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1、 p31实验四实验四 分光分光(fn un)光度技术与光度技术与 葡萄糖氧化酶法测定血糖葡萄糖氧化酶法测定血糖第一页，共二十四页。分光光度法血糖实习一、分光一、分光(fn un)光度法光度法 分光分光(fn un)光度法是根据不同物质对于光度法是根据不同物质对于不同不同波长的光波具有选择性吸收的光学特性，建立波长的光波具有选择性吸收的光学特性，建立起来的分析方法。起来的分析方法。（一）分光（一）分光(fn un)光度法的依据光度法的依据第二页，共二十四页。分光光度法血糖实习I0It溶液溶液(rngy) 当一定波长的光线通过某种当一定波长的光线通过某种透明介质透明介质时，时，其中一部分光可透过其
2、中一部分光可透过(tu u)，一部分光被吸收，这种，一部分光被吸收，这种某种溶液对一定波长的光的某种溶液对一定波长的光的吸收特性吸收特性可用于该物质可用于该物质的的定性和定量分析定性和定量分析。第三页，共二十四页。分光光度法血糖实习分光分光(fn un)光度计可获得光度计可获得单色光单色光 分光光度计利用棱镜或光栅取得分光光度计利用棱镜或光栅取得(qd)波长范围波长范围为几个为几个nm甚至更窄的单色光。甚至更窄的单色光。第四页，共二十四页。分光光度法血糖实习测定的时候需选择不同测定的时候需选择不同(b tn)物质物质最大吸收峰所对应的波长最大吸收峰所对应的波长波长波长(bchng)（nm ）光
3、光吸吸收收值值最大吸收最大吸收(xshu)峰峰第五页，共二十四页。分光光度法血糖实习分光分光(fn un)光度计的优点光度计的优点 分光光度法的灵敏度、准确度及选择性分光光度法的灵敏度、准确度及选择性都很高，是一种最常用的灵敏、精确、都很高，是一种最常用的灵敏、精确、快速快速(kui s)和简便的分析方法。和简便的分析方法。第六页，共二十四页。分光光度法血糖实习不同分光光度计的波长不同分光光度计的波长(bchng)范围范围紫外光紫外光(200-400nm)可见光可见光(400-760nm)红外光红外光(760nm-30m)第七页，共二十四页。分光光度法血糖实习（二）分光（二）分光(fn un)
4、光度法原理光度法原理 Lambert-beer定律，该定律阐明定律，该定律阐明(chnmng)了了溶液对单色光吸收的多少与溶液浓度及液层厚溶液对单色光吸收的多少与溶液浓度及液层厚度的乘积成正比关系。度的乘积成正比关系。I0Itlg=KCL第八页，共二十四页。分光光度法血糖实习I0Itlg：光密度（光密度（O.D.），或称吸光度），或称吸光度(gungd)(gungd)（A）I0：入射光强度入射光强度(qingd)It：透过：透过(tu u)光强度光强度K：吸光系数，它与该物质吸收光能力有关：吸光系数，它与该物质吸收光能力有关I0Itlg=KCLC：溶液浓度：溶液浓度(mol/L)L：液层厚度：
5、液层厚度(cm)第九页，共二十四页。分光光度法血糖实习（三）分光光度法计算待测溶液浓度（三）分光光度法计算待测溶液浓度(nngd)的方法的方法1 1、利用、利用(lyng)(lyng)标准溶液测定溶液的浓度标准溶液测定溶液的浓度A标标= KC标标LA样样= KC样样LA标标A样样C标标C样样第十页，共二十四页。分光光度法血糖实习2 2、利用标准、利用标准(biozhn)(biozhn)曲线求得待测溶液的浓度曲线求得待测溶液的浓度标准曲线的制作：标准曲线的制作： 先配制一系列已知不同浓度的测定物标准溶先配制一系列已知不同浓度的测定物标准溶液，按测定管显色液，按测定管显色(xin s)，分别读取各
6、管光密度，分别读取各管光密度，以各管光密度为纵坐标，各管浓度为横坐标，作以各管光密度为纵坐标，各管浓度为横坐标，作图得标准曲线。图得标准曲线。第十一页，共二十四页。分光光度法血糖实习浓度浓度(nngd)吸吸光光度度以测定管的光密度从标准以测定管的光密度从标准(biozhn)曲线上可求得测定物浓度曲线上可求得测定物浓度第十二页，共二十四页。分光光度法血糖实习（四）分光（四）分光(fn un)光度计的基本结构光度计的基本结构1 1、光源、光源(gungyun)(gungyun)2 2、单色光器、单色光器3 3、吸收杯（比色杯）、吸收杯（比色杯）4 4、检流计（测光系统）、检流计（测光系统）第十三页
