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1、第6课时酶活力的测定第2章酶技术学习导航1.阅读教材P33、P35内容，了解酶活力和酶反应速度的关系。2.结合教材P3233内容，检测果胶酶的活力。3.结合教材P34内容，探究果胶酶作用的最佳条件。重难点击1.解释果胶酶活力测定原理及方法。2.探究果胶酶作用的最佳条件。一、检测果胶酶的活力二、探究果胶酶作用的最佳条件内容索引当堂检测一、检测果胶酶的活力基础梳理不同条件下，酶的活性是不同的，要定量地比较酶活力的差别就要进行酶活力的测定。结合教材实验，完成下面的探究内容。1.酶活力单位及其测定方法酶活力单位及其测定方法(1)酶活力单位是指在一定条件下，1 min内能转化 底物的酶量。测定过程中温度
2、保持在 ，其他条件如 和底物浓度等均应采用最适条件。1 mol25pH(2)测定方法一是测定完成一定量反应所需的时间，所需时间越短，说明酶活力 ；反之，酶活力 。二是测定在一定条件下所催化的某一化学反应的反应速度，酶催化的反应速度越大，说明酶活力 ；反之，酶活力 。越高越低越高越低2.果胶酶活力的测定果胶酶活力的测定(1)实验原理果胶酶可将果胶水解生成 ，产物可用 法进行定量测定，从而计算出果胶酶的活力。(2)方法步骤半乳糖醛酸次碘酸钠步骤操作提示保温两个锥形瓶，1号瓶内加入果胶、_ ；2号瓶内加入等量的果胶和 ，均用冰乙酸将pH调至 ，放在恒温水浴锅中 保温2 h保温的目的是使酶对底物很好地
3、发挥作用，温度和pH都应是 的加碘氧化从1、2号瓶中分别取5 mL反应液加入两个 瓶中，加热煮沸，冷却后分别加入1 mL 1mol/L的 溶液和5 mL0.1 mol/L的 液，混匀这一步的目的是在碱性条件下( 提供碱性条件)，碘可以和果胶酶的水解产物 作用，生成糖酸盐果胶酶蒸馏水3.550最适宜碘量碳酸钠碘碳酸钠半乳糖醛酸滴定分别加入2 mL1 mol/L的硫酸，用0.05 mol/L硫代硫酸钠滴定至溶液呈 色，再加入质量分数为0.5%的 指示剂，继续滴定至 色消失为止，记录所用硫代硫酸钠的体积，分别用A和B表示滴定时加入硫酸的目的是使 终止，然后用硫代硫酸钠滴定剩余的 ，根据化学反应中的定
4、量关系即可求出半乳糖醛酸的量淡黄淀粉蓝酶促反应碘计算酶活力(单位)(BA)M12205B表示 滴定所消耗的硫代硫酸钠毫升数；A表示 滴定消耗的硫代硫酸钠毫升数； M表示 的摩尔浓度；1表示1 mol硫代硫酸钠相当于1 mol ；2表示 ；20表示反应液 ；5表示检测时所取 的毫升数空白样品硫代硫酸钠半乳糖醛酸作用时间总体积反应液1.影响酶促反应速度的外界因素有哪些？它们是否都影响酶活力？请举例说明。答答案案(1)影响酶促反应速度的外界因素有温度、pH、酶抑制剂、酶的用量、底物浓度等。(2)不一定。例如，温度、pH和酶抑制剂能通过改变酶的结构而影响酶活力，但酶的用量和底物浓度只影响反应速度，并不
5、影响酶活力。问题探究答案2.甲、乙两图是温度、pH对酶活力的影响的数学模型。答案答案甲、乙两图B点所对应的温度和pH分别是酶的最适温度和最适pH。(1)甲、乙两图中B点代表的含义分别是什么？(2)甲、乙两图中A点对应的值对酶活力的影响相同吗？答案答案不相同。甲图A点对应的酶活力较低，乙图A点对应的酶已失活。答案答案(3)甲、乙两图中C点对应的值对酶活力的影响相同吗？答案答案相同。两图C点所对应酶均已失活。归纳归纳总结总结(1)为了得到一种高纯度、高活力的酶制剂，往往要经过一系列复杂的分离纯化过程，而各个过程中采取的手段可能很温和，也可能很激烈，这些手段都或多或少地影响到酶的活性。为了掌握了解每
6、一个过程中的酶活力的损失程度以及所采取的手段是否合适，以决定是否进行下一步操作，就必须在完成了每一步操作后都要对酶活力进行测定。(2)果胶酶可以将果胶水解成半乳糖醛酸，而半乳糖醛酸具有还原性糖醛基，可用次碘酸钠法定量测量，其原理如下：碘在碱性溶液中可以生成具有强氧化性的次碘酸盐，次碘酸盐能与醛糖反应，从而使醛糖氧化成糖酸盐。RCHOI23NaOHRCOONa2NaI2H2O醛糖 糖酸盐利用过量的碘在碱性条件下氧化醛糖形成糖酸盐，然后用硫代硫酸钠滴定剩余的碘，即可求出半乳糖醛酸的量，以此来表示果胶酶的活性。拓展应用1.下列关于酶活力与酶促反应速率的叙述中，错误的是A.酶活力是指酶催化某一化学反应
