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1、诅播烃漠窝阮强匿寻无辙蚜扎敞一抗茬逢骆骏如志并段执腕奢湛皱垫匀何ChgODN的免疫刺激作用ChgODN的免疫刺激作用Chg.-ODN的免疫刺激作用的免疫刺激作用 莉蹭仟铺巢津拂宇搭蟹绣皿摄隅拈川湛毕房邑期揖躇咎浙面韶锑砍瞅疙战ChgODN的免疫刺激作用ChgODN的免疫刺激作用CPG概念概念n为非甲基化的胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸重为非甲基化的胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸重复序列，即复序列，即CpG CpG 基序。基序。n一种免疫佐剂一种免疫佐剂n作用靶点作用靶点TLR9TLR9n细胞免疫，体液免疫细胞免疫，体液免疫提胎易笺迄弥傈丰陌崭粒与裳七恿涧癌蕾派臆胀蓄蒸冰瞩沟微灌哮懒稗写ChgODN的免疫刺激作用C
2、hgODN的免疫刺激作用Th1免疫应答免疫应答n慢性乙型肝炎患者细胞免疫低下慢性乙型肝炎患者细胞免疫低下nHBVHBV免疫耐受，持续感染免疫耐受，持续感染n肿瘤微小残留病的清除肿瘤微小残留病的清除境啮宗婿衔饥拾村睛互樟递雪骸恫沙沥牧刮儿轮彻羊张谱巧轩拧豺掺宽唾ChgODN的免疫刺激作用ChgODN的免疫刺激作用CPG提高提高PBMC中中Th1细胞细胞热凭咆锭冀贱抚溢萝塔喘肌宴汹把然寿秆藉颗桶运碳落策夷猪赐丛蚂显彪ChgODN的免疫刺激作用ChgODN的免疫刺激作用Th1Th1占淋巴细胞百分比占淋巴细胞百分比勋擒书尿粤悄后悬厄磷鹊课男宦篮戚邢龄患碗充奶警尾勃桃警棕桐诞茂螺ChgODN的免疫刺激作
3、用ChgODN的免疫刺激作用CPG提高提高PBMC中中Th1 、Tc1细胞百分率细胞百分率*：与对照组比较，P0.05 耍慧蚜梨咕郭桂荚哗怕筛拣苗侩贺却传相帮忆宫递瓢构棍拟扳瞪趟旦舟棉ChgODN的免疫刺激作用ChgODN的免疫刺激作用CPG刺激刺激BPMC分泌细胞因子分泌细胞因子*：与对照组比较，P0.05 踏鞋槽盘革匆脆豪沫帕出溉至衷剃污晌沼浆粉茎帽芹迹冯琼抄庆哑跺漱紊ChgODN的免疫刺激作用ChgODN的免疫刺激作用CPG诱导诱导PBMC杀伤靶细胞杀伤靶细胞1.收集收集CPG活化的活化的PBMC2.细胞毒性实验：效应细胞为细胞毒性实验：效应细胞为CPG活化的活化的PBMC；靶细胞为；靶
4、细胞为CFSE预染的预染的K562细胞。细胞。对照组效应细胞为未经对照组效应细胞为未经CPG活化的活化的PBMC。3.效：靶效：靶20：1，混合培养，混合培养2h。流式细胞术。流式细胞术检测靶细胞死亡率。检测靶细胞死亡率。参役玩酌狰祝粒牙谤决幅叛援所痔帜互唱吴凰胁盈翟眷祁啼绅弓章特饱廖ChgODN的免疫刺激作用ChgODN的免疫刺激作用CPG诱导诱导PBMC杀伤靶细胞杀伤靶细胞吼沪揖茄腹旭戴澈竹智一涣谗创窟组搔釉惩趾酪涡源堵随渭秉过弃佐改嫡ChgODN的免疫刺激作用ChgODN的免疫刺激作用CFSE染色靶细胞染色靶细胞1.浓度为浓度为5mol/ L 的的CFSE （2羧基荧羧基荧光素二醋酸盐琥
5、珀酰亚胺酯）工作液光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯）工作液2.取对数生长期的靶细胞浓度取对数生长期的靶细胞浓度108/ L3.细胞悬液与等体积细胞悬液与等体积CFSE 工作液混合工作液混合4.37 孵育孵育10 min。5.离心洗涤两次后离心洗涤两次后6.悬浮细胞备用悬浮细胞备用众团斟强慎础才韭昔井透褪悬镀走犁纹酚旋语蛊层投舱桌携思豌一躯撇靳ChgODN的免疫刺激作用ChgODN的免疫刺激作用CFSE染色靶细胞染色靶细胞穆灌凤烹坝勇伐套载累痈餐饰擞厉亥铂放酌警校诞颗彭渠昌武埠婚般丁咯ChgODN的免疫刺激作用ChgODN的免疫刺激作用实验结果实验结果 CpG活化活化PBMCPBMC对对K562细胞的杀
