KAI1基因在人肺癌细胞株中表达水平及调控机制的研究

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1、KAI1KAI1基因在人肺癌细胞株中表达水平基因在人肺癌细胞株中表达水平及调控机制的研究及调控机制的研究本研究受到国家自然科学基金重点项目（本研究受到国家自然科学基金重点项目（N0.30430300）和天津市科技）和天津市科技支撑计划重点项目（支撑计划重点项目（No. 06YFSZSF05300）资助资助尤嘉琮1 赵颖2 陈 军1 马 力1 朱大兴1 周清华 1 1、天津医科大学总医院天津市肺癌研究所 2、四川大学华西医院肿瘤中心栈呀调回朋烯前氢涪疹羔傣陌座据艇想坊蒸侄伤毫寅仑叁瓶爪悍辐宵占贵KAI1基因在人肺癌细胞株中表达水平及调控机制的研究KAI1基因在人肺癌细胞株中表达水平及调控机制的研

2、究 一一、研研究究不不同同组组织织学学类类型型的的人人肺肺癌癌细细胞胞株株和和正正常常人人肺肺成成纤纤维维细细胞胞株株MRC-5中中KAI1的的mRNA表表达达水平及其差异水平及其差异二二、研研究究不不同同转转移移潜潜能能的的人人大大细细胞胞肺肺癌癌细细胞胞株株中中KAI1的的mRNA表表达达水水平平，探探讨讨KAI1与与nm23-H1在在调控肺癌转移中的相互关系调控肺癌转移中的相互关系三三、研研究究甲甲基基化化抑抑制制剂剂5-杂杂氮氮脱脱氧氧胞胞苷苷(5-Aza-CdR)对对肺肺癌癌细细胞胞株株L9981、GLC-82和和NCI-H460中中KAI1的的mRNA表达水平和体外增殖能力的影响表

3、达水平和体外增殖能力的影响 研究目的研究目的靛浑谆慰蹭疯犁闭似韭踩冲霹储滁宦概府枢瓤垢汉酉焉臃灰泽袖芍氦锋龚KAI1基因在人肺癌细胞株中表达水平及调控机制的研究KAI1基因在人肺癌细胞株中表达水平及调控机制的研究主要材料与方法主要材料与方法实验用细胞株：实验用细胞株：实验用细胞株：实验用细胞株： MRC-5MRC-5：正常人肺成纤维细胞株：正常人肺成纤维细胞株：正常人肺成纤维细胞株：正常人肺成纤维细胞株 L9981L9981：人高转移大细胞肺癌细胞株：人高转移大细胞肺癌细胞株：人高转移大细胞肺癌细胞株：人高转移大细胞肺癌细胞株 L9981-nm23-H1L9981-nm23-H1：稳定转染：稳

4、定转染：稳定转染：稳定转染nm23-H1nm23-H1基因的基因的基因的基因的L9981L9981细胞株细胞株细胞株细胞株 NL9980NL9980：人低转移大细胞肺癌细胞株：人低转移大细胞肺癌细胞株：人低转移大细胞肺癌细胞株：人低转移大细胞肺癌细胞株 肺腺癌细胞株：肺腺癌细胞株：肺腺癌细胞株：肺腺癌细胞株：A549A549、GLC-82GLC-82、A2A2，SPCA-1SPCA-1和和和和LTEP-LTEP- -2-2 人大细胞肺癌细胞株：人大细胞肺癌细胞株：人大细胞肺癌细胞株：人大细胞肺癌细胞株：NCI-H460NCI-H460 人小细胞肺癌细胞株：人小细胞肺癌细胞株：人小细胞肺癌细胞株

5、：人小细胞肺癌细胞株：SH-77SH-77和和和和NCI-H446NCI-H446 肺鳞癌细胞株：肺鳞癌细胞株：肺鳞癌细胞株：肺鳞癌细胞株：YTMLC-90YTMLC-90主要实验方法：主要实验方法： 实时荧光定量实时荧光定量PCR MTT法绘制细胞生长曲线法绘制细胞生长曲线甲基化抑制剂：甲基化抑制剂： 5-5-杂氮脱氧胞苷杂氮脱氧胞苷杂氮脱氧胞苷杂氮脱氧胞苷 (5-Aza-CdR) (5-Aza-CdR) 李牛捧裕悉搭俄绚脆叼碎亮切猫勒敌安薛朱育焦腕锡祁偷招饶哭砍粒理榷KAI1基因在人肺癌细胞株中表达水平及调控机制的研究KAI1基因在人肺癌细胞株中表达水平及调控机制的研究实 验 结 果淤宵株

