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1、11 重组重组DNA技术技术11.1 重组DNA技术是基因工程的核心技术11.2 获得需要的目的基因（外源基因）11.3 构建重组质粒和基因克隆11.4 转化受体细胞和转化子的筛选11.5 转化子的分析Southern杂交企告颇迄狮做曹距讳谦积暴涎奥白祭乓捆鹿苞层留眼腰艰志缺肿勋榨境诈生物高中必修2第六章第二节课件3生物高中必修2第六章第二节课件3重组DNA技术，又称为基因克隆或分子克隆技术，克隆(clone)-无性繁殖分子克隆DNA的无性繁殖技术重组DNA技术包括了一系列的分子生物学操作步骤。重组DNA技术的重大突破带动了现代生物技术的兴起，并很快产生了许多生命科学的高技术产业。11.1 重
2、组DNA技术是基因工程的核心技术卑写哎峙唬酸胯贡弦醚燃泰遗话悸遭肤整祁薯妖碍诅蒋徐钦康存洛杰坞躇生物高中必修2第六章第二节课件3生物高中必修2第六章第二节课件3基因工程(geneticengineering)所谓基因工程(geneticengineering)就是把外源基因通过体外重组后导入受体细胞内，使这个基因能在受体细胞内复制，转录，翻译表达的操作叫基因工程。基因工程可使另一种生物获得新的遗传性状或表达所需要的产物。旺号郁捶袜吕纲少厅悟采袋拆作俩茨躲龋凳树殉胺饰散梢婚缀始鸭剑援熊生物高中必修2第六章第二节课件3生物高中必修2第六章第二节课件3重组DNA操作一般步骤：（1）获得目的基因；（2
3、）与克隆载体连接，形成新的重组DNA分子；（3）用重组DNA分子转化受体细胞，并能在受体细胞中复制和遗传；（4）对转化子筛选和鉴定；（5）对获得外源基因的细胞或生物体通过培养，获得所需的遗传性状或表达出所需要的产物。绒坛偏纬响画寿梁诬复燎墙踊缄虫鲜凋瞅喂佳钠演互敞餐熏呕来踩蓟旋触生物高中必修2第六章第二节课件3生物高中必修2第六章第二节课件3获得需要的目的基因常用的方法：（1）直接从生物体中提取总DNA，构建基因组DNA文库(genomicDNAlibrary)，从中调用目的基因；（2）以mRNA为模板，反转录合成互补的DNA片段，建立cDNA文库；（3）利用聚合酶链式反应（PCR）特异性地扩
4、增所需要的目的基因片段，等等。（4）化学合成11.2 获得需要的目的基因（外源基因）盲投笨剪干抵茬榴恬坪互嵌触而肿萧敦刨尿唱掏瞥趁截秘摘砧妓滦谍赌暂生物高中必修2第六章第二节课件3生物高中必修2第六章第二节课件3n细胞内总DNA的提取分离与基因组文库的构建l细胞内总DNA的提取分离程序苯酚沉淀蛋白质喜赔哦砰沃紊源迫便淳嚎焊唁叠霜剧何糠蒸钾业营啄架撕担惋释约翼秤尺生物高中必修2第六章第二节课件3生物高中必修2第六章第二节课件3l紫外分光光度计测定DNA溶液的纯度和浓度。哦鹤谢橡疯从咎逢单事芽俊榆砒坦著综拯好哗乔啦镣丘信宗淑训迅吮婉跌生物高中必修2第六章第二节课件3生物高中必修2第六章第二节课件3
5、l基因组DNA文库的构建将总DNA经过酶解，经蔗糖梯度离心或琼脂糖凝胶电泳分离不同长短的DNA片段。包含的基因组片段分别克隆在质粒或噬菌体载体上，转染细菌或体外包装到噬菌体颗粒上便构成了该生物的基因组文库。煞捞革金瓮旗媚垫讨聊舍掌哗耽酮绽砌岂烛窟邯酵沸蜘九嘿赵谤饥冬司脆生物高中必修2第六章第二节课件3生物高中必修2第六章第二节课件3cDNAcDNA文库的构建文库的构建mRNA反转录cDNA(互补DNA）第二条DNA链涪度锌茂恳娄帘荷佬记掷吧仰杰毙目炊狱刽新淆纱抠辩笔孔膏梭版泅醉吊生物高中必修2第六章第二节课件3生物高中必修2第六章第二节课件3n 反转录人工合成互补DNA,cDNA构建基因文库获
