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1、第二章第二章 细胞工程的理论基础细胞工程的理论基础细胞工程的理论基础n n动物细胞与组织培养（cell and tissue culture）是动物细胞工程的重要技术基础。n n动物的细胞与组织培养是指从活的机体中取出组织或细胞，模拟机体内生理条件，在体外建立无菌、适温和一定营养条件等，使之生长和生存，并维持其结构和功能的技术。细胞工程的理论基础n n组织培养的概念组织培养的概念 组织培养这一名词实际上是一个通用名词，习惯上泛指所有的体外培养。根据培养物的不同可概括为三个不同概念：细胞培养、组织培养和器官培养。细胞工程的理论基础A：细胞培养：细胞培养：将组织块用机械方法或酶解法分离成单个细胞，
2、做成细胞悬液，再培养于固体基质上，成单层细胞生长，或在培养液中呈悬浮状态培养的技术称为细胞培养。细胞工程的理论基础B：组织培养：组织培养：将活体的一小片组织放在盛有培养液的玻璃或塑料培养器皿中，待组织块粘着后，沿底面平面移动生长的过程称为组织培养。 从组织块中生长出来的仍然是细胞，细胞在生长的同时也发生移动，至使组织培养难以长时间维持其原有结构，结果也就成了细胞培养。细胞工程的理论基础C：器官培养：器官培养：是指采取某些措施使器官的原基、器官的一部分或整个器官在体外存活、生长，并保持其原有结构和功能的培养技术。细胞工程的理论基础体体外外培培养养的的种种类类细胞工程的理论基础二、二、 细胞培养的
3、现实意义细胞培养的现实意义细胞工程的理论基础 生物技术上：生物技术上：生物技术上：生物技术上：生产各种生技术产品如：狂犬病、小儿麻痹生产各种生技术产品如：狂犬病、小儿麻痹 症等病毒疫苗，表皮生长因子及干扰素、白症等病毒疫苗，表皮生长因子及干扰素、白 细胞介素等生长因子及单克隆抗体等。细胞介素等生长因子及单克隆抗体等。科学研究上：科学研究上：科学研究上：科学研究上：在病毒学、免疫学、遗传学、肿瘤学等方面。在病毒学、免疫学、遗传学、肿瘤学等方面。临床医学上：临床医学上：临床医学上：临床医学上：胎儿的遗传性疾病分析，药物筛选及某些疾胎儿的遗传性疾病分析，药物筛选及某些疾 病的治疗等病的治疗等细胞工程
4、的理论基础三、细胞培养的优点三、细胞培养的优点细胞工程的理论基础1.1.研究的对象是活细胞研究的对象是活细胞 在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可力，并可长时间监控长时间监控、检测甚至定量评估一部分、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的情况，包括活细胞活细胞的形态、结构、生命的形态、结构、生命活动等。活动等。细胞工程的理论基础2.2. 研究条件可以人为控制研究条件可以人为控制 可以根据需要，控制包括可以根据需要，控制包括pH、温度、氧气、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，同时，可以二氧化碳、张力等物理化学的条件，同时，可以施
5、加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。细胞工程的理论基础3. 研究的样本可以达到比较均一性研究的样本可以达到比较均一性 通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。细胞工程的理论基础4. 4. 研究内容便于观察、检测和记录研究内容便于观察、检测和记录 采用各种研究技术、记录方法：
