酶化学新课件

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1、第 六 章酶 化 学本章内容本章内容一、酶的概述酶的概述 二、二、酶的结构与功能的关系酶的结构与功能的关系 三、酶的作用机制三、酶的作用机制 四、酶促反应动力学四、酶促反应动力学 五、酶的应用及发展五、酶的应用及发展（一）（一） 酶的概念酶的概念（二）（二） 酶的化学本质酶的化学本质（三）（三） 酶的命名酶的命名（四）（四） 酶的分类酶的分类（五）（五） 酶的特性酶的特性一、酶的概述酶的概述（一）（一）酶酶(Enzyme)(Enzyme)的概念的概念: : 酶是活细胞产生的，具有催化生物反应功能的酶是活细胞产生的，具有催化生物反应功能的蛋白质大分子及核酸。蛋白质大分子及核酸。 一、酶的概述一、

2、酶的概述几个有关名词几个有关名词底物底物(substrate, S)(substrate, S)：酶作用的物质。：酶作用的物质。 产物产物(product, P)(product, P)：反应生成的物质。：反应生成的物质。酶促反应：酶催化的反应。酶促反应：酶催化的反应。酶活性：酶催化化学反应的能力。酶活性：酶催化化学反应的能力。（二）酶的化学本质（二）酶的化学本质1 1、大多数酶是蛋白质：大多数酶是蛋白质：元素组成与分子量元素组成与分子量 化学结构与空间结构；化学结构与空间结构；理化性质理化性质: :两性性质；胶体性质；两性性质；胶体性质；变性失活；可被蛋白酶分解；结晶；测序。变性失活；可被蛋

3、白酶分解；结晶；测序。2 2、某些某些RNARNA具有催化活性具有催化活性, ,将本质为将本质为RNA RNA 的酶称的酶称核酶（核酶（ribozymesribozymes) )。（三）（三） 酶的命名酶的命名习惯命名法习惯命名法1. 1.习惯命名法的原则：习惯命名法的原则：（1 1）根据其）根据其底物底物命名，如淀粉酶、蛋白酶命名，如淀粉酶、蛋白酶（2 2）根据其）根据其催化的反应性质催化的反应性质命名：如水解酶、转氨酶命名：如水解酶、转氨酶（3 3）根据）根据底物及反应性质底物及反应性质命名：如乳酸脱氢酶命名：如乳酸脱氢酶（4 4）在（）在（1 1）（）（2 2）（）（3 3）基础上有时）

4、基础上有时加上酶的来源或加上酶的来源或其他特点其他特点，如胃蛋白酶、碱性磷酸酶。，如胃蛋白酶、碱性磷酸酶。2.2.习惯命名的优缺点：优点是习惯命名的优缺点：优点是简单简单，缺点是，缺点是缺乏统缺乏统一性一性 国际系统命名法国际系统命名法系统名称系统名称(systematic name)(systematic name)应当标明酶的底物和反应的性质应当标明酶的底物和反应的性质当底物多于两个时应同时列出当底物多于两个时应同时列出, ,并用并用“:”:”隔开。例：隔开。例：根据酶催化反应的类型分为六大类：根据酶催化反应的类型分为六大类： 1. 1.氧化还原酶类氧化还原酶类 2.2.转移酶类转移酶类

5、3. 3.水解酶类水解酶类 4.4.裂分酶类裂分酶类 5. 5.异构酶类异构酶类 6.6.合成酶类合成酶类 根根据据底底物物的的性性质质和和反反应应键键的的性性质质，每每一一类类又又可可分分为为若干亚类及次亚类。仍然用若干亚类及次亚类。仍然用1 1，2 2，3 3，编号。编号。 在次亚类中编号。在次亚类中编号。系统名称：系统名称：系统名系统名乳酸脱氢酶乳酸脱氢酶EC1.1.1.27EC(EnzymeCommision)第第1 1大类，氧化还原酶大类，氧化还原酶第第1 1亚类，氧化基团亚类，氧化基团CHOHCHOH第第1 1亚亚类，亚亚类，H H受体为受体为NADNAD+ +该酶在亚亚类中的流水

6、编该酶在亚亚类中的流水编号号I 系统名系统名：包括所有底物的名称和反应类型。：包括所有底物的名称和反应类型。乳酸乳酸 + NAD+ NAD+ +丙酮酸丙酮酸 + NADH + H+ NADH + H+ +乳酸：乳酸：NADNAD+ +氧化还原酶氧化还原酶I 惯用名惯用名：只取较重要的底物名称和反应类型。：只取较重要的底物名称和反应类型。乳酸：乳酸：NADNAD+ +氧化还原酶氧化还原酶乳酸脱氢酶乳酸脱氢酶1. 1.氧化还原酶类氧化还原酶类：主要是催化氢的转移或电子传递或加氧主要是催化氢的转移或电子传递或加氧的氧化还原反应。的氧化还原反应。AH2+B（O2）供氢体供氢体受氢体受氢体A+BH2（H

7、2O2，H2O）根据受氢体的性质，氧化还原酶类可分为：根据受氢体的性质，氧化还原酶类可分为：（1 1）脱氢酶类）脱氢酶类：催化直接从底物上脱氢的反应：催化直接从底物上脱氢的反应。AH2+BA+BH2（需辅酶需辅酶或辅酶或辅酶）（2 2）氧化酶类）氧化酶类催化底物脱氢，氧化生成催化底物脱氢，氧化生成H H2 2OO2 2：AH2+O2A+H2O2催化底物脱氢，氧化生成催化底物脱氢，氧化生成H H2 2OO：2AH2+O22A+2H2O（3 3）过氧化物酶）过氧化物酶ROO+H2O2RO+H2O+O2（其它）（其它）（4 4）加氧酶（双加氧酶和单加氧酶）加氧酶（双加氧酶和单加氧酶）O2+OHOHC

8、=OC=OOHOH（顺，顺顺，顺- -已二烯二酸）已二烯二酸）2. 2. 转移酶类转移酶类：催化化合物中某些基团的转移。：催化化合物中某些基团的转移。AX+BA+BX根据根据X X分成分成8 8个亚类：转移碳基、酮基或醛基、酰个亚类：转移碳基、酮基或醛基、酰基、糖基、烃基、含氮基、基、糖基、烃基、含氮基、含磷基（激酶）含磷基（激酶）和含和含硫基的酶。硫基的酶。3.3.水解酶类水解酶类：催化加水分解作用。催化加水分解作用。 AB + H H2O O AOOH H + BH H4. 4. 裂解酶类裂解酶类：催化非水解性地除去基团而形成双催化非水解性地除去基团而形成双键的反应或逆反应。键的反应或逆反

