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1、细菌标本的收集、转运和处理细菌标本的收集、转运和处理细菌标本的收集、转运和处理细菌标本的收集、转运和处理 第四军医大学西京医院检验科第四军医大学西京医院检验科 概述概述目的目的 按照正确的说明采集和稳妥地运转标本以保证结果的按照正确的说明采集和稳妥地运转标本以保证结果的正确。正确。 质量差的标本：误诊、错误的抗生素治疗质量差的标本：误诊、错误的抗生素治疗实验室责任实验室责任1.提供标本采集和运转手册提供标本采集和运转手册(正确的说明正确的说明)2.与临床医生交流：正确地选择微生物试验，解释结果与临床医生交流：正确地选择微生物试验，解释结果3.检验医师：查房、会诊、选择试验、解释结果检验医师：查
2、房、会诊、选择试验、解释结果 标本采集标本采集 细菌学培养的标本应在疾病发作之后，抗生素开始细菌学培养的标本应在疾病发作之后，抗生素开始治疗之前尽可能快地进行收集。需要采第二份标本是因治疗之前尽可能快地进行收集。需要采第二份标本是因为第一份标本质量差或运转条件不适当，但对诊断一种为第一份标本质量差或运转条件不适当，但对诊断一种急性传染病来讲，其它情况很少要求第二份标本。例外急性传染病来讲，其它情况很少要求第二份标本。例外的情况包括多次收集血标本培养和诊断苛养菌或最初没的情况包括多次收集血标本培养和诊断苛养菌或最初没有怀疑的不常见的病原菌。有怀疑的不常见的病原菌。标本的选择和收集的一般原则标本的
3、选择和收集的一般原则 1选择合适的解剖部位收集标本。选择合适的解剖部位收集标本。 2避免固有菌群污染。正常菌群的细菌生长和报告会使避免固有菌群污染。正常菌群的细菌生长和报告会使 医生和保健机构错误地认为它们引起感染的发生。另医生和保健机构错误地认为它们引起感染的发生。另 外，正常菌群的过度生长会掩盖真正的病原。外，正常菌群的过度生长会掩盖真正的病原。 3抽吸及抽吸后用无菌盐水冲洗和组织活检是怀疑厌氧抽吸及抽吸后用无菌盐水冲洗和组织活检是怀疑厌氧 菌感染时正确的标本采集方法菌感染时正确的标本采集方法(表表2)。用拭子采集标本。用拭子采集标本 最少考虑，因为拭子取样标本量相对较少且容易被邻最少考虑
4、，因为拭子取样标本量相对较少且容易被邻 近的正常菌群污染。培养厌氧菌的标本应储存于室近的正常菌群污染。培养厌氧菌的标本应储存于室 温，不能放冰箱，因为氧较容易扩散到冷的标本中去。温，不能放冰箱，因为氧较容易扩散到冷的标本中去。 一、标本的选择和收集一、标本的选择和收集4收集足够量的标本，使所要求的所有试验都能满意收集足够量的标本，使所要求的所有试验都能满意 地完成。标本量不足可产生假阴性结果。地完成。标本量不足可产生假阴性结果。5每份标本都要标明患者姓名、识别号码、标本来每份标本都要标明患者姓名、识别号码、标本来 源、采集日期和时间、采集者的姓名。源、采集日期和时间、采集者的姓名。6盛标本的容
5、器要有助于病原菌的存活，无泄漏，在盛标本的容器要有助于病原菌的存活，无泄漏，在 运送和处理期间安全。运送和处理期间安全。 表表1 用于细菌培养的常见临床标本的选择用于细菌培养的常见临床标本的选择 解剖部位解剖部位临临 床床 标标 本本正正 确确不不 正正 确确下呼吸道下呼吸道咳出的新咳出的新鲜鲜粘液和炎性粘液和炎性细细胞胞( (脓脓) )，痰，痰唾液、口咽分泌物、从鼻咽部唾液、口咽分泌物、从鼻咽部窦窦内内排出物排出物窦窦直接从直接从窦窦内抽取或灌洗的分泌物，用内内抽取或灌洗的分泌物，用内窥镜检查时窥镜检查时刮取的或活刮取的或活检标检标本本鼻或鼻咽拭子、鼻咽分泌物、痰，鼻或鼻咽拭子、鼻咽分泌物、
6、痰，唾液唾液泌尿道泌尿道中段尿，用中段尿，用“直的直的”插入插入导导管收集的尿，管收集的尿，耻骨上穿刺尿，抽吸，膀胱耻骨上穿刺尿，抽吸，膀胱镜检查镜检查或其或其它外科它外科检查进检查进收集的收集的标标本本FoleyFoley导导尿管收集袋中的尿尿管收集袋中的尿浅表浅表伤伤抽取的抽取的脓脓或局部清洗液或局部清洗液( (无菌无菌盐盐水水) )，源自，源自真皮下的真皮下的脓脓拭子拭子表面物拭子或由于表面物表面物拭子或由于表面物污污染的拭染的拭子，用含有防腐子，用含有防腐剂剂的的盐盐水清洗液水清洗液深部深部伤伤浓浓性物，坏死性物，坏死组织组织，或从深部取的，或从深部取的组织组织表面物表面物质污质污染的
7、染的标标本本胃胃肠肠道道新新鲜鲜排出的排出的粪粪便，内便，内窥镜检查时窥镜检查时收集的收集的洗液或洗液或粪粪便便直直肠肠拭子，如果病人入院拭子，如果病人入院33天后天后发发展成腹泻，用于展成腹泻，用于细细菌培养菌培养静脉血静脉血在抗生素在抗生素庆庆用之前，从不同部位静脉穿用之前，从不同部位静脉穿刺收集刺收集2 23 3份份标标本，本，对对9090磅的人每份血磅的人每份血大大约约20ml20ml；用含碘化合物或洗必汰消毒；用含碘化合物或洗必汰消毒凝固的血，在凝固的血，在24h24h内抽内抽1 1份或份或33份血份血标标本，每份培养本，每份培养20ml2g)(2g)无菌、防漏、无菌、防漏、宽宽口器
8、口器;5ml;5ml无菌、防漏、无菌、防漏、宽宽口容器或口容器或Cary- Cary- BlairBlair培基培基(2g)(2g)无菌、防漏、无菌、防漏、宽宽口容器或用口容器或用10%10%福福尔尔马马林和林和/ /或或PVA;2mlPVA;2ml拭子拭子转转运运未防腐未防腐: : 1h,RT1h,RT运运转转培养基培养基24h,RT24h,RT21h,RT21h,RT1h,RT1h,RT1 124h,24h,4,24h,4,24h,-20-20或更冷或更冷未防腐未防腐: : 1h,RT1h,RT拭子拭子转转运系运系统统24h,RT24h,RT或或44未防腐未防腐1h,RT1h,RT福福尔尔
9、马马林林/PVA/PVA时间时间无限定无限定, , RTRT2h,RT2h,RT24h24h4448h48hRTRT或或44培养培养: 2d, : 2d, 443d43d4或更或更长时间长时间-70-70用于用于毒素毒素检测检测24h,24h,4448h48hRTRT24h,24h,44时间时间无限定无限定, RT, RT24h,24h,RTRT1/d1/d1 1或或2d2d标标本可本可测测出出低水平毒低水平毒素素1/d1/d1/d1/d1/d1/d住院超住院超过过3d3d或入院或入院诊诊断不断不是胃是胃肠肠炎的患者未炎的患者未经经医医师师会会诊诊不做常不做常规粪规粪便培养。便培养。对这对这些
10、患者些患者应应考考虑进虑进行行艰艰难难梭菌的梭菌的检测检测。除除婴婴儿外不推荐用拭子做儿外不推荐用拭子做常常规规病原病原检测检测患者患者应应是每是每24h24h排泄液体或排泄液体或软软大便大便5 5次的患者。成形次的患者。成形或硬大便，不推荐。或硬大便，不推荐。-20-20或以上冷或以上冷冻冻易于使易于使细细胞毒胞毒素活性快速素活性快速丢丢失失有腹部有腹部痉挛痉挛的患者在的患者在发发病病6d6d内采集到的血或液状便内采集到的血或液状便的阳性率最高，所有的阳性率最高，所有EHECEHEC血清型血清型检测检测志志贺贺毒素比毒素比仅仅用于山梨醇用于山梨醇MacConkeyMacConkey培养培养O
11、157:H7O157:H7好。好。该该步步骤骤不鼓励使用，因不鼓励使用，因为为它提供不了什么它提供不了什么临临床价床价值值，且易且易误导误导。革。革兰兰或或简单简单的的亚亚甲基甲基蓝蓝染色可用于染色可用于观观察察白白细细胞。也有一些商胞。也有一些商业检业检测测方法方法对对淋球菌、志淋球菌、志贺贺氏菌、弯氏菌、弯曲菌、曲菌、单纯单纯疱疹病毒、及疱疹病毒、及肛肛门门携携带带的的B B群群链链球菌或球菌或别别的溶血的溶血链链球菌的球菌的检测检测，或，或不能留不能留样样的患者，是保留的患者，是保留方法方法表表3 细菌标本收集、运输和储藏指南细菌标本收集、运输和储藏指南瘘管瘘管见脓肿见脓肿液体：腹液体：
12、腹部的、羊部的、羊膜的、腹膜的、腹水、胆汁、水、胆汁、关关节节穿刺穿刺液、心包液、心包的、腹膜的、腹膜的、胸膜的、胸膜的、滑膜的、滑膜的、胸腔的、胸腔穿刺液穿刺液1.1.用碘酊充分消毒皮用碘酊充分消毒皮肤肤2.2.经经穿刺抽吸或外科穿刺抽吸或外科获获取取标标本本3.3.立即立即转转运运实验实验室室4.4.尽量多呈送液体；尽量多呈送液体；不要将拭子浸入液体不要将拭子浸入液体内内转转运运用于用于细细菌和酵菌和酵母的血培养瓶母的血培养瓶或无菌旋帽管或无菌旋帽管或或厌厌氧氧转转运系运系统统细细菌菌1ml1ml真菌真菌10ml10ml分枝杆菌分枝杆菌10ml10ml15min,15min,RTRT24h
