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1、朱仙庄矿中学朱仙庄矿中学 徐徐 宏宏知识回顾知识回顾一、原理？一、原理？二、诱导方法？二、诱导方法？三、用途？三、用途？动物细胞融合动物细胞融合的基本原理、的基本原理、诱导方法及用诱导方法及用途是什么？途是什么？不同不同DNA的两个细胞的两个细胞融融合合两个完整的两个完整的杂交细胞杂交细胞灭活的病毒灭活的病毒v细胞融合完成的标志细胞融合完成的标志: :细细胞核融合成一个核胞核融合成一个核生物种类生物种类细胞来源细胞来源成功年代成功年代酵母菌酵母菌鸡鸡原生质体原生质体血红细胞血红细胞1975年年人人胡萝卜胡萝卜腹水癌细胞腹水癌细胞原生质体原生质体1976年年人人小鼠小鼠纤维肉瘤细胞纤维肉瘤细胞畸
2、胎畸胎瘤细胞瘤细胞1978年年分析资料，总结细胞融合（杂交）的意义分析资料，总结细胞融合（杂交）的意义突破了有性杂交的局限，突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能。使远缘杂交成为可能。阅读课本阅读课本P52最后一段和最后一段和P53的的第一段，思考回答问题。第一段，思考回答问题。1.1.抗体是由何种细胞产生的？抗体是由何种细胞产生的？2.2.抗体是如何产生的？抗体是如何产生的？3.3.传统制备抗体的方法是什么？缺传统制备抗体的方法是什么？缺陷？陷？4.B4.B淋巴细胞有什么特点？淋巴细胞有什么特点？抗体的传统生产方法抗体的传统生产方法从从血清血清中分离抗体中分离抗体该法制备抗体的特点：该法制
3、备抗体的特点：产量少、纯度低、特异性差产量少、纯度低、特异性差如何解决这些如何解决这些问题？问题？1975年英国科学家米尔斯坦和柯勒极富创造性的实验方案解决了这个问题单克隆抗体单克隆抗体阅读课本阅读课本P5354单克隆抗体制备的单克隆抗体制备的文字及示意图，再思考回答问题。文字及示意图，再思考回答问题。一个一个B B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞能无限增殖骨髓瘤细胞能无限增殖杂交瘤细胞杂交瘤细胞动物细胞培养动物细胞培养设计方案：设计方案：动物细胞融合动物细胞融合单克隆单克隆抗体抗体 既能产生特异性抗体，既能产生特异性抗体， 又能大量繁殖的细胞又能大量繁殖的
4、细胞单克隆抗体单克隆抗体单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备用抗原免疫小鼠用抗原免疫小鼠骨髓瘤细胞的培养骨髓瘤细胞的培养B B淋巴淋巴细胞细胞骨髓瘤骨髓瘤细胞细胞融合融合多种杂交细胞多种杂交细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞及同型融合及同型融合细胞死亡细胞死亡B B淋巴细胞淋巴细胞及同型融合及同型融合细胞死亡细胞死亡杂交瘤细胞杂交瘤细胞置于选择培置于选择培养基上培养养基上培养DNA的合成有的合成有D或或S两条途径，而氨基嘌呤能阻断两条途径，而氨基嘌呤能阻断D途径。途径。B淋巴细胞有淋巴细胞有D和和S两条途径，但一般不增两条途径，但一般不增殖；骨髓瘤细胞有殖；骨髓瘤细胞有D途径并可以不断增殖。若在促途径并可以
5、不断增殖。若在促融后的培养基中加入氨基嘌呤，则能不断增殖的是融后的培养基中加入氨基嘌呤，则能不断增殖的是哪种细胞？为什么？哪种细胞？为什么？多多孔孔细细胞胞培培养养板板阳性克隆的筛选和阳性克隆的筛选和克隆化培养克隆化培养用培养液稀释用培养液稀释能产生专一抗体的杂交瘤细胞能产生专一抗体的杂交瘤细胞注射到小鼠体内注射到小鼠体内体外培养体外培养单克隆抗体单克隆抗体读下面一段文字资料，结合单克隆抗体的制备读下面一段文字资料，结合单克隆抗体的制备过程归纳出过程归纳出单克隆抗体的概念单克隆抗体的概念 人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的的B B细胞可以产生
6、多达百万种以上的特异性抗体，但细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个是每个B B细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强、细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强、灵敏度高的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须灵敏度高的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个细胞进行无性繁殖，即克隆。用单个细胞进行无性繁殖，即克隆。单克隆抗体的概念单克隆抗体的概念单克隆单克隆抗体抗体: :单个杂交瘤细胞克隆产生的单个杂交瘤细胞克隆产生的化化学性质单一、特异性强、灵敏度高学性质单一、特异性强、灵敏度高的抗体的抗体诊断试剂诊断试剂最广泛用途最广泛用途准确、高效、简易、快速准确、高效、简易、快速单克隆抗体的优点和应
7、用单克隆抗体的优点和应用最主要优点：特异性强、灵敏度高、并可能大量制备最主要优点：特异性强、灵敏度高、并可能大量制备治病和运载药物 (“生物导弹生物导弹” 单抗导向，药物为弹头单抗导向，药物为弹头)本节小结本节小结两个过程两个过程动物细胞融合过程动物细胞融合过程单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程三个三个“一一”一种诱导细胞融合的新方法一种诱导细胞融合的新方法 一种新细胞一种新细胞一个优点一个优点灭活的病毒灭活的病毒杂交瘤细胞杂交瘤细胞单克隆抗体特异单克隆抗体特异性强、灵敏度高并可性强、灵敏度高并可能大量制备能大量制备朱仙庄矿中学朱仙庄矿中学 徐徐 宏宏感谢同学们的配合！感谢同学们的配合！祝同学们学习进步！祝同学们学习进步！
