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1、紫外紫外- -可见分光光度法在可见分光光度法在药品检验中的应用药品检验中的应用北京市药品检验所化学室北京市药品检验所化学室北京市药品检验所化学室北京市药品检验所化学室 1一、概述一、概述二、基本概念二、基本概念三、分光光度法的基本原理三、分光光度法的基本原理四、紫外分光光度计四、紫外分光光度计五、紫外可见分光光度法在药检中应用五、紫外可见分光光度法在药检中应用六、结语六、结语2一一.概述：概述： 分分光光光光度度法法是是通通过过测测定定物物质质在在某某些些特特定定波波长长处处或或一一定定范范围围内内的的吸吸光光度度或或发发光光强强度度，是是对对物物质质进进行行定定性性和和定定量量的的分分析析方
2、方法法。紫紫外外- -可可见见分分光光光光度度法法具具有有操操作作简简便便快快速速、专专属属性性和和灵灵敏敏度度高高等等优优点点。因因此此在在药药品品的的分分析析检检验验中中被被广广泛泛采采用用。在在各各国国药药典典中中药药品品的的理理化化常常数数、鉴鉴别别、检检查查和和含含量量测测定定等等各各个个项项目目中中都都能能见见到到紫紫外外- -可可见见分分光光光光度度法法的的应应用用实例。实例。3二二.基本概念：基本概念：光光的的色色散散：阳阳光光通通过过棱棱镜镜后后会会射射出出按按红红橙橙黄黄绿绿蓝蓝靛靛紫紫次次序序排排列列的的七七色色光光，这这种种将将阳阳光光分分解解为为各各种种单单色色光光的
3、的现现象象，即即为为光光的的色色散。散。光光谱谱：经经过过色色散散后后的的单单色色光光依依固固定定的的次次序序排排列列而成的景象，称为光谱。而成的景象，称为光谱。4 可可见见光光：经经过过色色散散以以后后的的各各种种颜颜色色的的单单色色光通常叫做可见光。光通常叫做可见光。 波长范围波长范围:400-760:400-760nmnm为可见光区为可见光区紫紫外外光光：与与可可见见光光光光谱谱的的紫紫色色一一端端相相接接的的为紫外光，肉眼不能直接感知。为紫外光，肉眼不能直接感知。 波长范围波长范围:200-400:200-400nmnm为紫外光区为紫外光区5吸吸收收光光谱谱：发发射射连连续续光光谱谱的
4、的光光源源（如如氘氘灯灯和和钨钨丝丝灯灯）发发出出的的光光通通过过透透明明物物质质（固固体体、液液体体或或气气体体）后后，一一些些波波长长的的单单色色光光成成分分被被该该物物质质选选择择吸吸收收，在在原原来来的的连连续续光光谱谱上上出出现现若若干干条条暗暗线线或暗带，这种光谱叫做吸收光谱。或暗带，这种光谱叫做吸收光谱。波波长长（符符号号为为 ）：是是指指由由一一个个波波上上的的任任意意一一点点到到相相邻邻的的下下一一个个波波上上相相对对应应点点之之间间的的直直线线距距离。单位为：离。单位为：nmnm。6ABCDE7光子能量与其传播频率和波长的关系：光子能量与其传播频率和波长的关系： E=hE=
5、h =h*C/=h*C/ 其中其中: :EE光子跃迁能量光子跃迁能量 hh普郎克常数（普郎克常数（6.6261966.626196 1010-34-34J J） 频率频率, ,每秒发出波的数目每秒发出波的数目( (单位：单位：H HZ Z) ) C C光速（光速（2.9979252.997925 10101010 cm/scm/s） 1/ 1/ 波数波数由由上上式式可可以以看看出出：光光子子能能量量与与频频率率成成正正比比，与与波长成反比波长成反比 总能量总能量E=EE=E平移平移+ +E E振动振动+ +E E转动转动+ +E E电子电子8跃跃迁迁：分分子子被被吸吸收收的的光光辐辐射射激激发