13、24h，RTRT心包液心包液或用于真或用于真菌培养的菌培养的液体，液体，24h,24h,44无无羊水和后穹隆穿刺液羊水和后穹隆穿刺液应应用用厌厌氧系氧系统统送送检检，革，革兰兰染色前不需离心。其他染色前不需离心。其他液体液体检测检测最好用最好用细细胞离胞离心制心制备备法做革法做革兰兰染色染色坏疽坏疽组织组织见脓肿见脓肿胃的洗液胃的洗液或灌洗液或灌洗液检测检测分枝分枝杆菌杆菌幽幽门门螺杆螺杆菌活菌活检组检组织织患者早晨未患者早晨未进进食，并食，并卧床，采卧床，采样样1.1.用鼻胃管用鼻胃管进进入胃入胃2.2.用用25-50ml25-50ml冷却的冷却的无菌蒸无菌蒸馏馏水灌洗水灌洗3.3.获获得得
14、标标本并放入到本并放入到防漏无菌容器防漏无菌容器4.4.在去除管子之前，在去除管子之前，停止抽吸，并停止抽吸，并钳紧钳紧由消化科由消化科专专家用内家用内镜镜采采样样无菌、防漏容无菌、防漏容器器运运输输培基无菌培基无菌管管15min,15min,RTRT或在采集或在采集1h1h内中和内中和1h,RT1h,RT24h,24h,4424h,24h,441/d1/d1/d1/d标标本必本必须须立即立即处处理，因理，因为为分枝杆菌在胃灌洗中分枝杆菌在胃灌洗中死亡很快。当运死亡很快。当运转转达达1h1h时时用碳酸用碳酸氢钠氢钠中和中和为为抗菌抗菌试验试验可能需培养可能需培养表表3 细菌标本收集、运输和储藏
15、指南细菌标本收集、运输和储藏指南生殖器生殖器: :女女性，羊水性，羊水1.1.经经羊膜穿刺或剖腹羊膜穿刺或剖腹产产厌厌氧氧转转运系运系统统, ,1ml1ml2h,RT2h,RT24h,24h,RTRT无无不能接受用拭子采集或不能接受用拭子采集或抽吸的阴道分泌物抽吸的阴道分泌物标标本，本，因因为为有潜在的阴道共生有潜在的阴道共生菌群的菌群的污污染染前庭大腺前庭大腺分泌物分泌物1.1.用碘制用碘制剂剂消毒皮肤消毒皮肤2.2.由由导导管抽吸液体管抽吸液体厌厌氧氧转转运系运系统统, ,1ml1ml2h,RT2h,RT24h,24h,RTRT1/d1/d宫颈宫颈分泌分泌物物1.1.用无用无润润滑滑剂剂的
16、的扩扩阴阴器使器使宫颈宫颈可可见见2.2.用拭子从用拭子从宫颈宫颈上拭上拭去粘液和分泌物，去粘液和分泌物，丢丢掉拭子掉拭子3.3.用新的无菌拭子用新的无菌拭子紧紧贴宫颈贴宫颈内道内道稳稳固地但固地但轻轻轻轻地采地采样样拭子拭子转转运运2h,RT2h,RT24h,24h,RTRT1/d1/d参参阅阅关于关于针对针对衣原体和衣原体和淋球菌采集和淋球菌采集和转转运的教运的教村村后穹隆液后穹隆液送抽吸物或液送抽吸物或液厌厌氧培养系氧培养系统统1ml1ml2h,RT2h,RT24h,24h,RTRT1/d1/d子子宫宫内膜内膜组织组织和分和分泌物泌物1.1.通通过过望望远镜导远镜导管管经经宫颈宫颈采采样
17、样2.2.将将样样本全量本全量转转入入厌厌氧氧转转运系运系统统厌厌氧培养系氧培养系统统1ml1ml2h,RT2h,RT24h,24h,RTRT1/d1/d表表3 细菌标本收集、运输和储藏指南细菌标本收集、运输和储藏指南妊娠妊娠产产物物1.1.将将组织组织的一部分送入的一部分送入无菌容器无菌容器2.2.如果从剖如果从剖宫产获宫产获得得, ,立即立即转转入入厌厌氧氧转转运系运系统统无菌管或无菌管或厌厌氧氧转转运运系系统统2h,RT2h,RT24h,24h,RTRT1/d1/d不要不要处处理理恶恶露，露，该标该标本本的培养，可能会有的培养，可能会有误导误导作用作用尿道分泌物尿道分泌物患者排尿至少患者
18、排尿至少1h1h后采集后采集1.1.拭去尿道口的渗出物拭去尿道口的渗出物2.2.用拭子按摩尿道，采用拭子按摩尿道，采集排泄物，集排泄物，对对女性病人女性病人通通过过阴道靠着耻骨阴道靠着耻骨联联合合按摩尿道按摩尿道拭子拭子转转运运2h,RT2h,RT24h,24h,RTRT1/d1/d如未如未获获得排泄物，用得排泄物，用BetadineBetadine皂洗外尿道，皂洗外尿道，并用水冲洗，用泌尿生并用水冲洗，用泌尿生殖道拭子插入尿道殖道拭子插入尿道2-4cm2-4cm，旋，旋转转拭子，至少放置拭子，至少放置2s2s抽出，以便吸收抽出，以便吸收阴道分泌物阴道分泌物1.1.擦除擦除过过多的分泌物和多的
19、分泌物和排出液排出液2.2.用无菌拭子或吸管从用无菌拭子或吸管从阴道穹隆部粘膜阴道穹隆部粘膜处获处获取取分泌物分泌物3.3.如果需要涂片，再用如果需要涂片，再用一个拭子一个拭子拭子拭子转转运运2h,RT2h,RT24h,24h,RTRT1/d1/d对对于子于子宫宫内装置，将全内装置，将全装置放入无菌容器并室装置放入无菌容器并室温温转转运。推荐用革运。推荐用革兰兰染染色方法而不是培养，色方法而不是培养，诊诊断断细细菌性阴道病菌性阴道病生殖生殖: :女性女性或男性，或男性，损损伤伤1.1.用无菌用无菌盐盐水清洗水清洗损伤损伤处处，用解剖刀刃切去，用解剖刀刃切去损损伤伤表面表面2.2.使渗出液使渗出
20、液积积聚聚3.3.按按压损伤压损伤底部，用无底部，用无菌拭子用力擦底部采渗菌拭子用力擦底部采渗出液出液拭子拭子转转运运2h,RT2h,RT24h,24h,RTRT1/d1/d用暗用暗视视野野检查检查来辨来辨认认梅梅毒螺旋体，用毒螺旋体，用载载玻片接玻片接触渗出液，加盖玻片，触渗出液，加盖玻片，放在保湿盒里，放在保湿盒里，( (平皿用平皿用湿湿纱纱布布) )，立即，立即转转运到运到实实验验室，梅毒不能用人工室，梅毒不能用人工培基培养培基培养表表3 细菌标本收集、运输和储藏指南细菌标本收集、运输和储藏指南生殖生殖: :男性男性前列腺前列腺尿道尿道1.1.用肥皂和水清洗阴茎用肥皂和水清洗阴茎头头2.
21、2.通通过过直直肠肠按摩前列腺按摩前列腺3.3.用无菌拭子收集液体用无菌拭子收集液体或使液体或使液体进进入无菌管内入无菌管内用泌尿生殖道拭子插入用泌尿生殖道拭子插入尿道腔尿道腔2-4cm2-4cm，旋，旋转转拭拭子，至少停留子，至少停留2s2s，而使，而使之容易吸收之容易吸收拭子拭子转转运或无菌运或无菌管管拭子拭子转转运运2h,RT2h,RT2h,RT2h,RT24h,24h,RTRT24h,24h,RTRT1/d1/d1/d1/d前列腺分泌物的病原菌可前列腺分泌物的病原菌可通通过过按摩前后的尿按摩前后的尿标标本定本定量培养量培养鉴鉴定。精液也可以定。精液也可以培养培养下呼吸道下呼吸道下支气管
22、下支气管肺泡灌洗、肺泡灌洗、支气管刷支气管刷或洗液、或洗液、气管抽吸气管抽吸物物痰，咳出痰，咳出痰，痰，诱导诱导性性1.1.将抽吸物或洗出物放将抽吸物或洗出物放入痰采集器入痰采集器2.2.将刷出物放入有将刷出物放入有1ml1ml盐盐水的无菌容器内水的无菌容器内1.1.在医生或在医生或护护士的直接士的直接监视监视下采集下采集标标本本2.2.让让患者清洗或漱口患者清洗或漱口, ,去除口腔去除口腔过过多菌群多菌群3.3.指指导导患者深咳，患者深咳，产产生生下呼吸道下呼吸道标标本本( (非鼻后非鼻后液液) )。采集到无菌容器。采集到无菌容器内内1.1.刷完牙刷完牙龈龈和舌和舌头头后后让让患得用水漱口患
23、得用水漱口2.2.借助借助喷雾喷雾器使患者吸器使患者吸入入约约25ml 3%-10%25ml 3%-10%的无的无菌菌盐盐水水3.3.采集采集诱导诱导的痰到无菌的痰到无菌容器内容器内无菌容器无菌容器1ml1ml无菌溶器无菌溶器1ml1ml最最小量小量: :细细菌菌, , 1ml1ml无菌容器无菌容器1ml1ml2h,RT2h,RT2h,RT2h,RT2h,RT2h,RT24h, RT24h, RT24h, RT24h, RT24h, RT24h, RT1/d1/d1/d1/d1/d1/d定量分析需定量分析需40-80ml40-80ml液体量，液体量，做刷出物的定量分析，可做刷出物的定量分析，可
24、将刷出物放入将刷出物放入1ml1ml盐盐水中水中对对于不能于不能产产生生标标本的儿科本的儿科患者，呼吸道治患者，呼吸道治疗师应经疗师应经抽吸抽吸获获得得标标本，最好的本，最好的标标本本应应1010个个鳞鳞状状细细胞胞/100/100视视野野(10(10物物镜镜和和1010目目镜镜) )同上同上表表3 细菌标本收集、运输和储藏指南细菌标本收集、运输和储藏指南上呼吸道上呼吸道鼻鼻鼻咽鼻咽喉或咽喉或咽1.1.用拭子拭去用拭子拭去损伤损伤表面表面的分泌物和碎片，并的分泌物和碎片，并丢丢弃弃2.2.用第二个拭子用力在用第二个拭子用力在损伤处损伤处采采样样，避免接触，避免接触正常正常组织组织1.1.用用预
