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1、专题专题2 :2 :微生物的培养与应用微生物的培养与应用微生物包括微生物包括原核生物界原核生物界原生生物界原生生物界真菌界真菌界病毒界病毒界一、基础知识：一、基础知识：(一一)微生物微生物是一切肉眼看不见或是一切肉眼看不见或看不清楚的微看不清楚的微小生物的总称小生物的总称病病毒：动物病毒、植物病毒毒：动物病毒、植物病毒、细菌病毒、细菌病毒病毒病毒SARS冠状病毒、冠状病毒、禽流感病毒禽流感病毒朊病毒（蛋白质病毒）朊病毒（蛋白质病毒）病毒的增殖：病毒的增殖：常见的三种细菌典型形态常见的三种细菌典型形态球菌、杆菌、弧菌球菌、杆菌、弧菌原原核核生物：一藻二菌三体生物：一藻二菌三体细菌的营养类型细菌的
2、营养类型n根据细菌所利用的根据细菌所利用的能源和碳源能源和碳源的不同，的不同，将细菌分为两大营养类型。将细菌分为两大营养类型。n自养菌自养菌: :n异养菌异养菌: : 腐生菌、寄生菌腐生菌、寄生菌光能自养型光能自养型:光合细菌光合细菌化能自养型化能自养型:硝化细菌硝化细菌,铁细菌铁细菌,硫细菌硫细菌一、细菌一、细菌基本结构：基本结构：特殊结构：特殊结构：细胞壁、细胞膜、细胞质、拟核细胞壁、细胞膜、细胞质、拟核荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢等荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢等细胞壁细胞壁：肽聚糖；与细菌的致病能力：肽聚糖；与细菌的致病能力有有关；关；溶溶菌酶作用对象菌酶作用对象。荚膜荚膜：细胞壁外多糖类物质细胞壁
3、外多糖类物质或或称为称为粘粘液层液层；荚膜与致病荚膜与致病菌的菌的致致病力病力有关。（如有关。（如S型肺炎双球菌）型肺炎双球菌）鞭毛鞭毛：主要用于运动，数目多少不一。：主要用于运动，数目多少不一。1.细菌的结构细菌的结构纤毛纤毛：比鞭毛短、直、细，主要用于：比鞭毛短、直、细，主要用于细菌之间的粘附或附着于宿主细胞细菌之间的粘附或附着于宿主细胞。菌菌毛毛：数量少，：数量少，参与细菌的接合，也是噬参与细菌的接合，也是噬菌体入侵的受体。菌体入侵的受体。质粒质粒：环状：环状DNA小分子，通过接合作小分子，通过接合作用，质粒可以在不同细胞之间迁移用，质粒可以在不同细胞之间迁移，使，使质粒上的耐药性基因可
4、以在细菌之间传质粒上的耐药性基因可以在细菌之间传播，质粒可用作基因工程的载体。播，质粒可用作基因工程的载体。细胞膜、细胞膜、拟核、拟核、核糖体核糖体3.细菌的生殖方细菌的生殖方式：式：2.细菌的形细菌的形态：态：4.细菌的休眠体细菌的休眠体芽孢芽孢杆菌、球菌、弧菌、杆菌、球菌、弧菌、螺旋菌螺旋菌分裂生殖分裂生殖 有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做个椭圆形的休眠体，叫做芽孢芽孢。芽孢的壁很厚，。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力抗力。芽。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环
5、境孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌以萌发，形成一个细菌. .芽孢芽孢休眠体，不是繁殖体休眠体，不是繁殖体孢子孢子生殖细胞生殖细胞5.细菌的群体特细菌的群体特征征n由由单个微生物单个微生物在适宜的固体培养基表面在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度后，形成或内部生长、繁殖到一定程度后，形成肉眼可见的、有一定形态结构的肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞子细胞生长群体生长群体叫叫菌落菌落。n菌落是鉴定菌种菌落是鉴定菌种的重的重要要依据依据。菌落菌落菌菌落落的的大大小小、形形状状、边边缘缘状状
