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1、天然药物化学天然药物化学 Chemistry of Natural Medicines 卫生部规划教材卫生部规划教材 Chemistry of Natural Products 第一章 总总 论论 (Generation) 本本 章章 内内 容容第一节第一节 绪论绪论第二节第二节 生物合成生物合成第三节第三节 提取分离方法提取分离方法第四节第四节 结构研究方法结构研究方法 第三节第三节 提取分离方法提取分离方法一、提取法:一、提取法:1.溶剂提取法(溶剂提取法(extraction with solvent) 原理:相似相溶原理:相似相溶常用提取溶剂极性顺序:常用提取溶剂极性顺序: 环己烷、甲
2、苯环己烷、甲苯石油醚(石油醚(3060、6090)乙醚乙醚氯仿氯仿(CHCl3,常用二氯甲烷代替),常用二氯甲烷代替)乙酸乙酯(乙酸乙酯(EtOAc)正丁醇正丁醇(BuOH)丙酮丙酮乙醇(乙醇(EtOH)甲醇(甲醇(MeOH)KB, 根据根据值的大小可决定分离采用的方法值的大小可决定分离采用的方法: 100,简单的一次萃取,可基本分离简单的一次萃取,可基本分离. 10010,约约10次以上萃取。次以上萃取。 2,约约100次以上萃取。次以上萃取。 第三节第三节 提取分离方法提取分离方法2.2. 根据物质在两相溶剂中的根据物质在两相溶剂中的分配比分配比不同进行分离不同进行分离P20P21v2.1
3、 影响分离的因素影响分离的因素pH值值 对对于于酸酸性性、碱碱性性、两两性性化化合合物物,pH值值可可改改变变它它们们的的存存在在状状态态(游游离离型型和和解解离离型型),分分配配比比受受pH值值的的影影响响,因为因为HA达到达到99%解离时,解离时,pH pKa + 2HA达到达到99%游离时,游离时,pH pKa - 2 第三节第三节 提取分离方法提取分离方法P21 第三节第三节 提取分离方法(提取分离方法(Methods of Extraction and Isolation)pH值的进一步应用值的进一步应用pH-梯度萃取法梯度萃取法 按酸碱性强弱不同分离酸性、碱性、中性物质,按酸碱性强
4、弱不同分离酸性、碱性、中性物质,改变改变pH值值使酸碱成分呈不同状态。使酸碱成分呈不同状态。 液液-液萃取分离常用方法:液萃取分离常用方法:1. 逆流分溶法逆流分溶法(CCD): 是一种多次连续的液是一种多次连续的液- -液萃取分离过液萃取分离过程。程。特点特点:条件温和,样品易回收,适用于中等极性、不稳:条件温和,样品易回收,适用于中等极性、不稳定物质的分离。定物质的分离。四、提取分离方法0 1 2 3 n CCD法的分离过程示意图法的分离过程示意图P222.纸色谱法(纸色谱法(PC):也叫纸分配色谱(:也叫纸分配色谱(PPC, Paper Partition Chromatography)
5、。)。 第三节第三节 提取分离方法提取分离方法P23补补固定相:滤纸纤维中含有的固定相:滤纸纤维中含有的5-7%水水流动相:有机溶剂流动相:有机溶剂h1h2Rf = h2 / h1注意:如果流动相为缓冲盐溶液,则注意:如果流动相为缓冲盐溶液,则PC为非极性吸附色谱(纤维素色谱)为非极性吸附色谱(纤维素色谱)3. 液液-液分配柱色谱液分配柱色谱v正正相相色色谱谱:固固定定相相极极性性大大,如如水水、缓缓冲冲液液等等;流流动动相相极性小极性小,如氯仿、乙酸乙酯等。,如氯仿、乙酸乙酯等。载体:硅胶(含水可达载体:硅胶(含水可达17%),硅藻土,纤维素等。),硅藻土,纤维素等。分离极性大或水溶性成分,