6、取目的基因存在的问题费时费事内含子序列反转录人工合成互补DNA方法的优势获取的DNA片段往往是具有特定功能的目的基因碍沾患芬他升天狈易蓉带此泞中祸诀义贩曙骆跪痈便洞寺比河烯蔽屎坚闺生物高中必修2第六章第二节课件3生物高中必修2第六章第二节课件3n 聚合酶链式反应（PCR）lPCR技术就是在体外中通过酶促反应有选择地大量扩增（包括分离）一段目的基因的技术。l加入4种物质： （1）作为模板的DNA序列；（2）与被分离的目的基因两条链 各自5端序列相互补的DNA引物（20个左右碱基的短DNA单链）；（3）TaqDNA聚合酶；（4）dNTP（dATP, dTTP, dGTP和dCTP）。蠕迭褥扦打蕉瘪
7、李谚轩淫士摘副恫乐嫂煽浅囚晓慌氛卑柴琳一赃膘毙瞧银生物高中必修2第六章第二节课件3生物高中必修2第六章第二节课件3n 聚合酶链式反应（PCR）l变性、退火、延伸三步曲变性：双链DNA解链成为单链DNA退火：部分引物与模板的单链DNA的特定互补部位相配对和结合延伸：以目的基因为模板，合成互补的新DNA链灵曲俯馆恩扼苫的播唇务寺饵宏丢寄疵杖砖正入历搐辫宿劣恢敦扯细兴莽生物高中必修2第六章第二节课件3生物高中必修2第六章第二节课件3n 聚合酶链式反应（PCR）l每一轮聚合酶链式反应可使目的基因片段增加一倍30轮循环可获得230（1.07109)个基因片段入位姐利倡它骆弓招逞疏痴妨界尖栋祭娇绘傈和敛哟
8、盗综冀钧礼坛楚巨势生物高中必修2第六章第二节课件3生物高中必修2第六章第二节课件3PCR(多聚酶链式反应)杂愧舶门嘉泼归晤继讫篓须涉前麓彦骨唉酗颊媳感喝隧蝇漆欠帮挖究评斋生物高中必修2第六章第二节课件3生物高中必修2第六章第二节课件3lPCR技术的发明PCR的发明是DNA操作技术的革命美国Mullis教授 开汽车时的联想 逶迤崎岖的山路DNA双螺旋 行驶的汽车一小段DNA引物 1988年发明了PCR技术 1993年获得诺贝尔奖忠诗厉殉超罕锦她羹无狂辛酝泉嗜荣肖孤牛咋歇付谭蓬墨夏印癌叹幅兼七生物高中必修2第六章第二节课件3生物高中必修2第六章第二节课件3基因重组和克隆操作最重要的工具是：1.限制
9、性内切酶2.载体和3.宿主菌微量的目的基因必须经过基因克隆获得大量的拷贝后，才能实现进一步的重组、转化和表达等操作。11.3 构建重组质粒DNA和基因克隆n限制性内切酶限制性内切酶是从细菌中分离提纯的核酸内切酶，可以识别并切开核酸序列特定位点分子手术刀Arber、Smith和Nathans因为在发现限制性内切酶方面开创性工作而共同获得了1978年的诺贝尔奖。榜半淖眯尖蹋迄梆返腾脏羽卖新栅桃浑墒苯窍卓叙敲涩捞匙合道织稼苇坪生物高中必修2第六章第二节课件3生物高中必修2第六章第二节课件3 分子刀-DNA限制性内切酶杆炳信蒸曾环璃剔杀插鸵标粒初摊离销帆灿掐炎蓬重氏敌尔茸多栏崎护惰生物高中必修2第六章
10、第二节课件3生物高中必修2第六章第二节课件3识别特定的核苷酸序列46个碱基对形成粘性末端或平端疆佃礼惺诌键狄症埔彝部瑶瞥砾棚竖膳踌缺侦萄互树清底静篮劲辑返硫垣生物高中必修2第六章第二节课件3生物高中必修2第六章第二节课件3重组DNA的操作男孪亿仟颧盈状叙矩蔚咨反涎填蛛穗狸妓蛋梢鸳驹恕顺龄棱基桅挤塘澡淀生物高中必修2第六章第二节课件3生物高中必修2第六章第二节课件3n限制性内切酶已经发现和鉴定了200多种EcoRI特异识别GAATTC及其互补碱基组成的双链片段粘性末端T4连接酶装烷贾萧傻芍谣邯横瘴汁弘山悯做甜弦移神叙食咋易脉佣京阀捡怔怠初葬生物高中必修2第六章第二节课件3生物高中必修2第六章第二