6、况况、质质地地、光光泽泽、颜颜色色及及透透明明度度等等是是微微生生物物分分类类、鉴定鉴定的重要依据。的重要依据。菌菌苔苔：固固体体培培养养基基表表面面众众多多菌菌落落连连成成一片，呈片状一片，呈片状，这就是，这就是菌苔。菌苔。平平板板：即即培培养养平平板板，指指盛盛有有固固体体培培养养基的平皿基的平皿各种类各种类型的细型的细菌菌落菌菌落二、放线菌二、放线菌1 1、结构：、结构：单细胞原核单细胞原核分支状的菌丝（基内菌丝、气生菌分支状的菌丝（基内菌丝、气生菌丝）丝）如：链霉素、土霉素、四环素、如：链霉素、土霉素、四环素、氯霉素、红霉素、庆大霉素氯霉素、红霉素、庆大霉素 微生物中发现了几千种抗生微
7、生物中发现了几千种抗生素，素，其其中中2/32/3是由是由放线菌产放线菌产生的。生的。应用应用: :三、真菌（真核细胞）三、真菌（真核细胞）1.单细胞真菌单细胞真菌酵母菌：酵母菌：酵酵母菌、霉菌、大型真菌（蘑菇、木耳等）母菌、霉菌、大型真菌（蘑菇、木耳等）三、真菌（真核细胞）三、真菌（真核细胞）2.丝状真菌丝状真菌霉菌霉菌直立菌丝直立菌丝 营养菌丝营养菌丝腐生生活腐生生活各种类型的各种类型的霉菌菌落霉菌菌落酵母菌和霉菌酵母菌和霉菌青霉青霉3.大型真菌大型真菌各各种种类类型型的的放放线线菌菌菌菌落落各各种种类类型型的的酵酵母母菌菌菌菌落落 n n四大类微生物区分要点四大类微生物区分要点n n菌落
8、形态：菌落形态：1.1.若菌落表面湿润若菌落表面湿润薄而小薄而小细菌细菌厚而大厚而大酵母菌酵母菌2.2.若菌落表面干燥若菌落表面干燥密而小密而小放线菌放线菌松而大松而大霉菌霉菌 细菌：湿润，粘稠，易挑起细菌：湿润，粘稠，易挑起放线菌：干燥，多皱，难挑起，菌落较小，多放线菌：干燥，多皱，难挑起，菌落较小，多有色素有色素酵母菌：湿润，粘稠，易挑起，表面光华，酵母菌：湿润，粘稠，易挑起，表面光华，比细菌比细菌的菌的菌落大而厚落大而厚.霉菌：菌丝细长，菌落疏松，成绒毛状、蜘蛛霉菌：菌丝细长，菌落疏松，成绒毛状、蜘蛛网状、棉絮状，无固定大小，多有光泽，网状、棉絮状，无固定大小，多有光泽，不易挑起。不易挑
9、起。不同微生物菌落的特点不同微生物菌落的特点同类微生物的同类微生物的不同物不同物种，种，菌菌落的特点落的特点也不相同。也不相同。原生生物界：原生生物界：藻类、原生动物类、原生藻类、原生动物类、原生菌类菌类草履虫微微生生物物的的种种类类有细胞结构没有细胞结构原核生物原核生物（原核细胞构成）真核微生物真核微生物（真核细胞构成）真菌真菌原生原生生生物物病毒病毒微生物的共同特点微生物的共同特点（小、多、快、强、广小、多、快、强、广）n（1 1）体积小，面积大）体积小，面积大 （细胞以微米、（细胞以微米、纳米来计算）纳米来计算） n（2 2）吸收多，转化快）吸收多，转化快n（3 3）生长旺，繁殖快）生长
10、旺，繁殖快 如大肠杆菌如大肠杆菌n（4 4）适应强，易变异）适应强，易变异 如感冒病毒如感冒病毒n（5 5）分布广，种类多）分布广，种类多（二）培养基（二）培养基 人们按照微生物对营养物质的人们按照微生物对营养物质的不同需求，不同需求，配制出供其生长繁殖的配制出供其生长繁殖的营养营养基质。基质。按成分分按成分分按按功能功能分分按物理状按物理状态态分分培养基类型培养基类型合成培养基合成培养基天然培养基天然培养基基本培养基基本培养基选择培养基选择培养基鉴别培养基鉴别培养基固体培养基固体培养基液体培养基液体培养基半固体培养基半固体培养基分类：分类： 根据细胞生存所需物质的种类和数量，用根据细胞生存所
11、需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的。人工方法模拟合成的。 合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。 优点：优点：标准化生产，组分和含量相对固定标准化生产，组分和含量相对固定; ;成本低成本低 缺点：缺点： 缺少某些成分，不能完全满足体外缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长需要。细胞生长需要。 A A. .合成培养基合成培养基: :天然培养基与合成培养基天然培养基与合成培养基血清中含有：血清中含有：多种蛋白质（白蛋白、球蛋白、铁蛋白等）多种蛋白质（白蛋白、球蛋白、铁蛋白等）多种金属