6、采用各种研究技术、记录方法：采用各种研究技术、记录方法：采用各种研究技术、记录方法： 研究研究研究研究: : 倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流 式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原 位杂交、同位素标记位杂交、同位素标记位杂交、同位素标记位杂交、同位素标记- - 记录记录记录记录: : 摄影照片、缩时电影、电视摄影照片、缩时电影、电
7、视摄影照片、缩时电影、电视摄影照片、缩时电影、电视- -细胞工程的理论基础5.5.研究的范围比较广泛研究的范围比较广泛 学科多学科多学科多学科多： 细胞学、免疫学、肿瘤学、生物化学、遗传学、分子生物学等细胞学、免疫学、肿瘤学、生物化学、遗传学、分子生物学等细胞学、免疫学、肿瘤学、生物化学、遗传学、分子生物学等细胞学、免疫学、肿瘤学、生物化学、遗传学、分子生物学等 对象广对象广对象广对象广： 各种动物：低等动物各种动物：低等动物各种动物：低等动物各种动物：低等动物- -高等动物高等动物高等动物高等动物- -人类人类人类人类 一种动物：不同年龄一种动物：不同年龄一种动物：不同年龄一种动物：不同年龄
8、- - 不同组织不同组织不同组织不同组织- - 正常或异常（肿瘤正常或异常（肿瘤正常或异常（肿瘤正常或异常（肿瘤- -）细胞工程的理论基础6.6.研究的费用相对较经济研究的费用相对较经济 可提供可提供可提供可提供大量大量大量大量、同一时期同一时期同一时期同一时期、重复性好重复性好重复性好重复性好的、的、的、的、生物学性状生物学性状生物学性状生物学性状相似相似相似相似的实验对象的实验对象的实验对象的实验对象细胞工程的理论基础四、细胞培养的缺点四、细胞培养的缺点细胞工程的理论基础 现人工模拟体内环境的技术已经很高现人工模拟体内环境的技术已经很高现人工模拟体内环境的技术已经很高现人工模拟体内环境的技
9、术已经很高, , 但但但但, , 人工所模拟的条件人工所模拟的条件与与体内体内实际情况实际情况实际情况实际情况 仍仍仍仍不完全相同不完全相同. . 当细胞被置于当细胞被置于当细胞被置于当细胞被置于体外培养体外培养后后, , 生活在缺乏动态平衡的环境中生活在缺乏动态平衡的环境中生活在缺乏动态平衡的环境中生活在缺乏动态平衡的环境中, , 久了，必然久了，必然发生变化发生变化. .细胞工程的理论基础 因此，对于体外培养的细胞，应该把他们视作因此，对于体外培养的细胞，应该把他们视作一种一种既能保持动物体内原细胞一定的性状、结构和既能保持动物体内原细胞一定的性状、结构和功能功能又具有某些改变的特定的细胞
10、群体又具有某些改变的特定的细胞群体，而不能将，而不能将之与体内的细胞完全等同。之与体内的细胞完全等同。细胞工程的理论基础五、细胞培养的工作原则五、细胞培养的工作原则细胞工程的理论基础u有标准化的工作方法有标准化的工作方法 u培养用的液体极多（如培养液、胰蛋白酶、培养用的液体极多（如培养液、胰蛋白酶、HANKSHANKS液及液及 抗菌素等），应由专人负责，并保证做到按规程行事，配抗菌素等），应由专人负责，并保证做到按规程行事，配制浓度准确，灭菌可靠，所有配好的溶液瓶上都要标明名制浓度准确，灭菌可靠，所有配好的溶液瓶上都要标明名称、浓度、消毒与否和制备日期等。称、浓度、消毒与否和制备日期等。 u一
