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1、专题专题2 2微生物的培养与应用微生物的培养与应用课题课题1 1微生物的实验室培养微生物的实验室培养. .微生物的类群微生物的类群微微生生物物原核类原核类: :真核类真核类非细胞类：非细胞类：细菌、支原体、衣原体、放线菌、细菌、支原体、衣原体、放线菌、蓝藻蓝藻个体微小、结构简单个体微小、结构简单酵母菌、霉菌、食用菌酵母菌、霉菌、食用菌真菌：真菌：原生生物：原生生物： 显微藻类、原生生物显微藻类、原生生物（如：草履虫、变形（如：草履虫、变形虫等）虫等）病毒、类病毒、朊病毒病毒、类病毒、朊病毒微生物的共同特点：微生物的共同特点：一一. .微生物基础知识微生物基础知识1.1.细菌的形态细菌的形态拟核
2、，大型环状拟核，大型环状DNA 质粒质粒(小型环状小型环状DNA，含抗，含抗生素，抗药性，固氮基因生素，抗药性，固氮基因)其成分为其成分为肽聚糖肽聚糖2.细菌的结构细菌的结构特殊结构（有时特殊结构（有时包括芽孢）包括芽孢） 有些细菌在有些细菌在一定的条件下，细一定的条件下，细胞里面形成一个椭胞里面形成一个椭圆形的圆形的休眠体休眠体，叫，叫做做芽孢芽孢。芽孢的壁。芽孢的壁很厚，对干旱、低很厚，对干旱、低温、高温等温、高温等恶劣的恶劣的环境环境有很强的有很强的抵抗抵抗力力。（。（抗逆性极强）抗逆性极强）注：不是繁殖体注：不是繁殖体例如，有的细菌的芽孢，煮沸例如，有的细菌的芽孢，煮沸3 3小时以后才
3、死亡。芽孢小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌. .细菌主要是以二分裂的方式进细菌主要是以二分裂的方式进行增殖（如右图）行增殖（如右图）3.3.细菌的繁殖细菌的繁殖4.4.细菌的菌落细菌的菌落.定义：定义：单个或者少数细菌在单个或者少数细菌在固体培养基固体培养基上大量上大量繁殖时，会形成一个繁殖时，会形成一个肉眼可见的、具有肉眼可见的、具有一定形态结构的子细胞群体一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。，叫做菌落。.特征：特征： 大小、
4、形状、光泽度、颜色、硬度、大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等。透明度等。.功能：功能： 每种细菌在一定条件下所形成的菌落，每种细菌在一定条件下所形成的菌落，可以可以作为菌种鉴定的重要依据作为菌种鉴定的重要依据。几种菌落及其形态几种菌落及其形态5.5.病毒的结构病毒的结构 : :由核酸和蛋白质构成。由核酸和蛋白质构成。病毒的结构病毒的结构吸附吸附吸附吸附注入注入注入注入合成合成合成合成释放释放释放释放组装组装组装组装6.6.病毒的繁殖病毒的繁殖病毒的增殖一般可分五个阶段，即：病毒的增殖一般可分五个阶段，即：吸附吸附注入核酸注入核酸合成核酸和蛋白质合成核酸和蛋白质组装组装释放释放6.6.病毒
5、的营养方式病毒的营养方式：寄生：寄生 培养微生物需要解决的两个问题是什么？培养微生物需要解决的两个问题是什么？1 1、为微生物提供合适的营养条件和环境、为微生物提供合适的营养条件和环境 条件条件2 2、防止杂菌的入侵、防止杂菌的入侵培养基、培养条件培养基、培养条件无菌技术无菌技术( (获得纯净培养物关键）获得纯净培养物关键）思考思考:微生物需要的五大类营养要素物质是：微生物需要的五大类营养要素物质是：. .微生物需要的营养物质及功能微生物需要的营养物质及功能1.1.碳源碳源 2.2.氮源氮源 3.3.生长因子生长因子 4.4.无机盐无机盐 5.5.水水1.碳源：碳源： 为微生物提供碳元素。为微
6、生物提供碳元素。无机碳化合物无机碳化合物CO2、NaHCO3等等有机碳有机碳化合物化合物糖类糖类（最常用的碳源，尤其是葡萄糖最常用的碳源，尤其是葡萄糖）烃类、醇类、脂肪酸烃类、醇类、脂肪酸蛋白质、脂质、核酸等（有机大分子）蛋白质、脂质、核酸等（有机大分子）牛肉膏、蛋白胨、花生粉饼、石油（天然）牛肉膏、蛋白胨、花生粉饼、石油（天然）2.氮源氮源:N2NH3等等有机物中的氮（有机物中的氮（还还有尿素）有尿素）无机氮无机氮牛肉膏、蛋白胨牛肉膏、蛋白胨为微生物提供氮元素。为微生物提供氮元素。圆褐固氮菌、硝化细菌和大肠杆菌圆褐固氮菌、硝化细菌和大肠杆菌氨盐、硝酸盐等是常用的氮源氨盐、硝酸盐等是常用的氮源
7、氮源主要用于合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物氮源主要用于合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物自养型微生物与异养型微生物的培自养型微生物与异养型微生物的培养基的主要差别是养基的主要差别是( )( )A A碳源碳源 B B氮源氮源 C C无机盐无机盐 D D特殊营养物质特殊营养物质A3.生长因子生长因子.常见的生长因子：常见的生长因子：常见的生长因子：常见的生长因子：.概念：概念：概念：概念：.作用：作用：作用：作用：微生物生长不可缺少的微量有机物。微生物生长不可缺少的微量有机物。微生物生长不可缺少的微量有机物。微生物生长不可缺少的微量有机物。酶和核酸的组成成分。酶和核酸的组成成分。酶和核酸的组成