9、应。CH3C=OCOOHCC键CH3C=OH+CO2（脱羧酶、醛缩酶）CO键CH2COOHHOCHCOOHHCCOOHHOOCCH+H2O（脱水酶脱水酶）CN键COOHCHNH2CH2COOHCOOHCHHCCOOH+NH3（脱氨酶脱氨酶）5.5.异构酶异构酶类类：催化各种异构体之间的互变。催化各种异构体之间的互变。AB常见的有消旋和变旋、醛酮异构、顺反异构和变常见的有消旋和变旋、醛酮异构、顺反异构和变位酶类位酶类。6.6.合成酶合成酶类类: :催化一切必须与催化一切必须与ATPATP分解相偶联、并由两分解相偶联、并由两种物质合成一种物质的反应。种物质合成一种物质的反应。 A + B + AT

10、P C + ADP（或AMP）+ Pi(或PPi) （四）酶的分类（四）酶的分类1 1、根据酶的组成分类：、根据酶的组成分类：（1 1）单纯酶）单纯酶（简单蛋白质）：（简单蛋白质）： 其活性仅取决于其蛋白质结构。其活性仅取决于其蛋白质结构。 如：蛋白酶、淀粉酶等。如：蛋白酶、淀粉酶等。（2 2）结合酶：酶蛋白）结合酶：酶蛋白+ +辅因子辅因子=全酶全酶 辅因子辅因子(cofacter)(cofacter)：热稳定的非蛋白小分子。热稳定的非蛋白小分子。l按分子组成：按分子组成： 金属离子金属离子：MgMg2+2+、MnMn2+2+ 小分子有机物小分子有机物：维生素维生素 全全 酶酶酶蛋白酶蛋白辅

11、助因子辅助因子金属离子金属离子小分子有机化合物小分子有机化合物决定反应的特异性决定反应的特异性决定反应的种类与性质决定反应的种类与性质 同一辅因子可与多种不同酶蛋白结合，显示不同催化活性同一辅因子可与多种不同酶蛋白结合，显示不同催化活性辅助因子按其与酶蛋白结合的紧密程度分为：辅助因子按其与酶蛋白结合的紧密程度分为： 辅酶辅酶 (coenzyme):(coenzyme):与酶蛋白结合疏松，可用透析或超滤的与酶蛋白结合疏松，可用透析或超滤的方法除去。方法除去。 辅基辅基 (prosthetic group):(prosthetic group):与酶蛋白结合紧密，不能用透析或超与酶蛋白结合紧密，不

12、能用透析或超滤的方法除去滤的方法除去。（3 3）多酶体系及其分类）多酶体系及其分类）多酶体系）多酶体系(multienzyme system)(multienzyme system)：细胞内存在着细胞内存在着许多许多由几种不同功能的酶彼此聚合形成的多酶复由几种不同功能的酶彼此聚合形成的多酶复合物合物。主要指结构化的多酶复合体如丙酮酸脱氢。主要指结构化的多酶复合体如丙酮酸脱氢酶系、脂肪酸合成酶复合体等。酶系、脂肪酸合成酶复合体等。）多酶体系的分类：）多酶体系的分类： 可溶性的多酶体系可溶性的多酶体系 如催化糖的有氧氧化的多酶体系中的各个酶，在如催化糖的有氧氧化的多酶体系中的各个酶，在细胞质中以可

13、溶性形式作为独立的单体存在，彼细胞质中以可溶性形式作为独立的单体存在，彼此之间没有结构上的关系。此之间没有结构上的关系。 丙酮酸脱氢酶复合体丙酮酸脱氢酶复合体（pyruvic acid dehydrogenase complex)pyruvic acid dehydrogenase complex)由三个酶组成：由三个酶组成：丙酮酸脱氢酶、二氢硫辛酸转乙酰基酶、二氢丙酮酸脱氢酶、二氢硫辛酸转乙酰基酶、二氢硫辛酸脱氢酶硫辛酸脱氢酶 脂肪酸合成酶复合体脂肪酸合成酶复合体：7 7种种不同的酶围绕着不同的酶围绕着酰基载体蛋白（酰基载体蛋白（ACPACP）排列成排列成紧密的复合体紧密的复合体 结构化的多

14、酶体系结构化的多酶体系 （五）酶的特性（五）酶的特性 酶的生物学意义酶的生物学意义: :酶能在机体十分温和的条件下酶能在机体十分温和的条件下高效率地起催化作用高效率地起催化作用, ,使生物体内的各种物质处使生物体内的各种物质处于不断的新陈代谢之中于不断的新陈代谢之中, ,因此酶在生物体的生命因此酶在生物体的生命活动中占有极其重要的地位。活动中占有极其重要的地位。 u酶与一般催化剂的共同点酶与一般催化剂的共同点在反应前后没有质和量的变化；在反应前后没有质和量的变化；只能催化热力学允许的化学反应；只能催化热力学允许的化学反应；只能加速可逆反应的进程，而不改变只能加速可逆反应的进程，而不改变反应的平

15、衡点。反应的平衡点。（1 1）酶促反应具有极高的效率）酶促反应具有极高的效率 1. 1.酶催化作用特点：酶催化作用特点：酶酶的的催催化化效效率率通通常常比比非非催催化化反反应应高高10108 810102020倍倍，比一般催化剂高比一般催化剂高10107 710101313倍。倍。酶酶 加加 速速 反反 应应 的的 机机 理理 是是 降降 低低 反反 应应 的的 活活 化化 能能(activation energy)(activation energy)。反应总能量改变反应总能量改变 非催化反应活化能非催化反应活化能 酶促反应酶促反应 活化能活化能 一般催化剂催一般催化剂催化反应的活化能化反应

16、的活化能 能能量量反反 应应 过过 程程 底物底物 产物产物 酶促反应活化能的改变酶促反应活化能的改变 活化能：活化能：底物分子从初态转变到活化态所需的能量。底物分子从初态转变到活化态所需的能量。过氧化氢分解反应所需活化能过氧化氢分解反应所需活化能催化剂催化剂每摩尔需活化能每摩尔需活化能无无18 000cal18 000cal胶态钯胶态钯11 700cal11 700cal过氧化氢酶过氧化氢酶2 000cal2 000cal一一种种酶酶仅仅作作用用于于一一种种或或一一类类化化合合物物，或或一一定定的的化化学学键键，催催化化一一定定的的化化学学反反应应并并生生成成一一定定的的产产物。酶的这种选择

17、性称为酶的特异性或专一性物。酶的这种选择性称为酶的特异性或专一性。* 酶的特异性酶的特异性(specificity)(specificity)（2 2）酶促反应具有高度的特异性）酶促反应具有高度的特异性绝对特异性绝对特异性(absolute specificity)(absolute specificity)相对特异性相对特异性(relative specificity)(relative specificity)立体结构特异性立体结构特异性( (stereostereo specificityspecificity) )绝对特异性绝对特异性酶只作用于特定结构的底物，进行一种专一酶只作用于特定