11、切培养用品都要有固定的存放点，避免杂乱无章，其一切培养用品都要有固定的存放点，避免杂乱无章，其中尤其重要的是：培养用品与非培养用品应严格分开，已中尤其重要的是：培养用品与非培养用品应严格分开，已消毒品与未消毒品应分别存放。消毒品与未消毒品应分别存放。 细胞工程的理论基础第二节第二节 组织培养的细胞生物学组织培养的细胞生物学细胞工程的理论基础一、体内外细胞的差异和分化一、体内外细胞的差异和分化细胞工程的理论基础（一）体内外细胞的差异（一）体内外细胞的差异 培养细胞最多见的表现是：失去原有组织结构和细胞形培养细胞最多见的表现是：失去原有组织结构和细胞形态，分化减弱或不显，出现类似态，分化减弱或不显
12、，出现类似“反祖反祖” ” 现象；表现为细现象；表现为细胞趋单一化，或获得不死性，或变成具有恶性性状的细胞群。胞趋单一化，或获得不死性，或变成具有恶性性状的细胞群。细胞工程的理论基础1.与体内主要不同与体内主要不同 相对相对孤立孤立、相对单一、相对单一、相对单一、相对单一 缺乏体内的缺乏体内的系统作用、失去神经体液的调节系统作用、失去神经体液的调节系统作用、失去神经体液的调节系统作用、失去神经体液的调节 和细胞相互间的和细胞相互间的和细胞相互间的和细胞相互间的影响影响 细胞工程的理论基础2. 2.主要表现主要表现 失去原有组织结构和细胞形态失去原有组织结构和细胞形态 分化减弱或不显分化减弱或不
13、显 细胞趋向细胞趋向细胞趋向细胞趋向单一化单一化； 3. 3.提示提示 要正确认识要正确认识体外培养细胞体外培养细胞体外培养细胞体外培养细胞 是一种特定条件下生长的细胞群体。是一种特定条件下生长的细胞群体。是一种特定条件下生长的细胞群体。是一种特定条件下生长的细胞群体。细胞工程的理论基础（二）培养细胞的分化（二）培养细胞的分化 1不适应(Deadaption)： 表现为，细胞在原体内时所拥有的分化特性减弱或不显，如肝细胞产生酪氨酸转移酶(Tyrosine Aminotranserase)特性的丧失.2脱分化或去分化(Dedifferentiation) 细胞也可能出现脱分化或去分化，即细胞失掉
14、发生分化的能力。细胞工程的理论基础细胞工程的理论基础二、培养细胞形态分类二、培养细胞形态分类细胞工程的理论基础体外细胞培养物的生长类型 按生长方式按生长方式:2型型 粘附型粘附型细胞细胞细胞细胞: :附着在某一固相支持物表面才能生长的细胞。附着在某一固相支持物表面才能生长的细胞。附着在某一固相支持物表面才能生长的细胞。附着在某一固相支持物表面才能生长的细胞。 悬浮型悬浮型细胞细胞细胞细胞: :不必附着于固相支持物表面，而在悬浮状态下即可生长不必附着于固相支持物表面，而在悬浮状态下即可生长不必附着于固相支持物表面，而在悬浮状态下即可生长不必附着于固相支持物表面，而在悬浮状态下即可生长的细胞。的细
15、胞。的细胞。的细胞。 绝大多数绝大多数绝大多数绝大多数有机体细胞有机体细胞有机体细胞有机体细胞属粘附型属粘附型属粘附型属粘附型细胞，只有少数细胞类型如某些肿瘤细胞细胞，只有少数细胞类型如某些肿瘤细胞细胞，只有少数细胞类型如某些肿瘤细胞细胞，只有少数细胞类型如某些肿瘤细胞和白细胞可在悬浮状态下生长。和白细胞可在悬浮状态下生长。和白细胞可在悬浮状态下生长。和白细胞可在悬浮状态下生长。 细胞工程的理论基础贴附(粘附)型细胞 粘附粘附: :是大多数有机体是大多数有机体是大多数有机体是大多数有机体细胞细胞在体内在体内在体内在体内 生存生存和和和和生长发育生长发育的的的的基本存在方式基本存在方式含义含义
