CHINESE CENTER FOR DISEASE CONTROL AND PREVENTION埃博拉出血热（埃博拉出血热（EVDEVD）标本）标本采集采集、、包装、运输与检测包装、运输与检测中国疾病预防控制中心2014年12月 CHINESE CENTER FOR DISEASE CONTROL AND PREVENTIONl埃博拉出血热(Ebola hemorrhagic fever)是由埃博拉病毒(Ebola virus)引起的一种急性传染病l人主要通过接触病人或感染动物的体液、分泌物和排泄物等而感染l临床表现主要为突起发热、出血和多脏器损害，病死率可高达50%-90%l本病潜伏期为2～21天，通常为8～10天l2014年，在几内亚、利比里亚和塞拉利昂等西非国家发生历史上最严重的埃博拉出血热暴发疫情埃博拉埃博拉病毒病毒简介简介 CHINESE CENTER FOR DISEASE CONTROL AND PREVENTION 为指导医疗机构和疾病预防控制机构工作人员对埃博拉出血热相关标本的采集、包装、运输和检测工作，保证生物安全培训目的培训目的 CHINESE CENTER FOR DISEASE CONTROL AND PREVENTION 埃博拉出血热留观、疑似或确诊病例：l标本采集的个人防护生物安全要求l包装的要求l运输的方式l实验室检测方法培训内容培训内容 CHINESE CENTER FOR DISEASE CONTROL AND PREVENTIONl《中华人民共和国传染病防治法》l《病原微生物实验室生物安全管理条例》l《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定》l卫生部《人间传染的病原微生物名录》l 国际民航组织《危险物品航空安全运输技术细则》l《中国疾病预防控制中心关于规范埃博拉出血热病例标本接收和检测结果反馈等工作的通知》中疾控应急发〔2014〕322号知识知识要点要点- -国内的法律法规及管理办法国内的法律法规及管理办法 CHINESE CENTER FOR DISEASE CONTROL AND PREVENTIONl应遵守《医院感染管理规范》和《病原微生物实验室生物安全管理条例》等相关生物安全规定l在标准预防的基础上，应采取避免飞沫和接触感染的预防措施标本标本的采集的采集 CHINESE CENTER FOR DISEASE CONTROL AND PREVENTIONl采样人员应该接受埃博拉病人采血规程的培训l培训内容lPPE的规范使用l采血要求及注意事项l采血时，需 2名采血人员同时在场标本的标本的采集采集- -人员要求人员要求 CHINESE CENTER FOR DISEASE CONTROL AND PREVENTIONl工作服l一次性工作帽l双层医用手套l防渗透防护服(连帽，猴服)l医用防护口罩(N95及以上)+护目镜或防护面屏 或普通外科口罩+正压头盔l工作鞋+一次性防水靴套 或长筒胶靴l防渗漏防护服(反穿式)标本的标本的采集采集- -个人防护个人防护 CHINESE CENTER FOR DISEASE CONTROL AND PREVENTIONl应提前将所有采血物品准备齐全，并配备：n洗手的设施n备用手套n消毒液n锐器盒标本的标本的采集采集- -物品物品准备准备 CHINESE CENTER FOR DISEASE CONTROL AND PREVENTIONl一般发病后2周内，可在患者血标本中检测到病毒核酸和抗原，发病后3～10天的标本核酸和抗原的检出率高l留观病例、疑似病例诊断埃博拉病毒感染应采集发病3天以后的血标本标本的标本的采集采集- -采集时间采集时间 CHINESE CENTER FOR DISEASE CONTROL AND PREVENTIONl用分离胶无菌真空促凝管采集静脉血，每管3mll留观病例、疑似病例采集4管n2管送指定的具有埃博拉出血热检测资质的实验室进行检测n2管保存于样本采集单位或所在省级疾控中心标本的标本的采集采集- -采血采血管种类及采血管种类及采血量量 CHINESE CENTER FOR DISEASE CONTROL AND PREVENTION采集采集后的处理方式后的处理方式l应用封口膜封闭管口，消毒后由协助者将病人信息填写在采血管上，放入试管架中l退入潜在污染区，将采血管放入50ml离心管内l离心管消毒后，放入第二层包装尽快送检l如不能立即送检，则置于4℃下保存，填写标本采集登记表保存方式保存方式l全血采用冷藏运输，血清采用冷冻运输标本的采集标本的采集 