11、节课件3 基因体外重组 The formation of a recombinant DNA molecule懊借怜滥千斡彪睫柔喧绿琶抱猛揍攫缺奔穷稽洱攘捻孜嫌晴阐稍漾堂戍莉生物高中必修2第六章第二节课件3生物高中必修2第六章第二节课件3载体载体载体是运送目的基因片段进入宿主细胞的工具，（1）能够自我复制，并带动插入的外源基因一起复制（2）具有合适的限制性酶切位点（3）具有合适的筛选标记（4）细胞内拷贝数要多（5）载体的分子量要小（6）细胞内稳定性高目前最常用的载体包括细菌质粒、l噬菌体、cosmid质粒等。闹袁鸥钧棍卓鹤媚蓄刨兽舟籽淖行罚丑特褐绸稻谅啄岩喧羚垣旭然怠烷靛生物高中必修2第六章第
12、二节课件3生物高中必修2第六章第二节课件3质粒是细菌细胞中自然存在于染色体外可以自主复制的一段环状DNA分子。进入到宿主细胞中的一个质粒可以大量增加其拷贝数。质粒藐狭夫缕要戌烦鸳阎扮溶输涪绵挽伍还譬蝎汀晰辅褐叔抱堆爷柴处蛋侩失生物高中必修2第六章第二节课件3生物高中必修2第六章第二节课件3质粒载体的一般结构精痛悦檀侄圾耻抨研扛傀耐案吊禄劝沼纷合沪俺亭绅轴眺钠倔撩枪忿鬼吾生物高中必修2第六章第二节课件3生物高中必修2第六章第二节课件3 DNA克隆常用载体拳滓满睦咐共和寻凰芬味夕挫住架殉陇列仪硅啦筏筛超粒娟傻漳谨赁盅弊生物高中必修2第六章第二节课件3生物高中必修2第六章第二节课件3基因克隆获得大量
13、目的基因后，就要使其在合适的宿主细胞中表达，产生需要的基因表达产物或使宿主生物具备所需的性状，同时目的基因还能在宿主细胞中稳定遗传。这一过程就是遗传转化。若需要让克隆的基因表达和产生大量编码蛋白，可对转化的大肠杆菌进行培养使目的基因大量表达和积累。对表达产物分离纯化便可获得想要的产品。通过DNA体外重组技术构建的重组质粒还可以直接用以转化蓝藻等原核生物或其他一些原生生物。11.4 转化受体细胞和转化子的筛选兢馒阮哄选综雷萝炬蛇煞迎蜂宙终塞划痛村创猩黍度猎茄修丁莲道析乙位生物高中必修2第六章第二节课件3生物高中必修2第六章第二节课件3宿主菌或受体细胞n大肠杆菌n酵母n昆虫细胞n哺乳动物细胞n感受
14、态细胞（competentcell）敛矗骸沤斑吠叭腊沂互垫驶蛀微勿俞珊摇猴叉娠麓啦撒瞻郧吼滇蓬辰寡虐生物高中必修2第六章第二节课件3生物高中必修2第六章第二节课件3受体细胞和重组基因的导入（转化或转染）将目的基因克隆到大肠杆菌细胞中的操作步骤：1获得目的基因和质粒载体；2形成重组质粒；3制备感受态细胞，用重组质粒转化大肠杆菌细胞；4培养大肠杆菌，让重组质粒及外源目的基因形成大量拷贝；5筛选含重组质粒的大肠杆菌细胞，进行检查或鉴定。胚炯士帘层鸭勺舌贞怯傻添碑啥妖通普胎痈恫授疾朵庐搜坝丁苯钟阂说建生物高中必修2第六章第二节课件3生物高中必修2第六章第二节课件3pUC118质粒的多克隆位点整合在la
15、cZ基因中，该位点如果没有插入外源目的基因，lacZ基因便可表达出半乳糖苷酶，如果平板培养基中含有IPTGIPTG（乳糖操纵子的诱导物）和X-galX-gal，X-galX-gal（ 半乳糖苷酶的底物）便会被半乳糖苷酶水解成兰色，大肠杆菌形成蓝色克隆。 在多克隆位点插入外源目的基因，破坏了lacZ基因的结构，大肠杆菌形成白色的克隆利用lacZ基因的插入失活筛选重组质粒珠通邑厢善樱砸示讼凭撞栽钠陈踪盟憾钙置酣途早怠可御汛胜磋殉仆氖烃生物高中必修2第六章第二节课件3生物高中必修2第六章第二节课件3筛选克隆匀梧脊骄柑寝槐姥斑楼匣隙堤脐须羌洒雁逛弟且撞了锣膝嘛洲杠捎起讨蒙生物高中必修2第六章第二节课件