12、离子；多种金属离子； 激素；激素；促贴附物质，如纤粘蛋白、冷析球蛋白、胶促贴附物质，如纤粘蛋白、冷析球蛋白、胶原蛋白等。原蛋白等。各种生长因子各种生长因子转移蛋白转移蛋白不明成分不明成分 人工合成培养基只能维持细胞生存，要想人工合成培养基只能维持细胞生存，要想使细胞生长和繁殖，还需补充一定量的天然使细胞生长和繁殖，还需补充一定量的天然培养基培养基（如血（如血清）。清）。半合成培养基半合成培养基 天然培养基天然培养基: :有血清、血浆、和组有血清、血浆、和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。优点：优点：营养成分丰富，培养效果好营养成分丰富，培养效果好缺点：缺点：来源受限
13、来源受限; ;成分复杂，成分复杂，影响对影响对某些实验产物的提取和实验结果的分某些实验产物的提取和实验结果的分析析; ;易发生支原体污染易发生支原体污染。B B. .天然培养基天然培养基：A.鉴别培养基鉴别培养基利用细菌分解糖类和蛋白质的能力及其代利用细菌分解糖类和蛋白质的能力及其代谢产物的不同，在培养基中谢产物的不同，在培养基中加入特定的作用底加入特定的作用底物和指示剂物和指示剂，观察细菌生长过程中分解底物所，观察细菌生长过程中分解底物所释放的不同产物，通过指示剂的反应不同来鉴释放的不同产物，通过指示剂的反应不同来鉴别细菌。例如别细菌。例如伊红伊红-美蓝培养基美蓝培养基鉴别水中鉴别水中大肠大
14、肠杆菌杆菌(带金属光泽深紫色菌落带金属光泽深紫色菌落）；又如：；又如：淀粉培淀粉培养基养基可通过培养基上产生淀粉水解圈，鉴别可通过培养基上产生淀粉水解圈，鉴别产产淀粉酶菌株淀粉酶菌株 鉴别培养基与选择培养基鉴别培养基与选择培养基B.选择培养基选择培养基在培养基中加入在培养基中加入抑制剂抑制剂，去抑制标本中，去抑制标本中的杂菌生长，有助于对所选择的细菌种类的的杂菌生长，有助于对所选择的细菌种类的生长。如：利用以生长。如：利用以纤维素或石蜡油纤维素或石蜡油为唯一碳为唯一碳源的选择培养基，可分离出源的选择培养基，可分离出分解纤维素或石分解纤维素或石蜡油的微生物。蜡油的微生物。又如：加入又如：加入青霉
15、素、四环素青霉素、四环素或链霉素或链霉素的选择培养基，可以的选择培养基，可以抑制细菌和放抑制细菌和放线菌线菌的生长，而将的生长，而将酵母菌和霉菌分离酵母菌和霉菌分离出来。出来。 鉴别培养基与选择培养基鉴别培养基与选择培养基 选择培养基加入青霉素的培养基加入青霉素的培养基: : 分离酵母菌、霉菌等真菌分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐的培养基加入高浓度食盐的培养基: : 分离金黄色葡萄球菌分离金黄色葡萄球菌不加氮源的无氮培养基不加氮源的无氮培养基: : 分离固氮菌分离固氮菌不不加有加有机物机物的培的培养基养基: : 分离自养型微分离自养型微生物生物A A. .液体培养基：液体培养基：表面生长表
16、面生长均匀混浊生长均匀混浊生长沉淀生长沉淀生长固体培养基与液体培养基固体培养基与液体培养基B固体培养基固体培养基：菌落，菌苔：菌落，菌苔B.半固体培养基半固体培养基：无动力无动力 有动力有动力( (弥散弥散) )( (是否运动是否运动) ) 培养培养基的用途基的用途液体培养基：液体培养基：固体培养基：固体培养基：半固体培养基：半固体培养基：天然培养基：天然培养基：合成培养基：合成培养基：选择培养基：选择培养基：鉴别培养基：鉴别培养基：增菌增菌、工业生产、工业生产分离、鉴定、计数、保藏分离、鉴定、计数、保藏观察运动、分类、计数观察运动、分类、计数工业生产工业生产分类、鉴定分类、鉴定分离出特定微生
17、物分离出特定微生物鉴别不同种类的微生物鉴别不同种类的微生物培培养基的成分养基的成分各种培养基的共有成分各种培养基的共有成分水水、碳源碳源、氮源氮源、 无机盐无机盐等等营养物质。营养物质。 不同微生物所需要的特殊成分不同微生物所需要的特殊成分微微生物生长对生物生长对pH、特殊营养物质特殊营养物质,以及以及氧氧气气、二氧化碳二氧化碳、渗透压渗透压等的要等的要求。求。例如例如:生长因子生长因子(即细菌生长必需，而自身不即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物能合成的化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶呤、嘧啶) （三）无菌技术（三）无菌技术1.1.无菌技术的概念无菌技术的概