CHINESE CENTER FOR DISEASE CONTROL AND PREVENTION恢复期标本采集l确诊病例采集恢复期血标本2份，每份2管l采集时间应间隔不少于48小时，送国家疾控中心病毒病所进行埃博拉病毒相关检测，用于指导病例管理l恢复期血标本，并不限定必须于出院前采集l可采集发病2周后或出院(死亡)前标本标本的采集标本的采集 CHINESE CENTER FOR DISEASE CONTROL AND PREVENTIONl采取A类包装，符合UN2814要求l容器或包装材料应达到国际民航组织《危险物品航空安全运输技术细则》（Doc9284包装说明PI602）规定的A类包装标准标本标本的包装的包装 CHINESE CENTER FOR DISEASE CONTROL AND PREVENTION三层包装三层包装l第一层为自封袋或50ml离心管l第二层为防水、防漏的安全壳容器l第三层为运输包装包装要求包装要求l样本应用吸水纸等包裹，固定在自封袋或离心管内l在坚固、防水、防漏的第二层安全壳容器中，用吸水纸等填充物将内有标本的自封袋或离心管固定好，装入第三层包装l第二层和第三次包装之间应放置冰排等制冷材料l安全壳容器和外包装须与IATA危险物品条例包装制度650相符合标本的包装标本的包装 CHINESE CENTER FOR DISEASE CONTROL AND PREVENTION包装中的注意事项包装中的注意事项l用0.5%有效氯消毒50ml离心管表面，并在潜在污染区放入第二层包装l第二层包装用0.5%有效氯浸泡消毒15min后，擦拭干净带入清洁区，放入外层包装标本的包装标本的包装 CHINESE CENTER FOR DISEASE CONTROL AND PREVENTION样品清单样品清单l填写标本说明两份，写明标本的基本信息、运送者及接收者地址等l将标本说明密封在塑料袋里，用胶布分别粘贴于最外层包装的内侧和外侧l标本相关信息需留档以便查验，方便实验室操作人员查对标本数量标本的包装标本的包装 CHINESE CENTER FOR DISEASE CONTROL AND PREVENTION收取标本收取标本l由医院所在地的疾病预防控制机构到医院收取标本。
标本运输之前，应按相关生物安全规定，与样本接收单位生物安全管理部门联系，办理相关手续l运送日期确定后，立即将运送时间和运输方式通知接收单位，做好接收准备标本的包装标本的包装 中国中国疾控中疾控中心检测的标心检测的标本本运输流程运输流程 CHINESE CENTER FOR DISEASE CONTROL AND PREVENTION省市内运送埃博拉出血热标本省市内运送埃博拉出血热标本的运输流程的运输流程 CHINESE CENTER FOR DISEASE CONTROL AND PREVENTION生物安全要求生物安全要求l 由专人专车运送，运送人员须有相关资质，且不得少于两人l申请单位对与运送人员进行埃博拉病毒相关的生物安全培训l在运送过程中采取相应的防护措施l运输前仔细检查容器，要符合安全要求l按照规定进行标本运输前的包装和送达后的开启标本运输标本运输的生物安全要求的生物安全要求 CHINESE CENTER FOR DISEASE CONTROL AND PREVENTION省市间标本运输省市间标本运输l跨省、自治区、直辖市运输疑似病例或留观病例样本时，应当将申请材料提交至运输出发地省级卫生计生行政部门进行初审l对符合要求的，省级卫生计生行政部门应当在3个工作日内出具初审意见，并将初审意见和申报材料上报卫计委审批l卫计委应当自收到申报材料后3个工作日内做出是否批准的决定l符合法定条件的，颁发准运证书省市省市间间BSL-3BSL-3实验室标本运输流程实验室标本运输流程 CHINESE CENTER FOR DISEASE CONTROL AND PREVENTIONWHOWHO、美国、美国CDCCDC等其他国家及地区关于等其他国家及地区关于标本的采集、包装和标本的采集、包装和运输的文件运输的文件l WHO的《Laboratory Guidance for the Diagnosis of Ebola Virus Disease Interim Recommendations》2014.9.19l英国卫生署的《PHE Microbiology Services VHF Sample Testing Queries》2014.9l美国CDC的《Interim Guidance for Specimen