6、发后后能能量量由由低低能能级跳到高能级的过程。级跳到高能级的过程。 按照光吸收过程中能量的过程分为按照光吸收过程中能量的过程分为: : 转动能跃迁转动能跃迁 振动能跃迁振动能跃迁 电子跃迁电子跃迁 远红外吸收光谱远红外吸收光谱转动光谱转动光谱 红外吸收光谱红外吸收光谱振动光谱振动光谱 紫外紫外- -可见吸收光谱可见吸收光谱电子光谱电子光谱 E E电子跃迁电子跃迁E E分子振动跃迁分子振动跃迁E E分子转动跃迁分子转动跃迁9三三.分光光度法的基本原理分光光度法的基本原理在在紫紫外外和和可可见见光光区区，灵灵敏敏度度和和精精密密度度较较高高，一一般般每每1 1mlml溶溶液液中中含含有有几几微微克
7、克（ g g）的的物物质质即即可可测测定定，误误差差约约为为1-2%1-2%，在在此此区区域域内内，物物质质对对光光的的吸吸收收主主要要系系分分子子中中电电子子的的能能级级跃跃迁迁所所致致，同同时时伴伴有有分分子子的的振振动动和和转转动动能能级级的的变变化化，电电子子吸吸收收光光谱谱一一般般比比较较平平缓缓，选选择择性性不不如如红红外外光光区区，故故紫紫外外- -可可见见光光区区主主要要用用于于定定量量分析以及作为物理常数的测定。分析以及作为物理常数的测定。10红红外外光光区区的的灵灵敏敏度度和和精精密密度度较较低低，一一般般需需要要数数百百微微克克（ g g）的的供供试试品品进进行行测测定定
8、，此此区区域域内内，物物质质对对光光的的吸吸收收系系由由分分子子中中振振动动和和转转动动能能级级的的跃跃迁迁引引起起，红红外外光光谱谱的的特特征征性性很很强强，特特别别是是在在7-157-15 m m（称称为为“指指纹纹区区”），吸吸收收峰峰很很多多，而而且且尖尖锐锐。除除光光学学异异构构体体外外，不不会会遇遇到到两两种种不不同同的的化化学学物物质质完完全全相相同同的的红红外外吸吸收收光光谱谱，故红外区主要用于鉴别和分析物质的结构。故红外区主要用于鉴别和分析物质的结构。11透透光光率率（T T）：单单色色光光通通过过一一物物质质的的溶溶液液时时，透透过过光光的的强强度度（I I）与与入入射射光
9、光的的强强度度（I I0 0）之之比比。即：即：T=I / IT=I / I0 0。吸吸 光光 度度 （ A A） ： 透透 光光 率率 的的 负负 对对 数数 值值 . .即即: :A=log1/T= -A=log1/T= -logTlogT12郎郎伯伯定定律律（Lamberts Lamberts LawLaw）: :当当溶溶液液浓浓度度不不变变时，吸光度与溶液的液层厚度成正比。时，吸光度与溶液的液层厚度成正比。比比耳耳定定律律（Beers Beers LawLaw）: :当当溶溶液液液液层层厚厚度度不不变时，吸光度与溶液的浓度成正比。变时，吸光度与溶液的浓度成正比。比耳比耳- -郎伯定律（