8、成分。酶和核酸的组成成分。 维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。 一些天然物质如酵母膏、蛋白胨、动植物组织提一些天然物质如酵母膏、蛋白胨、动植物组织提一些天然物质如酵母膏、蛋白胨、动植物组织提一些天然物质如酵母膏、蛋白胨、动植物组织提取液等可为微生物提供生长因子取液等可为微生物提供生长因子取液等可为微生物提供生长因子取液等可为微生物提供生长因子（4 4 4 4）来源：）来源：）来源：）来源：注意：注意：n最常用的碳源是糖类，尤其是葡萄糖最常用的碳源是糖类，尤其是葡萄糖n最常用的氮源是铵盐、硝酸盐最常用的氮源是铵
9、盐、硝酸盐n对异养生物而言，含对异养生物而言，含C、H、O、N的化合物的化合物既是碳源，有时氮源，如蛋白质既是碳源，有时氮源，如蛋白质n之所以补充生长因子，是由于缺少合成这之所以补充生长因子，是由于缺少合成这些物质的酶或合成能力有限些物质的酶或合成能力有限思考：思考：C（三）培养基（三）培养基 培养基（培养液）是培养基（培养液）是由人工方法配由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养混合营养液。液。1.1.培养基的类型及用途培养基的类型及用途种类种类是否含凝是否含凝固剂固剂用途用途固体培养基固体培养基半固体培养半固体培养基基液体培养基液体培养基按物
10、理性质分按物理性质分是是是是否否分离、计数等分离、计数等观察微生物的运动、观察微生物的运动、鉴定菌种等鉴定菌种等工业生产工业生产固体培养基：菌落固体培养基：菌落半固体培养基：半固体培养基：无动力无动力 有动力有动力( (弥散弥散) )液体培养基：液体培养基：表面生长表面生长均匀混浊生长均匀混浊生长沉淀生长沉淀生长按化学成分分按化学成分分种类种类化学成化学成分是否分是否明确明确用途用途天然培养基天然培养基合成培养基合成培养基否否是是主要用于主要用于工业生产工业生产分类、鉴定分类、鉴定按培养基的功能（用途）分按培养基的功能（用途）分种类种类制备方法制备方法原理原理用途用途举例举例选择选择培养培养基
11、基鉴别鉴别培养培养基基加入某种加入某种化学物质化学物质加入某种加入某种试剂或化试剂或化学药品学药品依据某些微依据某些微生物对某些生物对某些物质的抗性物质的抗性依据微生物的依据微生物的代谢产物与特代谢产物与特定试剂或化学定试剂或化学药品反应，产药品反应，产生明显的特征生明显的特征变化变化从众多微生从众多微生物中物中分离所分离所需的微生物需的微生物鉴别鉴别不同种不同种类的微生物类的微生物加入青霉素加入青霉素分离得到酵分离得到酵母菌和霉菌母菌和霉菌伊红和美蓝伊红和美蓝培养基可鉴培养基可鉴别大肠杆菌别大肠杆菌选择培养基选择培养基n加入青霉素的培养基n加入高浓度食盐的培养基 n不加氮源的无氮培养基n不加
12、含碳有机物的无碳培养基分离酵母菌、霉菌等真菌分离酵母菌、霉菌等真菌分离金黄色葡萄球菌分离金黄色葡萄球菌分离固氮菌分离固氮菌分离自养型微生物分离自养型微生物（三）培养基（三）培养基 （1 1）按物理状态分：）按物理状态分：（2 2）按功能分：）按功能分：（3 3）按成分分：）按成分分：总结：总结：1.1.培养基的类型培养基的类型固体培养基固体培养基液体培养基液体培养基半固体培养基半固体培养基选择培养基选择培养基鉴别培养基鉴别培养基天然培养基天然培养基合成培养基合成培养基2.2.不同的微生物往往需要采用不不同的微生物往往需要采用不同的培养基同的培养基配方配方不管哪种培养基，一般都含有不管哪种培养基
13、，一般都含有水水、无机盐无机盐、碳源碳源和和氮源氮源等等营养物质，营养物质，另外还需要满足微生物生长对另外还需要满足微生物生长对pHpH、特殊营养物质特殊营养物质以及以及氧气氧气的要求的要求3.3.培养基的成分培养基的成分血清中含有：血清中含有：多种蛋白质（白蛋白、球蛋白、铁蛋白等）多种蛋白质（白蛋白、球蛋白、铁蛋白等）多种金属离子；多种金属离子； 激素；激素；促贴附物质，如纤粘蛋白、冷析球蛋白、胶促贴附物质，如纤粘蛋白、冷析球蛋白、胶原等。原等。各种生长因子各种生长因子转移蛋白转移蛋白不明成分不明成分人工合成培养基只能维持细胞生存，要想使细人工合成培养基只能维持细胞生存，要想使细胞生长和繁殖