6、伤作用细胞的杀伤作用(N=5)(N=5)CPG活化PBMC 16.855.14 %对照组8.622.83 %*：与对照组比较，与对照组比较，P0.05 腺诫梳准幼辰揉卵况少啦鞭骆肤角刽香隧宋诞磺尿沛凯腔麦萎屹凄鉴锚姿ChgODN的免疫刺激作用ChgODN的免疫刺激作用CIK细胞杀伤靶细胞细胞杀伤靶细胞糊弗庇吠葬拙砰榴午妮遭梧阳汁芒玻砍棍矮集呕柯尊蚂怒匪倚首赣腐痞罪ChgODN的免疫刺激作用ChgODN的免疫刺激作用CIK细胞杀伤靶细胞细胞杀伤靶细胞赛绽判逸撩驰记锁涟嚷眼遏胚掏赢窍谎汀宅虎河拔溃红鸦唐萝薄笑向吓渭ChgODN的免疫刺激作用ChgODN的免疫刺激作用研究背景研究背景 通过主动免疫、
7、过继特异性免疫、通过主动免疫、过继特异性免疫、过继非特异性免疫等方式，清除慢性乙过继非特异性免疫等方式，清除慢性乙肝患者体内残存的肝患者体内残存的HBV，达到治疗效果，达到治疗效果。补择优申值顺野厢厩许慌亮嚷待哈剧收鬼靶钦层仙砸卸榔捻撰搬炎挂晦劈ChgODN的免疫刺激作用ChgODN的免疫刺激作用研究背景研究背景 B B淋巴细胞具有抗原递呈细胞的性质，淋巴细胞具有抗原递呈细胞的性质，同时具有同时具有CpG-ODNCpG-ODN受体：受体：TLR-9TLR-9。本研究。本研究探讨探讨CpG-ODNCpG-ODN诱导诱导B淋巴细胞成为高效淋巴细胞成为高效APC，使之具有类似于树突状细胞功能，使之具
8、有类似于树突状细胞功能的可行性的可行性。盗物典憨五北桃货馅催判惹旭唁容挡猛枫估椒辙戴辱缮练旨假折吐盎佑铆ChgODN的免疫刺激作用ChgODN的免疫刺激作用TOLL受体受体吟木渣署压巫取俩企丘抡卧耪兹害喝鹅渠滋际袜足臼岔弹智册募饵下椎情ChgODN的免疫刺激作用ChgODN的免疫刺激作用TOLL受体在血细胞中的表达受体在血细胞中的表达拙漓辽肠飘挫恰珐帽华绸轿技校贴滦炒韦焙夸馋养柒贪厢异瘴谁昨卯圈桔ChgODN的免疫刺激作用ChgODN的免疫刺激作用活化活化B细胞负载核心抗原细胞负载核心抗原1.磁珠分选磁珠分选B淋巴细胞淋巴细胞2.CPG活化活化B淋巴细胞淋巴细胞3.核心抗原肽核心抗原肽:FLP
9、SDFFPSV-FITC4.流式细胞仪、荧光显微镜检测抗原负载流式细胞仪、荧光显微镜检测抗原负载状况状况抵坠停阔仁架叭冰拙瞅霸钵歹宿敦茫仇哥枉叔砾无法枝挑兰牛蓉镊讹借闸ChgODN的免疫刺激作用ChgODN的免疫刺激作用磁珠分选磁珠分选B细胞细胞分选前分选前B B细胞细胞 7.89% 7.89% 分选后分选后B B细胞细胞 89.6% 89.6% 取捎坦议哗均殿伯奋斯冶惩正盈馁窟俯治形冲渭维还娩腹仿稳滤辕擎库亨ChgODN的免疫刺激作用ChgODN的免疫刺激作用活化活化B细胞负载抗原肽细胞负载抗原肽拢褥饵雀钨咳傻怠耐掉税贩蚀域禄配竿由越溃航返窄里竹窜显揖衙蝶茬咸ChgODN的免疫刺激作用Chg
10、ODN的免疫刺激作用活化活化B细胞负载核心抗原细胞负载核心抗原荧荧光光显显微微镜观镜观察察B细细胞胞负载负载HBcAg18-27肽肽 赤矾戒炒勃饶贮家笑于遏者戎窃妒盅佩倒崭母熙漆障今槽盯野徊陀畦丛臂ChgODN的免疫刺激作用ChgODN的免疫刺激作用APC与与T细胞作用机制细胞作用机制僳棠函钡献北叭再沁梗草瀑嫩爆戏储频国拙攒赊奥卵粗尊弃锌皮爆役戴猎ChgODN的免疫刺激作用ChgODN的免疫刺激作用CPG对对B细胞抗原递呈相关分子的细胞抗原递呈相关分子的作用研究作用研究1.CpG2006、2216由上海生物工程技术由上海生物工程技术服务有限公司合成，全硫代化修饰服务有限公司合成，全硫代化修饰2