16、两两两两方面方面方面方面结果结果 基于粘附特性，使细胞与细胞之间相互结合形成组织，基于粘附特性，使细胞与细胞之间相互结合形成组织，基于粘附特性，使细胞与细胞之间相互结合形成组织，基于粘附特性，使细胞与细胞之间相互结合形成组织， 有机体的绝大多数细胞必须有机体的绝大多数细胞必须有机体的绝大多数细胞必须有机体的绝大多数细胞必须 粘附粘附于一于一于一于一固相表面固相表面 才能才能才能才能生存生存和和和和生长生长。细胞工程的理论基础培养时培养时培养时培养时：这些细胞被放到体外环境中以后：这些细胞被放到体外环境中以后：这些细胞被放到体外环境中以后：这些细胞被放到体外环境中以后, ,同样需要粘附于同样需要
17、粘附于同样需要粘附于同样需要粘附于某一固相表面才能生存和生长，因而某一固相表面才能生存和生长，因而某一固相表面才能生存和生长，因而某一固相表面才能生存和生长，因而属于粘附型细胞属于粘附型细胞属于粘附型细胞属于粘附型细胞。粘附粘附(锚定或锚着锚定或锚着)依赖型依赖型(性性)细胞：唯有粘细胞：唯有粘附于固相表面才能生存的细胞附于固相表面才能生存的细胞细胞工程的理论基础 类型类型 细胞在体内、外细胞在体内、外细胞在体内、外细胞在体内、外的的的的粘附粘附粘附粘附方式方式方式方式：存在差异存在差异存在差异存在差异 体内体内体内体内：粘附粘附粘附粘附是是是是全方位全方位全方位全方位 外形外形外形外形具有具
18、有具有具有复杂的立体特征复杂的立体特征复杂的立体特征复杂的立体特征 体外体外体外体外：多数情况，细胞只有多数情况，细胞只有多数情况，细胞只有多数情况，细胞只有一个附着平面一个附着平面一个附着平面一个附着平面 外形外形外形外形一般一般一般一般与体内时明显不同与体内时明显不同与体内时明显不同与体内时明显不同 按照培养细胞粘附生长时的主要形态，可分为按照培养细胞粘附生长时的主要形态，可分为按照培养细胞粘附生长时的主要形态，可分为按照培养细胞粘附生长时的主要形态，可分为几大类型几大类型几大类型几大类型 细胞工程的理论基础分类分类 根据形态大致的不同，主要根据形态大致的不同，主要根据形态大致的不同，主要
19、根据形态大致的不同，主要2 2类：类：类：类： 上皮细胞型上皮细胞型 成纤维细胞型成纤维细胞型 其它，不定型其它，不定型其它，不定型其它，不定型细胞工程的理论基础上皮细胞型 名称：名称：名称：名称：仅形态上似体内仅形态上似体内仅形态上似体内仅形态上似体内，实际上不完全等于，实际上不完全等于，实际上不完全等于，实际上不完全等于- -来源：来源：来源：来源：来源于外胚层来源于外胚层来源于外胚层来源于外胚层，内胚层细胞，内胚层细胞，内胚层细胞，内胚层细胞 如：皮肤及其衍生物如：皮肤及其衍生物如：皮肤及其衍生物如：皮肤及其衍生物 消化道，乳腺，肺泡消化道，乳腺，肺泡消化道，乳腺，肺泡消化道，乳腺，肺泡
20、 上皮性肿瘤上皮性肿瘤上皮性肿瘤上皮性肿瘤形态：形态：形态：形态：类似类似类似类似体内的体内的体内的体内的上皮细胞上皮细胞上皮细胞上皮细胞 扁平扁平扁平扁平，不规则多角形不规则多角形不规则多角形不规则多角形，中有圆形核，中有圆形核，中有圆形核，中有圆形核 细胞工程的理论基础生长特点生长特点生长特点生长特点 易相连易相连易相连易相连成片成片成片成片 相相相相靠靠靠靠紧紧紧紧密密密密相相相相连连连连成成成成薄薄薄薄层层层层 铺石状铺石状铺石状铺石状 生长生长生长生长时呈时呈时呈时呈膜状膜状膜状膜状移动移动移动移动 很很很很少少少少脱脱脱脱离离离离细细细细胞胞胞胞群群群群而而而而单单单单个活动个活动