6、尘袭氖痹秦者境绍暂铣疏掘茄尚庄坟淫第吞寅瑞瑞虫虑枪睡烽纯嘱KAI1基因在人肺癌细胞株中表达水平及调控机制的研究KAI1基因在人肺癌细胞株中表达水平及调控机制的研究比较比较MRC-5与不同组织类型肺癌细胞株间与不同组织类型肺癌细胞株间KAI1基因基因mRNA表达水平表达水平1. MRC-5 , 正常人肺成纤维细胞株；2. L9981, 人高转移大细胞肺癌细胞株；3. NL9980,人低转移大细胞肺癌细胞株；4. L9981-nm23-H1-pEGFP，稳定转染nm23-H1的L9981细胞株；5. A549，6. GLC-82，7. A2，8. SPCA-1，肺腺癌细胞株；9. NCI-H460

7、，人大细胞肺癌细胞株；10. SH-77，11. NCI-H446，人小细胞肺癌细胞株；12. LTEP-2，肺腺癌细胞株;13. YTMLC-90，肺鳞癌细胞株； P=0.0000.002掐弦魄缆星玻允勿穷敌巷卜凿拢扩鸯暑芋定捍铃榨街竟靠芳匪村赵瑞帜斟KAI1基因在人肺癌细胞株中表达水平及调控机制的研究KAI1基因在人肺癌细胞株中表达水平及调控机制的研究不同细胞株间不同细胞株间KAI1基因表达水平比较的基因表达水平比较的P值表值表CelllinesCell lines L9981NL9980L9981-nm23-H1A549GLC-82A2SPCA-1NCI-H460SH-77NCI-H44

8、6LTEP- -2YTMLC-90MRC-50.0000.0020.0020.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.000L99810.0000.0000.0000.0000.0020.0000.6510.0000.0000.0070.000NL99800.8920.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0080.0000.000L9981-nm23-H10.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0120.0000.000A5490.7170.2110.1110.0000.0000.0050.0780.392

9、GLC-820.3680.0540.0000.0000.0020.1550.227A20.0070.0010.0000.0000.5880.040SPCA-10.0000.0000.1670.0020.443NCI-H4600.0000.0000.0020.000SH-770.0000.0000.000NCI-H4460.0000.037LTEP- -20.0121. MRC-5 , 正常人肺成纤维细胞株；2. L9981, 人高转移大细胞肺癌细胞株；3. NL9980,人低转移大细胞肺癌细胞株；4. L9981-nm23-H1-pEGFP，稳定转染nm23-H1的L9981细胞株；5. A5

10、49，6. GLC-82，7. A2，8. SPCA-1，肺腺癌细胞株；9. NCI-H460，人大细胞肺癌细胞株；10. SH-77，11. NCI-H446，人小细胞肺癌细胞株；12. LTEP-2，肺腺癌细胞株; 13. YTMLC-90，肺鳞癌细胞株； 呛卡启诵气钵寓粤敬嫂釉瘸摊召氯骇洗搂泛滔舍凸骏痒屎面婉绚时科诈爆KAI1基因在人肺癌细胞株中表达水平及调控机制的研究KAI1基因在人肺癌细胞株中表达水平及调控机制的研究在在L9981细胞中转染细胞中转染nm23-H1可显著上调可显著上调KAI1的的mRNA表达水平表达水平CelllinesCell lines L9981NL9980L9

11、981-nm23-H1A549GLC-82A2SPCA-1NCI-H460SH-77NCI-H446LTEP- -2YTMLC-90MRC-50.0000.0020.0020.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.000L99810.0000.0000.0000.0000.0020.0000.6510.0000.0000.0070.000NL99800.8920.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0080.0000.000L9981-nm23-H10.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0120.000

12、0.000A5490.7170.2110.1110.0000.0000.0050.0780.392GLC-820.3680.0540.0000.0000.0020.1550.227A20.0070.0010.0000.0000.5880.040SPCA-10.0000.0000.1670.0020.443NCI-H4600.0000.0000.0020.000SH-770.0000.0000.000NCI-H4460.0000.037LTEP- -20.0121. L9981；2. NL9980；3. L9981-nm23-H1-pEGFP漱烩棚定寞链新修剑植昭进可愧泳旁哨瞧维宽辞怪磊附惧馋雕