10、郎伯定律（Beer -Lamberts LawBeer -Lamberts Law）：）：吸光度（吸光度（A A）与溶液的浓度（与溶液的浓度（C C）和光路长（和光路长（L L）是成正比例的。即：是成正比例的。即：A=ECLA=ECL13比耳比耳- -郎伯定律适用范围：郎伯定律适用范围：1.1.溶溶液液的的浓浓度度不不能能过过高高或或过过低低，使使测测定定结结果果的的相相对对误误差差最最小小的的最最佳佳透透射射率率为为T=37%T=37%左右。左右。2.2.所所用用溶溶剂剂不不得得与与测测定定物物质质有有分分子子间间缔缔合合，生生成成复复合合物物、异异构构化化或或出出现现酸酸碱碱平平衡衡。14
11、四四.紫外紫外-可见分光光度计可见分光光度计1.1.基本构造：基本构造：稳压电源光源波长选择装置样品池检测器记录装置15光源：光源： 可见光光源常用钨灯；紫外光光源常用氘灯可见光光源常用钨灯；紫外光光源常用氘灯波长选择装置：波长选择装置： 一一般般简简易易的的仪仪器器，如如比比色色计计多多采采用用滤滤光光片片来来获获得得一一定定波长的光辐射。波长的光辐射。 分分光光光光度度计计则则采采用用棱棱镜镜或或衍衍射射光光栅栅为为核核心心构构成成单单色色器器，以获得纯度较高的单色光。以获得纯度较高的单色光。样品池（吸收池）：样品池（吸收池）： 玻璃吸收池仅适用于玻璃吸收池仅适用于320320nmnm以上
12、波长的测定。以上波长的测定。 水晶或熔融石英吸收池可用于水晶或熔融石英吸收池可用于200200nmnm以上波长的测定。以上波长的测定。 最常用的是光路长度为最常用的是光路长度为1 1cmcm的吸收池。的吸收池。检测器：检测器： 紫外紫外- -可见光度计中作为检测器的光敏元件有光电池、可见光度计中作为检测器的光敏元件有光电池、光电管、光电倍增管和光敏二级管阵列等。光电管、光电倍增管和光敏二级管阵列等。162.2.仪器的校正和检定仪器的校正和检定（1 1）波波长长的的校校正正：由由于于温温度度变变化化对对机机械械部部分分的的影影响响，仪仪器器的的波波长长经经常常会会略略有有变变动动，因因此此除除应
13、应定定期期对对所所用用仪仪器器进进行行全全面面校校正正检检定定外外，还还应应于于测测定定前校正测定波长。前校正测定波长。钬玻璃在钬玻璃在279.4279.4nmnm、287.5nm287.5nm、333.7nm333.7nm、 360.9nm 360.9nm、418.5nm418.5nm、460.0nm460.0nm、484.5nm484.5nm、536.2nm536.2nm与与637.5637.5nmnm的波长处有尖锐的吸收的波长处有尖锐的吸收峰，可作为波长校正用。峰，可作为波长校正用。17（2 2）吸光度的准确度：）吸光度的准确度： 取在取在120120 C C干燥至恒重的基准重铬酸钾约干
14、燥至恒重的基准重铬酸钾约6060mgmg，精密称定，用精密称定，用0.0050.005mol/Lmol/L硫酸溶液溶解硫酸溶液溶解并稀释至并稀释至10001000mlml，在规定的波长处测定吸光度在规定的波长处测定吸光度并计算其吸收系数。并计算其吸收系数。波长波长（nmnm）235235（最小）（最小）257257（最大）（最大）313313（最小）（最小）350350（最大）（最大）吸收系数吸收系数（E E1%1%1cm1cm）124.5124.5144144.0.048.648.6106.6106.6许可范围许可范围123.0-126.0123.0-126.0142.8-146.2142.