Collection, Transport, Testing, and Submission for Persons Under Investigation for Ebola Virus Disease in the United States》2014.10.20知识知识要点要点- -国外的情况国外的情况 CHINESE CENTER FOR DISEASE CONTROL AND PREVENTIONl推荐用EDTA塑料采血管采集全血，最低量4mll保存聚茴香脑硫酸钠(SPS)或柠檬酸采血管中,或促凝采血管也可以l尿液标本也是可以的，但需要尽快检测l死亡者或无法采血的儿童采集咽拭子知识要点知识要点- -国外的国外的情况情况- -标本标本的采集的采集 CHINESE CENTER FOR DISEASE CONTROL AND PREVENTIONlWHO和美国CDC包装形式均与我国一致，运输高致病性病原微生物菌（毒）种或样本的容器或包装材料应当达到国际民航组织《危险物品航空安全运输技术细则》（Doc9284包装说明PI602）规定的A类包装标准知识要点知识要点- -国外的情况国外的情况- -标本标本的包装的包装 CHINESE CENTER FOR DISEASE CONTROL AND PREVENTIONlWHO关于运输主要依据《Guidance on regulations for the Transport of Infectious Substances》2013.1.1，如果本国没有实验室可以做检测可将标本寄到《Laboratory Guidance for the Diagnosis of Ebola Virus Disease Interim Recommendations》2014.9.19所写的实验室l美国则按照各州的规定运输标本知识要点知识要点- -国外的情况国外的情况- -标本标本的运输的运输 CHINESE CENTER FOR DISEASE CONTROL AND PREVENTIONWHO发布的安全采集埃博拉出血热疑似患者血液标本 WHO发布的如何安全运输埃博拉出血热疑似患者血液标本的流程 （国内运输） CHINESE CENTER FOR DISEASE CONTROL AND PREVENTION检测方法1. 病毒核酸检测方法 （1）实时荧光定量RT-PCR法 （2）一步法常规RT-PCR方法2. 埃博拉病毒抗原抗体检测方法 （1）埃博拉病毒抗原检测方法（双抗体夹心法ELISA、胶体金快诊） （2）埃博拉病毒IgM抗体检测（抗体捕捉法ELISA） （3）埃博拉病毒IgG抗体检测方法（间接法ELISA）标本的检测标本的检测 CHINESE CENTER FOR DISEASE CONTROL AND PREVENTIONl埃博拉病毒的实验室检测相关活动严格按照《人间传染的病原微生物名录》的要求，在相应的生物安全级别实验室开展n病毒培养在BSL-4实验室n动物感染实验在ABSL-4实验室n未经培养的感染材料的操作在BSL-3实验室n灭活材料的操作在BSL-2实验室l按照《病原微生物实验室生物安全管理条例》等相关规定要求，做好生物安全工作实验室实验室生物安全生物安全要求要求 CHINESE CENTER FOR DISEASE CONTROL AND PREVENTION 埃博拉病毒检测机构应将所有阳性和部分阴性血清标本送中国疾病预防控制中心病毒病所进行复核检测 实验室检测结果应及时反馈标本送检单位，并尽快上报上级主管部门 CHINESE CENTER FOR DISEASE CONTROL AND PREVENTION 埃博拉病毒相关感染性标本的灭活，应在BSL-3实验室Ⅱ级生物安全柜内进行 标本的灭活标本的灭活处理处理 CHINESE CENTER FOR DISEASE CONTROL AND PREVENTION（（1 1）） TRIzol TRIzol（或（或TriPureTriPure）灭活法）灭活法 提取病毒RNA时，标本和TRIzol（或TriPure）按照1:10混匀，室温孵育10分钟灭活埃博拉病毒（（ 2 2））加热灭活法加热灭活法 标本中埃博拉病毒抗原抗体检测前，将标本置于BSL-3实验室水浴箱60℃ 1小时灭活 加热灭活后的标本在BSL-3实验室的生物安全柜内进行加样操作。
埃博拉病毒的血清学检测都在BSL-3实验室进行灭活处理方法灭活处理方法 CHINESE CENTER FOR DISEASE CONTROL AND PREVENTIONThankyou！ 。