14、，还需补充一定量的天然培养基胞生长和繁殖，还需补充一定量的天然培养基（如血清如血清）。）。（四）无菌技术（四）无菌技术1.1.无菌技术的概念无菌技术的概念 无菌操作泛指在培养微生物的操无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有作中，所有防止杂菌污染的方法防止杂菌污染的方法。成功地培养微生物的关键。成功地培养微生物的关键。 2.2.消毒与灭菌的概念及两者的区别消毒与灭菌的概念及两者的区别 3.3.常用的消毒与灭菌的方法常用的消毒与灭菌的方法比较比较项目项目理化因素的理化因素的作用强度作用强度消灭微生物的消灭微生物的程度程度芽孢和孢子芽孢和孢子能否被消能否被消灭灭消毒消毒较为温和较为温和部分生活状态部
15、分生活状态的微生物的微生物不能不能灭菌灭菌强烈强烈全部微生物全部微生物能能煮沸消毒法：煮沸消毒法：100100煮沸煮沸5-6min5-6min。巴氏消毒法：巴氏消毒法：70-7570-75下煮下煮30min30min或或 8080下煮下煮15min15min。化学药剂消毒法：用化学药剂消毒法：用75%75%酒精、新洁尔酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒；氯气消毒水源。灭等进行皮肤消毒；氯气消毒水源。紫外线消毒。紫外线消毒。消毒的方法：消毒的方法：3.3.常用的消毒与灭菌的方法常用的消毒与灭菌的方法（1）日常生活经常用到的是）日常生活经常用到的是 煮沸煮沸 消毒法消毒法 ；（2）对一些不耐高温的液体，
16、则使用）对一些不耐高温的液体，则使用 巴巴氏氏 消毒法（例如牛奶）消毒法（例如牛奶） ；（3）对接种室、接种箱或超净工作台首）对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒先喷洒 石炭酸或煤酚皂石炭酸或煤酚皂 等等溶液溶液以增强消毒以增强消毒效果，然后使用效果，然后使用 紫外线紫外线 进行进行物理物理消毒。消毒。（4）实验操作者的双手使用）实验操作者的双手使用 酒精酒精 进行消进行消毒；毒；（5）饮水水源用）饮水水源用 氯气氯气 进行消毒。进行消毒。消毒的方法消毒的方法1 1、灼烧灭菌灼烧灭菌灭菌的方法：灭菌的方法：接种环、接种针、试管口接种环、接种针、试管口等的灭菌等的灭菌2 2、干热灭菌干热灭菌：1
17、60-170 160-170 下加热下加热1-1-2h2h。3 3、高压蒸气灭菌高压蒸气灭菌：100kPa100kPa、121 121 下维下维持持15-30min.15-30min. 如如玻璃器皿、金玻璃器皿、金属用具属用具等的灭菌等的灭菌如如培养基、无菌水培养基、无菌水等的灭菌等的灭菌高压蒸气灭菌的原理是（高压蒸气灭菌的原理是（ ）A A高压使细菌高压使细菌DNADNA变性变性 B B高压使细菌蛋白质凝固变性高压使细菌蛋白质凝固变性 C C高温烫死细菌高温烫死细菌 D D高温使细菌高温使细菌DNADNA变性变性B B灭菌的方法：灭菌的方法： 1、灼烧灭菌、灼烧灭菌2、干热灭菌、干热灭菌3、
18、高压蒸气灭菌、高压蒸气灭菌4、紫外线灭菌、紫外线灭菌如表面灭菌和空气灭菌等，所如表面灭菌和空气灭菌等，所 用器械是用器械是 紫外灯紫外灯 。关于灭菌和消毒的不正确的理解是关于灭菌和消毒的不正确的理解是A A消毒和灭菌实质上是相同的消毒和灭菌实质上是相同的 B B灭菌是指杀死环境中的一切微生物灭菌是指杀死环境中的一切微生物 的细胞、芽孢和孢子的细胞、芽孢和孢子C C接种环用烧灼的方法灭菌接种环用烧灼的方法灭菌 D D常用灭菌方法有加热法、过滤法、常用灭菌方法有加热法、过滤法、红外线法、化学药品法红外线法、化学药品法A1.1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其
19、他外来微生物污染外，还有什么目的？被其他外来微生物污染外，还有什么目的？2.2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。灭菌。如果需要，请选择合适的方法。（1 1） 培养细菌用的培养基与培养皿培养细菌用的培养基与培养皿（2 2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管玻棒、试管、烧瓶和吸管（3 3） 实验操作者的双手实验操作者的双手答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。答：（答：（1）、（）、（2）需要灭菌；（）需要灭菌；（3）需要消毒。）需要消毒。二、微生物实验室培养的基本操作程序二、