18、结构的底物，进行一种专一的反应，生成一种特定结构的产物的反应，生成一种特定结构的产物 。如：如： 相对特异性相对特异性酶作用于一类化合物或一种化学键。酶作用于一类化合物或一种化学键。如：如：立体结构特异性立体结构特异性酶仅作用于立体异构体中的一种。酶仅作用于立体异构体中的一种。(1)(1)延胡索酸水化酶，只能催化反延胡索酸水化酶，只能催化反- -丁烯二酸，而不能催丁烯二酸，而不能催化顺化顺- -丁烯二酸丁烯二酸反反- -丁丁烯烯二二酸酸顺顺- -丁丁烯烯二二酸酸(2)L-AA(2)L-AA氧化酶只催化氧化酶只催化L-AAL-AA的氧化。的氧化。（3 3）高敏感性）高敏感性：即酶易失活，酶作用需

19、要比较温和即酶易失活，酶作用需要比较温和的条件，如常温、常压和接近中性的酸碱度等。的条件，如常温、常压和接近中性的酸碱度等。这是由于酶的化学本质为蛋白质，凡使蛋白质变这是由于酶的化学本质为蛋白质，凡使蛋白质变性的因素都能使蛋白质失活性的因素都能使蛋白质失活（4 4）可调节性）可调节性：包括抑制剂调节、共价修饰调节、包括抑制剂调节、共价修饰调节、反馈调节、酶原激活和激素控制等反馈调节、酶原激活和激素控制等（5 5）与辅酶、辅基和金属离子的相关性）与辅酶、辅基和金属离子的相关性：结合酶的：结合酶的催化活性与辅酶、辅基和金属离子的作用是相关催化活性与辅酶、辅基和金属离子的作用是相关的的： 二、酶的结

20、构与功能的关系二、酶的结构与功能的关系 1.酶的活性中心酶的活性中心2.酶原与酶原的激活酶原与酶原的激活3.同工酶同工酶4.抗体酶抗体酶5.核酶核酶二、二、酶的结构与功能的关系酶的结构与功能的关系1. 1.酶的活性中心酶的活性中心活性中心：活性中心：酶分子中能同底物结合并起催化作用的空间部酶分子中能同底物结合并起催化作用的空间部位。位。羧肽酶的活性中心羧肽酶的活性中心实验：实验：酶蛋白经酶蛋白经水解切去部分肽水解切去部分肽链后，残留部分链后，残留部分仍有活性。仍有活性。说明：说明：参与催化参与催化反应的只是其中反应的只是其中一小部分，即一小部分，即活活性中心。性中心。活性中心的实质活性中心的实

21、质 活性中心活性中心即酶分子即酶分子中在三维结构上相中在三维结构上相互靠近的几个互靠近的几个aaaa残残基或其上的某些基基或其上的某些基团。团。 活性中心以外的部活性中心以外的部分对酶催化次要但分对酶催化次要但对活性中心形成提对活性中心形成提供结构基础。供结构基础。胰凝乳蛋白酶的活性中心胰凝乳蛋白酶的活性中心活性中心的功能部位：活性中心的功能部位：结合部位：结合部位：酶分子上与底物结合的部位。酶分子上与底物结合的部位。催化部位：催化部位：底物在此发生一定的化学变化。底物在此发生一定的化学变化。活性中心活性中心结合部位结合部位决定酶的专一性决定酶的专一性催化部位催化部位决定酶所催化反应的性质决定

22、酶所催化反应的性质构成酶活性中心的常见基团：构成酶活性中心的常见基团：HisHis的咪唑基、的咪唑基、SerSer的的OHOH、CysCys的的SHSH、GluGlu的的-COOH-COOH。活性中心的特点：活性中心的特点：1 1）仅为酶体积的很小部分；）仅为酶体积的很小部分；2 2）具有一定的空间构象；）具有一定的空间构象；3 3）S S与与E E靠次级键结合；靠次级键结合；4 4）是由特定空间构象维持的一）是由特定空间构象维持的一个个裂隙裂隙。溶菌酶活性中心底底物物活性中心以外活性中心以外的必需基团的必需基团结合基团结合基团催化基团催化基团活性中心活性中心63研究酶活性中心的方法：研究酶活

23、性中心的方法：1 1、通过研究专一性底物判断确定、通过研究专一性底物判断确定E E活性中心的结构；活性中心的结构；2 2、用化学修饰法共价修饰、用化学修饰法共价修饰E E分子的一些功能基团，以查分子的一些功能基团，以查出哪些基团是活性必需的；出哪些基团是活性必需的；3 3、X-X-衍射直接探明活性中心。衍射直接探明活性中心。2. 2. 酶原与酶原的激活酶原与酶原的激活酶原酶原 ( (zymogenzymogen) )有些酶在细胞内合成或初分泌时只是有些酶在细胞内合成或初分泌时只是酶的无活性前体，此前体物质称为酶原。酶的无活性前体，此前体物质称为酶原。 酶原的激活酶原的激活在一定条件下，酶原向有

24、活性酶转化在一定条件下，酶原向有活性酶转化的过程。的过程。 酶原激活的机理酶原激活的机理酶酶 原原分子构象发生改变分子构象发生改变形成或暴露出酶的活性中心形成或暴露出酶的活性中心 一个或几个特定的肽键断裂，水解一个或几个特定的肽键断裂，水解掉一个或几个短肽掉一个或几个短肽在特定条件下在特定条件下胰蛋白酶原的激活过程胰蛋白酶原的激活过程胰蛋白酶原的激活过程胰蛋白酶原的激活过程 酶原激活的生理意义酶原激活的生理意义避免细胞产生的酶对细胞进行自身消化，避免细胞产生的酶对细胞进行自身消化，并使酶在特定的部位和环境中发挥作用，保证并使酶在特定的部位和环境中发挥作用，保证体内代谢正常进行。体内代谢正常进行

25、。有的酶原可以视为酶的储存形式。在需要有的酶原可以视为酶的储存形式。在需要时，酶原适时地转变成有活性的酶，发挥其催时，酶原适时地转变成有活性的酶，发挥其催化作用。化作用。3. 3. 同工酶同工酶* 定义定义同工酶同工酶(isoenzyme)(isoenzyme)是指催化相同的是指催化相同的化学反应，而酶蛋白的分子结构、理化化学反应，而酶蛋白的分子结构、理化性质乃至免疫学性质不同的一组酶。性质乃至免疫学性质不同的一组酶。 同工酶是寡聚酶。同工酶是寡聚酶。 存在于同一种属或同一个体的不同组织或同一组存在于同一种属或同一个体的不同组织或同一组织、同一细胞内。织、同一细胞内。 目前发现约目前发现约50

26、0500种。种。* 举例：乳酸脱氢酶举例：乳酸脱氢酶(LDH(LDH1 1 LDHLDH5 5) )临床意义临床意义心肌梗死和肝病病人血清心肌梗死和肝病病人血清LDHLDH同工酶谱的变化同工酶谱的变化1 1酶酶活活性性心肌梗死酶谱心肌梗死酶谱正常酶谱正常酶谱肝病酶谱肝病酶谱2 23 34 45 5同工酶的性质同工酶的性质由于同工酶一级结构的不同，因此分子量、由于同工酶一级结构的不同，因此分子量、pIpI、KmKm、物理化学性质、免疫性质、电泳行为等、物理化学性质、免疫性质、电泳行为等方面都表现出差异。方面都表现出差异。可以用电泳的方法对它们进行分离。可以用电泳的方法对它们进行分离。思考：为什么

