用微生物效价检定法管碟法。