20、微生物实验室培养的基本操作程序1 1、器具的灭菌、器具的灭菌2 2、培养基的配制、培养基的配制3 3、培养基的灭菌、培养基的灭菌4 4、倒平板、倒平板5 5、微生物接种、微生物接种6 6、恒温箱中培养、恒温箱中培养7 7、菌种的保存、菌种的保存涂布器涂布器接种环接种环接种针接种针a.制备牛肉膏蛋白胨培养基（制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌用于培养细菌）配方：配方：1 1计算计算、称量称量2 2溶化溶化3 3调调pHpH：pH7pH76 64 4过滤：这一步可以省去。过滤：这一步可以省去。5 5分装：分装过程中注意不要使培养分装：分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而基沾
21、在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分装三角烧瓶的量以不超过引起污染。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。三角烧瓶容积的一半为宜。6 6加塞加塞7 7包扎包扎操作步骤操作步骤 8 8灭菌灭菌: : 将将5050mlml培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为锅，在压力为100100kPakPa、温度为温度为121121，灭菌，灭菌15153030minmin。将培养基用旧报纸包裹，放入干热灭菌将培养基用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在箱内，在160160170 1
22、70 下灭菌下灭菌2 2h h。 9 9倒平板倒平板: : 待培养基冷却到待培养基冷却到50 50 左右时，在酒精灯左右时，在酒精灯附近倒平板。（倒平板操作见课本）附近倒平板。（倒平板操作见课本）2 2d d后观察平后观察平板，无杂菌污染才可用来接种板，无杂菌污染才可用来接种. . 1010无菌检查无菌检查： 将灭菌的培养基放入将灭菌的培养基放入3737的温室中培的温室中培养养24482448小时，以检查灭菌是否彻底。小时，以检查灭菌是否彻底。倒倒平平板板操操作作1.1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？他外来微生物污
23、染外，还有什么目的？2.2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。菌。如果需要，请选择合适的方法。培养细菌用的培养基与培养皿培养细菌用的培养基与培养皿玻棒、试管、烧瓶和吸管玻棒、试管、烧瓶和吸管实验操作者的双手实验操作者的双手答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。物感染。答：（答：（1 1）、（）、（2 2）需要灭菌；（）需要灭菌；（3 3）需要消毒。）需要消毒。答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就
24、可以进锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。行倒平板了。2.2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。养基。问题讨论问题讨论1.1.培养基灭菌后，需要冷却到培养基灭菌后，需要冷却到50 50 左右时，左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？的温度？3.3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿
25、底之间的部位，这个平板还能用来在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？培养微生物吗？为什么？答：答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以以防止皿盖上的水珠落入培养基防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。，造成污染。答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物
26、。微生物。b.b.纯化大肠杆菌纯化大肠杆菌接种方法有：接种方法有：平板划线法平板划线法和和稀释涂布平板法稀释涂布平板法微生物的接种技术：微生物的接种技术：接种方法有：接种方法有：平板划线法和稀释涂布平板法平板划线法和稀释涂布平板法 平板划线法平板划线法: :通过接种环在琼脂固体通过接种环在琼脂固体培养基表面连续画线的操作培养基表面连续画线的操作, ,将聚集的将聚集的菌钟逐步稀释分散到培养基的表面菌钟逐步稀释分散到培养基的表面. . 在数次画线后在数次画线后, ,可以分离到由一个细可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体, ,这就是菌落这就是菌落. .平