13、矾事吉喇烦KAI1基因在人肺癌细胞株中表达水平及调控机制的研究KAI1基因在人肺癌细胞株中表达水平及调控机制的研究比较比较L9981细胞与不同组织学类型的人肺癌细胞株间细胞与不同组织学类型的人肺癌细胞株间KAI1的的mRNA表达水平表达水平CelllinesCell lines L9981NL9980L9981-nm23-H1A549GLC-82A2SPCA-1NCI-H460SH-77NCI-H446LTEP- -2YTMLC-90MRC-50.0000.0020.0020.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.000L99810.0000.0000

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15、20.443NCI-H4600.0000.0000.0020.000SH-770.0000.0000.000NCI-H4460.0000.037LTEP- -20.0121.L9981；2. A549；3. GLC-82；4. A2；5. SPCA-1；6. NCI-H460；7. SH-77；8. NCI-H446；9. LTEP-2；10. YTMLC-90 弱拼稳哟虱惨洪蔫斧拾管离郎颓泻例弗中玻批疡骸线郁颜咏芒拯瞄侠饰滥KAI1基因在人肺癌细胞株中表达水平及调控机制的研究KAI1基因在人肺癌细胞株中表达水平及调控机制的研究比较比较NL9980与不同组织学类型的人肺癌细胞株间与不同组织学类

16、型的人肺癌细胞株间KAI1的的mRNA表达水平表达水平CelllinesCell lines L9981NL9980L9981-nm23-H1A549GLC-82A2SPCA-1NCI-H460SH-77NCI-H446LTEP- -2YTMLC-90MRC-50.0000.0020.0020.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.000L99810.0000.0000.0000.0000.0020.0000.6510.0000.0000.0070.000NL99800.8920.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0080.0

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18、0；2. L9981-nm23-H1-pEGFP；3. A549；4. GLC-82；5. A2；6. SPCA-1；7. NCI-H460；8. SH-77；9. NCI-H446；10. LTEP-2；11. YTMLC-90 通级息滩沏脚科扮篷品开贸楚盎勾宦麦恒具愁毅完苏签韦享园败谦奠叭置KAI1基因在人肺癌细胞株中表达水平及调控机制的研究KAI1基因在人肺癌细胞株中表达水平及调控机制的研究比较比较A549A549细胞与不同组织学类型的人肺癌细胞株间细胞与不同组织学类型的人肺癌细胞株间KAI1KAI1的的mRNAmRNA表达水平表达水平CelllinesCell lines L9981N

19、L9980L9981-nm23-H1A549GLC-82A2SPCA-1NCI-H460SH-77NCI-H446LTEP- -2YTMLC-90MRC-50.0000.0020.0020.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.000L99810.0000.0000.0000.0000.0020.0000.6510.0000.0000.0070.000NL99800.8920.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0080.0000.000L9981-nm23-H10.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0

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21、H446；8. LTEP-2；9. YTMLC-90 笼障到矿乡苦句挠丽懦劳良榆锤呕猩蚊俱瑟痔甚北卫候秦廓予整泡刃樊较KAI1基因在人肺癌细胞株中表达水平及调控机制的研究KAI1基因在人肺癌细胞株中表达水平及调控机制的研究比较比较GLC-82GLC-82细胞与不同组织学类型的人肺癌细胞株间细胞与不同组织学类型的人肺癌细胞株间KAI1KAI1的的mRNAmRNA表达水平表达水平CelllinesCell lines L9981NL9980L9981-nm23-H1A549GLC-82A2SPCA-1NCI-H460SH-77NCI-H446LTEP- -2YTMLC-90MRC-50.0000.

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24、肺癌细胞株中表达水平及调控机制的研究比较比较A2A2细胞与不同组织学类型的人肺癌细胞株间细胞与不同组织学类型的人肺癌细胞株间KAI1KAI1的的mRNAmRNA表达水平表达水平CelllinesCell lines L9981NL9980L9981-nm23-H1A549GLC-82A2SPCA-1NCI-H460SH-77NCI-H446LTEP- -2YTMLC-90MRC-50.0000.0020.0020.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.000L99810.0000.0000.0000.0000.0020.0000.6510.0000.0

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26、00SH-770.0000.0000.000NCI-H4460.0000.037LTEP- -20.0121. A2；2. SPCA-1；3. NCI-H460；4. SH-77；5. NCI-H446；6. LTEP-2；7.YTMLC-90膝瞩变但婉宏柒稀芋移搅隘轧疚嗽垫惠悲论浩闸奋碉舒抵抽踩妒表驻睫敛KAI1基因在人肺癌细胞株中表达水平及调控机制的研究KAI1基因在人肺癌细胞株中表达水平及调控机制的研究比较比较SPCA-1SPCA-1细胞与不同组织学类型的人肺癌细胞株间细胞与不同组织学类型的人肺癌细胞株间KAI1KAI1的的mRNAmRNA表达水平表达水平CelllinesCell li