25、预先被无菌先被无菌盐盐水湿水湿润润的拭子插入鼻孔的拭子插入鼻孔约约1-1-2cm2cm2.2.对对着鼻粘膜用力旋着鼻粘膜用力旋转转1.1.用藻酸用藻酸钙钙拭子拭子经经鼻鼻轻轻轻轻插入鼻咽后部插入鼻咽后部2.2.慢慢旋慢慢旋转转拭子拭子5s5s以吸以吸收分泌物收分泌物3.3.移去拭子，在床移去拭子，在床边边或或检查检查桌上接种培养基，桌上接种培养基，或将拭子或将拭子转转入入转转运培养运培养基基1.1.用用压压舌板舌板压压舌舌2.2.用无菌拭子从咽后、用无菌拭子从咽后、扁桃体和扁桃体和发发炎区域采炎区域采样样拭子拭子转转运运拭子拭子转转运运直接培养基接种直接培养基接种或拭子或拭子转转运运拭子拭子转
26、转运运2h,RT2h,RT2h, RT2h, RT平皿平皿: : 15min,RT15min,RT拭子拭子: 2h, : 2h, RTRT2h, RT2h, RT24h, RT24h, RT24h, RT24h, RT24h, RT24h, RT24h, RT24h, RT1/d1/d1/d1/d1/d1/d1/d1/d对细对细菌学菌学评评价，不能采表浅价，不能采表浅组织组织，应选择组织应选择组织活活检标检标本本或或针针抽吸物抽吸物先前的鼻培养先前的鼻培养应应保存，以用保存，以用于于链链球菌和球菌和链链球菌携球菌携带带者或者或鼻鼻损伤损伤的的检测检测喉拭子培养不能用于会喉拭子培养不能用于会厌发
27、厌发炎的患者，炎的患者，检测检测淋球菌的拭淋球菌的拭子子应应放入含碳的放入含碳的转转运培养基，运培养基，采集后采集后12h12h内接种平皿。内接种平皿。JEMBECJEMBEC、BiobagsBiobags、GonoPakGonoPak宜于室温下宜于室温下转转运运组织组织外科手外科手术术或皮肤活或皮肤活检检程程序收集序收集厌厌氧氧转转运系运系统统或或无菌旋帽瓶，需无菌旋帽瓶，需要加几滴要加几滴盐盐水保水保持持组织组织潮湿潮湿15min, RT15min, RT24h,24h,RTRT无无呈送呈送组织组织的量尽可能多，如的量尽可能多，如可能在可能在-70-70保存一定量的外保存一定量的外科科组织
28、组织以以应进应进一步研究之需，一步研究之需，不要呈送在表面不要呈送在表面简单简单磨擦的磨擦的拭子，拭子，对对于定量研究于定量研究1cm1cm3 3的的样样本是适宜的本是适宜的表表3 细菌标本收集、运输和储藏指南细菌标本收集、运输和储藏指南尿尿女性女性, ,中中段段男性，中男性，中段段直直导导管管导导管内管内1.1.用肥皂和水完全清洗用肥皂和水完全清洗尿道区域尿道区域2.2.用湿用湿纱纱布布垫垫漂洗漂洗3.3.分开阴唇，开始排泄分开阴唇，开始排泄4.4.排出几毫升后，不停排出几毫升后，不停止尿流，采集中段尿止尿流，采集中段尿1.1.用肥皂和水清洗阴茎用肥皂和水清洗阴茎头头2.2.用湿用湿纱纱布布
29、垫垫漂洗漂洗3.3.回回缩缩包皮，开始排泄包皮，开始排泄4.4.排出几毫升后，不停排出几毫升后，不停止尿流，采集中段尿，止尿流，采集中段尿，用于用于细细菌培养菌培养1.1.用肥皂和水完全清洗用肥皂和水完全清洗尿道区域尿道区域2.2.用湿用湿纱纱布布垫垫漂洗漂洗3.3.将将导导管无菌插入膀胱管无菌插入膀胱4.4.流流过过15ml15ml尿之后，采尿之后，采集尿入无菌容器内集尿入无菌容器内1.1.用用70%70%乙醇消毒乙醇消毒导导管管采集部分采集部分2.2.用用针头针头和注射器无菌和注射器无菌采集采集5-10ml5-10ml尿尿3.3.转转入无菌管或容器内入无菌管或容器内无菌广口容无菌广口容器，
30、器，1ml1ml，或尿或尿转转运运试试剂剂盒盒无菌无菌宽宽口容口容器器, 1ml, 1ml，或尿或尿转转运运试试剂剂盒盒无菌防漏容无菌防漏容器器无菌防漏容无菌防漏容器器未防腐未防腐: :2h, RT2h, RT防腐：防腐：24h, RT24h, RT未防腐未防腐: :2h, RT2h, RT防腐：防腐：24h, RT24h, RT未防腐未防腐: :2h, RT2h, RT防腐：防腐：24h, RT24h, RT未防腐未防腐: :2h, RT2h, RT防腐：防腐：24h, RT24h, RT24h 24h 4424h 24h 4424h 24h 4424h 24h 441/d1/d1/d1/d
31、1/d1/d1/d1/d女性尿中的衣原体抗原女性尿中的衣原体抗原检测检测的敏感性可能的敏感性可能较较男男性低。尿性低。尿对细对细胞系有毒，胞系有毒，因而不能用于衣原体培因而不能用于衣原体培养之养之标标本。中段尿部分本。中段尿部分用于用于细细菌培养菌培养首段尿用于衣原体的探首段尿用于衣原体的探针针和抗原和抗原检测检测。收集探。收集探针针和抗原和抗原检测检测的的标标本待本待最后一次排尿至少最后一次排尿至少2h2h后后该该程序可能程序可能导导致尿道菌致尿道菌落落进进入膀胱并增加医源入膀胱并增加医源性感染的危性感染的危险险留管的病人膀胱内留管的病人膀胱内总总是是有有细细菌的。除非他菌的。除非他们们有有
32、症状，不要从症状，不要从这这些病人些病人收集尿收集尿标标本本伤伤口口见脓肿见脓肿AFB：抗酸杆菌；：抗酸杆菌；BAP：血琼脂平板；：血琼脂平板；BHI：心脑浸液；：心脑浸液；CHOC：巧克力琼脂；：巧克力琼脂；CSF：脑脊液；：脑脊液；CVP：中心静脉压；：中心静脉压；EtOH：乙醇；：乙醇；I.V：静脉内；：静脉内；PVA：聚乙烯乙醇固定液；：聚乙烯乙醇固定液；RT：室温：室温 表表3 细菌标本收集、运输和储藏指南细菌标本收集、运输和储藏指南二、标本的转运二、标本的转运 用用于于细细菌菌培培养养的的标标本本应应立立即即转转运运至至实实验验室室。过过度度延延长长或或将将标标本本暴暴露露于于极极
33、端端温温度度会会危危及及结结果果，必必须须避避免免。转转运运一一般原则如下：般原则如下：1标本必须及时送至实验室。如果运送时间大于标本必须及时送至实验室。如果运送时间大于2h， 需用特殊运送培养基或要求冷藏温度需用特殊运送培养基或要求冷藏温度(表表3)。2细菌培养标本储存不要超过细菌培养标本储存不要超过24h，即使合适的运送培，即使合适的运送培 基或冷藏温度。基或冷藏温度。 3用于细菌学培养的临床标本转运最合适的时间取决于获得的用于细菌学培养的临床标本转运最合适的时间取决于获得的 材料的体积。小体积的液体材料的体积。小体积的液体(1ml)或组织或组织(1cm3)应在应在15 30min内提交，
34、以避免蒸发、干燥或暴露于周围条件下。大体内提交，以避免蒸发、干燥或暴露于周围条件下。大体 积和在运送培基内的标本可储存长至积和在运送培基内的标本可储存长至24h。4对周围条件特别敏感的细菌包括志贺菌、淋病奈瑟菌、脑膜对周围条件特别敏感的细菌包括志贺菌、淋病奈瑟菌、脑膜 炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌、肺炎链球菌和厌氧菌。通过培养炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌、肺炎链球菌和厌氧菌。通过培养 进行志贺菌的可靠检测要求及时进行。流感嗜血杆菌对低温进行志贺菌的可靠检测要求及时进行。流感嗜血杆菌对低温 敏感。决不能冷冻脑脊液、生殖器、眼或中耳标本。敏感。决不能冷冻脑脊液、生殖器、眼或中耳标本。5从一个实验室到另一个实验
35、室转运临床标本和传染性物质，从一个实验室到另一个实验室转运临床标本和传染性物质， 不管距离远近，都要严格注意标本包装和标记说明。运送期不管距离远近，都要严格注意标本包装和标记说明。运送期 间，被运送的物质必需适当地标记、包装和保护。间，被运送的物质必需适当地标记、包装和保护。特殊标本运送指南见表特殊标本运送指南见表3。 三、不常见细菌标本三、不常见细菌标本 某某些些引引起起传传染染病病的的细细菌菌很很少少碰碰到到，要要求求特特殊殊运运送送条条件件或或运运送送培培养养基基。在在许许多多情情况况下下，这这些些标标本本需需要要送送到到参参考考实实验验室室，则则需需要要相相对对长长的的时时间间。表表4
36、列列出出了了这些标本和这些细菌的转运条件。这些标本和这些细菌的转运条件。 表表4 不常见菌的标本处理不常见菌的标本处理 细细菌菌( (疾病疾病) )标标本本选择选择转转运条件运条件注注 释释巴通体属巴通体属( (猫抓猫抓热热) )血、血、组织组织、淋巴、淋巴结结抽出物抽出物4141周，周，-70-70长长期期用用GiemsaGiemsa染色可在染色可在红细红细胞内或上看胞内或上看见见菌体。菌体。组织组织用用WarthinWarthin- Starry- Starry银银染色。染色。SPSSPS有毒性有毒性伯氏疏螺旋体伯氏疏螺旋体( (莱姆病莱姆病) )皮皮损损周周围围活活检检，血、，血、CSF