27、板划线的操作平板划线的操作一旦划破，会造成划线不均匀，难一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；以达到分离单菌落的目的；二是存留在划破处的单个细胞无法二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。处生长，会形成一个条状的菌落。1.接种环接种环只蘸一次菌液只蘸一次菌液,但要在培养基不同位置但要在培养基不同位置连续划线多次连续划线多次.2.划线划线首尾不能相接首尾不能相接3.划线后划线后,培养皿培养皿倒置培养倒置培养划线分离法注意事项划线分离法注意事项:其他画线分离图：其他画线分离图：答：操作的第一步灼烧接种环
28、是为了避免接种答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免种环，能及时杀死接种环上残
29、留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。细菌污染环境和感染操作者。问题讨论问题讨论1.1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？灼烧接种环吗？为什么？2.2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。答：以免接种环温度太高，杀死菌种。3.3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？总是从上一次划线的末端
30、开始划线？答：答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。稀释涂布平板稀释涂布平板的操作方法的操作方法答：答：应从操作的各个细节保证应从操作的各个细节保证“无菌无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。精灯火
31、焰周围等等。问题讨论问题讨论涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第想一想，第2 2步应如何进行无菌操作？步应如何进行无菌操作？微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养伊红伊红美蓝培养美蓝培养基基是鉴别培养基，可是鉴别培养基，可以用来检测自来水中以用来检测自来水中的大肠杆菌是否超标，的大肠杆菌是否超标，因为的因为的代谢产物与伊代谢产物与伊红红美蓝结合美蓝结
32、合，使菌，使菌落呈落呈黑色并带有金属黑色并带有金属光泽光泽，使大肠杆菌的，使大肠杆菌的菌落显示出来，并没菌落显示出来，并没有促进大肠杆菌的生有促进大肠杆菌的生长和抑制其他微生物长和抑制其他微生物的生长。的生长。例如：例如：鉴别大肠杆菌培养基鉴别大肠杆菌培养基大肠杆菌呈黑色中心大肠杆菌呈黑色中心 , ,有或无金属光泽有或无金属光泽菌种的保存菌种的保存 1 1、临时保藏临时保藏：接种到固体斜面培接种到固体斜面培养基，菌落长成后养基，菌落长成后置于置于44冰箱冰箱保存。保存。 2 2、长期保存长期保存：甘油冷冻管藏法甘油冷冻管藏法结果分析与评价结果分析与评价 . . . .培养基的制作是否合格培养基
33、的制作是否合格培养基的制作是否合格培养基的制作是否合格如果未接种的培养基在恒温箱中保温如果未接种的培养基在恒温箱中保温如果未接种的培养基在恒温箱中保温如果未接种的培养基在恒温箱中保温1 1 1 12d2d2d2d后无菌落生长后无菌落生长后无菌落生长后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。. . . .接种操作是否符合无菌要求接种操作是否符合无菌要求接种操作是否符合无菌要求接种操作是否符合无菌要求如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一
34、致，如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。中，无菌操作
35、还未达到要求，需要分析原因，再次练习。中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。. . . .是否进行了及时细致的观察与记录是否进行了及时细致的观察与记录是否进行了及时细致的观察与记录是否进行了及时细致的观察与记录培养培养培养培养12h12h12h12h与与与与24h24h24h24h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一及时观察记录的同