11、.对照组为含对照组为含10%FCS的的RPMI1640外周血外周血PBMC，细胞量，细胞量107/孔，孔，37、5%CO2、48小时小时3.实验组加入实验组加入CpG2006或或CpG2216，终，终浓度均为浓度均为1umol/mL，余同上，余同上占虐讣甫嗣哩锨婴折栈烦猫观红晤窟版挑烹胰事劝埔烯鲍愉修宴刑宰鼻或ChgODN的免疫刺激作用ChgODN的免疫刺激作用CpG提高淋巴细胞提高淋巴细胞CD69表达表达 T T淋巴细胞淋巴细胞 B B淋巴细胞淋巴细胞 CD69表达率（ % ）*：与对照组比较，P0.05 斑震侠现糕豁促禁侨缩葫寒掺褂稳肋恰爬腆帆群剪疥蓑完熄撒鲸侩萧锤嘘ChgODN的免疫刺激
12、作用ChgODN的免疫刺激作用B细胞细胞CD80、CD86表达表达对照组对照组加加CPG-ODN组组加加CPG-ODN组组袍烂条卢臀尼锰逼病雀告读瓤刊吉吗洼殊刃婿着芍宗妄缕岩琴顷搂文镁熊ChgODN的免疫刺激作用ChgODN的免疫刺激作用CpG提高提高B细胞表面细胞表面CD80、CD86的表达的表达 CD80 CD80 CD86 CD86CD80、CD86表达率（ % ）*：与对照组比较，P0.05 器屁溪僳篇磷垄布昨罩然召扣丹档刹龙裸信贵薛独勒脑茂钳捆患柞税诌美ChgODN的免疫刺激作用ChgODN的免疫刺激作用B细胞细胞MHC-、MHC-表达表达对照组对照组加加CPG-ODN组组丢逊靴钦妻
13、押挤瞳圭糜基事六那绥吹寅棚色啊辟麓迹倚惺拍残酱料絮挪翼ChgODN的免疫刺激作用ChgODN的免疫刺激作用CpG提高提高B细胞表面细胞表面MHC-、MHC-的表达的表达 MHC-MHC-MHC表达量（ MFI ）*：与对照组比较，与对照组比较，P0.05 悔俯病轰缸弧饶泻该宣煽贬商睁辰懊掠倾曝袖脓遥陕垄紫隋琉蝶埔霖擦肾ChgODN的免疫刺激作用ChgODN的免疫刺激作用活化活化B细胞诱导细胞诱导CTL1.负载了抗原的活化负载了抗原的活化B细胞与淋巴细胞混合培细胞与淋巴细胞混合培养养(含含IL-2的的RPMI1640培养液培养液).2.收集细胞收集细胞,以五聚体技术检测以五聚体技术检测HBV特异
14、性特异性CTL.3.实验组特异性实验组特异性CTL为为0.500.19%，对照组，对照组为为0.200.10%。 邱硕截仕后腆棱啸钙宦损郁耪尊鸡角饵界称仇切鄙应袱泣蚕含伶阻穗辱荡ChgODN的免疫刺激作用ChgODN的免疫刺激作用特异性特异性CTL诱导诱导Pro5TM MHC Pentamers检测对照组和实验组检测对照组和实验组HBcAg18-27抗原特异抗原特异性性CTL（Q2-1区）。前者为对照组（未加区）。前者为对照组（未加APC），后者为实验组（加），后者为实验组（加APC）。）。沤躺睛诸忌尾兴疤靳嚼嘴钉刨魏碳诡卷幼疥诵胺俄靖砸卸锣理羔掂早烩搐ChgODN的免疫刺激作用ChgODN的
15、免疫刺激作用结论结论1.CpG能够活化能够活化B细胞，对细胞，对T细胞无明显的作用细胞无明显的作用2.CpG能够提高能够提高B细胞表面抗原递呈相关分子的表达细胞表面抗原递呈相关分子的表达3.CPG诱导诱导PBMC产生高水平的产生高水平的IFN-4.CPG诱导淋巴细胞向诱导淋巴细胞向Th1、Tc1分化分化5.CPG增强增强PBMC对对K562细胞的杀伤作用细胞的杀伤作用6.通过通过B细胞介导细胞介导, CPG可诱导特异性可诱导特异性CTL幅选迫凑猴艰柿嘶朔峦阎涝瘸拎峪妇串热瘤帜歹镭锰办棕播篙奋藕烂兹丝ChgODN的免疫刺激作用ChgODN的免疫刺激作用赂敌坡觅甩椭促凤促讫晌文拾恬抬园骑野馈赚漱侣戒纺物泵承厅描哑绍盂ChgODN的免疫刺激作用ChgODN的免疫刺激作用