7、的能力B.酶活力大小可以用在一定条件下所催化的某一化学反应的反应速度来表示C.酶催化的反应速度越大，酶的活力越高D.酶催化的反应速度越大，酶的活力越低解解析析酶活力又叫酶活性，是指酶催化某一化学反应的能力，酶活力大小可以用在一定条件下所催化的某一化学反应的反应速度来表示，酶催化的反应速度越大，酶的活力越高；反之，酶的活力越低。答案解析2.果胶酶的反应速度可用哪一项来表示A.单位时间内果胶的减少量B.单位体积内半乳糖醛酸的增加量C.单位时间内半乳糖醛酸的增加量D.单位时间内、单位体积中果胶的减少量或半乳糖醛酸的增加量答案技巧提炼技巧提炼1.酶促反应速率：是用酶做催化剂分解底物的快慢程度。2.酶活
8、力：是在一定条件(温度、pH)下酶分解底物的能力高低，可以用酶促反应速率的大小来判断酶活性的大小。二、探究果胶酶作用的最佳条件基础梳理酶的活性受多种因素的影响，实际应用中为了最大限度地利用酶，就要先确定酶的最佳作用条件，结合下列实验体会探究酶最佳作用条件的方法。1.探探究究温温度度对对果果胶胶酶酶活活性性的的影响影响(1)果胶酶的最适温度为4550 。设置温度梯度时，要以这个范围为 设置，右图实验中的温度梯度为 。(2)该实验的自变量是 ，根据单一变量原则，应确保各实验组相同的变量有_ 等。(3)果胶酶的活性是通过_ 来体现的。中心5果泥量、果胶酶的浓度和用量、水浴时间和混合物的pH相同反应时
9、间内产生的果汁的体积温度2.探究探究pH对果胶酶活性的影响对果胶酶活性的影响(1)果胶酶的最适pH范围为6.0左右。因此设置pH时要以此为 设置pH梯度，如：可设置系列： 、 、6、7、 五组。(2)本实验步骤中，在完成“烧杯中分别加入苹果泥(假定pH的改变对苹果泥成分无影响)，试管中分别注入果胶酶溶液、编号、编组”之后，有下面两种操作：方法一：将试管中的果胶酶溶液和烧杯中的苹果泥相混合，再把混合液的pH分别调至4、5、6、7、8。方法二：将试管中果胶酶溶液和烧杯中苹果泥的pH分别调到4、5、6、7、8，再把pH相等的果胶酶溶液和苹果泥相混合。中心458请问哪一种方法更为科学： ，并说明理由：
10、_ 。方法二方法二的操作能够确保酶的反应环境从一开始达到实验预设的pH(或“方法一的操作会在达到预定pH之前就发生了酶的催化反应”)3.探究果胶酶浓度的影响探究果胶酶浓度的影响(1)此探究实验是建立在温度和pH对果胶酶活性影响的基础之上的。此时，研究的变量是 ，温度和pH都应 。(2)实验时可以配制 浓度的果胶酶溶液，也可以只配制 浓度的果胶酶溶液，然后使用不同的体积即可，但必须保证反应液的用量 ，否则影响实验结果的准确性。果胶酶的用量保持相同并适宜不同一种相同1.实验方案(1)当探究温度(或pH)对果胶酶活力的影响时，自变量是什么？无关变量有哪些？答答案案温度(或pH)是自变量。果泥量、果胶
11、酶的用量、水浴时间和pH(或温度)等属于无关变量。(2)在探究温度或pH对酶活力的影响时，如何设置对照实验？答答案案不同的温度梯度之间或不同的pH梯度之间可以作为对照，这种对照称为相互对照。问题探究答案2.实验操作在苹果泥和果胶酶混合之前，为什么要将苹果泥和果胶酶分装在不同的试管中用同一恒温处理？答答案案使酶与反应物混合前就分别达到预设的温度，避免混合时改变温度进而导致实验误差。3.结果分析(1)为什么可以根据滤出的苹果汁的体积大小来判断果胶酶活力的高低？答答案案果胶酶将果胶分解为小分子物质，小分子物质可以通过滤纸，因此可以根据滤出的苹果汁的体积判断果胶酶的活力。答案答案(2)除果汁的体积外，
12、根据哪个因变量也能判断果胶酶活力的高低？该因变量与果胶酶活力有何对应关系？答案答案果汁的澄清度。果汁越澄清，表明果胶酶的活力越高。4.绘制曲线(1)请绘制温度和pH对果胶酶活力的影响曲线图。答案答案答案(2)请绘制不同果胶酶用量对出汁量影响的曲线图(在浓度和体积相同的条件下)。答案答案归纳归纳总结总结 (1)酶相关实验的变量控制(1)探究温度对酶活力的影响：可以选用10 作为梯度差，设置的具体温度为10 、20 、30 、40 、50 和60 等，也可以尝试以5 作为梯度差。(2)探究pH对酶活力的影响：只需将温度梯度改成pH梯度，并选定一个适宜的温度进行水浴加热。反应液的pH可以用体积分数为