37、CSF保持保持组织组织潮湿和无菌；如潮湿和无菌；如果可能果可能亲亲自送到自送到实验实验室室除培养外，考除培养外，考虑虑PCRPCR，培养阳性率低。，培养阳性率低。WarthinWarthin- -StarryStarry银银染染组织组织。AOAO和和GiemsaGiemsa染色用于血液和染色用于血液和CSFCSF回回归热归热螺旋体螺旋体( (回回归热归热) )血涂片血涂片( (血血) )如可能如可能亲亲自送交自送交实验实验室室盐盐水湿片直接用暗水湿片直接用暗视视野野显显微微镜观镜观察。用察。用WrighrsWrighrs或或GiemsaGiemsa染色。血培养不可靠染色。血培养不可靠布氏杆菌布
38、氏杆菌血、骨髓血、骨髓室温运送；儿科溶解室温运送；儿科溶解- -离心离心试试管有帮助管有帮助如如维维持持3030天可用常天可用常规规血培养瓶。可能需盲血培养瓶。可能需盲传传。关。关节节炎用关炎用关节节液培养。液培养。怀怀疑布氏菌病通知疑布氏菌病通知实验实验室室克雷伯肉芽克雷伯肉芽肿肿杆菌杆菌( (腹股腹股沟肉芽沟肉芽肿肿；杜；杜诺诺凡肉芽凡肉芽肿肿) )组织组织、表面下刮片、表面下刮片室温运送室温运送主要是一种主要是一种热带热带疾病，疾病，WrightsWrights或或GiemsaGiemsa染色。染色。仅仅上皮是不上皮是不够够的，的，细细菌不能培养菌不能培养柯克斯体柯克斯体(Q(Q热热)
39、)立克次体立克次体( (斑点斑点热热、斑疹、斑疹伤伤寒寒) )血清、血液、血清、血液、组织组织血液和血液和组织组织冷冷冻冻于于-70-70直直到运送到运送分离送参考分离送参考实验实验室，室，优优先先选择选择血清学血清学诊诊断断埃立克体属埃立克体属血涂片，皮肤活血涂片，皮肤活检检，血液，血液( (用肝素或用肝素或EDTAEDTA抗凝抗凝) )，CSFCSF，血清，血清培养材料在冰上运送；保培养材料在冰上运送；保持持组织组织湿湿润润和无菌，保存和无菌，保存于于4 42020直到直到检测检测或或- -7070运送；运送；PCRPCR检测检测需在冰需在冰上或冷上或冷冻冻运送运送优优先先选择选择血清学血
40、清学诊诊断，用甲醇固定涂片，用断，用甲醇固定涂片，用FAFA或或GimenezGimenez染色，分离送参考染色，分离送参考实验实验室。室。CSFCSF直接直接检测检测或或PCRPCR弗朗西斯菌属弗朗西斯菌属( (土拉土拉热热) )淋巴淋巴结结抽吸物、刮片，病抽吸物、刮片，病损损活、血液、痰活、血液、痰迅速迅速转转送送实验实验室或冷室或冷冻冻；在干冰上运送在干冰上运送送参考送参考实验实验室，血清学室，血清学实验实验帮助。帮助。组织组织GramGram染色无染色无效。效。IFAIFA可用。当可用。当时时培养有效性培养有效性10%10%钩钩端螺旋体属端螺旋体属血清，血液血清，血液( (枸枸橼橼酸酸
41、盐盐抗凝抗凝剂剂不能用不能用) )，CSF(CSF(第第1 1周周) )，尿尿(1(1周后周后) )血血1h1h；尿；尿1h1h或用或用1%1%牛血牛血清白蛋白清白蛋白1:101:10稀稀释储释储存于存于4 42020，或用碳，或用碳氢钠氢钠中和中和血清学血清学试验试验最有帮助。酸性尿有害。暗最有帮助。酸性尿有害。暗视视野野显显微微镜镜和直接和直接FAFA可用。可用。组织组织用用WarthinWarthin-Starry-Starry银银染色染色链链杆菌属杆菌属( (鼠咬鼠咬热热哈佛希哈佛希尔尔热热) )血、抽取关血、抽取关节节液液优选优选高容量瓶高容量瓶不能冷不能冷冻冻。生。生长长需血、血清
42、或腹水。禁用需血、血清或腹水。禁用SPSSPS。AOAO染染色有帮助色有帮助 AO吖啶橙吖啶橙;SPS：多聚茴者脑黄酸钠：多聚茴者脑黄酸钠 四、标本的处理四、标本的处理(检测检测) 细菌标本的检测包括：染色，培养，免疫学细菌标本的检测包括：染色，培养，免疫学方法检测抗原和分子生物学技术检测核酸序列。方法检测抗原和分子生物学技术检测核酸序列。推荐方法见表推荐方法见表5. (一一)常见细菌标本革兰染色和接种培养基的建议常见细菌标本革兰染色和接种培养基的建议 见表见表5表表5 细菌学标本革兰染色和接种培养基的建议细菌学标本革兰染色和接种培养基的建议 标标本或微生物本或微生物革革兰兰染色染色需氧培养基
43、需氧培养基厌厌氧培养基氧培养基备备 注注 体腔液体腔液脑脑脊液脊液( (常常规规) )脑脑脊液脊液( (分流分流) )心包心包胸腔胸腔腹腔腹腔慢性非卧床腹膜透析慢性非卧床腹膜透析滑液滑液骨髓骨髓导导管管头头外耳液外耳液/ /拭子拭子内耳液内耳液眼眼X XX XX XX XX XX XX XX XX XX XX XB CB CB C B C ThThB CB CB C MacB C MacB CB CB C B C ThThB CB CB CB CB BB C MacB C MacB CB CB CB CBBABBABBABBABBA LKV BBE CANBBA LKV BBE CANBBAB
44、BABBABBABBABBA可使用血液培养瓶培养所有体可使用血液培养瓶培养所有体腔液大体腔液大体积标积标本液本液消化道消化道粪粪便便直直肠肠拭子拭子泌尿生殖道泌尿生殖道阴道阴道/ /宫颈宫颈尿道尿道/ /阴茎阴茎其它其它X XX XB Mac HE Ca EBB Mac HE Ca EBB Mac HE Ca EBB Mac HE Ca EBEBEBB TMB TMB C Mac TM B C Mac TM BBA LKV BBE CANBBA LKV BBE CAN对对所有消化道所有消化道标标本，空本，空/ /大大肠肠弯弯曲菌在曲菌在5%O5%O2 2-10%CO-10%CO2 2-85%N
45、2-85%N2， 4242培养培养B B组链组链球菌球菌筛选筛选选择选择肉肉汤传汤传代培养代培养到到B B下呼吸道下呼吸道痰痰气管吸出物气管吸出物支气管肺泡灌洗液支气管肺泡灌洗液支气管支气管镜镜刷清洗液刷清洗液X XX XX XX XB C MacB C MacB C MacB C MacB C MacB C MacB C MacB C MacBBA LKV BBE CANBBA LKV BBE CAN进进行行厌厌氧培养要求氧培养要求对对支气管支气管镜镜刷保刷保护护组织组织X XB C B C MacThMacThBBA LKV BBE CANBBA LKV BBE CAN上呼吸道上呼吸道鼻咽
46、鼻咽鼻鼻喉喉B CB CB BB B或或SSASSA会会厌厌需要增加巧克力需要增加巧克力琼琼脂脂尿液尿液B MacB Mac伤伤口或口或脓肿脓肿拭子拭子吸取物吸取物X XX XB C MacB C MacB C MacB C MacBBA LKV BBE CANBBA LKV BBE CAN拭子不推荐拭子不推荐厌厌氧培养氧培养百日咳和副百日咳博百日咳和副百日咳博德特氏菌德特氏菌Regan LoweRegan Lowe布布鲁鲁氏菌氏菌B CB C白喉杆菌白喉杆菌胱氨酸胱氨酸- -亚亚碲酸碲酸盐盐或或吕吕氟勒血清氟勒血清艰难艰难梭菌梭菌CCFACCFA大大肠肠杆菌杆菌O157:H7O157:H7山
47、梨醇山梨醇-Mac-Mac志志贺贺毒素毒素EIAEIA比比较较敏感敏感土拉土拉热热弗朗西弗朗西丝丝氏菌氏菌C C或或BCYEBCYE表表5 细菌学标本革兰染色和接种培养基的建议细菌学标本革兰染色和接种培养基的建议B B型群型群链链球菌球菌LIMLIM肉肉汤汤革革兰兰染色象染色象”鱼鱼群群”杜克莱氏嗜血杆菌杜克莱氏嗜血杆菌C+C+万古霉素万古霉素(3g/mll)(3g/mll)幽幽门门螺杆菌螺杆菌X XB B弯曲菌气体弯曲菌气体环环境境35353737军团军团菌菌BCYEBCYE钩钩端螺旋体端螺旋体FletchersFletchers培养培养基或基或EMJHEMJH3030培养至培养至13WK1
48、3WK淋球菌淋球菌TMTM弧菌弧菌TCBSTCBS耶耶尔尔森氏菌属森氏菌属CINCINB：血液琼脂平板；：血液琼脂平板；C：巧克力琼脂平板；：巧克力琼脂平板；Mac：麦康凯琼脂；：麦康凯琼脂；Th：巯基乙酸培养基；：巯基乙酸培养基；Ca：弯曲菌琼脂；：弯曲菌琼脂；HE：Hektoen氏培养基；氏培养基；EB：增菌：增菌肉汤；肉汤；SSA：A型链球菌选择性琼脂平板；型链球菌选择性琼脂平板；TM：Thayer-Martin;BCYE：平衡活性炭酵母抽提物；：平衡活性炭酵母抽提物；TCBS：硫代硫酸：硫代硫酸-柠檬酸柠檬酸-胆盐蔗糖琼脂；胆盐蔗糖琼脂；CIN：cefsulodin-irgasan-n