15、8-146.247.0-50.347.0-50.3105.5-108.5105.5-108.518 （3 3）杂散光的检查：）杂散光的检查： 按下表的试剂和浓度，配制成水溶液，置1cm石英吸收池中，在规定的波长处测定透光率，应符合表中的规定。试剂试剂浓度浓度%（g/ml）波长波长（nmnm）透光率透光率（%）碘化钠碘化钠1.00 1.00 220220 0.8亚硝酸钠亚硝酸钠5.00 5.00 340340 0.819 3.3.紫外分光光度法对溶剂的要求：紫外分光光度法对溶剂的要求： 用用1 1cmcm石英吸收池盛溶剂，以空气为空白，测石英吸收池盛溶剂，以空气为空白，测定其吸光度，溶剂和吸收池
16、的吸光度应满足以下定其吸光度，溶剂和吸收池的吸光度应满足以下要求：要求：波长波长 吸光度要求吸光度要求220220nm-240nmnm-240nm不得超过不得超过0.400.40241241nm-250nmnm-250nm不得超过不得超过0.200.20251251nm-300nmnm-300nm不得超过不得超过0.100.10300300nmnm以上以上 不得超过不得超过0.050.05204.4.紫外分光光度法测定法：紫外分光光度法测定法：测测定定时时，除除另另有有规规定定外外，应应以以配配制制供供试试品品溶溶液液的的同同批批溶溶剂剂为为空空白白对对照照，采采用用1 1cmcm的的石石英英
17、吸吸收收池池，在在规规定定的的吸吸收收峰峰波波长长 2 2nmnm以以内内测测试试几几个个点点的的吸吸光光度度，以以核核对对供供试试品品的吸收峰波长是否准确。的吸收峰波长是否准确。除除另另有有规规定定外外，吸吸收收峰峰波波长长应应在在该该品品种种项项下下规规定定的的波波长长 2 2nmnm以以内内；否否则则应应考考虑虑该该试试样样的的真真伪伪、纯纯度度以以及及仪仪器器波长的准确性。波长的准确性。应以吸光度最大的波长作为测定波长。应以吸光度最大的波长作为测定波长。一一般般供供试试品品溶溶液液的的吸吸光光度度读读数数，以以在在0.3-0.70.3-0.7之之间间的的误误差较小。差较小。仪仪器器的的
18、狭狭缝缝波波带带宽宽度度应应小小于于供供试试品品吸吸收收带带的的半半宽宽度度，否否则则测测得得的的吸吸光光度度会会偏偏低低。狭狭缝缝宽宽度度的的选选择择，应应以以减减小小狭狭缝宽度时供试品的吸光度不再增加为准。缝宽度时供试品的吸光度不再增加为准。由由于于吸吸收收池池和和溶溶剂剂本本身身可可能能有有空空白白吸吸收收，因因此此测测定定供供试试品的吸光度后应减去空白读数，再计算含量。品的吸光度后应减去空白读数，再计算含量。21五五.紫外紫外-可见分光光度法在药品检验中的应用可见分光光度法在药品检验中的应用 药典和药品标准中应用紫外药典和药品标准中应用紫外- -可见分光光度可见分光光度法的项目有吸收系
19、数、鉴别、颜色检查、纯法的项目有吸收系数、鉴别、颜色检查、纯度检查、溶出度、含量均匀度检查和含量测度检查、溶出度、含量均匀度检查和含量测定等等。定等等。221.吸收系数：吸收系数： 药药品品的的吸吸收收系系数数是是药药品品的的理理化化特特性性常常数数，可可作作为为药药品品生生产产过过程程中中精精制制纯纯化化的的一一种种指指标标。对对紫紫外外区区一一定定波波长长的的光光有有特特征征吸吸收收的的药药物物进进行行精精制制时时，应应进进行行到到产产品品在在其其特特定定波波长长测测定定吸吸收收系系数数达达到到一一个个稳稳定定的的最最大大值值时时为为止止，因因此此吸吸收收系系数数同同其其它它物物理理常常数