13、0.1%的氢氧化钠溶液或盐酸溶液进行调节。(3)探究酶的用量：该实验是建立在探究最适温度和pH对酶活性影响的基础之上的，此时，研究的变量是酶的用量，其他因素都应保持不变。(2)极端条件对酶活性的影响区别影响因素酶的活性酶的结构活性恢复情况低温降低未破坏可恢复高温降低或失活破坏不可恢复过酸失活破坏不可恢复过碱失活破坏不可恢复拓展应用3.探究温度对果胶酶活力的影响、pH对酶活力的影响、果胶酶的用量三个实验中，实验变量依次为A.温度、酶活性、酶用量B.苹果泥用量、pH、果汁量C.反应时间、酶活性、酶用量D.温度、pH、酶用量解解析析实验变量又称自变量，指实验中由实验者所操纵的因素和条件，例：探究温度
14、对酶活力的影响时，需要设置不同的温度梯度作为对照，所以温度就是实验变量；同理，探究pH对酶活力影响的自变量为pH，研究果胶酶的用量实验，实验变量为酶用量。答案解析4.下表是某同学探究温度对果胶酶活力影响的实验结果。该结果不能说明答案解析温度/ 102030405060果汁量/mL234565A.温度影响果胶酶的活性B.40 与60 时酶活力相等C.50 是该酶的最适温度D.若温度从10 升高到40 ，酶的活性将逐渐增强一题多变一题多变(1)请根据本题中表格的实验结果及必修1中的相关知识，描述温度对酶活力的影响。答答案案在一定范围内，随着温度的升高，酶活力逐渐升高；当达到最适温度时，酶活力最高；
15、超过最适温度后，随着温度的升高，酶活力逐渐降低。(2)本题中的实验及其结果无法确定果胶酶的最适温度，如何通过实验进一步探究？答答案案可以在4060 再设置多组实验，将相邻两组的温差缩小，然后通过比较果汁量确定比较适合的温度，再以同样的思路进一步探究，可以探究出酶的最适温度。答案课堂小结果胶酶用量活力条件当堂检测1.如图表示酶活力与温度的关系。下列叙述正确的是A.当反应温度由t2调到最适温度时，酶活力下降B.当反应温度由t1调到最适温度时，酶活力上升C.酶活力在t2时比t1高，故t2时更适合酶的保存D.酶活力在t1时比t2低，表明t1时酶的空间结构破坏更严重2341答案解析2.下列与酶活力有关的
16、说法，不正确的是A.酶活力是由蛋白质结构决定的，不受外界条件的影响B.酶活力是指酶催化一定化学反应的能力C.酶活力受温度、pH等因素的影响D.酶活力高低与反应物浓度无关解解析析酶活力是指酶催化一定化学反应的能力，其高低可以用在一定条件下，酶所催化的某一化学反应的反应速度来表示。酶的催化作用受外界条件影响，温度、pH等对酶的催化作用都有较大影响，反应物浓度与酶活力高低无关。答案解析23413.下图为某同学根据实验作出的、四种常见酶的催化效率曲线图，不正确的是答案解析2341A.B.C. D.解解析析酶反应条件温和，有最适温度，在一定温度范围内，随温度升高酶的活性升高，直至最适温度达到最大值，超过
17、最适温度后，随温度的升高而降低。4.下列是有关酶的应用问题，请分析回答下面的问题：工业生产果汁时，常常利用果胶酶破除果肉细胞壁以提高出汁率，为研究温度对果胶酶活性的影响，某学生设计了如下实验。将果胶酶与苹果泥分装于不同试管中，在10 水浴中恒温处理10 min(如图A)。将步骤处理后的果胶酶和苹果泥混合，再次在10 水浴中恒温处理10 min(如图B)。将步骤处理后的混合物过滤，收集滤液，测量果汁量(如图C)。2341答案2341解析在不同温度条件下重复以上实验步骤，并记录果汁量，结果如下表：温度/ 1020304050607080果汁量/mL813152515121110根据上述实验，请分析
18、回答下面的问题：(1)果胶酶能破除细胞壁，是因为果胶酶可以促进细胞壁中果胶的水解，产物是 。半乳糖醛酸2341(2)实验结果表明，当温度在 附近时，果汁量最多，此时果胶酶活力 。(3)为什么该实验能够通过测定过滤出的苹果汁的体积大小来判断果胶酶活力的高低？_ 。答案40 最高果胶酶将果胶分解为小分子物质，小分子物质可以通过滤纸，因此苹果汁的体积大小反映了果胶酶催化分解果胶的能力2341(4)果胶酶作用于一定量的某种物质(底物)，保持温度、pH在最适值，生成物量与反应时间的关系如图。在35 min后曲线变成水平是因为_ 。若增加果胶酶浓度，其他条件不变，请在图中画出生成物量变化的示意曲线。答案底物消耗完毕答案答案如图(虚线所示)