6、如苷类、糖、生物碱等。分离极性大或水溶性成分,如苷类、糖、生物碱等。 洗脱顺序:极性小的物质先被洗脱出来。洗脱顺序:极性小的物质先被洗脱出来。 第三节第三节 提取分离方法(提取分离方法(Methods of Extraction and Isolation)P24补补反反相相色色谱谱:固固定定相相极极性性小小于于流流动动相相。如如HPLC反反相相柱柱,反反相相TLC薄层色谱。薄层色谱。 固定相固定相:硅胶硅醇基结合烷基,如:硅胶硅醇基结合烷基,如RP-2,RP-8,RP-18(ODS)。亲脂性:)。亲脂性:RP-18 RP-8 RP-2。 第三节第三节 提取分离方法(提取分离方法(Method
7、s of Extraction and Isolation)P24流流动动相相(洗洗脱脱剂剂):MeOH-H2O,CH3CN-H2O洗脱顺序:洗脱顺序:分离极分离极性大的成分性大的成分,极性,极性大者先洗脱下来大者先洗脱下来流流动动相相(洗洗脱脱剂剂):MeOH-H2O,CH3CN-H2O加压液相柱色谱法加压液相柱色谱法普通柱色谱:普通柱色谱:固定相粒径大固定相粒径大 柱效低柱效低 耗时长耗时长 溶剂用量大溶剂用量大加压柱色谱:加压柱色谱:固定相粒径小固定相粒径小 柱效柱效高高 时间短时间短 溶剂用量小溶剂用量小P24加压液相色谱:加压液相色谱: a). 中低压液相色谱:中低压液相色谱:lob
8、ar柱柱 b). 高压(效)液相色谱:高压(效)液相色谱:HPLC c). 超高效液相色谱法:超高效液相色谱法:UPLC泵泵检测器检测器 液滴逆流色谱液滴逆流色谱( DCCC ): 一一种种液液-液液分分配配色色谱谱,流流动动相相呈呈液液滴滴形形式式垂垂直直上上升升或或下下降降,通通过过固定相的液柱,实现物质的逆流色谱分离。固定相的液柱,实现物质的逆流色谱分离。 特特点点:不不易易乳乳化化,样样品品可可定定量量回回收收,分分离离效效果果好好,特特别别适适合合于于分分离皂苷等水溶性成分。离皂苷等水溶性成分。 第三节第三节 提取分离方法(提取分离方法(Methods of Extraction a
9、nd Isolation)液滴逆流色谱液滴逆流色谱(DCCC)示意图示意图P26高速逆流色谱(高速逆流色谱(HSCCC) 第三节第三节 提取分离方法(提取分离方法(Methods of Extraction and Isolation) 通过特定的高速行星式旋转所产生的离心力场作用,使无载体支持通过特定的高速行星式旋转所产生的离心力场作用,使无载体支持的固定相稳定地保留在蛇形管内,并使流动相单向、低速通过固定相,实现的固定相稳定地保留在蛇形管内,并使流动相单向、低速通过固定相,实现连续逆流萃取分离物质的目的。连续逆流萃取分离物质的目的。 用于各种物质的分离,包括蛋白、酶、三萜、生物碱、皂苷等。
10、用于各种物质的分离,包括蛋白、酶、三萜、生物碱、皂苷等。P263.1 吸附分类:吸附分类:v物物理理吸吸附附:相相似似相相吸吸,吸吸附附解解析析发发生生迅迅速速。吸吸附附剂剂如如硅硅胶胶、氧化铝、活性炭等;氧化铝、活性炭等;v化化学学吸吸附附:不不可可逆逆性性。如如碱碱性性氧氧化化铝铝对对酚酚酸酸性性成成分分的的吸吸附附,硅胶对生物碱的吸附等。硅胶对生物碱的吸附等。v半化学吸附:半化学吸附:聚酰胺对酚酸类、醌类的氢键吸附。聚酰胺对酚酸类、醌类的氢键吸附。 第三节第三节 提取分离方法提取分离方法3.3. 根据物质的根据物质的吸附性吸附性差别进行分离差别进行分离吸附色谱法吸附色谱法P27物理吸附:
11、物理吸附:吸附原理:相似相吸吸附原理:相似相吸影响吸附过程的三要素:影响吸附过程的三要素: 吸附剂(固定相)吸附剂(固定相) 溶质(被分离物质)溶质(被分离物质) 溶剂(洗脱剂,展开剂,流动相)溶剂(洗脱剂,展开剂,流动相) 第三节第三节 提取分离方法提取分离方法P283.2 硅胶、氧化铝:硅胶、氧化铝: 极性吸附剂极性吸附剂:载样量大,吸:载样量大,吸附力强附力强 硅胶硅胶:应用最广,:应用最广,适用于各适用于各类成分分离类成分分离 氧化铝氧化铝:有中性、酸性、碱:有中性、酸性、碱性氧化铝。性氧化铝。碱性氧化铝不适合碱性氧化铝不适合于分离酸性成分,多用于分离于分离酸性成分,多用于分离生物碱生