20、数一一样样，也也可可作作为为判判断断药药品品纯纯度的依据。度的依据。 中中国国药药典典20052005年年版版中中收收载载的的甲甲苯苯磺磺丁丁脲脲和和地地塞塞米米松松等等品品种种，均均在在性性状状项项下下测测定定其其吸吸收收系数。系数。232.鉴别：鉴别： 药药物物对对光光辐辐射射的的吸吸收收特特点点（即即其其吸吸收收光光谱谱）可可与与其其它它化化学学的的或或物物理理的的方方法法配配合合作作为为鉴鉴别别的的一一种种手手段段，即即绘绘制制出出药药物物的的吸吸收收光光谱谱曲曲线线与与标标准准品品的的吸吸收收光光谱谱互互相相核核对对。实实际际上上在在化化合合物物的的理理化化常常数数资资料料及及药药品
21、品标标准准中中，一一般般只只列列出出各各化化合合物物最最大大吸吸收收（有有时时也也列列出出最最小小吸吸收收）的的波波长长位位置置。对对于于具具有有两两个个以以上上最最大大吸吸收收的的药药物物可可以以进进一一步步简简化化操操作作，无无需需费费时时作作吸吸收收光光谱谱曲曲线线，只只要要测测出出各各最最大大吸吸收收波波长长处处的的吸吸收收度度，求求出出这这些些吸吸收收度度的的比比值值，测测出出它它们们相相对对位位置置的的比比值值即即可可。24维维 生生 素素 B12B12的的 鉴鉴 别别 规规 定定 每每 1 1mlml中中 含含 维维 生生 素素B B12122525 g g的的水水溶溶液液，照照
22、分分光光光光度度法法测测定定，在在278278、361361与与550550nmnm的波长处有最大吸收。的波长处有最大吸收。 A361nmA361nm/ /A278nmA278nm应为应为1.70-1.881.70-1.88。 A361nmA361nm/550/550nmnm应为应为3.15-3.453.15-3.45。25263.纯度检查：纯度检查： 若若一一种种化化合合物物对对紫紫外外光光和和可可见见光光区区的的某某一一波波段段呈呈光光学学透透明明（即即不不吸吸收收或或几几乎乎不不吸吸收收），而而不不纯纯杂杂质质有有吸吸收收时时，则则该该物物质质的的生生产产精精制制应应当当进进行行到到规规
23、定定波波长长处处的的吸吸收收系系数数降降到到最最低低时时为为止止。有有些些药药物物就就以以此此作作为为杂杂质质限限度度检检查查的的依依据据。此此外外，有有些些药药物物的的杂杂质质是是通通过过比比色色法与杂质对照品比较进行控制的。法与杂质对照品比较进行控制的。27检检查查肾肾上上腺腺素素中中的的酮酮体体：取取肾肾上上腺腺素素，加加0.10.1mol/Lmol/L盐盐酸酸溶溶液液，制制成成每每1 1mlml中中含含2 2mgmg的的溶溶液液，照照分分光光光光度度法法，在在310310nmnm的的波波长长处处测测定定，吸吸光光度不得过度不得过0.050.05。2829苄苄氟氟噻噻嗪嗪和和氢氢氯氯噻噻
24、嗪嗪等等药药物物中中，芳芳香香第第一一胺胺的的检检查查，均均采采用用比比色色法法。将将样样品品用用亚亚硝硝酸酸重重氮氮化化后后与与二二盐盐酸酸萘萘乙乙二二胺胺生生成成偶偶氮氮化化合合物物，在在518518nmnm波波长长处处测测定定吸吸光光度度，应应不不得得超超过过规规定定限限度。度。30枸枸橼橼酸酸哌哌嗪嗪和和磷磷酸酸哌哌嗪嗪检检查查项项下下，根根据据第第一一胺胺和和氨氨与与亚亚硝硝基基铁铁氰氰化化钠钠在在丙丙酮酮的的存存在在下下的的碱碱性性溶溶液液中中呈呈黄黄色色至至红红色色的的反反应应，采采用用比比色色法法，测测定定600nm与与520nm波波长长处处的的吸吸光光度度比比值值，以以此此来
25、控制药品中杂质伯胺和氨的含量。来控制药品中杂质伯胺和氨的含量。31葡葡萄萄糖糖注注射射液液和和葡葡萄萄糖糖氯氯化化钠钠注注射射液液中中的的杂杂质质5-羟羟甲甲基基糠糠醛醛，在在284nm测测定定吸吸光光度度，控控制制杂杂质质的的含含量量。如如药药典典规规定定，1%葡葡萄萄糖糖溶溶液液的的吸吸光光度度不不得得大大于于0.32，按按5-羟羟甲甲基基糠糠醛醛的的E1%1cm 为为 1308计计算算，含含5-羟羟甲甲基基糠糠醛醛应应在在0.00024%以以下。下。32碘碘解解磷磷定定注注射射液液：分分解解产产物物的的检检查查规规定定，用用0.1mol/L盐盐酸酸溶溶液液将将样样品品稀稀释释制制成成每每