49、ovobiocin;BBA：布鲁氏菌血琼脂；：布鲁氏菌血琼脂；LKV：含卡那霉素和万古霉素的可溶羊血；：含卡那霉素和万古霉素的可溶羊血；BBE：拟杆菌胆汁七叶苷：拟杆菌胆汁七叶苷(bacteroides bile esculin)；CAN：厌氧性多粘菌素：厌氧性多粘菌素E-萘啶酸；萘啶酸；CCFA：环丝氨酸：环丝氨酸-头孢噻吩头孢噻吩-果糖琼脂；果糖琼脂；CAPD：慢性非卧床腹膜透析体液：慢性非卧床腹膜透析体液如果标本采集正确，根据需要进行厌氧培养。如果标本采集正确，根据需要进行厌氧培养。 表表5 细菌学标本革兰染色和接种培养基的建议细菌学标本革兰染色和接种培养基的建议革兰染色无论何时都推荐：
50、革兰染色无论何时都推荐：快速染色结果对病人防治是需要的；快速染色结果对病人防治是需要的；细胞组成分析用于决定标本是否适当；细胞组成分析用于决定标本是否适当；结果有助于解释培养结果。结果有助于解释培养结果。 厌厌氧氧菌菌培培养养应应仅仅仅仅包包括括规规定定好好的的合合适适的的标标本本来来源源(表表2)和和无无氧氧容容器器运运转转并并没没有有被被皮皮肤肤粘粘膜膜正正常常菌菌群群污污染染的的标本。标本。 (二二)标本处理一般原则标本处理一般原则 1安全安全2及时送往实验室，要求见表及时送往实验室，要求见表33标本标记和试验医嘱要求标本标记和试验医嘱要求 (1)记录标本到达实验室的时间记录标本到达实验
51、室的时间 (2)记录标本接种的时间记录标本接种的时间 (3)接受标本时仔细检查标本和申请；接受标本时仔细检查标本和申请； 标标本本标标签签上上必必须须有有病病人人的的姓姓名名和和标标本本来来源源，申申请请单单上上必必须须有有：病病人人姓姓名名、年年龄龄、性性别别、鉴鉴定定身身份份的的号号码码(如如社社会会保保险险号号或或唯唯一一的的挂挂号号号号码码、账账单单)、病病房房、医医生生办办公公室室地地址址；下下医医嘱的医生姓名、标本来源、标本采集日期和时间；检查项目。嘱的医生姓名、标本来源、标本采集日期和时间；检查项目。 如如果果上上述述资资料料不不完完整整，实实验验室室人人员员必必须须打打电电话话
52、问问清清楚楚，如如果果一一个个标标本本没没有有标标记记或或没没有有提提供供姓姓名名，则则必必须须重重新新送送一一份份标标本本。只只有有另另一一份份标标本本不不能能得得到到，如如外外科科手手术术取取的的标标本本，才才允允许许重重新新标标记记标标本本。实实验验室室操操作作人人员员必必须须清清楚楚地地记记录录这这些些例例外外，每每一一步步必必须须验验证证和和文文字字证证明明以以及及应应负负责责任任的的人人员员。当当有有例例外外发发生生时时，必必须须在在报报告告单单下下注注明明，以以便便医医生生解解释释结结果果时时避避免潜在的错误。免潜在的错误。 (三三)标本拒绝接收标本拒绝接收 (1)标本采集、转运
53、容器和条件不当可使标本变标本采集、转运容器和条件不当可使标本变 为不可接受的，需重新采集。要求见表为不可接受的，需重新采集。要求见表3。 (2)由于标本质量不符合要求，拒绝接收由于标本质量不符合要求，拒绝接收(见表见表6)。 表表6 保证细菌常规培养质量要求的标本筛选保证细菌常规培养质量要求的标本筛选 标标 本本 筛选筛选方法方法筛选结筛选结果可接收果可接收不可接收不可接收痰痰显显微微镜检查镜检查革革兰兰染色涂片染色涂片10SEC平均平均100视视野野气管内抽出物气管内抽出物显显微微镜检查镜检查革革兰兰染色涂片染色涂片10SEC平均每个平均每个100视视野野和未和未查查到到细细菌菌/20个个视
54、视野野(1000)支气管肺泡灌支气管肺泡灌洗液洗液同上同上1%细细细细胞胞是是SEC尿尿尿液分析尿液分析尿沉渣革尿沉渣革兰兰染色染色尿液分析尿液分析10多形核白多形核白细细胞胞/mm3(无症状病人白无症状病人白细细胞不增胞不增加加)尿液分析尿液分析3+SEC或通或通过过革革兰兰染色染色检查检查3个可能病原个可能病原菌，暗示被大量菌，暗示被大量污污染染浅浅层伤层伤口口显显微微镜检查镜检查革革兰兰染色涂片染色涂片2+SEC或无多形核折或无多形核折细细胞胞检查检查病原菌的病原菌的粪粪便便病人位置病人位置住院期住院期间间门诊门诊病人或住病人或住3天病人天病人住院住院3天或住院期天或住院期间发间发展展为
55、为腹泻腹泻其它其它标标本本筛选筛选取方法不能用取方法不能用或不能提供或不能提供LE：白细胞；：白细胞；SEC：鳞状上皮细胞：鳞状上皮细胞 (3)尽量使标本的量满足所有试验要求。如果标本体积尽量使标本的量满足所有试验要求。如果标本体积(量量)被方被方 法或感染的身体部位等限制，小体积的液体标本可加法或感染的身体部位等限制，小体积的液体标本可加 1 2ml灭菌盐水或营养肉汤，加到刚好足够满足所有试验所要灭菌盐水或营养肉汤，加到刚好足够满足所有试验所要 求的液标本量是很重要的。求的液标本量是很重要的。(4)应对标本时行肉眼检查应对标本时行肉眼检查 首先对临床标本进行细胞组成的肉眼检查，感染导致产首先
56、对临床标本进行细胞组成的肉眼检查，感染导致产 生脓生脓(多形核白细胞多形核白细胞)、血、坏死组织和粘液、血、坏死组织和粘液(粘膜标本粘膜标本)。 一般说来，肉眼检查应鉴别黄色到褐色的脓，红色到铁一般说来，肉眼检查应鉴别黄色到褐色的脓，红色到铁 锈色的血，清亮到粘稠的粘液，和棕色到淡黑色表示坏锈色的血，清亮到粘稠的粘液，和棕色到淡黑色表示坏 死的组织。制备涂片和接种培养基应取自这些区域。死的组织。制备涂片和接种培养基应取自这些区域。 涂片的理想显微检查，用涂片的理想显微检查，用10物镜，应检查出许多多形核细物镜，应检查出许多多形核细 胞，而检查到少数或检查不到表示皮肤或皮肤粘膜正常菌群污胞，而检
57、查到少数或检查不到表示皮肤或皮肤粘膜正常菌群污 染的鳞状上皮细胞。坏死组织染色涂片上也可表现许多弹性纤染的鳞状上皮细胞。坏死组织染色涂片上也可表现许多弹性纤 维。虽然弹性纤维出现在未感染的外科伤口和来自水肿组织的维。虽然弹性纤维出现在未感染的外科伤口和来自水肿组织的 标本，但它们也可在已坏死的组织。标本，但它们也可在已坏死的组织。 下呼吸道标本往往显示肺泡巨噬细胞和下呼吸道标本往往显示肺泡巨噬细胞和Curschmanns螺旋物螺旋物 (粘蛋白状的原纤维，见于支气管哮喘患者痰内粘蛋白状的原纤维，见于支气管哮喘患者痰内)，表明标本来，表明标本来 源于气道的远端。源于气道的远端。Curschmann
58、s螺旋物是细支气管的管型，螺旋物是细支气管的管型， 见于由哮喘或吸烟引起的慢性肺病患者。见于由哮喘或吸烟引起的慢性肺病患者。 有丰富的鳞状上皮细胞，表明正常菌群污染的标本，有丰富的鳞状上皮细胞，表明正常菌群污染的标本， 应拒收。应拒收。被病人贴身的医护人员拒绝的标本，解释拒绝的理被病人贴身的医护人员拒绝的标本，解释拒绝的理 由，并要求更换成可接受质量的标本，应及时通知并由，并要求更换成可接受质量的标本，应及时通知并 采集替换标本，特别是在已经开始抗微生物治疗的情采集替换标本，特别是在已经开始抗微生物治疗的情 况。况。 标本拒绝的标准在变为规定之前应由相应实验室和医标本拒绝的标准在变为规定之前应
59、由相应实验室和医 护人员代表复审。护人员代表复审。五、培养解释五、培养解释 根据每种分离菌的量、相关性培养物革兰染色涂片根据每种分离菌的量、相关性培养物革兰染色涂片结果和来自不同部位标本的常见污染菌和病原菌的识别结果和来自不同部位标本的常见污染菌和病原菌的识别来区别正常污染菌群和可能病原菌。来区别正常污染菌群和可能病原菌。 标本来自容易污染的部位标本来自容易污染的部位(如痰、尿和表面伤口如痰、尿和表面伤口)，可能的病原菌的数量应超出固有菌群，经革兰染色直接可能的病原菌的数量应超出固有菌群，经革兰染色直接能看到。能看到。 标本来自可能无菌部位标本来自可能无菌部位(如如CSF、关节液、其它体液、关
60、节液、其它体液和组织和组织)，可能病原菌可以任何数量出现，染色涂片看到，可能病原菌可以任何数量出现，染色涂片看到或看不到。或看不到。 保留培养平板保留培养平板1周是有用办法，它可以留给医生根据周是有用办法，它可以留给医生根据临床指征要求进一步鉴定或药敏试验的机会。临床指征要求进一步鉴定或药敏试验的机会。六、微生物学的应急价值六、微生物学的应急价值 虽然培养需要数天或数周才出现阳性，但涂片染色结果、抗虽然培养需要数天或数周才出现阳性，但涂片染色结果、抗原或抗酸测定结果和来自无菌部位标本的培养结果可能会有所需原或抗酸测定结果和来自无菌部位标本的培养结果可能会有所需的重要信息。的重要信息。 需要立即