27、思考：为什么同工酶能同工酶能催化相同的化学反应？催化相同的化学反应？4.4.抗体酶抗体酶既是抗体又具有催化功能的蛋白质既是抗体又具有催化功能的蛋白质. . 本质是本质是免疫球蛋白免疫球蛋白(immunologlobulins)人工的方法使其获得了酶的属性，所以又称为人工的方法使其获得了酶的属性，所以又称为催催化性抗体化性抗体(catalytic antibody)。抗体蛋白的特性抗体蛋白的特性酶酶与与抗抗体体这这两两种种蛋蛋白白质质之之间间尽尽管管功功能能不不同同，但但它它们们与与各各自自的的配配基基( (酶酶- -底底物物、抗抗体体- -抗抗原原) )的的结结合合特性特性，如，如结合方式、动

28、力学过程结合方式、动力学过程等都非常相似。等都非常相似。从从2020世世纪纪6060年年代代起起，有有人人开开始始了了对对抗抗体体进进行行修修饰饰，并，并使其获得酶的属性使其获得酶的属性的研究。的研究。 核酶（核酶（Ribozyme) :Ribozyme) :具催化活性的具催化活性的RNARNA。 核酶的发现核酶的发现: : 1982 1982年年CechCech等发现四膜虫等发现四膜虫26S rRNA26S rRNA前体前体具有自我剪接具有自我剪接(self-splicing)(self-splicing)功能，并于功能，并于19861986年年证明其内含子证明其内含子L-19 RNAL-1

29、9 RNA具有多种催化功能。具有多种催化功能。此后陆续发现多种具有催化功能的此后陆续发现多种具有催化功能的RNARNA，底，底物也扩大到物也扩大到DNADNA、糖类、氨基酸酯。、糖类、氨基酸酯。 5. 5. 核酶核酶AltmanAltman发发现现RNase-PRNase-P的的蛋蛋白白部部分分不不具具催催化化功功能能，而而RNARNA部部分分在在有有足足够够浓浓度度MgMg2+2+存在下，能起存在下，能起核酸水解酶核酸水解酶的作用。的作用。证证明明了了核核酸酸既既是是信信息息分分子子，又又是是功功能能分分子。子。核酶的催化性质核酶的催化性质RNARNA作用于作用于RNARNA；核酸酶催化的反

30、应主要包括核酸酶催化的反应主要包括: :水解反应水解反应(RNA(RNA限制性内切酶活性限制性内切酶活性) )，连接反应连接反应( (聚合聚合酶活性酶活性) )和和转核苷酰反应转核苷酰反应等；等；最近核酸酶的其他作用底物也已被发现，最近核酸酶的其他作用底物也已被发现，如如多糖、多糖、DNADNA以及氨基酸酯等以及氨基酸酯等。核酶研究中的两个问题核酶研究中的两个问题核酶催化效率太低。核酶催化效率太低。由由于于核核酶酶本本身身是是RNARNA，很很容容易易被被核核酸酸水水解酶解酶(RNase)(RNase)所破坏。所破坏。 因此，要将核酶应用于体内阻断基因表达或作为抗病毒的临床药物，还要做大量的研

31、究工作。三、酶的作用机制三、酶的作用机制 降低化学反应所需的活化能降低化学反应所需的活化能（1 1）中间产物学说：）中间产物学说： 学说认为：学说认为：当酶催化一化学反应时，首先当酶催化一化学反应时，首先 E E和和 S S结合形成中间产物结合形成中间产物 ESES，然后它再分解成产物，然后它再分解成产物P P并释放酶并释放酶E E。ESE + SE + P k1k2k3 中间产物学说中间产物学说1 1）中间产物比底物需较少的活化能就可分解成产物）中间产物比底物需较少的活化能就可分解成产物并放出酶。并放出酶。2 2）ES ES 决定酶促反应速度。决定酶促反应速度。3 3）中间产物形成的）中间产

32、物形成的实验依据实验依据：同位素同位素3232P P标记底物法（磷酸化酶与葡萄糖结合）标记底物法（磷酸化酶与葡萄糖结合）吸收光谱法（过氧化物酶与过氧化氢结合）吸收光谱法（过氧化物酶与过氧化氢结合）（2 2）决定酶作用专一性的机制）决定酶作用专一性的机制 锁钥学说锁钥学说： 1894 1894年年E.Fischer E.Fischer 提出：提出：S S分子或其分子或其一部分像钥匙一一部分像钥匙一样楔入样楔入E E活性中心活性中心部位。部位。 此学说强调此学说强调E E与与S S结结构互相吻合构互相吻合( (刚性刚性模板模板) )。物理吸附物理吸附诱导契合学说诱导契合学说19581958年年Ko

33、shland Koshland 提出：提出：当当E E与与S S接近时，接近时，E E蛋白受蛋白受S S分子的诱分子的诱导，其构象发生有导，其构象发生有利于利于S S结合的变化，结合的变化，E E与与S S在此基础上互在此基础上互补契合、进行反应。补契合、进行反应。诱导契合假说诱导契合假说（3 3）使酶具高催化效率的因素：）使酶具高催化效率的因素：）酶与底物的）酶与底物的“邻近邻近”及及“定向定向”效应效应邻近邻近(proximity)(proximity)：在酶促反应中，底物分子在酶促反应中，底物分子酶的活性中心酶的活性中心酶活性中心的有效浓度大大增酶活性中心的有效浓度大大增加加 提高反应速

34、度。提高反应速度。定向定向(orientation)(orientation): :底物分子中参与反应的基团底物分子中参与反应的基团与酶活性中心的相关基团相互接近，并正确定与酶活性中心的相关基团相互接近，并正确定向向高效率和专一性特点。高效率和专一性特点。分子间反应变为分子内反应。分子间反应变为分子内反应。2 2）“张力张力”和和“形变形变”X X衍射证实：衍射证实：E E使使S S分子中分子中敏感键中某些基团的电敏感键中某些基团的电子密度变化，产生电子子密度变化，产生电子张力张力，使其发生变形，使其发生变形，更易于断裂。更易于断裂。A A：S S变形变形B B：S S和和E E都变形都变形3

35、 3）酸碱催化）酸碱催化指指E E分子上某分子上某些基团作为质些基团作为质子供体和质子子供体和质子受体对受体对S S进行进行（广义的）酸（广义的）酸碱催化。碱催化。广义酸碱催化是指广义酸碱催化是指通过质子酸提供部分质子通过质子酸提供部分质子, ,或是通或是通过质子碱接受部分质子的作用，达到降低反应活化能过质子碱接受部分质子的作用，达到降低反应活化能的过程。的过程。4 4）共价催化）共价催化 E E分子中的亲核基团提分子中的亲核基团提供电子，对供电子，对S S中亲电子的碳中亲电子的碳原子进行攻击，原子进行攻击，生成生成ESES使反使反应活化能降低，应活化能降低，S S可越过较可越过较低的能垒而形