26、1ml中中含含0.01mg的的溶溶液液，在在294与与262nm的的波波长长处处分分别别测定吸光度，测定吸光度，A294/A262应不小于应不小于3.1。 碘解磷定的碘解磷定的0.1mol/L盐酸溶液在盐酸溶液在225和和294nm波长处有最大吸收，在波长处有最大吸收，在262nm波长处有最小吸收波长处有最小吸收其其顺顺式式异异构构体体及及其其水水解解产产物物吡吡啶啶-2-甲甲醛醛-N甲甲碘碘物物同条件下在同条件下在294nm波长处均无吸收，这些杂质在波长处均无吸收，这些杂质在262nm处有吸收，如有杂质存在会导致碘解磷定处有吸收，如有杂质存在会导致碘解磷定溶液的溶液的A294/A262比值降
27、低。比值降低。33盐盐酸酸土土霉霉素素：杂杂质质吸吸收收度度检检查查规规定定，本本品品2mg/ml的的盐盐酸酸甲甲醇醇溶溶液液在在430nm波波长长处处的的吸吸光光度度不不得得过过0.5。本本品品10mg/ml的的盐盐酸酸甲甲醇醇溶溶液液在在490nm波长处的吸光度不得过波长处的吸光度不得过0.2。 盐酸土霉素在酸性溶液（盐酸土霉素在酸性溶液（pH2.0）中，最大吸中，最大吸收为收为353nm，在上述所述波长和浓度条件下，盐在上述所述波长和浓度条件下，盐酸土霉素几乎无吸收酸土霉素几乎无吸收。34华华法法林林钠钠：溶溶液液的的澄澄清清度度与与颜颜色色检检查查规规定定，本本品品 20mg/ml丙丙
28、 酮酮 溶溶 液液 ， 用用 4cm吸吸 收收 池池 ， 在在460nm的吸光度不得过的吸光度不得过0.12。35 用比色法检查：用比色法检查：醋酸氟轻松和氟脲嘧啶与茜素氟蓝反应检查氟；醋酸氟轻松和氟脲嘧啶与茜素氟蓝反应检查氟；胰岛素制剂与锌试剂反应检查锌；胰岛素制剂与锌试剂反应检查锌；醋酸地塞米松等与二氨基萘反应检查硒。醋酸地塞米松等与二氨基萘反应检查硒。364.含量测定：含量测定：药典中含量测定方法可分为：药典中含量测定方法可分为：（1）对照品比较法）对照品比较法（2）吸收系数法）吸收系数法（3）计算分光光度法）计算分光光度法（4）比色法）比色法37（1）对照品比较法）对照品比较法应用范围
29、：应用范围： 单一成分药剂的测定。单一成分药剂的测定。 混合物或复方制剂，但其它成分在被测组分的混合物或复方制剂，但其它成分在被测组分的 测定波长没有或几乎没有吸收测定波长没有或几乎没有吸收38 测定要求测定要求分别配制供试品溶液和对照品溶液分别配制供试品溶液和对照品溶液对对照照品品溶溶液液所所含含对对照照品品的的量量应应为为供供试试品品溶溶液液中中被测组分标示量的被测组分标示量的 10%以内。以内。所所用用溶溶剂剂、其其它它试试剂剂、操操作作方方法法和和条条件件都都应应保保持一致。持一致。39计算公式：计算公式： Cs=Cr*As/Ar Cs：供试品溶液的浓度供试品溶液的浓度 As：供试品溶
30、液的吸光度供试品溶液的吸光度 Cr：对照品溶液的浓度对照品溶液的浓度 Ar：对照品溶液的吸光度对照品溶液的吸光度 40（2）.吸收系数法：吸收系数法：应用范围：应用范围：单一成分药剂的测定。单一成分药剂的测定。混混合合物物或或复复方方制制剂剂，但但其其它它成成分分在在被被测测组组分分的的测测定定波波长没有或几乎没有吸收长没有或几乎没有吸收41测定要求：测定要求：通常为测定最大吸收峰波长处的吸光度通常为测定最大吸收峰波长处的吸光度供供试试品品溶溶液液在在测测定定波波长长处处浓浓度度与与吸吸光光度度严严格格遵遵循比耳循比耳-郎伯定律，具有良好的线性关系。郎伯定律，具有良好的线性关系。测定条件和操作