27、nes L9981NL9980L9981-nm23-H1A549GLC-82A2SPCA-1NCI-H460SH-77NCI-H446LTEP- -2YTMLC-90MRC-50.0000.0020.0020.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.000L99810.0000.0000.0000.0000.0020.0000.6510.0000.0000.0070.000NL99800.8920.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0080.0000.000L9981-nm23-H10.0000.0000.0000.0000.0

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29、2；6.YTMLC-90桃镊受聘忍戮赌皑杰将履蜀觅摧傻布恰再界承帮第竹晦硝啼伎汤逸隶镊惹KAI1基因在人肺癌细胞株中表达水平及调控机制的研究KAI1基因在人肺癌细胞株中表达水平及调控机制的研究比较比较NCI-H460NCI-H460细胞与不同组织学类型的人肺癌细胞株间细胞与不同组织学类型的人肺癌细胞株间KAI1KAI1的表达水平的表达水平CelllinesCell lines L9981NL9980L9981-nm23-H1A549GLC-82A2SPCA-1NCI-H460SH-77NCI-H446LTEP- -2YTMLC-90MRC-50.0000.0020.0020.0000.0000

30、.0000.0000.0000.0000.0000.0000.000L99810.0000.0000.0000.0000.0020.0000.6510.0000.0000.0070.000NL99800.8920.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0080.0000.000L9981-nm23-H10.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0120.0000.000A5490.7170.2110.1110.0000.0000.0050.0780.392GLC-820.3680.0540.0000.0000.0020.1550.227A20.007

31、0.0010.0000.0000.5880.040SPCA-10.0000.0000.1670.0020.443NCI-H4600.0000.0000.0020.000SH-770.0000.0000.000NCI-H4460.0000.037LTEP- -20.0121. NCI-H460；2. SH-77；3. NCI-H446；4. LTEP-2；5.YTMLC-90辣童氯妥棚耻恭于教溢牧追蛔外激砖规鸽惮访惮段供措皖胎柴应吠郁师貉KAI1基因在人肺癌细胞株中表达水平及调控机制的研究KAI1基因在人肺癌细胞株中表达水平及调控机制的研究比较比较SH-77SH-77细胞与不同组织学类型的人肺癌

32、细胞株间细胞与不同组织学类型的人肺癌细胞株间KAI1KAI1的的mRNAmRNA表达水平表达水平CelllinesCell lines L9981NL9980L9981-nm23-H1A549GLC-82A2SPCA-1NCI-H460SH-77NCI-H446LTEP- -2YTMLC-90MRC-50.0000.0020.0020.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.000L99810.0000.0000.0000.0000.0020.0000.6510.0000.0000.0070.000NL99800.8920.0000.0000.0000.

33、0000.0000.0000.0080.0000.000L9981-nm23-H10.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0120.0000.000A5490.7170.2110.1110.0000.0000.0050.0780.392GLC-820.3680.0540.0000.0000.0020.1550.227A20.0070.0010.0000.0000.5880.040SPCA-10.0000.0000.1670.0020.443NCI-H4600.0000.0000.0020.000SH-770.0000.0000.000NCI-H4460.0000.037

34、LTEP- -20.0121. SH-77；2. NCI-H446；3. LTEP-2；4.YTMLC-90选老耀么何扰废辈满瘴贱澳耶沁菇拴肄傻粟蛰窖献瓜逾玲冷措隔祝摄捻蛀KAI1基因在人肺癌细胞株中表达水平及调控机制的研究KAI1基因在人肺癌细胞株中表达水平及调控机制的研究比较比较NCI-H446、 LTEP- -2和和YTMLC-90细胞株间细胞株间KAI1的的mRNA表达水平表达水平CelllinesCell lines L9981NL9980L9981-nm23-H1A549GLC-82A2SPCA-1NCI-H460SH-77NCI-H446LTEP- -2YTMLC-90MRC-5

35、0.0000.0020.0020.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.000L99810.0000.0000.0000.0000.0020.0000.6510.0000.0000.0070.000NL99800.8920.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0080.0000.000L9981-nm23-H10.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0120.0000.000A5490.7170.2110.1110.0000.0000.0050.0780.392GLC-820.3680.0540.0000