61、通知医护人员的例子：血培养、需要立即通知医护人员的例子：血培养、CSF革兰染色或培革兰染色或培养阳性结果、伤口标本中养阳性结果、伤口标本中A组链球菌的检测结果、革兰染色表明组链球菌的检测结果、革兰染色表明的气性坏疽或其它系统毒素血症、疟疾阳性涂片等。的气性坏疽或其它系统毒素血症、疟疾阳性涂片等。 白天交班时通知白天交班时通知(不必晚上或半夜通知不必晚上或半夜通知)的例子：抗酸染色阳的例子：抗酸染色阳性、新的或非常规的药敏试验、有高度意义或不常见的菌如军团性、新的或非常规的药敏试验、有高度意义或不常见的菌如军团菌、李斯特菌、或布氏菌的检测结果。菌、李斯特菌、或布氏菌的检测结果。 应急报告的内容需
62、实验室与临床医护人员商量应急报告的内容需实验室与临床医护人员商量 。七、血液和血管内导管标本七、血液和血管内导管标本 (一一)菌血症和脓毒血症菌血症和脓毒血症 菌血症：血中存在细菌菌血症：血中存在细菌 继发性菌血症：从原发灶扩散入血继发性菌血症：从原发灶扩散入血 原发性菌血症：找不到原发灶原发性菌血症：找不到原发灶 脓毒血症：带有症状和体征的菌血症，如发热、寒颤和脓毒血症：带有症状和体征的菌血症，如发热、寒颤和 心跳加快心跳加快 脓毒性休克：脓毒症引起的低血压，严重的脓毒症特征脓毒性休克：脓毒症引起的低血压，严重的脓毒症特征 为脓毒性休克伴有器官系统衰竭，死亡率为脓毒性休克伴有器官系统衰竭，死
63、亡率 高达高达20%40% (二二)造成菌血症的细菌造成菌血症的细菌 种类繁多，主要有链球菌种类繁多，主要有链球菌/肠球菌、葡萄球菌或肠杆菌等。肠球菌、葡萄球菌或肠杆菌等。 污污染染菌菌主主要要有有凝凝固固酶酶阴阴性性的的葡葡球球菌菌、棒棒状状杆杆菌菌、芽胞杆菌属和丙酸杆菌。芽胞杆菌属和丙酸杆菌。 鉴鉴别别病病原原菌菌和和污污染染菌菌非非常常重重要要。一一般般讲讲，上上述述污污染染菌菌中中一一次次培培养养阳阳性性代代表表污污染染，多多次次不不同同时时间间采采集集的的标标本生长出同一种菌很可能是致病菌。本生长出同一种菌很可能是致病菌。 污污染染可可通通过过静静脉脉穿穿刺刺皮皮肤肤防防腐腐而而控控
64、制制，23%是是满意的。污染率应研究和通过教育纠正。满意的。污染率应研究和通过教育纠正。(三三)采集时间、方法和量采集时间、方法和量 1. 采集时间采集时间 尽尽量量在在使使用用抗抗生生素素前前采采集集，如如已已用用抗抗菌菌药药物物；则则在在下下次次用用药药前前采采集集。对对间间隙隙性性寒寒战战或或发发热热者者应应在在寒寒战战或或体体温温高高峰峰到到来之前来之前0.5-1h采集，或寒战或发热后采集，或寒战或发热后1h采集。采集。2.采集方法和量采集方法和量 所所以以，检检测测菌菌血血症症要要求求多多个个血血培培养养，每每个个培培养养的的血血量量要要大大。对对成成人人的的规规则则，24h内内需需
65、23次次分分开开的的血血培培养养，每每次次至至少少接接种种20ml血血。对对儿儿科科，除除血血量量外外，其其它它推推荐荐要要求求相相似似。见见表表3和和7。血培养血培养培养瓶的消毒：加培养瓶的消毒：加70%异丙醇或酚到橡胶塞异丙醇或酚到橡胶塞1min穿刺部位消毒前先触摸穿刺部位消毒前先触摸静脉静脉静脉穿刺消毒静脉穿刺消毒1.用用70%乙醇清洗采集乙醇清洗采集部位部位2.使用蘸碘拭子，从中使用蘸碘拭子，从中心开始呈同心心开始呈同心圆圆式涂抹式涂抹3.让让碘制碘制剂剂晾干晾干4.不要触摸不要触摸该该点点5.采血采血6.穿刺后，用乙醇将皮穿刺后，用乙醇将皮肤上之碘除去肤上之碘除去细细菌：血培养菌：血
66、培养瓶，成人，瓶，成人，20ml /套套(量量大易分离出大易分离出)婴婴儿和儿童儿和儿童1 120ml/20ml/套，套，取决于病人体取决于病人体重重2h,RT2h，RT或按或按说说明明3套套/24h急性急性发热发热：立即使用或改：立即使用或改变变抗生素，抗生素，10min内从不同部位采内从不同部位采2套套(抗生素抗生素使用前使用前)慢性病：不立即使用或改慢性病：不立即使用或改变变抗生素，抗生素，从不同部位从不同部位24h内，内，间间隔不小于隔不小于3h，采，采2 23 3套套( (抗生素使用前抗生素使用前) )急性心内膜炎：急性心内膜炎：1-2h1-2h内从内从3 3个不同个不同部位采部位采
67、3 3套，尽可能用抗生素前。套，尽可能用抗生素前。亚亚急性心内膜炎：急性心内膜炎：24h24h内从内从3 3个分离个分离部位采部位采3 3套，套，间间隔隔1h1h，如，如24h24h内内为为阴性，要再采阴性，要再采2-32-3套。套。原因不明原因不明发热发热：24h24h内从不同部位内从不同部位采采2-32-3套，套，间间隔隔1h1h，如，如24-48h24-48h内内为为阴性，要再采阴性，要再采2-32-3套套一些数据一些数据显显示，另加一个需氧瓶或示，另加一个需氧瓶或真菌瓶比真菌瓶比仅仅仅仅使用使用厌厌氧瓶的效果更氧瓶的效果更好好儿科，立即采血，很少需要培养儿科，立即采血，很少需要培养间间
68、隔隔时间证时间证明持明持续续菌血症菌血症标标本本类类型型采集指南采集指南装置和装置和/或最或最小量小量运运转时间转时间和和温度温度储储存存时间时间重复采重复采样样限制限制说说 明明 表表3 血标本的采集、运输和储藏血标本的采集、运输和储藏病人体重病人体重( (磅磅) )推荐血体推荐血体积积( (培培养养)ml)ml2 2次培养次培养总总血体血体积积(ml)(ml)等于病人等于病人1%1%血液体血液体积积的的血量血量(ml)(ml)194040表表7 儿科细菌血培养推荐血液体积儿科细菌血培养推荐血液体积 血血液液体体积积计计算算按按新新生生儿儿约约85ml/kg，其其它它病病人人73ml/kg，
69、从从1个个80kg成人采集成人采集2个个20ml血标本血标本(总量总量40ml)大约是病人总血量的大约是病人总血量的0.7%。(四四)接种方法接种方法 最最好好的的方方法法是是静静脉脉采采集集的的血血直直接接接接种种到到血血培培养养瓶瓶，比比先先放放入入试试管管再再送送到到实实验验室室转转种种到到培培养养瓶瓶好好。直直接接接接种种培培养养瓶瓶可可使使细细菌菌马马上上开开始始生生长长，减减少少细细菌菌暴暴露露于于抗抗凝凝剂剂的的量量，也也减减少少健健康康医医护护人人员员被被针针刺刺意意外外事事故故的的机机会会。所所有有血血培培养养系系统统中中使使用用的的抗抗凝凝剂剂是是多多聚聚茴茴香香脑脑黄黄酸
70、酸钠钠(SPS)，已已知知它它对对脑脑膜膜炎炎球球菌菌，淋淋球球菌菌、厌厌氧氧消消化化链链球球菌菌、念念珠珠状状链链杆杆菌菌和和阴阴道道加加德德纳纳菌菌有有抑抑制制作作用用。直直接接接接种种到到血血培培养养瓶瓶可可减减少少暴露于转运试管中暴露于转运试管中SPS的量。的量。(五五)直接镜检直接镜检 静静脉脉血血标标本本(或或血血液液浅浅黄黄色色上上层层)涂涂片片革革兰兰染染色色镜镜检检偶偶儿儿可可查查到到下下列列病病人人血血液液中中细细菌菌：脑脑膜膜炎炎、肺肺链链球球菌感染、或由其它细菌引起的严重脓毒症。菌感染、或由其它细菌引起的严重脓毒症。 虽虽有有不不少少报报导导直直接接应应用用，但但血血中
71、中细细菌菌浓浓度度很很高高，大约大约10000个个/ml血。这一条不能做为常规应用。血。这一条不能做为常规应用。 (六六)其它几个相关问题其它几个相关问题 1细菌不生长细菌不生长 某些菌如军团菌、分枝杆菌、脑膜炎球菌，某些株和淋病某些菌如军团菌、分枝杆菌、脑膜炎球菌，某些株和淋病奈瑟菌在常规商品培养基上不生长，可考虑换其它方法，如溶奈瑟菌在常规商品培养基上不生长，可考虑换其它方法，如溶解离心法。有的菌要需要长时间培养，有的需要加入抗生素或解离心法。有的菌要需要长时间培养，有的需要加入抗生素或抑制物的吸附剂。抑制物的吸附剂。 2染色报告染色报告 血培养瓶培养阳性最初靠肉汤涂片染色镜检评价。染色报
72、血培养瓶培养阳性最初靠肉汤涂片染色镜检评价。染色报告要包括革兰染色反应和细菌形态描述。如果能作出初步性鉴告要包括革兰染色反应和细菌形态描述。如果能作出初步性鉴定，可加在报告上。如定，可加在报告上。如“革兰阳性球菌，建议考虑葡萄球菌革兰阳性球菌，建议考虑葡萄球菌”，如果革兰染色不能识别，吖啶橙染色可能更敏感。，如果革兰染色不能识别，吖啶橙染色可能更敏感。阳性血培养瓶的标本以涂片革兰染色看到的菌为基础进行传代阳性血培养瓶的标本以涂片革兰染色看到的菌为基础进行传代培养。培养。 由由于于有有510%菌菌血血症症是是多多种种细细菌菌的的，推推荐荐方方法法为为根根据据染染色色显显示示，加加哥哥伦伦比比亚亚