21、个活动个活动 体外培养细胞类型（体外培养细胞类型（1）上皮细胞型上皮细胞型细胞工程的理论基础成纤维细胞型 名称：名称：凡在凡在凡在凡在培养中形态与成纤维细胞类似培养中形态与成纤维细胞类似的的的的来源：来源：由由由由中胚层间充质组织起源中胚层间充质组织起源的组织的组织的组织的组织 如：真正的成纤维细胞如：真正的成纤维细胞如：真正的成纤维细胞如：真正的成纤维细胞 心肌，平滑肌，成骨细胞，血管内皮心肌，平滑肌，成骨细胞，血管内皮心肌，平滑肌，成骨细胞，血管内皮心肌，平滑肌，成骨细胞，血管内皮形态：形态：似体内成纤维细胞似体内成纤维细胞的形态的形态的形态的形态 胞体梭形胞体梭形或不规则三角形或不规则三
22、角形或不规则三角形或不规则三角形 胞质向外伸出胞质向外伸出胞质向外伸出胞质向外伸出2323个个个个长短不等的突起长短不等的突起 中有卵圆形核中有卵圆形核中有卵圆形核中有卵圆形核细胞工程的理论基础生长特点生长特点生长特点生长特点 排列成排列成排列成排列成放射状放射状放射状放射状，漩涡，漩涡，漩涡，漩涡状状状状 并不紧靠连成片并不紧靠连成片并不紧靠连成片并不紧靠连成片， 细胞细胞细胞细胞细胞接触易细胞接触易细胞接触易细胞接触易断开而断开而断开而断开而 单独行动单独行动单独行动单独行动 游离的游离的游离的游离的单独的单独的单独的单独的成纤维成纤维成纤维成纤维样细胞，样细胞，样细胞，样细胞， 常有几个
23、常有几个常有几个常有几个伸长的伸长的伸长的伸长的细胞突起细胞突起细胞突起细胞突起体外培养细胞类型（体外培养细胞类型（2）成纤维细胞型成纤维细胞型细胞工程的理论基础贴附生长型贴附生长型-类型类型1. 与体内与体内同名的同名的细胞细胞细胞细胞不完全相同不完全相同 如：如：如：如：形态相似形态相似的成纤维细胞，的成纤维细胞，的成纤维细胞，的成纤维细胞，可不同来源可不同来源 自自自自 同同同同 一一一一 动动动动 物物物物 不不不不 同同同同 组组组组 织织织织 的的的的 成成成成 纤纤纤纤 维维维维 样样样样 细细细细 胞胞胞胞 相相相相 似似似似 但但但但 发展趋向不同发展趋向不同2. 培养细胞的
24、培养细胞的培养细胞的培养细胞的形态不稳定形态不稳定 条件改变条件改变，细胞形态，细胞形态，细胞形态，细胞形态可有变化可有变化 细胞工程的理论基础培养细胞形态不稳定培养细胞形态不稳定培养细胞形态不稳定培养细胞形态不稳定血清血清血清血清 Hela Hela 高血清高血清高血清高血清 低血清低血清低血清低血清 成纤维细胞样成纤维细胞样成纤维细胞样成纤维细胞样 上皮样细胞上皮样细胞上皮样细胞上皮样细胞 pHpH Hela Hela 太酸或太碱太酸或太碱太酸或太碱太酸或太碱 标准标准标准标准pHpH 成纤维细胞样成纤维细胞样成纤维细胞样成纤维细胞样 上皮样细胞上皮样细胞上皮样细胞上皮样细胞 细胞密度细胞
