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1、生活饮用水微生物指标检验生活饮用水中微生物指标项目单位限值说明总大肠菌群MPN/100mL或CFU/100mL不得检出一般性污染耐热大肠菌群MPN/100mL或CFU/100mL不得检出指示粪便污染大肠埃希氏菌MPN/100mL或CFU/100mL不得检出指示粪便污染菌落总数CFU/mL100一般性污染贾第鞭毛虫个/10 L1肠道原虫隐孢子虫个/10 L1肠道原虫微生物指标常规检验流程水样水样总大肠菌群总大肠菌群菌落总数菌落总数报告报告报告报告耐热大肠菌群耐热大肠菌群或大肠埃希氏菌或大肠埃希氏菌报告报告实验前准备1、灭菌吸管 10mL、1mL刻度吸管分别包好，160干烤2h灭菌2、9mL灭菌生
2、理盐水3、相应的灭菌培养基4、检验前 ，无菌室用紫外线灯照射30min菌落总数定义： 是指水样在营养琼脂上有氧条件下37培养48h后，所得1mL水样所含菌落的总数 。培养基：营养琼脂 设备：放大镜/菌落计数器菌落总数平板计数法总大肠菌群检测方法多管发酵法滤膜法酶底物法多管发酵法定义： 总大肠菌群指一群在37培养24h能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。培养基：乳糖蛋白胨培养液 二倍浓缩乳糖蛋白胨培养液 伊红美蓝培养基 设备：显微镜15管法检测步骤在36下培 养 24h10ml水样1ml水样0.1ml水样10ml双料乳糖蛋白胨培养液10ml单料乳糖蛋白胨培养液10ml单料
3、乳糖蛋白胨培养液都不产酸产气判阴性产酸产气管EMB染色镜检乳糖蛋白胨培养液革兰氏阴性无芽孢杆菌产酸产气判总大肠菌群存在典型特征菌落在36下培 养 24h10ml双料乳糖蛋白胨培养液10ml单料乳糖蛋白胨培养液10ml单料乳糖蛋白胨培养液都不产酸产气产酸产气管EMB染色镜检革兰氏阴性无芽孢杆菌产酸产气典型特征菌落多管发酵法结果大肠菌群在伊红美蓝培养基上的典型菌落特征大肠菌群革兰氏染色显微镜下的形态 滤膜法定义： 是指用孔径为0.45的微孔滤膜过滤水样，将滤膜贴在选择性品红亚硫酸钠培养基上37培养24h，能形成紫红或红色有金属光泽的需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。培养基1.品红亚硫酸钠培养基
4、 2.乳糖蛋白胨培养液 设备：显微镜，过滤设备检测步骤过滤水样：过滤设备显色培养，染色镜检：24h复发酵：阳性接种，24h酶底物法 Enzyme Substrate Test常用的色原和荧光底物色原（荧光）糖苷结合物 糖苷酶色原（荧光）氨基酸结合物 氨基肽酶 常用呈色的色原有：、萘酚，邻位或对位硝基酚，对硝基苯胺，酚酞，2-氨4-硝基苯等，如ONPG(邻硝基酚-B-D半乳糖苷 )常用的荧光物有：4-甲基伞形酮（4MU），7氨基4甲基伞形酮香豆素 如MUG(四甲基伞形酮-B-D-葡萄糖苷 )总大肠菌群酶底物法定义： 在选择性培养基上能产生-半乳糖苷酶（-D-galactosidase）分解ONP
5、G（Ortho-nitrophenyl-D-galactopyranoside）使培养基呈黄色的细菌群组 。培养基： MMO-MUG培养基 设备：压膜机检测步骤加样：干粉培养基加入到100mL水样中压膜：专用压膜机分装培养：361的培养24h 结果判读：24h培养后颜色变成黄色判断为阳性反应； 培养24h后判读，为可疑阳性，可延长培养到28h判读，超过28h之后出现的颜色反应不作为阳性结果 。总大肠菌群酶底物法总大肠菌群酶底物法检测示意图检测示意图耐热大肠菌群检测方法多管发酵法滤膜法多管发酵法定义： 用提高培养温度的方法将自然环境中的大肠菌群与粪便中的大肠菌群区分开，在44.5仍能生长的大肠菌
6、群，称为耐热大肠菌群。培养基：1. EC培养基 2. 伊红美蓝琼脂 设备：无特殊设备检测步骤初发酵（同总大肠菌群），24h耐热培养：阳性管接种，24h显色培养：阳性管接种，24h滤膜法定义： 用孔径为0.45的滤膜过滤水样，细菌被阻留在膜上，将滤膜贴在MFC培养基上，44.5培养24h能形成蓝色菌落的细菌为耐热大肠菌群。培养基：1.MFC培养基 2.EC培养基 设备：过滤设备大肠埃希氏菌检测方法多管发酵法滤膜法酶底物法多管发酵法定义： 指多管发酵法总大肠菌群阳性，在EC-MUG培养基上44.5培养242h产生-葡萄糖醛酸酶（-glucuronidase），分解MUG（4-methyl-umbe
7、lliferyl-D-glucuronide）并产生荧光产物，使培养基在波长366nm紫外光下产生蓝色荧光的细菌。 培养基：1.EC-MUG培养基 设备：紫外灯：波长366nm检测步骤初发酵（同总大肠菌群），24h耐热显色培养：阳性管接种，24h荧光观测，报告大肠埃希氏菌酶底物法大肠埃希氏菌酶底物法检测示意图检测示意图生活饮用水非常规检测项目贾第虫和隐孢子虫检测方法:水样过滤-洗涤离心-免疫磁珠分离-荧光标记和DAPI染色-显微镜检查记述-结果报告 在2012年成为常规检验项目微生物指标检验方法的总结总大肠菌群三种方法比较多管发酵法滤膜法酶底物法时间24h-72h24h-48h24h-28h验证试验需要需要不需要步骤较繁锁较简便简便可操作性强特殊设备显微镜显微镜过滤设备压膜机价格 低低较高大肠埃希氏菌三种方法比较多管发酵法滤膜法酶底物法时间48h28h24h-28h验证试验需要需要需要步骤较繁锁较简便简便可操作性强特殊设备/过滤设备压膜机价格 低低较高