36、学会发现这一点，并能观察到其他一及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。些细微的变化。些细微的变化。些细微的变化。本课题知识小结本课题知识小结: :【典例解析典例解析】例例例例: : : :关于微生物营养物质的叙述中，正确的是关于微生物营养物质的叙述中，正确的是关于微生物营养物质的叙述中，正确的是关于微生物营养物质的叙述中，正确的是( )( )( )( ) A. A. A. A.是碳源的物质不可能同时是氮源是碳源的物质不可能同时是氮源是碳源的物质不可能同时是氮源是碳源的物质不可能同时是氮源 B. B. B. B.凡碳源都提供能量凡碳源都提供能量凡碳源都提供能量凡碳源都提供
37、能量 C. C. C. C.除水以外的无机物只提供无机盐除水以外的无机物只提供无机盐除水以外的无机物只提供无机盐除水以外的无机物只提供无机盐 D. D. D. D.无机氮源也能提供能量无机氮源也能提供能量无机氮源也能提供能量无机氮源也能提供能量解析：解析：解析：解析：不同的微生物，所需营养物质有较大差别，要针对微生不同的微生物，所需营养物质有较大差别，要针对微生不同的微生物，所需营养物质有较大差别，要针对微生不同的微生物，所需营养物质有较大差别，要针对微生物的具体情况分析。对于物的具体情况分析。对于物的具体情况分析。对于物的具体情况分析。对于A A A A、B B B B选项，它的表达是不完整
38、的。有选项，它的表达是不完整的。有选项，它的表达是不完整的。有选项，它的表达是不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同时是氮源，如的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同时是氮源，如的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同时是氮源，如的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同时是氮源，如NHNHNHNH4 4 4 4HCOHCOHCOHCO3 3 3 3；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是氮；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是氮；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是氮；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是氮源，也是能源，如蛋白胨。对于源，也
39、是能源，如蛋白胨。对于源，也是能源，如蛋白胨。对于源，也是能源，如蛋白胨。对于C C C C选项，除水以外的无机物种选项，除水以外的无机物种选项，除水以外的无机物种选项，除水以外的无机物种类繁多，功能也多样。如二氧化碳，可作为自养型微生物的碳类繁多，功能也多样。如二氧化碳，可作为自养型微生物的碳类繁多，功能也多样。如二氧化碳，可作为自养型微生物的碳类繁多，功能也多样。如二氧化碳，可作为自养型微生物的碳源；源；源；源；NaHCONaHCONaHCONaHCO3 3 3 3，可作为自养型微生物的碳源和无机盐；而，可作为自养型微生物的碳源和无机盐；而，可作为自养型微生物的碳源和无机盐；而，可作为自养
40、型微生物的碳源和无机盐；而NaClNaClNaClNaCl则则则则只能提供无机盐。对于只能提供无机盐。对于只能提供无机盐。对于只能提供无机盐。对于D D D D选项，无机氮源提供能量的情况还是选项，无机氮源提供能量的情况还是选项，无机氮源提供能量的情况还是选项，无机氮源提供能量的情况还是存在的，如存在的，如存在的，如存在的，如NHNHNHNH3 3 3 3可为硝化细菌提供能量和氮源。可为硝化细菌提供能量和氮源。可为硝化细菌提供能量和氮源。可为硝化细菌提供能量和氮源。D D例例2 2：下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是：下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是( )( ) A. A.防止杂菌污染防
41、止杂菌污染 B. B.消灭杂菌消灭杂菌 C. C.培养基和发酵设备都必须灭菌培养基和发酵设备都必须灭菌 D. D.灭菌必须在接种前灭菌必须在接种前解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。A A A A说的是灭菌说的是灭菌说的是灭菌说的是灭菌的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种，整个发酵的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种，整个发酵的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种，整个发酵的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种，整个发酵过程不能混入其他微生物（