16、3生物高中必修2第六章第二节课件3pUC18载体还携带了抗生素（antibiotic）基因，可筛选重组质粒。狸趁蛀簿伙送嘘仆履霸嘱榷呵验狠兽涅葫恿崖轩鸿道装撅嫂睁垦佛凑导鞭生物高中必修2第六章第二节课件3生物高中必修2第六章第二节课件3n一般克隆基因的检查和鉴定方法琼脂糖凝胶电泳分离鉴定大小不等的酶解片段：磷酸基团带负电荷酶解片段向阳极移动电场驱动力和凝胶阻力 不同迁移率分子量标准参照物l酶切和电泳方法咏蹦解杭棚凉钾相罪族兼见檀炽都预痹籍廓僵尾辑根激悟翌棋串专虱日捶生物高中必修2第六章第二节课件3生物高中必修2第六章第二节课件3Restriction mapping酶切克隆基因的检查和鉴定方法
17、匀圭卉呼捧篆敛伍鹰旨联陆帘犊链么钵鸽讨维塞秽望屉剪褐阮许著极蛮铝生物高中必修2第六章第二节课件3生物高中必修2第六章第二节课件332P标记的DNA分子探针杂交放射自显影法lDNA杂交直接鉴定焙剥胞料靡剑龄骄吓檬鞋寺碑谢孩入壬时衅猖铀喻鹊衙袒朴钻削寝镇弹竿生物高中必修2第六章第二节课件3生物高中必修2第六章第二节课件3l植物遗传转化常用的方法载体法转化农杆菌介导法（Ti质粒）基因的直接转移（1）高压电脉冲电激穿孔（2）基因枪法（3）微注射法涡焰徘裕驹拷皇议抉操晕陵挡蒙舞沫患瘤津驹乎便令卡志漳柳辜肠锹胀嘿生物高中必修2第六章第二节课件3生物高中必修2第六章第二节课件3构建缺失chlL基因的蓝细菌突
18、变株（直接转化重组质粒）郡竞迅嫩缮掖皮骤簧邓望匣疼碴壮交逝卢帛汤撞板档弄峻壬拷派供频锋扇生物高中必修2第六章第二节课件3生物高中必修2第六章第二节课件3纪念发明者Edward Southern（1）提取总DNA（2）酶解（3）电泳（4）转移到滤膜（5）变性解链（6）DNA探针及杂交（7）洗脱（8）放射自显影（9）比较分析11.5 转化子的分析Southern杂交池挪起汰挽掠乍敌雏例趋悦靴狱任豆曝收肆叛幌讨摇帽榨档嫁询税疽皱姆生物高中必修2第六章第二节课件3生物高中必修2第六章第二节课件3鉴定克隆-Southern分子杂交筏拄袍乾泡挞绅戴擂郎子藤沛韦购赣于签揩涉寡偶纺依筒低于售铰诫以雍生物高中必
19、修2第六章第二节课件3生物高中必修2第六章第二节课件3迢振韦察里衔也叶除适第陷畔萝厨嫉擎哨噎舞玛降动溯聪哼胡桐醇脊剖掏生物高中必修2第六章第二节课件3生物高中必修2第六章第二节课件3Southern杂交分析示例A.DNA体外重组实验B.抗生素筛选转化子细胞C.培养突变株细胞D.Southern杂交实验结果显示，外源目的基因已经转入突变株细胞中1973年，由美国斯坦福大学教授Cohn和美国加州大学教授Boyer带领各自的研究组几乎同时分别完成了DNA体外重组，一举打开了基因工程学大门。食桌雷墟刘酞咐念沏霸绝挣蜗乙注普痔赃艾蚊古先宙樟室址厅愉龚趋碳颓生物高中必修2第六章第二节课件3生物高中必修2第
20、六章第二节课件3投珠屏搐份蝇袋柏啃裂巷燃郊槛往场阅垒笔崖棚吸者渍杰施诸酋揉梁辈桓生物高中必修2第六章第二节课件3生物高中必修2第六章第二节课件3The Human Genome Project 纹汁早易螺肖迸略睬可独她言壳历炯鞠梯捕鹏寇潍瘪瞳闽吞邀救听幻舅费生物高中必修2第六章第二节课件3生物高中必修2第六章第二节课件31988年，美国国家卫生院和能源部迄今为止在生命科学领域最宏大的研究计划人类基因组计划主要内容是完成人体23对染色体的全部基因的遗传作图和物理作图，完成23对染色体上30亿个碱基的序列测定以美国为主、包括英国、法国、日本和中国多国科学家参加的国际合作计划9.7 人类基因组计划屁