12、物碱。 第三节第三节 提取分离方法提取分离方法P283.2 硅胶、氧化铝:硅胶、氧化铝: 被分离物质吸附力与结构的关系被分离物质吸附力与结构的关系 被分离物质极性大,吸附力强被分离物质极性大,吸附力强,Rf值小,洗脱难,值小,洗脱难,后被洗脱下来。后被洗脱下来。 官能团极性大小相对一般排列顺序:官能团极性大小相对一般排列顺序: -COOH Ar-OH R-OH R-NH2, RNHR , RNR R R-CO-NRR RCHO RCOR RCOOR ROR RH 第三节第三节 提取分离方法提取分离方法P28溶剂溶剂( (洗脱剂洗脱剂) )的极性与洗脱力的关系的极性与洗脱力的关系 洗脱剂极性越大
13、洗脱剂极性越大, , 洗脱力越强洗脱力越强. . 练习练习: : 从黄花夹竹桃果仁中分离到七种强心苷成从黄花夹竹桃果仁中分离到七种强心苷成分分, , 比较极性大小和硅胶柱上洗脱顺序比较极性大小和硅胶柱上洗脱顺序. .名称名称RR黄夹苷黄夹苷ACHO(D-Glc)2黄夹苷黄夹苷BCH3(D-Glc)2黄夹次苷黄夹次苷ACHOH黄夹次苷黄夹次苷BCH3H黄夹次苷黄夹次苷CCH2OHH黄夹次苷黄夹次苷DCOOHH 第三节第三节 提取分离方法提取分离方法 第三节第三节 提取分离方法提取分离方法答案:答案:1. 1. 极性大极性大 小:黄夹苷小:黄夹苷A A黄夹苷黄夹苷B B 次次苷苷D D次苷次苷C
14、C次苷次苷A A次苷次苷B B2. 2. 硅胶柱上的出柱顺序:后硅胶柱上的出柱顺序:后 先先 3.3 活性炭活性炭非极性吸附剂非极性吸附剂v吸附力与结构的关系吸附力与结构的关系 被分离物质极性越小,吸附越牢固。被分离物质极性越小,吸附越牢固。v洗脱力与溶剂的关系洗脱力与溶剂的关系 100%醇醇 含水醇含水醇 H2Ov应用应用: 脱色等。脱色等。 第三节第三节 提取分离方法提取分离方法P283.4 聚酰胺聚酰胺(Polyamide) 色谱法:色谱法: 是由己酰胺聚合成的一类高分子化合物。是由己酰胺聚合成的一类高分子化合物。 第三节第三节 提取分离方法提取分离方法分离原理分离原理:主要通过:主要通
15、过酰胺键与酚羟基、酸、醌等形成酰胺键与酚羟基、酸、醌等形成氢键氢键,产生,产生吸附吸附作用。吸附力取决于作用。吸附力取决于形成氢键缔合的形成氢键缔合的能力能力。P31 3.4 聚酰胺聚酰胺 吸附力与结构的关系吸附力与结构的关系 a.a.形成氢键的基团数目越多形成氢键的基团数目越多, , 吸附力越强吸附力越强; ; b.b.形成分子内氢键者形成分子内氢键者, , 吸附力减少吸附力减少; ; 第三节第三节 提取分离方法提取分离方法P31 c.c.芳香化程度越高或共轭键越多芳香化程度越高或共轭键越多, ,吸附力越强吸附力越强; ; 第三节第三节 提取分离方法提取分离方法溶剂的洗脱能力溶剂的洗脱能力水
16、水醇醇丙酮丙酮NaOH B ASiO2-TLC Rf: A B CPolyamide TLC, Rf: C B A 第三节第三节 提取分离方法提取分离方法答案:答案:3.5 大孔吸附树脂大孔吸附树脂(macro-reticular resin)组成组成: 苯乙烯,二乙烯苯和致孔剂苯乙烯,二乙烯苯和致孔剂分离原理分离原理:吸附吸附(范德华力和氢键范德华力和氢键)和和分子筛分子筛作用作用(多孔性结多孔性结构构)树脂类型树脂类型:非极性、中极性和极性三种。非极性、中极性和极性三种。 非极性非极性:由苯乙烯和二乙烯苯缩合而成,故又称由苯乙烯和二乙烯苯缩合而成,故又称 芳香吸附树脂。芳香吸附树脂。如如D