42、杂菌），所以是正确的；过程不能混入其他微生物（杂菌），所以是正确的；过程不能混入其他微生物（杂菌），所以是正确的；过程不能混入其他微生物（杂菌），所以是正确的；B B B B是错误是错误是错误是错误的，因为灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不可能的，因为灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不可能的，因为灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不可能的，因为灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不可能只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。C C C C是正确的，因为与发酵是正确的，因为与发酵是正确的，因
43、为与发酵是正确的，因为与发酵有关的所有设备和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭菌有关的所有设备和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭菌有关的所有设备和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭菌有关的所有设备和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭菌后专门接种的，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就会后专门接种的，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就会后专门接种的，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就会后专门接种的，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就会把所接菌种也杀死。把所接菌种也杀死。把所接菌种也杀死。把所接菌种也杀死。B B编号编号成分成分含量含量粉状硫粉状硫10g10g（NHNH4 4）2 2SOS
44、O4 40.4g0.4gK K2 2HPOHPO4 44.0g4.0gMgSOMgSO4 49.25g9.25gFeSOFeSO4 40.5g0.5gCaClCaCl2 20.5g0.5gH H2 2O O100ml100ml例例3 3右表是某微生物培右表是某微生物培养基成分，请据此回答：养基成分，请据此回答：（1 1）右表培养基可培养）右表培养基可培养的微生物类型是的微生物类型是 。（2 2）若不慎将过量）若不慎将过量NaClNaCl加入培养基中。加入培养基中。如不想浪费此培养基，如不想浪费此培养基，可再加入可再加入 . . （提示（提示：金黄色葡萄球金黄色葡萄球菌具耐盐性）菌具耐盐性）自养
45、型微生物自养型微生物 含碳有机物含碳有机物 （3 3）若除去成分）若除去成分，加入（加入（CHCH2 2O O），该培），该培养基可用于培养养基可用于培养 。（4 4）表中营养成分共）表中营养成分共有有 类。类。（5 5）不论何种培养基，）不论何种培养基，在各种成分都溶化后在各种成分都溶化后分装前，要进行的是分装前，要进行的是 。固氮微生物固氮微生物 3 调整调整pHpH 编号编号成分成分含量含量粉状硫粉状硫10g10g（NHNH4 4）2 2SOSO4 40.4g0.4gK K2 2HPOHPO4 44.0g4.0gMgSOMgSO4 49.25g9.25gFeSOFeSO4 40.5g0.
46、5gCaClCaCl2 20.5g0.5gH H2 2O O100ml100ml（6 6）右表中各成分）右表中各成分重量确定的原则是重量确定的原则是 。（7 7）若右表培养基）若右表培养基用于菌种鉴定，应用于菌种鉴定，应该增加的成分该增加的成分 。依微生物的生长依微生物的生长需要确定需要确定 琼脂（或凝固剂）琼脂（或凝固剂） 编号编号成分成分含量含量粉状硫粉状硫10g10g（NHNH4 4）2 2SOSO4 40.4g0.4gK K2 2HPOHPO4 44.0g4.0gMgSOMgSO4 49.25g9.25gFeSOFeSO4 40.5g0.5gCaClCaCl2 20.5g0.5gH H2 2O O100ml100ml部分资料从网络收集整理而来，供大家参考，感谢您的关注！