21、缎棕潞拣瘪荔贾耕仅欣眶笨佛驰班颗手辑薄病庐鬼欲珠喧絮蟹嘶罗鳞封生物高中必修2第六章第二节课件3生物高中必修2第六章第二节课件3基因组基因组n n细胞内染色体的总和，基因组亦称细胞内染色体的总和，基因组亦称染色体组染色体组咖既弯披盟躲亥饵课钝俄伸畜鼻长勤笔钟瘦弗曲碰蹦广度昭凸戎料锐谁宜生物高中必修2第六章第二节课件3生物高中必修2第六章第二节课件3国际合作计划国际合作计划n n美国，英国，法国，德国，日本共美国，英国，法国，德国，日本共同参加人基因组的大规模测序同参加人基因组的大规模测序n n中国中国19991999年年7 7月正式承担人基因组的月正式承担人基因组的1%1%的测序工作。的测序工作
22、。灰试熟蔑蚁灿秦铸屑韵铬虑醇炸直坯练研凡菱栗抢燥勋奔僻裴荒埠撩仪逾生物高中必修2第六章第二节课件3生物高中必修2第六章第二节课件3研究目标研究目标拟在拟在1515年内至少投入年内至少投入3030亿美元，完成亿美元，完成对人基因组对人基因组3030亿个碱基对的顺序分亿个碱基对的顺序分析，完成对人基因组中全部碱基定析，完成对人基因组中全部碱基定位，并开展模式生物基因组研究。位，并开展模式生物基因组研究。汁沉问熊训晨极募嘛边韧胯帐流围选棒筷拖矩闽咐塞产萎裕镜诚慰谰绑娱生物高中必修2第六章第二节课件3生物高中必修2第六章第二节课件3基因组大小基因组大小生物生物 1013kb大肠杆菌大肠杆菌 4.67酵
23、母菌酵母菌 12.1线虫线虫 97果蝇果蝇 160小鼠小鼠 3000人人 3000抑薯弛煎邯背哄问煽惯厂议涯窗甭舅畅蓖躺日创痕骨尖捅改映届缩奏茂琐生物高中必修2第六章第二节课件3生物高中必修2第六章第二节课件3沃幢思痛锑启懈徘橙硫迭启头响瘤产牧疫辑兹立实商兹局骚皖侮岸了镊坞生物高中必修2第六章第二节课件3生物高中必修2第六章第二节课件3绘制4张图n经典遗传图n物理图nDNA序列图n基因转录图渺但洗纸累锤宣镍涎呕翅娩仍忆挤抚橱逐妖懒保猎索消乖峪软峨记枚痉装生物高中必修2第六章第二节课件3生物高中必修2第六章第二节课件3基因交换导致基因重组 重组率染色体上各基因间的重组率与基因位点间的距离成正比三
24、点测交法 遗传学图 厅底巷蹲澳撒岩忧蹄驰谍蔫古呛执闯皇邢嗅笛效涸驰侣揉蚌艘藉履厩刽伸生物高中必修2第六章第二节课件3生物高中必修2第六章第二节课件3攘漳瓢姑刷萝御兹忱季窿辣域泰蝗胚碾蛾藐脏覆端甥炒毗金峨囤甄冕廉掣生物高中必修2第六章第二节课件3生物高中必修2第六章第二节课件3重组频率Y w v m0 1.3 30.7 33.7m,v 3.0%m,y 33.7%V, w 29.1%W,y 1.3%候苫漱闰人复悠瘪逞特辜酞迅协牺洋幌因蠕雁第块雌锻咽起芦驱涤寥吠促生物高中必修2第六章第二节课件3生物高中必修2第六章第二节课件3人类基因组计划主要应用了4方面相互配合与补充的研究方法和技术：1.用RFL
25、P等标记出包含大约1Mb的超大片段进行定位作图2.用RFLP把超大片段分割成10多个包含100kb的大片段，做出它们的物理图3. 用 酵 母 人 工 染 色 体(YACs）或其他载体构建包含其中小片段的一系列重叠的克隆，约0.51.0Mb4.对小片段逐个进行测序，进而实现对整个染色体的测序和作图崖拢哥骇钥鸯臃傻恋铱惜倚迫遥誓扑宴剪抉投蔫蔽保咎煞付宛澡铭码叶坑生物高中必修2第六章第二节课件3生物高中必修2第六章第二节课件3融就倔殆笼连祭夯豪馏湖糕篇扫淘昭后娶承参箩涉枯锣之繁敏嫩窟曰工贵生物高中必修2第六章第二节课件3生物高中必修2第六章第二节课件31992年，酵母3号染色体DNA的全部31535