73、-多多粘粘菌菌素素-萘萘啶啶酮酮酸酸(CNA)或或别别的的G-菌菌抑抑制制剂剂琼琼脂脂培培基基培培养养分分离离G+菌菌，或或加加入入MacConkey培基或有关的选择培基上培养培基或有关的选择培基上培养G-菌。菌。3如如果果在在G染染色色涂涂片片中中看看见见厌厌氧氧菌菌的的形形态态或或仅仅在在厌厌氧氧培培养瓶中发现，则应用厌氧培基和条件。养瓶中发现，则应用厌氧培基和条件。 4. 关于厌氧培养关于厌氧培养 厌氧菌在血液中占百分比小，过去几年研究有下降趋厌氧菌在血液中占百分比小，过去几年研究有下降趋势。但并非所有医院都如此，实验室应根据自己的资料来势。但并非所有医院都如此，实验室应根据自己的资料来
74、决定是否将厌氧培养做为常规的一部分。决定是否将厌氧培养做为常规的一部分。5. 血管导管头培养血管导管头培养 血管导管头培养是检查菌血症是否来源于导管，要与血管导管头培养是检查菌血症是否来源于导管，要与血培养配对进行。常用方法是半定量方法，即将导管远端血培养配对进行。常用方法是半定量方法，即将导管远端5cm一段在血琼脂平板上滚动一段在血琼脂平板上滚动4次，然后丢掉。培养长出次，然后丢掉。培养长出15个菌落认为是有意义的，如果血培养获得同样的分离菌，个菌落认为是有意义的，如果血培养获得同样的分离菌，表明导管头很可能是菌血症的来源。还有定量方法。表明导管头很可能是菌血症的来源。还有定量方法。八、下呼
75、吸道标本八、下呼吸道标本 (一一)标本采集标本采集 下呼吸道标本用于检测气道疾病下呼吸道标本用于检测气道疾病(气管和支气管气管和支气管)、肺炎、肺脓肿和脓胸的病原体。常见标本有痰、肺炎、肺脓肿和脓胸的病原体。常见标本有痰、气管内吸出物气管内吸出物(插管病人插管病人)、支气管刷出物、洗液或、支气管刷出物、洗液或支气管镜收集的肺泡灌洗液和胸膜液。标本应及时支气管镜收集的肺泡灌洗液和胸膜液。标本应及时送往实验室。标本采集见表送往实验室。标本采集见表3。 标标本本类类型型采集指南采集指南装置和装置和/或最小或最小量量运运转时间转时间和温和温度度储储存存时间时间重复采重复采样样限制限制说说 明明 下呼吸
76、道下呼吸道下支气管下支气管肺泡灌洗、肺泡灌洗、支气管刷支气管刷或洗液、或洗液、气管抽吸气管抽吸物物痰，咳出痰，咳出痰，痰，诱导诱导性性1.1.将抽吸物或洗出物放将抽吸物或洗出物放入痰采集器入痰采集器2.2.将刷出物放入有将刷出物放入有1ml1ml盐盐水的无菌容器内水的无菌容器内1.1.在医生或在医生或护护士的直接士的直接监视监视下采集下采集标标本本2.2.让让患者清洗或漱口患者清洗或漱口, ,去除口腔去除口腔过过多菌群多菌群3.3.指指导导患者深咳，患者深咳，产产生生下呼吸道下呼吸道标标本本( (非鼻后非鼻后液液) )。采集到无菌容器。采集到无菌容器内内1.1.刷完牙刷完牙龈龈和舌和舌头头后后
77、让让患者用水漱口患者用水漱口2.2.借助借助喷雾喷雾器使患者吸器使患者吸入入约约25ml 3%-10%25ml 3%-10%的无的无菌菌盐盐水水3.3.采集采集诱导诱导的痰到无菌的痰到无菌容器内容器内无菌容器无菌容器1ml1ml无菌溶器无菌溶器1ml1ml最最小量小量: :细细菌菌, , 1ml1ml无菌容器无菌容器1ml1ml2h,RT2h,RT2h,RT2h,RT2h,RT2h,RT24h, RT24h, RT24h, RT24h, RT24h, RT24h, RT1/d1/d1/d1/d1/d1/d肺泡灌洗液定量分析需肺泡灌洗液定量分析需40-40-80ml80ml液体量，做刷出物的液体
78、量，做刷出物的定量分析，可将刷出物放定量分析，可将刷出物放入入1ml1ml盐盐水中水中对对于不能于不能产产生生标标本的儿科本的儿科患者，呼吸道治患者，呼吸道治疗师应经疗师应经抽吸抽吸获获得得标标本，最好的本，最好的标标本本应应1010个个鳞鳞状状细细胞胞/100/100视视野野(10(10物物镜镜和和1010目目镜镜) )同上同上表表3 下呼吸道标本的采集、运输和储藏下呼吸道标本的采集、运输和储藏(二二)标本和筛选标本和筛选 病原菌存在于含多形核白细胞的标本中，量比污病原菌存在于含多形核白细胞的标本中，量比污染的呼吸道菌群大，病原菌常常存在于多形核白细胞染的呼吸道菌群大，病原菌常常存在于多形核
79、白细胞内。筛选的方法有多种，最简单的是仅仅评估鳞状上内。筛选的方法有多种，最简单的是仅仅评估鳞状上皮细胞，见表皮细胞，见表6。 用于检测支原体肺炎、军团菌属、二相真菌和结用于检测支原体肺炎、军团菌属、二相真菌和结核分枝杆菌不应进行筛选。核分枝杆菌不应进行筛选。 表表6 下呼吸道标本的筛选下呼吸道标本的筛选 标标 本本 筛选筛选方法方法筛选结筛选结果可接收果可接收不可接收不可接收痰痰显显微微镜检查镜检查革革兰兰染色涂片染色涂片10SEC平均平均100视视野野气管内抽出气管内抽出物物显显微微镜检查镜检查革革兰兰染色涂片染色涂片10SEC平均每个平均每个100视视野和未野和未查查到到细细菌菌/20个
80、个视视野野(1000)表表6 下呼吸道标本的筛选下呼吸道标本的筛选(三三)涂片革兰染色涂片革兰染色 镜检看炎症细胞：细菌和病理指标，如粘液、坏死组镜检看炎症细胞：细菌和病理指标，如粘液、坏死组织、细胞内细菌、尘细胞和织、细胞内细菌、尘细胞和curschmann螺旋。气管、支气螺旋。气管、支气管脓池及肺脓腔内细胞坏死或碎片。吞噬细胞内细菌浓度管脓池及肺脓腔内细胞坏死或碎片。吞噬细胞内细菌浓度较细胞外附近部位的细菌浓度大，借此可将其与较细胞外附近部位的细菌浓度大，借此可将其与“躺在躺在”多形白细胞上的细菌区别开来。尘细胞多形白细胞上的细菌区别开来。尘细胞(胞浆内空泡、核偏胞浆内空泡、核偏于周边于周
81、边)较难看到，它和上述螺旋表明涂片的区域来自肺泡较难看到，它和上述螺旋表明涂片的区域来自肺泡和气管远端。和气管远端。(四四)污染呼吸道菌群与吸入性肺炎和呼吸道菌的区别污染呼吸道菌群与吸入性肺炎和呼吸道菌的区别 在意识丧失、吞咽和呼吸肌麻痹或喉部插管等情况在意识丧失、吞咽和呼吸肌麻痹或喉部插管等情况下，吞入大量咽部内容物可引起由混合呼吸道菌群造成下，吞入大量咽部内容物可引起由混合呼吸道菌群造成的气道感染、脓肿或脓胸。的气道感染、脓肿或脓胸。 吸入性肺炎病人痰革兰染色对诊断有很大启示。涂吸入性肺炎病人痰革兰染色对诊断有很大启示。涂片显示许多多形核白细胞和许多混合呼吸道菌群形态类片显示许多多形核白细
82、胞和许多混合呼吸道菌群形态类型，特别是提示链球菌和厌氧菌者。型，特别是提示链球菌和厌氧菌者。 (五五)下呼吸道细菌培养结果解释下呼吸道细菌培养结果解释标标本本( (参考参考) )可能有意可能有意义义可能性无意可能性无意义义其它其它资资料提示分泌料提示分泌物有意物有意义义痰痰- -咳出或咳出或诱导诱导革革兰兰染色和培养可能染色和培养可能病原菌占病原菌占优势优势，中性，中性粒粒细细胞多胞多革革兰兰染色不存在可能染色不存在可能病原菌和在培养中病原菌和在培养中仅仅1-2+1-2+生生长长可能病原菌在中性可能病原菌在中性粒粒细细胞内胞内( (细细胞内胞内细细菌菌) )气管内插管气管内插管吸出物吸出物革革
83、兰兰染色和培养染色和培养优势优势可能病原菌，中性粒可能病原菌，中性粒细细胞多胞多培养中可能病原菌培养中可能病原菌仅仅1-2+1-2+生生长长，革，革兰兰染色染色中性粒中性粒细细胞不多胞不多可能病原菌定量可能病原菌定量10106 6CFU/mlCFU/ml可能病原可能病原菌在中性粒菌在中性粒细细胞内胞内支气管肺泡支气管肺泡灌洗液灌洗液每个革每个革兰兰染色染色100100视视野看到可能病原菌。野看到可能病原菌。可能病原菌定量培养可能病原菌定量培养滴滴 度度10105 5CFU/mlCFU/ml革革兰兰染色看不到可能染色看不到可能病原菌，定量培养滴病原菌，定量培养滴度度101000CFU/ml的可的
84、可能病原菌菌落计数能病原菌菌落计数(对应于对应于106CFU/ml原标本原标本)可能与疾病相关。可能与疾病相关。肺泡灌洗液肺泡灌洗液 涂片染色如果鳞状细胞涂片染色如果鳞状细胞1%所有细胞，则严重污染，可错所有细胞，则严重污染，可错误地抬高可能病原菌计数。细胞内细菌可能是病原菌。误地抬高可能病原菌计数。细胞内细菌可能是病原菌。0.01或或0.001ml整倍数支气管肺泡灌洗液接种琼脂培基，整倍数支气管肺泡灌洗液接种琼脂培基，100000菌菌/ml提示可能为病原菌。提示可能为病原菌。10000100000菌菌/ml代表代表“灰色灰色”带。带。 九、尿标本九、尿标本 (一一)尿标本的采集尿标本的采集