7、，共二十四页。分光光度法血糖实习752型分光(fnun)光度计n1）A/T/C/F切换键n2）SD键具2个功能(gngnng)。传输数据；确认当前的F值。n3）/0%调T为000.0。n4)/100%调T为100.0。转换至A时，按键后显示0.000。第十四页，共二十四页。分光光度法血糖实习（五）操作规程（五）操作规程(cozuguchng)n1.插上电源，打开电源开关预热30min。n2.将波长旋钮旋至所需波长。n3.将样品倒入比色皿放入比色皿架，空白管进入光路，按A/T/C/F键至光标(unbio)于T位，开盖按/0%键使读数显示000.0。关盖，再按/100%键使读数显示100.0。按A
8、/T/C/F键至光标于A位，再按/100%显示0.000。拉出样品管进入光路读A。n4.测定结束打开样品室盖。n5.取出比色皿清洗干净后用蒸馏水冲洗并倒扣在粗滤纸上晾干。第十五页，共二十四页。分光光度法血糖实习实验实验(shyn)目的目的n了解葡萄糖氧化酶法测定血糖的基本原理。n掌握酶法测定(cdng)血糖的实验方法n熟悉分光光度计的使用。 P57二、葡萄糖氧化酶法测定血糖二、葡萄糖氧化酶法测定血糖(xutng)第十六页，共二十四页。分光光度法血糖实习n实验实验(shyn)原理：原理：葡萄糖葡萄糖O2+H2O GOD 葡萄糖酸内酯葡萄糖酸内酯2O222O2 + 4-氨基安替比林氨基安替比林(n
9、 t b ln)+酚酚 POD 红色醌类化合物红色醌类化合物 + 2O +O2 用分光光度法将待测溶液与同样处理的葡萄糖标准用分光光度法将待测溶液与同样处理的葡萄糖标准液比色，求待测血糖液比色，求待测血糖(xutng)浓度。浓度。第十七页，共二十四页。分光光度法血糖实习仪器仪器(yq)和药品：和药品：n血清、血糖试剂盒n752可见(kjin)紫外分光光度计。第十八页，共二十四页。分光光度法血糖实习基本操作基本操作n取三支试管，编号，下表加样计算血糖(xutng)浓度编号试剂ml空白管标准管测定管血清0.02葡萄糖标准液(100mg/dl)0.02酚试剂1.51.51.5酶试剂1,51.51.5
10、混匀后37度保温15分钟,在505nm波长处比色，显色后2小时稳定。第十九页，共二十四页。分光光度法血糖实习吸量管的使用(shyng)n拿吸量管正确(zhngqu)姿势n取液姿势n卸放姿势第二十页，共二十四页。分光光度法血糖实习微量取样器的操作(cozu)n调至所需体积值；吸：垂直持取样器用大拇指按至第一档第一档；将吸头插入溶液松开(snki)大拇指，液面上升；放：移出液面，按至第一档继续按至第二档继续按至第二档以排空液体。n注意：移取另一样品时，更换新吸头。第二十一页，共二十四页。分光光度法血糖实习计算公式计算公式测定(cdng)管吸光度值标准(biozhn)管吸光度值葡萄糖含量(hnlin
11、g)(mg/dL)=100参考数据：A测=0.217，A标=0.258，葡萄糖含量=84mg/dl第二十二页，共二十四页。分光光度法血糖实习思考题思考题n试分析影响本试验的因素有哪些？n操作(cozu)分光光度计时要注意哪些关键点？第二十三页，共二十四页。分光光度法血糖实习内容(nirng)总结p31实验四分光(fnun)光度技术与。分光(fnun)光度法是根据不同物质对于不同。波长的光波具有选择性吸收的光学特性，建立起来的分析方法。都很高，是一种最常用的灵敏、精确、。Lambert-beer定律，该定律阐明了溶液对单色光吸收的多少与溶液浓度及液层厚度的乘积成正比关系。：光密度（O.D.），或称吸光度（A）。A标=KC标L。A样=KC样L。1）A/T/C/F切换键。2）SD键具2个功能。2.将波长旋钮旋至所需波长第二十四页，共二十四页。分光光度法血糖实习