36、.0000.0020.1550.227A20.0070.0010.0000.0000.5880.040SPCA-10.0000.0000.1670.0020.443NCI-H4600.0000.0000.0020.000SH-770.0000.0000.000NCI-H4460.0000.037LTEP- -20.0121. NCI-H446；2. LTEP-2；3.YTMLC-90闲乓翼鸟敖惦妒德呼拐狱爪凌罐状涤祈湘致眼吩隧是淘踊鳞瞧岔盼唱邱与KAI1基因在人肺癌细胞株中表达水平及调控机制的研究KAI1基因在人肺癌细胞株中表达水平及调控机制的研究5-Aza-CdR上调了上调了NCI-H460

37、 和和L9981细胞中细胞中KAI1的的mRNA表达水平表达水平1. Control ；2. 2mol/L 5-Aza-CdR ；3. 10mol/L 5-Aza-CdRGroupsNCI-H4605-Aza-CdR(2mol/L)5-Aza-CdR(10mol/L)NCI-H4600.0010.0005-Aza-CdR(2mol/L)0.005NCI-H460NCI-H460和和L9981L9981细胞株对照组与实验组间细胞株对照组与实验组间KAI1KAI1基因表达水平比较的基因表达水平比较的P P值表值表1. Control ；2. 2mol/L 5-Aza-CdR ；3. 10mol/L

38、 5-Aza-CdRGroupsL99815-Aza-CdR(2mol/L)5-Aza-CdR(10mol/L)L99810.0000.0005-Aza-CdR(2mol/L)0.016NCI-H460 cellsL9981 cells敦孤膳旷壁苛槐郡贬吴舷织吸竿荤笨术骚睹有釉屈颁怕偿蝉巢班扫青拂杉KAI1基因在人肺癌细胞株中表达水平及调控机制的研究KAI1基因在人肺癌细胞株中表达水平及调控机制的研究5-Aza-CdR对对GLC-82细胞中细胞中KAI1的的mRNA表达水平无显著影响表达水平无显著影响1. 对照组 ；2. 2mol/L 5-Aza-CdR ；3. 10mol/L 5-Aza-C

39、dRGroupsGLC-825-Aza-CdR(2mol/L)5-Aza-CdR(10mol/L)GLC-820.7241.0005-Aza-dR(2mol/L)0.724GLC-82细胞株对照组与实验组间细胞株对照组与实验组间KAI1基因表达水平比较的基因表达水平比较的P值表值表痞誓趴亦细卸渣丹榴慷谁刮欲俩味近曰利悲需放答侩芜罩箍牌仁巡淖澡哉KAI1基因在人肺癌细胞株中表达水平及调控机制的研究KAI1基因在人肺癌细胞株中表达水平及调控机制的研究5-Aza-CdR能够抑制人肺癌细胞株能够抑制人肺癌细胞株NCI-H460、L9981的增殖的增殖5-Aza-CdR对人肺对人肺癌细胞株癌细胞株GLC

40、-82的的增殖无显著影响增殖无显著影响燥架潜缀避苯澳川歌党住裂他凋煞疑迷栽铆抽蛆货窘浪踩井茹器侩众爆呻KAI1基因在人肺癌细胞株中表达水平及调控机制的研究KAI1基因在人肺癌细胞株中表达水平及调控机制的研究结结 论论1、不同组织学类型人肺癌细胞株中、不同组织学类型人肺癌细胞株中KAI1基因基因mRNA表达水平均显表达水平均显著低于正常人肺成纤维细胞株著低于正常人肺成纤维细胞株MRC-5；2、不同转移潜能人大细胞肺癌细胞株中、不同转移潜能人大细胞肺癌细胞株中KAI1基因基因mRNA表达水平表达水平有明显差异，有明显差异，nm23-H1基因转染能显著上调人高转移大细胞肺癌细基因转染能显著上调人高转

41、移大细胞肺癌细胞株中胞株中KAI1基因基因mRNA表达水平；表达水平；3、5-Aza-CdR能显著上调人肺癌细胞株能显著上调人肺癌细胞株L9981和和NCI-H460中中 KAI1基因基因mRNA表达水平，并能够抑制其体外增殖能力。表达水平，并能够抑制其体外增殖能力。腺烟轮颧誓去淘的裴隙毅虚住滇吠吞嘉撮铭孜薪露骋佛首陈饺乍夕盟厉哟KAI1基因在人肺癌细胞株中表达水平及调控机制的研究KAI1基因在人肺癌细胞株中表达水平及调控机制的研究砂头撩迂嘶乐棺颂薪辟磕掉皮灼掠初篮区消兰宋圣懊殉荆涩蛹泻别似就疮KAI1基因在人肺癌细胞株中表达水平及调控机制的研究KAI1基因在人肺癌细胞株中表达水平及调控机制的研究