85、见表见表3 标标本本类类型型采集指南采集指南装置和装置和/或最或最小量小量运运转时间转时间和温和温度度储储存存时间时间重复采重复采样样限制限制说说 明明尿尿女性女性, ,中段中段男性，中男性，中段段直直导导管管导导管内管内1.1.用肥皂和水完全清洗用肥皂和水完全清洗尿道区域尿道区域2.2.用湿用湿纱纱布布垫垫漂洗漂洗3.3.分开阴唇，开始排泄分开阴唇，开始排泄4.4.排出几毫升后，不停排出几毫升后，不停止尿流，采集中段尿止尿流，采集中段尿1.1.用肥皂和水清洗阴茎用肥皂和水清洗阴茎头头2.2.用湿用湿纱纱布布垫垫漂洗漂洗3.3.回回缩缩包皮，开始排泄包皮，开始排泄4.4.排出几毫升后，不停排出
86、几毫升后，不停止尿流，采集中段尿，止尿流，采集中段尿，用于用于细细菌培养菌培养1.1.用肥皂和水完全清洗用肥皂和水完全清洗尿道区域尿道区域2.2.用湿用湿纱纱布布垫垫漂洗漂洗3.3.将将导导管无菌插入膀胱管无菌插入膀胱4.4.流流过过15ml15ml尿之后，采尿之后，采集尿入无菌容器内集尿入无菌容器内1.1.用用70%70%乙醇消毒乙醇消毒导导管采管采集部分集部分2.2.用用针头针头和注射器无菌和注射器无菌采集采集5-10ml5-10ml尿尿3.3.转转入无菌管或容器内入无菌管或容器内无菌广口容器，无菌广口容器，1ml1ml，或尿，或尿转转运运试剂试剂盒盒无菌无菌宽宽口容器口容器, 1ml,
87、1ml，或，或尿尿转转运运试剂试剂盒盒无菌防漏容器无菌防漏容器无菌防漏容器无菌防漏容器未防腐未防腐: :2h, RT2h, RT防腐：防腐：24h, RT24h, RT未防腐未防腐: :2h, RT2h, RT防腐：防腐：24h, RT24h, RT未防腐未防腐: :2h, RT2h, RT防腐：防腐：24h, RT24h, RT未防腐未防腐: :2h, RT2h, RT防腐：防腐：24h, RT24h, RT24h 424h 424h 424h 424h 424h 424h 424h 41/d1/d1/d1/d1/d1/d1/d1/d女性尿中的衣原体抗原女性尿中的衣原体抗原检检测测的敏感性可
88、能的敏感性可能较较男性低。男性低。尿尿对细对细胞系有毒，因而不胞系有毒，因而不能用于衣原体培养之能用于衣原体培养之标标本。本。中段尿部分用于中段尿部分用于细细菌培养菌培养首段尿用于衣原体的探首段尿用于衣原体的探针针和抗原和抗原检测检测。收集探。收集探针针和和抗原抗原检测检测的的标标本待最后一本待最后一次排尿至少次排尿至少2h2h后后该该程序可能程序可能导导致尿道菌落致尿道菌落进进入膀胱并增加医源性感入膀胱并增加医源性感染的危染的危险险留管的病人膀胱内留管的病人膀胱内总总是有是有细细菌的。除非他菌的。除非他们们有症状，有症状，不要从不要从这这些病人收集尿些病人收集尿标标本本 尿标本应立即送往实验
89、室，不应超过尿标本应立即送往实验室，不应超过2h。冷藏不能。冷藏不能超过超过24h。含硼酸的运送试管室温。含硼酸的运送试管室温24h可起到稳定细菌数可起到稳定细菌数的作用。的作用。 第一次空腹尿是最好的，因大多数病例细菌已在膀第一次空腹尿是最好的，因大多数病例细菌已在膀胱内增殖了数小时。胱内增殖了数小时。 清洁尿道周围区域，并未显示出现进尿培养的质量，清洁尿道周围区域，并未显示出现进尿培养的质量，因而不推荐。因而不推荐。(二二)尿标本的筛选尿标本的筛选 尿培养为最普通的试验，但大多为阴性，即检测不到病尿培养为最普通的试验，但大多为阴性，即检测不到病原菌，故采用筛选方法。原菌，故采用筛选方法。1
90、显微镜检查显微镜检查 每个油浸镜视野每个油浸镜视野(100物镜物镜)中有中有2个或以上相同形态类个或以上相同形态类型的菌，对应于培养中型的菌，对应于培养中100000或更多。革兰染色镜检经济、迅或更多。革兰染色镜检经济、迅速，但花费劳力和要求训练有素的技术人员。速，但花费劳力和要求训练有素的技术人员。2浸渍试纸条检测白细胞酯酶和亚硝酸盐浸渍试纸条检测白细胞酯酶和亚硝酸盐 该试验是基于中性粒细胞产生白细胞酯酶和细菌产生硝该试验是基于中性粒细胞产生白细胞酯酶和细菌产生硝酸盐还原酶。该法快速、廉价和操作简单，但某些病人敏感酸盐还原酶。该法快速、廉价和操作简单，但某些病人敏感性低。性低。 浸渍条假阴性
91、的原因是频繁排尿稀释了尿中白细胞浸渍条假阴性的原因是频繁排尿稀释了尿中白细胞酯酶和亚硝酸盐的浓度，肠球菌和其它不常见的尿道病酯酶和亚硝酸盐的浓度，肠球菌和其它不常见的尿道病原菌不产生硝酸盐还原酶，许多无症状菌尿病人尿中没原菌不产生硝酸盐还原酶，许多无症状菌尿病人尿中没有意义的白细胞数量。有意义的白细胞数量。 尽管如此而已，应建议门诊病人筛选规则是白细胞尽管如此而已，应建议门诊病人筛选规则是白细胞酯酶和硝酸盐还原酶是阳性的，则培养，如果阴性则不酯酶和硝酸盐还原酶是阳性的，则培养，如果阴性则不培养。该筛选最好是在有症状病人、糖尿病病人和培养。该筛选最好是在有症状病人、糖尿病病人和60岁岁以上的人中
92、进行。以上的人中进行。 此外，还有数种筛选系统，都是以此外，还有数种筛选系统，都是以104CFU/ml为界线。为界线。 (三三)尿的定量培养尿的定量培养 用经过校正的接种环接种用经过校正的接种环接种0.01或或0.001ml标本，通常标本，通常是羊血和是羊血和Mac Conkey琼是。先从平板顶到底划一条线，琼是。先从平板顶到底划一条线，再垂于该线来回划线，使尿布满个平板，以便菌落计再垂于该线来回划线，使尿布满个平板，以便菌落计数简单。数简单。 注意接种时环垂直插入尿中，深度刚好盖住环，注意接种时环垂直插入尿中，深度刚好盖住环，使尿液充满环，不能有气泡。使尿液充满环，不能有气泡。 尿培养尿培养
93、3548h。虽然大多数菌过夜生长，但生长。虽然大多数菌过夜生长，但生长慢的和被存在的抗微生物制剂抑制的菌过夜可能不出慢的和被存在的抗微生物制剂抑制的菌过夜可能不出现。现。(四四)培养结果解释培养结果解释 尿道以上的尿路在健康人是无菌，但尿道常有不尿道以上的尿路在健康人是无菌，但尿道常有不同的菌定居。因此，中段尿在通过尿道时变为污染。同的菌定居。因此，中段尿在通过尿道时变为污染。区别共生菌和可能病原菌通过定量培养区别。细菌计区别共生菌和可能病原菌通过定量培养区别。细菌计数指数指“有意义有意义”的菌尿的菌尿(即分离菌可能是病原菌即分离菌可能是病原菌)随宿随宿主和感染类型变化。表主和感染类型变化。表
94、11总结了临床上有意义的计数。总结了临床上有意义的计数。表表11尿培养结果的解释尿培养结果的解释 尿尿标标本和病人本和病人可能有意可能有意义义可能无意可能无意义义其它提示分离有意其它提示分离有意义义的的资资料料中段尿，女性中段尿，女性膀胱炎膀胱炎10102 2CFU/mlCFU/ml可能病原菌，可能病原菌，尿尿LELE阳性阳性可能病原菌数可能病原菌数污污染菌数染菌数中段尿，女性中段尿，女性肾肾盂盂肾肾炎炎10105 5CFU/mlCFU/ml可能病原菌，可能病原菌，尿尿LELE阳性阳性可能病原菌数可能病原菌数污污染菌群量染菌群量革革兰兰染色染色证证明在白明在白细细胞和胞和/ /或管型内有或管型
95、内有可能病原菌可能病原菌中段尿，无症中段尿，无症状菌尿状菌尿10105 5CFU/mlCFU/ml可能病原菌，可能病原菌，尿尿LELE通常通常为为阴性阴性1010103 3CFU/mlCFU/ml可能病原菌，可能病原菌，尿尿LELE阳性阳性1010102 2CFU/mlCFU/ml可能病原菌，可能病原菌，尿尿LELE在有症状病人在有症状病人为为阳阳性性1010102 2CFU/mlCFU/ml可能病原菌可能病原菌( (可存在多种病原菌可存在多种病原菌) )在无症状病人在无症状病人检检出菌尿，尿出菌尿，尿LELE阳性或阴性阳性或阴性无培养理由，除非无培养理由，除非病人有症状病人有症状表表11 尿
96、培养结果的解释尿培养结果的解释 (五五)提供快速诊断和治疗的措施提供快速诊断和治疗的措施1严重的尿路感染通常涉及肾严重的尿路感染通常涉及肾(肾盂肾炎肾盂肾炎)和导致菌血和导致菌血 症，可进行血培养。症，可进行血培养。2尿革兰染色尿革兰染色 尿革兰染色可立即提供尿质量的指征和可能污染菌的初尿革兰染色可立即提供尿质量的指征和可能污染菌的初步鉴定。会有大量鳞状上皮细胞的标本是严重污染标本。步鉴定。会有大量鳞状上皮细胞的标本是严重污染标本。3在抗微生物抑制剂抑制真正病原菌生长之前立即收集在抗微生物抑制剂抑制真正病原菌生长之前立即收集 新鲜标本。新鲜标本。4革兰染色检查培养后可能病原菌可能进一步证实经验革兰染色检查培养后可能病原菌可能进一步证实经验 治疗是正确的还是根据有意义的病原菌治疗是正确的还是根据有意义的病原菌(如金葡如金葡)建议改建议改 变治疗药物。变治疗药物。