36、成产物。低的能垒而形成产物。使酶具高催化效率的因素：使酶具高催化效率的因素：）酶与底物的）酶与底物的“邻近邻近”及及“定向定向”效应效应 2 2）“张力张力”和和“形变形变” 3 3）酸碱催化）酸碱催化 4 4）共价催化）共价催化q酶促反应动力学酶促反应动力学研究各种因素对研究各种因素对酶促反应速度酶促反应速度的影响。的影响。q影响因素包括有影响因素包括有底物浓度、酶浓度、温度、底物浓度、酶浓度、温度、 pHpH、抑制剂、激活剂。抑制剂、激活剂。四、酶促反应动力学四、酶促反应动力学I. I.单底物、单产物反应。单底物、单产物反应。II.II.酶酶促促反反应应速速度度用用单单位位时时间间内内底底

37、物物的的消消耗量和产物的生成量来表示。耗量和产物的生成量来表示。研究前提研究前提1. 1. 底物浓度对反应速度的影响底物浓度对反应速度的影响矩形双曲线矩形双曲线19131913年年MichaelisMichaelis和和MentenMenten提提出出反反应应速速度度与与底底物物浓浓度度关关系系的的数数学学方方程程式式，即即米米曼曼氏氏方方程程式式，简简称称米米氏氏方方程程式式(Michaelis equation)(Michaelis equation)。VmaxSKm+S1）米氏方程的推导）米氏方程的推导根据中间产物学说：根据中间产物学说： 式中K1,K2,K3分别为各反应常数，可知： E

38、S形成速度= K1 ES ES分解速度=(K2 + K3 )ES当反应达恒稳态时,二速度相等,即: K1 E S =(K2 + K3 ) ESS + E ES E + PK1K2K3整理并令：由于E 与ES之和为总的酶浓度Et ,即: Et= E + ES E = Et-ES将代入 :ESK1=ES(K2+K3)KmES=(Et-ES) SKm整理得:酶促反应速度由ES决定,而= K3 ES ES=将代入整理得:ES=EtSKm+SK3=EtSKm+SK3此时达到最大反应速度Vmax: Vmax= K3 Et 将代入,得米氏方程:当S 升高,所有E为S所饱和时,即: Et =ESVmaxSKm

39、+S当当v=Vmax/2时时KmS （1 1）K Kmm值等于酶促反应速度为最大反应速度一值等于酶促反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度，半时的底物浓度，单位是单位是mol/Lmol/L。2Km + S Vmax VmaxSV VmaxmaxV VSSK KmmV Vmaxmax/2 /2 2 2）K Kmm与与V Vmaxmax的意义的意义 （2 2）K Kmm是酶的特征性物理常数。是酶的特征性物理常数。 只与只与E E性质有关，与性质有关，与EE无关；无关； （3 3）同一同一E E有几个有几个S S就有几个就有几个K Kmm ， K Kmm最小的为最适最小的为最适S S或天然或天然S

40、S。（5 5） V Vmaxmax定义定义：V Vmm是酶完全被底物饱和时的反应速度，是酶完全被底物饱和时的反应速度，与酶浓度成正比。与酶浓度成正比。意义意义：V Vmaxmax=K=K3 3 EE如果酶的总浓度已知，可从如果酶的总浓度已知，可从V Vmaxmax计算酶计算酶的转换数的转换数(turnover number)(turnover number)，即动力学常数，即动力学常数K K3 3。定义定义 当当酶被底物充分饱和酶被底物充分饱和时，单位时间内时，单位时间内每个酶分子催化底物转变为产物的分每个酶分子催化底物转变为产物的分子数。子数。意义意义 可用来比较每单位酶的催化能力。可用来比

41、较每单位酶的催化能力。 酶的转换数酶的转换数3 3）mm值与值与maxmax值的测定值的测定双倒数作图法双倒数作图法(double reciprocal plot)(double reciprocal plot)，又称为，又称为 林林- -贝氏贝氏(Lineweaver- Burk)(Lineweaver- Burk)作图法作图法 V VmaxmaxSSKKmm+S+SV=V=（林贝氏方程）（林贝氏方程） 两边同取倒数两边同取倒数两边同取倒数两边同取倒数 双倒数作图法双倒数作图法 Hanes Hanes作图法作图法斜率斜率= 1/VmKm/VmKm/VmKm/VmKm/Vm-Km-KmS/VS

42、/VS/VS/VSSSS 在林在林- -贝方程的基础上，两贝方程的基础上，两边同乘边同乘SS/ V V =K Km m/ / VmaxVmax + + S/VmaxVmax Eadie-Hofstee Eadie-Hofstee作图法作图法VmaxVmax/KmVmVmaxaxVV/s在林在林- -贝方程的基础上，贝方程的基础上，两边同乘两边同乘V .VmaxV .Vmax2. 酶浓度对反应速度的影响酶浓度对反应速度的影响当当SSEE，反反应应速速度度与与酶酶浓浓度成正比。度成正比。0 V E 关系式为：关系式为：V = KV = K3 3 E Eq双重影响双重影响3.3.温度对反应速度的影响

43、温度对反应速度的影响q最适温度最适温度 (optimum (optimum temperature)temperature)：酶促反应速度最酶促反应速度最快时的环境温度。快时的环境温度。酶酶活活性性0.51.02.01.50 10 20 30 40 50 60 温度温度 C 温度影响酶促反应的机理：温度影响酶促反应的机理：温度对反应速度的影响温度对反应速度的影响1 1）低于低于最适温度：反最适温度：反应应速度随温度上升速度随温度上升而加而加快；快；2 2）高于高于最适温度：最适温度：E E蛋蛋白白随温度上升而变性失随温度上升而变性失活。活。酶酶活活性性0.51.02.01.50 10 20 3

44、0 40 50 60 温度温度 C 例例1. 1.蔬菜干制蔬菜干制 ( (霸王花、黄花菜霸王花、黄花菜) ) 酶促褐变条件：酚酶、酚类底物、酶促褐变条件：酚酶、酚类底物、OO2 2例例2.2.加工豆奶加工豆奶 豆腥味产生条件：脂氧化酶、油脂、豆腥味产生条件：脂氧化酶、油脂、OO2 2例例3.3.茶叶茶叶 绿茶：鲜叶绿茶：鲜叶 杀青杀青 揉捻揉捻 干燥干燥红红茶茶：鲜鲜叶叶 萎萎雕雕 揉揉捻捻 发发酵酵 干干燥燥4.pH4.pH对酶作用的影响对酶作用的影响最适最适 pHpH：酶具有最大的催化活性时的环境：酶具有最大的催化活性时的环境pHpH值值pHpH酶酶的的活活性性胃蛋白酶胃蛋白酶淀粉酶淀粉酶