31、应与测定吸收系数时完全一致。测定条件和操作应与测定吸收系数时完全一致。吸吸收收系系数数是是用用标标准准物物质质分分别别在在经经过过校校正正的的不不同同型号分光光度计上进行多次测定求得的平均值。型号分光光度计上进行多次测定求得的平均值。特别注意仪器的校正和检定特别注意仪器的校正和检定42计算公式：计算公式： A=ECL以中国药典2000年版氯霉素含量测定为例: 精密称取氯霉素0.1009g，置100ml量瓶中，加乙醇10ml振摇使溶解，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，在278nm波长处测定吸光度为0.596，按氯霉素(C11H12Cl2N2O5)吸收系数
32、(E1%1cm)为298计算氯霉素含量。已知：A=0.596 E=298 L=1则： C=A/(E*L)=0.596/(298*1)%=0.002%氯霉素含量=0.002%*100*100/(0.1009*2)=99.1%43（3）计算分光光度法）计算分光光度法联立方程式法联立方程式法差示分光光度法差示分光光度法双波长分光光度法双波长分光光度法三波长分光光度法三波长分光光度法系数倍率法系数倍率法导数光谱测定法导数光谱测定法正交函数分光光度法正交函数分光光度法44（4）比色法）比色法供供试试品品本本身身在在紫紫外外可可见见光光区区没没有有强强吸吸收收，或或在在紫紫外外区区虽虽有有吸吸收收，但但为
33、为了了避避免免干干扰扰或或提提高灵敏度，可加入适当的显色剂显色后测定高灵敏度，可加入适当的显色剂显色后测定45盐盐酸酸可可乐乐定定片片及及注注射射液液：在在适适宜宜的的pH值值条条件件下下，溴溴酚酚蓝蓝溶溶液液与与盐盐酸酸可可乐乐定定定定量量结结合合成成有有色色络络合合物物，用用氯氯仿仿提提取取后后，直直接接比比色色测测定定，对对照照品品同同法操作，并计算含量。法操作，并计算含量。46醋醋酸酸泼泼尼尼松松眼眼膏膏及及醋醋酸酸氢氢化化可可的的松松软软膏膏：甾甾醇醇类类化化合合物物在在C17上上的的 酮酮醇醇侧侧链链（-CHOH-CO-）具具有有还还原原性性。它它能能使使氯氯化化三三苯苯四四氮氮唑
34、唑在在碱碱性性（氢氢氧氧化化四四甲甲基基铵铵）条条件件下下被被还还原原为为红红色色，在在485nm的波长处测定的波长处测定。47计算公式：计算公式： Cs=Cr*As/Ar Cs：供试品溶液的浓度供试品溶液的浓度 As：供试品溶液的吸光度供试品溶液的吸光度 Cr：对照品溶液的浓度对照品溶液的浓度 Ar：对照品溶液的吸光度对照品溶液的吸光度 48在在吸吸收收度度和和浓浓度度不不呈呈线线性性时时，应应取取数数份份梯梯度度量量的的对对照照品品溶溶液液，用用溶溶剂剂补补充充至至同同一一体体积积，显显色色后后测测定定各各份份样样品品的的吸吸光光度度。以以各各对对照照品品的的吸吸收收度度为为纵纵坐坐标标，
35、浓浓度度为为横横坐坐标标绘绘制制标标准准曲曲线线；再再根根据据供供试试品品的的吸吸光光度度，在在标标准准曲曲线线上上求求出出其其含含量。量。49六六.小结：小结： 紫紫外外-可可见见分分光光光光度度法法具具有有灵灵敏敏度度和和精精密密度度高高，操操作作简简便便、快快捷捷等等优优点点。已已成成为为药药品品检检验验的的一一种种不不可可替替代代手手段段。目目前前各各国国药药典典及及药药物物标标准准中中含含量量测测定定采采用用的的方方法法以以分分光光光光度度法法最最多多。在在医医院院制制剂剂的的质质量量控控制制中中紫紫外外-可可见分光光度法也得到普遍的应用。见分光光度法也得到普遍的应用。50谢谢!51