17、101型型 弱极性弱极性:如如AB-8型型。 极极 性性:含酰氨基、氰基、酚羟基等含氮、氧、硫不同极:含酰氨基、氰基、酚羟基等含氮、氧、硫不同极性功能的吸附树脂。性功能的吸附树脂。 第三节第三节 提取分离方法提取分离方法P323.5 大孔吸附树脂大孔吸附树脂 洗脱剂洗脱剂: H2O 及不同比例的含水醇。及不同比例的含水醇。 洗脱分离洗脱分离: H2O 洗洗: 糖糖,水溶性色素水溶性色素 30% EtOH/ H2O: 极性大的成分极性大的成分 50-75% EtOH: 皂苷类皂苷类 95% EtOH: 极性小成分极性小成分 应用应用: 除多糖除多糖, 水溶性色素水溶性色素, 富集苷类成分富集苷类
18、成分 第三节第三节 提取分离方法提取分离方法 透析法透析法: : 半透膜半透膜, , 分子筛滤过作用分子筛滤过作用 超滤法超滤法: : 分子大小不同分子大小不同, , 扩散速度不同扩散速度不同 超速离心法超速离心法: : 溶质在超速离心作用下具有不同的溶质在超速离心作用下具有不同的 沉降性或浮游性沉降性或浮游性 凝胶滤过法凝胶滤过法: : 分子筛的作用分子筛的作用( (凝胶渗透色谱凝胶渗透色谱, ,分子分子 筛滤过筛滤过, , 排阻色谱排阻色谱), ), 被分离物质按分子被分离物质按分子 由大到小的顺序流出色谱柱由大到小的顺序流出色谱柱. .4.4.根据物质根据物质分子大小差别分子大小差别进行
19、分离进行分离凝胶滤过法凝胶滤过法 第三节第三节 提取分离方法提取分离方法4.1 4.1 主要的几种方法主要的几种方法P34 被分离物质按分子量由大被分离物质按分子量由大到小的顺序流出色谱柱到小的顺序流出色谱柱. .4.2凝胶种类凝胶种类:葡聚糖凝胶葡聚糖凝胶(Sephadex G): 只适于在只适于在水水中应用中应用, 分离多糖分离多糖、 蛋白质等蛋白质等.羟丙基葡聚糖凝胶羟丙基葡聚糖凝胶(Sephadex LH-20): 适用于各类化合物的分离,除具有分子筛的特性外,还起适用于各类化合物的分离,除具有分子筛的特性外,还起到反相分配色谱的效果。到反相分配色谱的效果。 常用溶剂有常用溶剂有甲醇甲
20、醇-水、氯仿水、氯仿-甲醇甲醇等。等。 第三节第三节 提取分离方法提取分离方法4.4.根据物质根据物质分子大小差别分子大小差别进行分离进行分离凝胶滤过法凝胶滤过法P35 4.3. 膜分离技术膜分离技术 原原理理:利利用用小小分分子子物物质质在在溶溶液液中中可可通通过过具具有有一一定定孔孔径径的的膜膜,而而大大分分子子物物质质不不能能通通过过的的性性质质进进行行分分离离。常常用用于于蛋蛋白白质质、多肽、多糖等与小分子物质的分离。多肽、多糖等与小分子物质的分离。 分类:分类:微滤(微滤(0.1m)、超滤()、超滤(10100 nm)、)、 纳滤(纳滤(110 nm)、)、 反渗透(反渗透(1 nm
21、) 应应用用:大大豆豆蛋蛋白白的的工工业业化化生生产产(超超滤滤)、生生产产注注射射液液、口服液、医用酒精、医疗用水等口服液、医用酒精、医疗用水等四、提取分离方法P375.根据物质根据物质离解程度不同离解程度不同进行分离进行分离离子交换法离子交换法 固定相固定相:离子交换树脂(聚苯乙烯高分子化合物,引:离子交换树脂(聚苯乙烯高分子化合物,引 入交换基团)入交换基团) 分类:分类: 阳离子交换树脂:强酸型阳离子交换树脂:强酸型 RSO3-H+ 弱酸型弱酸型 RCOO-H+ 阴离子交换树脂:强碱型阴离子交换树脂:强碱型 RN+(CH3)3Cl- 弱碱型弱碱型 RNH2, RNHR, RNRR” 第三节第三节 提取分离方法提取分离方法P385.1交换原理:交换原理:离子交换原理离子交换原理 阳离子交换树脂:阳离子交换树脂: 阴离子交换树脂:阴离子交换树脂:5.2应用:应用: 主要用于主要用于生物碱生物碱和和有机酸有机酸的分离。的分离。 第三节第三节 提取分离方法提取分离方法5.根据物质根据物质离解程度不同离解程度不同进行分离进行分离离子交换法离子交换法P39The End