45、胆碱酯酶胆碱酯酶0 02 24 46 68 81010 酶的最适酶的最适pHpH不是酶的特征性常数：因底物、不是酶的特征性常数：因底物、缓冲液的不同而不同。缓冲液的不同而不同。 不同酶的最适不同酶的最适pHpH各不相同，一般在各不相同，一般在pH5-8pH5-8之间。之间。pHpH影响的机理：影响的机理：1 1）pHpH影响影响E E活性中心及附近有关基团的解活性中心及附近有关基团的解 离离，使之，使之易易或或不易不易与与S S 结合；结合；2 2）pHpH影响影响S S的极性基团的极性基团，从而影响这些基，从而影响这些基 团与团与E E的结合；的结合；3 3）过酸、过碱可）过酸、过碱可使酶变

46、性失活使酶变性失活。5.5.激活剂对酶作用的影响激活剂对酶作用的影响概念概念：凡能提高酶活力的物质称激活剂。凡能提高酶活力的物质称激活剂。 种类种类：1 1）无机离子的激活作用：）无机离子的激活作用： 作为活性部位的组分；作为活性部位的组分； 作为辅助因子的组分；作为辅助因子的组分；如：如：MgMg2+2+、CaCa2+2+、CoCo2+2+、MnMn2+2+等。等。2 2）中等大小的有机分子）中等大小的有机分子： 包括还原剂（使二硫键还原）、包括还原剂（使二硫键还原）、 EDTAEDTA（去除重金属杂质）等。（去除重金属杂质）等。3 3）蛋白质类大分子物质：）蛋白质类大分子物质： 激活酶原、

47、解除抑制剂的抑制作用。激活酶原、解除抑制剂的抑制作用。如：如：prpr与重金属离子结合，解除抑制剂的与重金属离子结合，解除抑制剂的 抑制。抑制。6.6.抑制剂对反应速度的影响抑制剂对反应速度的影响酶的抑制剂酶的抑制剂(inhibitor)(inhibitor)凡能使酶的催化活性下降而不引起酶蛋白凡能使酶的催化活性下降而不引起酶蛋白变性的物质统称为酶的抑制剂。变性的物质统称为酶的抑制剂。 区别于酶的变性区别于酶的变性抑制剂对酶有一定选择性，而变性的因抑制剂对酶有一定选择性，而变性的因素对酶没有选择性。素对酶没有选择性。 抑制作用的类型抑制作用的类型不可逆性抑制不可逆性抑制 (irreversib

48、le inhibition)(irreversible inhibition)可逆性抑制可逆性抑制 (reversible inhibition)(reversible inhibition)：竞争性抑制竞争性抑制 (competitive inhibition)(competitive inhibition)非竞争性抑制非竞争性抑制 (non-competitive inhibition)(non-competitive inhibition)反竞争性抑制反竞争性抑制 (uncompetitive inhibition)(uncompetitive inhibition)1 ) 1 ) 不可

49、逆性抑制作用不可逆性抑制作用* 概念概念抑抑制制剂剂通通常常以以共共价价键键与与酶酶活活性性中中心心的的必必需需基基团团相相结结合合，使使酶酶失失活活，不不能能用用透透析析、超超滤滤等等方法予以除去。方法予以除去。 * * 举例举例农药农药: :有机磷农药有机磷农药、有机氯农药、有机汞农药、有机氯农药、有机汞农药2 2） 可逆性抑制作用可逆性抑制作用* * 概念概念抑抑制制剂剂以以非非共共价价键键与与酶酶或或酶酶- -底底物物复复合合物物可可逆逆性性结结合合，使使酶酶的的活活性性降降低低或或丧丧失失；抑抑制制剂剂可可用透析、超滤等方法除去。用透析、超滤等方法除去。竞争性抑制竞争性抑制非竞争性抑

50、制非竞争性抑制反竞争性抑制反竞争性抑制 * * * * 类型类型类型类型（1 1）竞争性抑制作用）竞争性抑制作用定义定义抑抑制制剂剂与与底底物物的的结结构构相相似似，能能与与底底物物竞竞争争酶酶的的活活性性中中心心，从从而而阻阻碍碍酶酶底底物物复复合合物物的的形形成成，使酶的活性降低。使酶的活性降低。竞争性抑制竞争性抑制 * * 特点特点b)b)抑抑制制程程度度取取决决于于抑抑制制剂剂与与酶酶的的相相对对亲亲和和力力及及S S；a)a)I I与与S S结结构构类类似似，竞竞争争酶酶的的活活性性中心；中心；c) c)动动力力学学特特点点：V Vmaxmax不不变变，表表观观K Kmm。 抑制剂抑

51、制剂无抑制剂无抑制剂1/v 1/S * * 举例举例 丙二酸对琥珀酸脱氢酶的抑制丙二酸对琥珀酸脱氢酶的抑制琥珀酸琥珀酸琥珀酸脱氢酶琥珀酸脱氢酶FADFADH2延胡索酸延胡索酸 磺胺药对细菌磺胺药对细菌FHFH2 2合成酶的抑制合成酶的抑制2. 2. 非竞争性抑制非竞争性抑制抑制剂与酶活性中心外的必需基团结合，抑制剂与酶活性中心外的必需基团结合，底物与抑制剂之间无竞争关系底物与抑制剂之间无竞争关系。非竞争性抑制非竞争性抑制* 特点特点a)抑抑制制剂剂与与酶酶活活性性中中心心外外的的必必需需基基团结合；团结合；b)b)抑抑制制程程度度取取决决于于I I；c) c)动动力力学学特特点点：V Vmax

52、max，表表观观K Kmm不变。不变。 抑制剂抑制剂 1/v 1/S 无抑制剂无抑制剂 2. 2. 反竞争性抑制反竞争性抑制抑制剂仅与酶和底物形成的中间产物结合抑制剂仅与酶和底物形成的中间产物结合，使使ESES的量下降。的量下降。反竞争性抑制反竞争性抑制* 特点特点a)a)抑抑制制剂剂只只与与ESES结合；结合；b)b)抑抑制制程程度度取取决决与与I I及及S S；c) c)动力学特点：动力学特点：V Vmaxmax，表观，表观K Kmm。 抑制剂抑制剂 1/V1/S无抑制剂无抑制剂 各种可逆性抑制作用的比较各种可逆性抑制作用的比较 作用特征作用特征竞争性竞争性抑制抑制非竞争性非竞争性抑制抑制