18、念 无菌技术泛指在培养微生物的操无菌技术泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。作中，所有防止杂菌污染的方法。成功地培养微生物的关键。成功地培养微生物的关键。 （）（）消毒定义：消毒定义：利用利用较为较为温和的化学或物理方法温和的化学或物理方法，杀，杀死死大部份致病微生物大部份致病微生物的过程。的过程。 分为分为高程度消毒高程度消毒 、中程度消毒中程度消毒、低程低程度消毒度消毒三种方式。三种方式。2.2.消毒与灭菌的概念及两者的区别消毒与灭菌的概念及两者的区别 （2 2）灭菌的定义：）灭菌的定义：以以强烈的化学剂强烈的化学剂或或物理方法物理方法消灭消灭所所有微生物有微生物，包括所有细
19、菌的繁殖体、芽，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而达到完全无菌之过孢、霉菌及病毒，而达到完全无菌之过程。程。 灭菌与消毒技术是微生物有关工作灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。中最普通也是最重要的技术。1 1、煮沸消毒法煮沸消毒法:100100煮沸煮沸5-6min5-6min2 2、巴氏消毒法：、巴氏消毒法：70-75 70-75 下煮下煮30min30min 或或80 80 下煮下煮15min15min3 3、化学药剂消毒法、化学药剂消毒法: :用用70%70%酒精、新酒精、新 洁尔灭等进行皮肤消毒洁尔灭等进行皮肤消毒; ;氯气消毒氯气消毒水源水源4 4、紫外线消
20、毒、紫外线消毒(1)消毒的方法：消毒的方法：3.3.常用的消毒与灭菌的方法常用的消毒与灭菌的方法1 1、灼烧灭菌、灼烧灭菌(2)灭菌的方法：灭菌的方法：2 2、干热灭菌：、干热灭菌：160-170 160-170 下加热下加热1-1-2h2h。3 3、高压蒸汽灭菌：、高压蒸汽灭菌：100kPa100kPa、121 121 下维下维持持15-30min.15-30min. 最常用的灭菌方法是最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌，它可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某它可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体，同时可以基本保持培些微生物的休眠体，同时可以基本保持培养基的营养成分不被破
21、坏。养基的营养成分不被破坏。 有些玻璃器皿也可采用有些玻璃器皿也可采用高温干热灭高温干热灭菌菌。为了防止杂菌，特别是空气中的杂菌。为了防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞污染，试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用子塞口，通常采用棉花塞棉花塞，也可采用各种，也可采用各种金属、塑料及硅胶帽，它们金属、塑料及硅胶帽，它们只可只可让空气通让空气通过，而空气中的其他微生物不能通过，而空气中的其他微生物不能通过。过。培养基分装完毕以后，在管口上培养基分装完毕以后，在管口上加一个棉塞。棉塞能防止杂菌污加一个棉塞。棉塞能防止杂菌污染，保证通气良好，加棉塞时，染，保证通气良
22、好，加棉塞时，应使棉塞长度的应使棉塞长度的23在试管口内，在试管口内，如上图所示。如上图所示。加棉塞加棉塞分类分类定义定义方法方法灭菌法灭菌法杀杀灭一切微生灭一切微生物物物理法：热力、辐射、物理法：热力、辐射、微波、等离子体微波、等离子体化学法：醛类、烷化剂化学法：醛类、烷化剂高程度高程度消消毒法毒法杀灭一切致病杀灭一切致病微生物微生物紫外线紫外线、微波、热力、微波、热力、含含氯剂、臭氯剂、臭氧等氧等中程度中程度消消毒法毒法杀灭除芽孢外杀灭除芽孢外的致病微生物的致病微生物超声波、碘类、醇类、超声波、碘类、醇类、酚类酚类低程度低程度消消毒法毒法杀灭细菌繁殖杀灭细菌繁殖体、亲脂病毒体、亲脂病毒单链
