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1、专题专题1 基因工程基因工程1.2 基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序比比较DNA复制复制PCR技技术区区别解旋解旋方式方式解旋解旋酶酶催化催化DNA在高温作用下在高温作用下变性解旋性解旋场所所细胞内胞内(主要在主要在细胞核内胞核内)细胞外胞外(主要在主要在PCR扩增增仪内内)区区别酶酶DNA解旋解旋酶酶、普通、普通的的DNA聚合聚合酶酶等等耐耐热的的DNA聚合聚合酶酶(Taq聚合聚合酶酶)温度温度条件条件细胞内温和条件胞内温和条件需控制温度，在需控制温度，在较高高温度下温度下进行行合成的合成的对象象DNA分子分子DNA片段或基因片段或基因联系系模板：均需要脱氧核苷酸模板：均需要脱氧
2、核苷酸链作作为模板模板进行行物物质合成合成原料：均原料：均为四种脱氧核苷酸四种脱氧核苷酸酶酶：均需要：均需要DNA聚合聚合酶酶进行催化行催化引物：均需要引物，使引物：均需要引物，使DNA聚合聚合酶酶从引物从引物的的3端开始端开始连接脱氧核苷酸接脱氧核苷酸受体受体细胞胞方法方法植物植物细胞胞(体体细胞胞)农杆菌杆菌转化法：目的基因插入化法：目的基因插入Ti质粒的粒的T-DNA农杆菌杆菌导入植物入植物细胞胞稳定定维持和表达持和表达基因基因枪法：是法：是单子叶植物中常用的一种子叶植物中常用的一种基因基因转化方法，但是成本化方法，但是成本较高高花粉管通道法：花粉管通道法：这是我国科学家独是我国科学家独
3、创的的一种方法，是一种十分一种方法，是一种十分简便便经济的方法的方法动物物细胞胞(受精卵受精卵)显微注射法：含有目的基因微注射法：含有目的基因的表达的表达载体提体提纯取卵取卵(受精受精卵卵)显微注射微注射受精卵受精卵发育育获得具有新性状的得具有新性状的动物物微生物微生物细胞胞(原核原核细胞胞)Ca2处理理细胞胞感受感受态细胞胞表达表达载体与感受体与感受态细胞混胞混合合感受感受态细胞吸收胞吸收DNA分分子子目的基因随受体目的基因随受体细胞的胞的繁殖而复制繁殖而复制比比较起始起始(终止止)密密码子子启启动(终止止)子子本本质三个相三个相邻碱基碱基DNA片段片段位置位置位于位于mRNA上上位于位于D
4、NA上上作用作用启启动(终止止)翻翻译启启动(终止止)转录类型型步步骤检测内容内容方法方法结果果显示示分子分子水平水平检测第一步第一步目的基因是目的基因是否否进入受体入受体细胞胞DNA分子分子杂交交(DNA和和DNA之之间)是否成功是否成功显示出示出杂交交带第二步第二步目的基因是目的基因是否否转录出出mRNA分子分子杂交交技技术(DNA和和mRNA之之间)是否成功是否成功显示出示出杂交交带第三步第三步目的基因是目的基因是否翻否翻译出蛋出蛋白白质抗原抗原抗抗体体杂交交是否成功是否成功显示出示出杂交交带个体个体水平水平鉴定定需要做抗虫、抗病的接种需要做抗虫、抗病的接种实验，以确定是，以确定是否有抗性以及抗性的程度；基因工程否有抗性以及抗性的程度；基因工程产品品与天然与天然产品的功能品的功能进行活性比行活性比较，以确定，以确定二者的功能活性是否相同等二者的功能活性是否相同等