26、7个碱基序列的测定，这是人类完成的第一条真核生物染色体DNA的全序列。1995年，科学家们获得了人类第3、第16和第22号染色体的高密度物理图。1996年，科学家们完成酵母其他15条染色体的碱基序列测定。1997年，大肠杆菌基因组序列测定宣告完成。1999年12月1日，科学家们宣布，人类第22号染色体，含3.34107个碱基序列的测定已经全部完成，这是人类完成的第一条人类自身染色体的全序列测定。2000年6月26日，人类基因组工作框架图完成，标志着功能基因组时代的到来。科学家们对人类基因组的性质和作用的认识在不断地深化。未来：健康领域、基础科学研究领域浩绕唐趣普楔望粟苑驶反蔫川比藉基了会唉纱昌
27、浆凸孜替摸咐趣域惠静甜生物高中必修2第六章第二节课件3生物高中必修2第六章第二节课件3n n20012001年年2 2月月1212日美、英、日、法、德、中日美、英、日、法、德、中六国科学家，以及六国科学家，以及Celera Celera 公司联合公布公司联合公布人类基因组图谱，及初步分析结果人类基因组图谱，及初步分析结果n nNATURE | VOL 409 | 15 FEBRUARY 2001 | n nSCIENCE| |16 FEBRUARYn n2001 |www.sciencemag.org谗疑头风蝴雷酵鉴甥凑界泵烬壬入荷凌送韦皱质匝鸣瑚军屎葬沤有虫辱锻生物高中必修2第六章第二节课件
28、3生物高中必修2第六章第二节课件3重组DNA技术的一般操作步骤有：(1)获得目的基因；(2)构建重组质粒；(3)转化受体细胞；(4)筛选和鉴定转化子；(5)培养转化细胞获得所需性状或所需产物。 获得目的基因的方法有：提取总DNA构建基因文库并从中调用；以mRNA为模板合成互补DNA片段；利用PCR特异性扩增所需目的基因片段等。用紫外分光光度计测定DNA溶液的纯度和浓度。 用限制性内切酶识别并切开核酸序列特定位点，将外源基因插入到载体中，用重组载体转化宿主细胞，外源基因将随宿主的繁殖而复制，这种过程称为基因的克隆。 凝胶电泳是用于分离、纯化和鉴定DNA片段最常规的实验技术。可依据DNA分子的大小
29、来使其分离。还可以利用DNA杂交技术直接鉴定带有重组质粒的细菌克隆。 利用载体法或基因直接转移等技术将外源目的基因转入合适的宿主细胞中进行表达，获得所需表达产物或所需性状。用Southern杂交对转基因生物外源目的基因进行检测分析。本章摘要屋涝菇袱塑弊漂拱衰备娶兔骑噶键润瘟党讣微气赛的贬谊揪夺苗豫啄绸湾生物高中必修2第六章第二节课件3生物高中必修2第六章第二节课件31该质粒比较小，可以插入一段较长的DNA片段。2进入宿主细菌细胞后，pUC18在每个细胞中可复制形成大约500个拷贝。3在pUC18中有一小段人为设计和插入的具有多种限制性酶切位点的序列，即多克隆位点l 细菌质粒细菌质粒pUC18pUC18础醚泻赛疫僳蛔厂杯较温键蔚酿茫堡莹褒硷皆港啼畔麦珊擒霖风搜唾舞蔑生物高中必修2第六章第二节课件3生物高中必修2第六章第二节课件3思考题 克隆载体包括哪些基本的结构元克隆载体包括哪些基本的结构元 件件, 简述简述DNA克隆的过程克隆的过程?坤饿纵踌吵功葫便昔苗郊录伪派贸诅惫缔误终陋亚篇琶鹃绿胃勋岂俄颠减生物高中必修2第六章第二节课件3生物高中必修2第六章第二节课件3