23、季胺盐、双胍类、单链季胺盐、双胍类、中草药、金属离子中草药、金属离子无菌技术无菌技术 定义定义常用方法常用方法 微生物培养和组微生物培养和组培中的应用培中的应用消消毒毒使用较为温和使用较为温和的物理或化学的物理或化学方法杀死物体方法杀死物体表面或内部的表面或内部的部分微生物部分微生物煮沸煮沸玻璃仪器玻璃仪器紫外线紫外线实验室、操作台、实验室、操作台、衣物等衣物等酒精溶液酒精溶液手、外植体等手、外植体等次氯酸钠溶液次氯酸钠溶液等等外植体外植体灭灭菌菌使用强烈的理使用强烈的理化因素杀死物化因素杀死物体内外所有的体内外所有的微生物，包括微生物，包括芽孢和孢子芽孢和孢子高压蒸汽高压蒸汽培养基、玻璃仪器
24、、培养基、玻璃仪器、棉塞、牛皮纸等棉塞、牛皮纸等灼烧灼烧接种环、涂布器接种环、涂布器干热干热玻璃仪器玻璃仪器微生物实验室培养的基本操作程序微生物实验室培养的基本操作程序1 1、培养基的配制、培养基的配制2 2、器具、培养基的灭菌、器具、培养基的灭菌3 3、倒平板、倒平板4 4、微生物接种、微生物接种5 5、恒温箱中培养、恒温箱中培养6 6、菌种的保存、菌种的保存1.1.无菌技术除了用来防止实验室的培无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？么目的？答：无菌技术还能有效避免操作者答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。自身被
25、微生物感染。2.2.请你判断以下材料或用具是否需要请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。的方法。（1 1） 培养细菌用的培养基与培养皿培养细菌用的培养基与培养皿（2 2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管玻棒、试管、烧瓶和吸管（3 3） 实验操作者的双手实验操作者的双手答：（答：（1）、（）、（2）需要灭菌；（）需要灭菌；（3）需）需要消毒。要消毒。三、实验操作三、实验操作 （一）制备牛肉膏蛋白胨培养基（一）制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于用于培养细菌培养细菌）1 1计算计算、称量称量2 2溶化溶化3 3调调pHpH：pH7.6pH7.64 4
26、过滤：这一步可以省去。过滤：这一步可以省去。5 5分装：分装过程中注意不要使培分装：分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分装锥形瓶的量棉塞而引起污染。分装锥形瓶的量以不超过以不超过锥形锥形瓶容积的一半为宜。瓶容积的一半为宜。6 6加塞加塞7 7包扎包扎操作操作步骤步骤 8 8灭菌灭菌: : 将将100ml100ml培养基用玻棒转移至培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为为100100kPakPa、温度为温度为121121，灭
27、菌，灭菌15153030minmin。将培养皿用旧报纸包裹，放将培养皿用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在入干热灭菌箱内，在160160170 170 下下灭菌灭菌2 2h h。 9 9倒平板倒平板: : 待培养基冷却到待培养基冷却到50 50 左右时，左右时，在酒精灯附近倒平板。（倒平板操作在酒精灯附近倒平板。（倒平板操作见课本）见课本）2 2d d后观察平板，无杂菌污染后观察平板，无杂菌污染才可用来接种才可用来接种. . 10 10无菌检查：无菌检查： 将灭菌的培养基放入将灭菌的培养基放入3737的温的温室中培养室中培养24244848小时，以检查灭菌是小时，以检查灭菌是否彻底。否彻底。1.