25、密度细胞密度细胞密度 3T3 3T3 低密度低密度低密度低密度 高密度高密度高密度高密度 成纤维细胞样成纤维细胞样成纤维细胞样成纤维细胞样 上皮样细胞上皮样细胞上皮样细胞上皮样细胞 生长状态改变生长状态改变生长状态改变生长状态改变 悬浮或贴附悬浮或贴附悬浮或贴附悬浮或贴附 悬浮悬浮悬浮悬浮 贴附贴附贴附贴附 圆形圆形圆形圆形 成纤维或上皮样成纤维或上皮样成纤维或上皮样成纤维或上皮样 转化与否转化与否转化与否转化与否 未转化未转化未转化未转化 转化后转化后转化后转化后 成纤维样成纤维样成纤维样成纤维样 可成上皮样可成上皮样可成上皮样可成上皮样 细胞工程的理论基础悬浮生长型概念概念概念概念 培养时
26、培养时培养时培养时不贴附于底物而呈悬浮状态生长不贴附于底物而呈悬浮状态生长不贴附于底物而呈悬浮状态生长不贴附于底物而呈悬浮状态生长 或以机械方法使保持悬浮状态下生长或以机械方法使保持悬浮状态下生长或以机械方法使保持悬浮状态下生长或以机械方法使保持悬浮状态下生长来源来源来源来源 自自自自血血血血，脾或骨髓，脾或骨髓，脾或骨髓，脾或骨髓， 尤以血中白细胞尤以血中白细胞尤以血中白细胞尤以血中白细胞 癌肿细胞也可能癌肿细胞也可能癌肿细胞也可能癌肿细胞也可能特点特点特点特点 在在在在悬浮中生长良好悬浮中生长良好悬浮中生长良好悬浮中生长良好 细胞细胞细胞细胞圆形圆形圆形圆形，单个或小细胞团，单个或小细胞团
27、，单个或小细胞团，单个或小细胞团细胞工程的理论基础优点优点优点优点 生存空间大，生存空间大，生存空间大，生存空间大，提供数量大提供数量大提供数量大提供数量大 传代方便传代方便传代方便传代方便( (不需消化不需消化不需消化不需消化) ) 易于收获易于收获易于收获易于收获 可获得稳定状态可获得稳定状态可获得稳定状态可获得稳定状态缺点缺点缺点缺点 观察不方便观察不方便观察不方便观察不方便 很多细胞不能很多细胞不能很多细胞不能很多细胞不能悬浮生长悬浮生长悬浮生长悬浮生长( (尤以正常细胞尤以正常细胞尤以正常细胞尤以正常细胞) ) 细胞工程的理论基础三、培养细胞的生长特点三、培养细胞的生长特点细胞工程的
28、理论基础（一）贴附（二）接触抑制（三）密度抑制细胞工程的理论基础四、培养细胞的生长和增殖过程四、培养细胞的生长和增殖过程细胞工程的理论基础（一）组织培养细胞生命期一）组织培养细胞生命期(Life Span of Culture Cells)所谓培养细胞生命期培养细胞生命期，是指细胞在培养中持续增殖和生长的时间。包括原代培养期、传代培养期及衰退期。细胞工程的理论基础正常培养的细胞周期细胞工程的理论基础原代培养原代培养(Primary Culture)期期也称初代培养，即从体内取出组织接种培养到第一次传代阶段，一般持续1-4周。特点特点：细胞呈活跃移动，可见细胞分裂，但不旺盛。与 体内原组织在形态
29、结构和功能活动上相似性大。细胞工程的理论基础传代期传代期特点特点：在全生命期中此期的持续时间最长，细胞增殖旺 盛，并能维持二倍体核型。传代传代：体内细胞生长在动态平衡环境中，而组织培养细胞的生存环境是培养瓶、皿或其它容器，生存空间和营养是有限的。当细胞增殖达到一定密度后，则需要分离出一部分细胞和更新营养液，否则将影响细胞的继续生存，这一过程叫传代。初代培养的细胞一经传代后便改称做细胞系（Cell Line）。细胞工程的理论基础衰退期衰退期特点特点：此期细胞仍然生存，但增殖很慢或不增殖， 最后衰退凋亡。细胞工程的理论基础（二）体外培养细胞一代生存期（二）体外培养细胞一代生存期潜伏期指数增生期停滞