53、反竞争反竞争性抑制性抑制与与I I结合的组分结合的组分E EE E、ESESESES表观表观K Kmm增大增大不变不变减小减小V Vmaxmax不变不变降低降低降低降低7.7.别构酶别构酶1) 1)特点：特点： 亦称亦称变构酶变构酶，是一类重要的调节酶。，是一类重要的调节酶。 一般为寡聚酶（两个以上亚基组成），一般为寡聚酶（两个以上亚基组成），易发生构象改变。其上有二个重要部位：易发生构象改变。其上有二个重要部位： 活性部位活性部位和和别构部位别构部位2)2)别构酶结构的部位别构酶结构的部位活性部位：活性部位： 负责负责E E对对S S的结合与催化；的结合与催化；别构部位：别构部位： 可结合调

54、节物，负责调可结合调节物，负责调节酶反应速度节酶反应速度 。 这两部位可在不同亚基这两部位可在不同亚基或同一亚基不同部位上。或同一亚基不同部位上。3)3)别构效应：别构效应：概念：概念： 当当S S或或S S以外的物质与以外的物质与E E的相应部位非共价的相应部位非共价 结合后，通过结合后，通过E E分子构象的变化影响分子构象的变化影响E E催化催化 活性的效应。活性的效应。 4 4）别构效应剂）别构效应剂别构激活剂别构激活剂： 正协同，加快反应速度的，多为正协同，加快反应速度的，多为S S 。 如：如：ATPATP对对ATCase(ATCase(天冬氨酸转氨甲酰酶天冬氨酸转氨甲酰酶) )。别

55、构抑制剂别构抑制剂： 负协同，减慢反应速度，多为代谢终产物。负协同，减慢反应速度，多为代谢终产物。 如：如：CTPCTP对对ATCaseATCase。 ATCase ATCase：合成：合成CTPCTP的多酶体系中的第一个酶的多酶体系中的第一个酶 底物为天冬氨酸、氨甲酰磷酸底物为天冬氨酸、氨甲酰磷酸 负调节物为负调节物为CTPCTP； 正调节物为正调节物为ATPATPATCaseATCase：天冬氨酸转氨甲酰基酶：天冬氨酸转氨甲酰基酶生物学意义：生物学意义：CTPCTP：通过通过降低酶与底物的亲和力抑制降低酶与底物的亲和力抑制 ATCaseATCase，保，保证了在嘧啶核苷酸充足时，不再进行一

56、些不必要的证了在嘧啶核苷酸充足时，不再进行一些不必要的合成。合成。ATPATP：增强酶与底物的亲和力：增强酶与底物的亲和力。作为信号表示有能。作为信号表示有能量供应量供应DNADNA复制复制 别构酶通常为代谢途径第一个酶或分别构酶通常为代谢途径第一个酶或分支点上第一个酶。支点上第一个酶。5 5）别构酶动力学曲线：）别构酶动力学曲线：大大多多数数别别构构酶酶不不符符合合米米氏氏方方程程。五、酶的应用与发展五、酶的应用与发展1. 1. 分离纯化分离纯化2. 2. 酶活力的测定酶活力的测定3. 3. 酶的应用酶的应用1. 1. 酶的分离提纯酶的分离提纯分离提纯的目的分离提纯的目的1）为了研究酶的理化

57、性质或鉴定酶；）为了研究酶的理化性质或鉴定酶；2 2）作为生化试剂或药物。）作为生化试剂或药物。2 2、胞内酶的分离提纯步骤、胞内酶的分离提纯步骤（胞外酶则易于分离提纯）（胞外酶则易于分离提纯） 选材选材破碎破碎抽提抽提分离纯化分离纯化保存保存（1 1）选材：含酶量高、易分离）选材：含酶量高、易分离（2 2）破碎细胞：）破碎细胞： 3 3 抽提抽提：低温下，用水或低盐缓冲液将酶溶出，所得为低温下，用水或低盐缓冲液将酶溶出，所得为粗提液，含较多杂质。粗提液，含较多杂质。4 4 分离及提纯分离及提纯：酶是蛋白质，故可用提纯蛋白质的方法：酶是蛋白质，故可用提纯蛋白质的方法：盐析、等电点沉淀、有机溶剂

58、、调节盐析、等电点沉淀、有机溶剂、调节pHpH等。等。 酶是生物活性物质，故应减少酶活性的损失，要求酶是生物活性物质，故应减少酶活性的损失，要求操作条件温和，一般在低温操作条件温和，一般在低温0 - 5 C0 - 5 C间进行，有时还间进行，有时还需进一步提纯。需进一步提纯。 5 5保存保存：酶制品浓缩、结晶后酶制品浓缩、结晶后-20C-20C保存。保存。常用方法有：常用方法有：（1 1）保存浓缩的酶液；）保存浓缩的酶液；（2 2）冰冻干燥；）冰冻干燥；（3 3）浓缩液加入等体积甘油，在零下）浓缩液加入等体积甘油，在零下20 C20 C长期保存。长期保存。 原则：原则： 在在增增加加酶酶得得率

59、率和和纯纯度度的的同同时时，尽尽可可能能避避免免高高温温、过过酸酸、过过碱碱、剧剧烈烈的的震震荡荡及及其其它它可可能能使使酶酶丧丧失失活活力力的的一一切切操操作作过过程程。尽尽最大可能保存酶的活力。最大可能保存酶的活力。2. 2. 酶活力的测定酶活力的测定1 1 ）酶活力）酶活力（enzyme activityenzyme activity）：指酶催化一定化学反）：指酶催化一定化学反应的能力。应的能力。 酶活力的大小可以用在一定条件下催化的某一化酶活力的大小可以用在一定条件下催化的某一化学反应的反应速度来表示。学反应的反应速度来表示。2 2 ）酶反应速度）酶反应速度：单位时间、单位体积内底物的

60、减少单位时间、单位体积内底物的减少量或产物的增加量，其单位为：浓度量或产物的增加量，其单位为：浓度/ /单位时间单位时间 酶活力的测定酶活力的测定 从右图可知从右图可知反应反应速度只在最初一段时速度只在最初一段时间内保持恒定间内保持恒定，随时，随时间增长，酶反应速度间增长，酶反应速度逐渐下降，故研究酶逐渐下降，故研究酶反应速度以酶促反应反应速度以酶促反应的的初速度初速度（initial initial velocity velocity 或或initial initial speedspeed）为准。）为准。 3 3）表示方法：）表示方法：（1 1）酶活力单位（）酶活力单位（active un

61、it, U, I.U active unit, U, I.U ）：）： 特定条件下（特定条件下（25 25 ），在），在1 1分钟内能转化分钟内能转化1 1微摩微摩尔底物的酶量。尔底物的酶量。（2 2）酶的转换数（）酶的转换数（katalkatal，katkat）：）： 在最适条件下（在最适条件下（30 30 ）, ,每秒钟可使每秒钟可使1mol1mol底物转底物转化的酶量。化的酶量。 1 1 kat = kat = 6106107 7 I.U I.U（3 3）酶的比活力）酶的比活力 指每指每mgmg酶蛋白所具有的酶活力，一般用酶蛋白所具有的酶活力，一般用U/ mgU/ mg蛋蛋白表示。白表示