28、1.培养基灭菌后，需要冷却到培养基灭菌后，需要冷却到50 50 左右时，才能用来倒平板。你用什么左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？办法来估计培养基的温度？ 答：答：可以用手触摸盛有培养基的可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。刚不烫手时，就可以进行倒平板了。2.2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？火焰？ 答答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。微生物污染培养基。3.3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒
29、置？ 答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，高，将平板倒置，既可以使培养基表面既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。的水珠落入培养基，造成污染。也可以避免空气中杂菌对培养基的污染也可以避免空气中杂菌对培养基的污染. .4.4.在倒平板的过程中，如果不小心在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？吗？
30、为什么？ 答答：空气中的微生物可能在皿盖：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。最好不要用这个平板培养微生物。（二）纯化大肠杆菌（二）纯化大肠杆菌接种方法有：接种方法有：平板划线法和稀释涂布平板法平板划线法和稀释涂布平板法微生物的接种技术：微生物的接种技术： 平板划线的操作方平板划线的操作方法法交叉划线法交叉划线法连续划线法连续划线法 51234平板划线的操作平板划线的操作一旦划破，会造成划线不均匀，难以达一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；到分离单菌落的目的；二是存留在划破处的单个细胞无法形成二是存
31、留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。会形成一个条状的菌落。 1.1.为什么在操作的第一步以及每次划线之为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？需要灼烧接种环吗？为什么？ 答：操作的答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线每次划线前灼烧接种环是为了前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种杀死上次划线结束后，接种环上
32、残留的菌种，环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。和感染操作者。 2.2.在灼烧接种环之后，为什么要等在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？其冷却后再进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。答：以免接种环温
33、度太高，杀死菌种。 3.3.在作第二次以及其后的划线操作在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？开始划线？答：答：划线后，线条末端细菌的数目比线划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，端开始，能使细菌的数目随着划线次数能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。细菌繁殖而来的菌落。稀释涂布平板法稀释涂布平板法把菌液进行一系列梯度稀释把菌液进行一系列梯度稀释, ,然后将不同稀释度然后将不同稀释度的菌液
34、分别涂布到固体培养基上进行培养的菌液分别涂布到固体培养基上进行培养。在在稀释度大的菌液里稀释度大的菌液里, ,就会出现单个菌体形成的就会出现单个菌体形成的菌落菌落 涂布平板的所有操作都应在火涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第稀释的无菌操作要求，想一想，第2 2步应如何进行无菌操作？步应如何进行无菌操作？ 应从操作的各个细节保证应从操作的各个细节保证“无无菌菌”。例如，酒精灯与培养皿的距。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围他物体、吸管要
35、在酒精灯火焰周围等等。等等。微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养菌种的保存菌种的保存 1 1、临时保藏：、临时保藏：接种到固体斜面培接种到固体斜面培养基，菌落长成后养基，菌落长成后置于置于44冰箱保存。冰箱保存。 2 2、长期保存：、长期保存：甘油冷冻管藏法甘油冷冻管藏法当培养基冷却至当培养基冷却至50左左右时，将试管带棉塞的一右时，将试管带棉塞的一端搁在一根木棒上。搁置端搁在一根木棒上。搁置的长度要合适，使培养基的长度要合适，使培养基形成的斜面的长度不超过形成的斜面的长
36、度不超过试管总长的一半。试管总长的一半。四、课题成果评价四、课题成果评价 （一）培养基的制作是否合格（一）培养基的制作是否合格 如果未接种的培养基在恒温箱中如果未接种的培养基在恒温箱中保温保温1 12 d2 d后无菌落生长，说明培养后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制基的制备是成功的，否则需要重新制备。备。（二）接种操作是否符合无菌要求（二）接种操作是否符合无菌要求 如果培养基上生长的菌落的颜色、如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操菌菌落的特点，则说明接种操作是符作是符合要求的；如果培养基上出