30、期所谓细胞的所谓细胞的“一代一代”是指从细胞接种到分离再培养的一段时间。是指从细胞接种到分离再培养的一段时间。细胞工程的理论基础（三）单个细胞的生长过程（三）单个细胞的生长过程细胞工程的理论基础五、体外培养细胞的遗传学特征五、体外培养细胞的遗传学特征（一）核型变化（二）永生化和恶变（三）细胞性别细胞工程的理论基础六、体外培养细胞的生存环境六、体外培养细胞的生存环境（一）无污染环境（二）温度（三）气体环境和氢离子浓度细胞工程的理论基础七、体外培养细胞生存所需基本物质七、体外培养细胞生存所需基本物质（一）糖（二）氨基酸（三）维生素（四）促生长因子（五）其它物质细胞工程的理论基础第三节第三节 建立细
31、胞系或细胞株建立细胞系或细胞株细胞工程的理论基础一、体外培养细胞的种类和命名一、体外培养细胞的种类和命名（一）初代培养（一）初代培养初代培养又称原代培养，即直接从体内取出的细胞、组织和器官进行的第一次的培养物。一旦已进行传代培养(5ubculture)的细胞，便不再称为初代培养，而改称为细胞系。细胞工程的理论基础（二）细胞系（二）细胞系初代培养物开始第一次传代培养后的细胞，即称之为细胞系。有限细胞系无限细胞系细胞工程的理论基础 (三三)克隆细胞株克隆细胞株 从一个经过生物学鉴定的细胞系用单细胞分离培养或通过筛选购方法，由单细胞增殖形成的细胞群，称细胞株。细胞工程的理论基础 (四四)二倍体细胞二
32、倍体细胞培养细胞染色体数目具有与原供体二倍细胞染色体数相同或基本相同(2n细胞占75或80以上)的细胞群，称二倍体细胞培养。二倍体细胞在正常情况下具有限生命期，故属有限细胞系。细胞工程的理论基础(五五)肿瘤细胞系或株肿瘤细胞系或株 是现有细胞系中最多的一类，我国已建立细胞系主要为这类细胞。肿瘤细胞系多由癌瘤建成，多呈上皮细胞型，常已传几十代或百代以上，并并具有不死性和异体接种致瘤性。细胞工程的理论基础 对已建成的各种细胞系或细胞株习惯上都给以名称；细胞的命名无严格统一规定，大多采用有一定意义缩写字或代号表示。但不论什么形式，均不宜太长，以便记忆和了解，今列举以下几种代表性的细胞名称供参考； H
33、eLa：为供体患者的性名(来源于宫颈癌) CHO：中国地鼠卵巢细胞(Chinese Hamster Ovary) 宫743：富颈癌上皮细胞，1974年3月建立 NIH3T3；美国国立卫生研究所(National Institute of Health)建立, 每3天传代一次，每次接种3106细胞毫升。（六）细胞系或细胞株的命名（六）细胞系或细胞株的命名细胞工程的理论基础二、建立细胞系（或株）的要求二、建立细胞系（或株）的要求（一）组织来源（二）细胞生物学检测（三）培养条件和方法细胞工程的理论基础三、已建立细胞系或株的签定、管理和使用三、已建立细胞系或株的签定、管理和使用培培 养养 简简 历：历
34、：组织来源日期、物种、组织起源、性别、年龄、 供体正常或异常健康状态、细胞已传代数等。冻冻 存存 液：液：培养基和防冻液名称。细细 胞胞 活活 力：力：融解前后细胞接种存活率和生长特性。培培 养养 液：液：培养基种类和名称(一般要求不含抗生素)，血 清来源和含量。细细 胞胞 形形 态：态：类型，如为上皮或成纤维细胞等。核核 型：型：二倍体或多倍体，标记染色体的有无。无污染测验：无污染测验：包括细菌、真菌、支原体、原虫和病毒等。物物 种种 检检 测：测：检测同功酶，主要为G6PD和LDH，以证明细 胞有否交叉污染。免免 疫疫 检检 测：测：一两种血清学检测。细胞建立细胞建立 者：者：建立者性名；检测者姓名。细胞工程的理论基础细胞工程的理论基础