62、。 3.3.酶的应用酶的应用工业上酶应用的优点：工业上酶应用的优点：1 1）专一性高，副反应很少，后处理容易。）专一性高，副反应很少，后处理容易。2 2）催化效率高，酶用量少。）催化效率高，酶用量少。3 3）反应条件温和，可以在近中性的水溶液中进行反应。）反应条件温和，可以在近中性的水溶液中进行反应。4 4）酶的催化活性可以进行人工控制。）酶的催化活性可以进行人工控制。缺点：缺点：1 1）酶易失活，酶反应的温度、）酶易失活，酶反应的温度、pHpH 、离子强度等要很好控制。离子强度等要很好控制。2 2）酶不易得到，价格昂贵。）酶不易得到，价格昂贵。3 3）酶不易保存。）酶不易保存。（1 1）酶在

63、工业中的应用不断扩大。）酶在工业中的应用不断扩大。酶在食品工业的应用：酶在食品工业的应用： 1) 1)酿造米酒酿造米酒 浸米浸米蒸饭蒸饭拌曲拌曲装缸装缸糖化发酵糖化发酵压压榨榨成品成品 2)2)果葡糖浆酶法生产：果葡糖浆酶法生产： 淀粉乳淀粉乳 糊精糊精葡萄糖葡萄糖果葡糖浆果葡糖浆酶在轻工、化工领域的应用：酶在轻工、化工领域的应用：1) 1) 蛋白酶用于皮革工业的脱毛。蛋白酶用于皮革工业的脱毛。2) -2) -淀粉酶、纤维素酶用了牛仔服的生产。淀粉酶、纤维素酶用了牛仔服的生产。3) 3) 碱性蛋白酶、碱性脂肪酶应用于洗涤剂的生产。碱性蛋白酶、碱性脂肪酶应用于洗涤剂的生产。酶在医学中应用酶在医学

64、中应用1) 1) 酶在疾病诊断中的地位越来越重要。酶在疾病诊断中的地位越来越重要。2) 2) 酶作为治疗疾病的药物在临床上的应用不断扩大。酶作为治疗疾病的药物在临床上的应用不断扩大。 某些作为药物使用的酶某些作为药物使用的酶 酶酶 临床应用临床应用 淀粉酶淀粉酶 治疗消化不良治疗消化不良 菠萝蛋白酶菠萝蛋白酶 伤口化脓、消化不良伤口化脓、消化不良 尿激酶尿激酶 溶解血栓溶解血栓 左旋糖酐酶左旋糖酐酶 预防龋齿预防龋齿 天冬酰胺酶天冬酰胺酶 治辽癌症治辽癌症工具酶在生物学研究中的应用工具酶在生物学研究中的应用 利用酶的专一性催化作用，可以进行生物大利用酶的专一性催化作用，可以进行生物大分子的分析

65、、改造和生物物质的处理。用于这样分子的分析、改造和生物物质的处理。用于这样目的酶称为目的酶称为- -工具酶工具酶工具酶工具酶。例如：例如： 蛋白酶蛋白酶 已用于蛋白质分子的一级结构分析。已用于蛋白质分子的一级结构分析。 DNADNA聚合酶聚合酶 已用于已用于DNADNA一级传结构分析。一级传结构分析。 DNA DNA限制性内切酶限制性内切酶 能将地断裂能将地断裂DNADNA成为片成为片断，这是基因工程能够实现的重要前提之一。断，这是基因工程能够实现的重要前提之一。 在处理细菌细胞时，可以用在处理细菌细胞时，可以用 溶菌酶、纤维素溶菌酶、纤维素酶酶等破碎细胞。等破碎细胞。（2 2）酶工程）酶工程

66、酶工程：酶工程：指酶制剂在工业上的大规模生产和应用。指酶制剂在工业上的大规模生产和应用。化学酶工程：化学酶工程： 由酶学与化学工程技术相结合而形成。由酶学与化学工程技术相结合而形成。 通过化学修饰、固定化处理、甚至化学合通过化学修饰、固定化处理、甚至化学合成法等手段改善酶的性质，以提高催化效率及成法等手段改善酶的性质，以提高催化效率及降低成本。降低成本。固定化酶固定化酶概念：概念：将分离纯化得到的水溶性酶用物理或化学将分离纯化得到的水溶性酶用物理或化学的方法处理，使酶与载体（琼脂糖、聚丙烯酰的方法处理，使酶与载体（琼脂糖、聚丙烯酰胺等）连接，作成具催化活性的水不溶的酶。胺等）连接，作成具催化活

67、性的水不溶的酶。应用：应用：此技术可提高酶使用寿命；使反应过程连此技术可提高酶使用寿命；使反应过程连续化、自动化，简化工艺；提高产品质量。续化、自动化，简化工艺；提高产品质量。 此技术以广泛用于工农业生产、医药卫生、此技术以广泛用于工农业生产、医药卫生、环境保护、生物化工等方面。环境保护、生物化工等方面。固定化酶的优点固定化酶的优点： 1) 1) 重复使用；重复使用； 2) 2) 不污染产物不污染产物 ； 3) 3) 有利于连续化和自动化生产；有利于连续化和自动化生产； 缺点缺点：1) 1) 酶经固定化后活力降低；酶经固定化后活力降低； 2) 2) 对大分子底物不利。对大分子底物不利。酶固定化

68、方法：酶固定化方法：1) 1) 吸附法吸附法 2) 2) 共价偶联法共价偶联法 3) 3) 包埋法包埋法 4) 4) 交联法固定化交联法固定化酶的应用：酶的应用：固定化木瓜蛋白酶澄清啤酒固定化木瓜蛋白酶澄清啤酒生物酶工程：生物酶工程： 是在化学酶工程基础上发展起来的，是以是在化学酶工程基础上发展起来的，是以酶学和酶学和DNADNA重组技术为主的现代分子生物学技重组技术为主的现代分子生物学技术相结合的产物。包括：术相结合的产物。包括：1 1）用）用DNADNA重组技术大量生产酶；重组技术大量生产酶；2 2）对酶基因进行修饰，产生突变酶；）对酶基因进行修饰，产生突变酶；3 3）设计新的酶基因，合成自然界不曾有过的、）设计新的酶基因，合成自然界不曾有过的、性能稳定、催化效率更高的新酶。性能稳定、催化效率更高的新酶。本章主要内容本章主要内容一、酶的概述酶的概述 二、二、酶的结构与功能的关系酶的结构与功能的关系 三、酶的作用机制三、酶的作用机制 四、酶促反应动力学四、酶促反应动力学 五、酶的应用及发展五、酶的应用及发展作业作业1. 1.试述使用酶作催化剂的优缺点试述使用酶作催化剂的优缺点 .2.2.温度影响酶促反应的机理？温度影响酶促反应的机理？3.3.名词解释名词解释 酶、酶的活性中心、酶、酶的活性中心、酶原与酶原的激活、酶原与酶原的激活、同工酶、抗体酶、同工酶、抗体酶、mm