37、现了其他菌合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。到要求，需要分析原因，再次练习。（三）是否进行了及时细致的观察与记（三）是否进行了及时细致的观察与记录录 培养培养12h12h与与24h24h后的大肠杆菌菌落的大后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。这一步的要求主要是培养学生良好变化。这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度与习惯。的科学态度与习惯。【典例解析典例解析
38、】例例1 1关微生物营养物质的叙述中，正确的关微生物营养物质的叙述中，正确的A.A.是碳源的物质不可能同时是氮源是碳源的物质不可能同时是氮源 B.B.凡碳源都提供能量凡碳源都提供能量C.C.除水以外的无机物只提供无机盐除水以外的无机物只提供无机盐 D.D.无机氮源也能提供能量无机氮源也能提供能量答案：答案：D 解析：解析：不同的微生物，所需营养物质有不同的微生物，所需营养物质有较大差别，要针对微生物的具体情况分析。较大差别，要针对微生物的具体情况分析。对于对于A A、B B选项，它的表达是不完整的。有的选项，它的表达是不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可碳源只能是碳源，如二氧化
39、碳；有的碳源可同时是氮源，如同时是氮源，如NHNH4 4HCOHCO3 3；有的碳源同时是能；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是氮源，也是源，如葡萄糖；有的碳源同时是氮源，也是能源，如蛋白胨。对于能源，如蛋白胨。对于C C选项，除水以外的无选项，除水以外的无机物种类繁多，功能也多样。如二氧化碳，机物种类繁多，功能也多样。如二氧化碳，可作为自养型微生物的碳源；可作为自养型微生物的碳源；NaHCONaHCO3 3，可作，可作为自养型微生物的碳源和无机盐；而为自养型微生物的碳源和无机盐；而NaClNaCl则则只能提供无机盐。对于只能提供无机盐。对于D D选项，无机氮源提供选项，无机氮源提供
40、能量的情况还是存在的，如能量的情况还是存在的，如NHNH3 3可为硝化细菌可为硝化细菌提供能量和氮源。提供能量和氮源。例例2 2下面对发酵工程中灭菌的理解下面对发酵工程中灭菌的理解不正确不正确的是的是A.A.防止杂菌污染防止杂菌污染 B.B.消灭杂菌消灭杂菌C.C.培养基和发酵设备都必须灭菌培养基和发酵设备都必须灭菌 D.D.灭菌必须在接种前灭菌必须在接种前答案：答案：B 解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。环节。A A说的是灭菌的目的，因为发酵所用的说的是灭菌的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种，整个发酵过程不能混菌种大多是单一的纯种，整个发酵
41、过程不能混入其他微生物（杂菌），所以是正确的；入其他微生物（杂菌），所以是正确的；B B是是错误的，因为灭菌的目的是防止杂菌污染，但错误的，因为灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不可能只消灭杂菌，而是消灭全部实际操作中不可能只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。微生物。C C是正确的，因为与发酵有关的所有是正确的，因为与发酵有关的所有设备和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭设备和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭菌后专门接种的，灭菌必须在接种前，如果接菌后专门接种的，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就会把所接菌种也杀死。种后再灭菌就会把所接菌种也杀死。编号编号成分成分含量含量粉状硫粉状硫10g
42、10g（NHNH4 4) )2 2SOSO4 40.4g0.4gK K2 2HPOHPO4 44.0g4.0gMgSOMgSO4 49.25g9.25gFeSOFeSO4 40.5g0.5gCaClCaCl2 20.5g0.5gH H2 2O O100ml100ml例例3 3右表是某微生右表是某微生物培养基成分，请据此物培养基成分，请据此回答：回答：（1 1）右表培养基可）右表培养基可培养的微生物类型是培养的微生物类型是 。（2 2）若不慎将过量）若不慎将过量NaClNaCl加入培养基中。加入培养基中。如不想浪费此培养基，如不想浪费此培养基，可再加入可再加入 。自养型微生物自养型微生物 含碳有机物含碳有机物 （3 3）若除去成分）若除去成分，加入（，加入（CHCH2 2O O），该），该培养基可用于培养培养基可用于培养 。（4 4）表中营养成分共有）表中营养成分共有 类。类。（5 5）不论何种培养基，在各种成分都）不论何种培养基，在各种成分都溶化后分装前，要进行的是溶化后分装前，要进行的是 。（6 6）右表中各成分重量确定的原则是）右表中各成分重量确定的原则是 。（7 7）若右表培养基用于菌种鉴定，应）若右表培养基用于菌种鉴定，应该增加的成分该增加的成分 。固氮微生物固氮微生物 3 调整调整pHpH 依微生物的生长需要确定依微生物的生长需要确定 琼脂（或凝固剂）琼脂（或凝固剂）
