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1、ABOABO血型鉴定血型鉴定2 2ABO血型鉴定一、一、 器材器材1、采血针：市售一次性使用的采血针，刺血深采血针：市售一次性使用的采血针，刺血深度可加控制。度可加控制。2、消毒干棉球。、消毒干棉球。3、75%乙醇棉球。乙醇棉球。4、一次性使用的、一次性使用的20uL刻度采血管。刻度采血管。二、鉴定方法二、鉴定方法 生理盐水凝集法：生理盐水凝集法：玻片法：操作简单，玻片法：操作简单，适于大量标本检查，但反应时间长；被检适于大量标本检查，但反应时间长；被检查者如血清抗体效价低，则不易引起红细查者如血清抗体效价低，则不易引起红细胞凝集，因此，不适于反向定型。胞凝集，因此，不适于反向定型。试管试管法
2、：由于离心作用可加速凝集反应，故反法：由于离心作用可加速凝集反应，故反应时间短，而且借助于离心力可以使红细应时间短，而且借助于离心力可以使红细胞接触紧密，促进凝集作用，适于急诊检胞接触紧密，促进凝集作用，适于急诊检查。查。三、操作 1、采血部位成人以左手无名指为宜。（半岁以上儿童以手指采取为好，半岁以下婴幼儿通常自拇指或足跟两侧采血 2、轻轻按摩采血部位，使其自然充血，75%乙醇棉球消毒局部皮肤、待干 3、紧捏刺血部位，用无菌刺血针穿刺取血。动作应迅速，深度为2-3mm。稍加挤压，以血液流出为宜。 4、用干棉球擦去第一滴血，用一次性使用的20uL刻度采血管采血20uL滴于玻片一端，同样在玻片另
3、一端滴血20uL。 5、滴加ABO血型鉴定试剂。 加试剂抗体血清加试剂抗体血清加被检红细胞悬液加被检红细胞悬液相对应的抗原抗体反应相对应的抗原抗体反应观察结果观察结果ABO血型判断血型判断 血血 正定型正定型 反定型反定型 型型 抗抗-A 抗抗-B AC BC OC A + + B + + O + + AB + + 五、五、.注意事项注意事项 一般注意事项：一般注意事项：所用器材必须干燥清洁、防止溶血。为避免交所用器材必须干燥清洁、防止溶血。为避免交叉污染，建议使用一次性器材。标准血清从冰箱叉污染，建议使用一次性器材。标准血清从冰箱取出后，应待其平衡至室温后再用，用完后应尽取出后，应待其平衡至
4、室温后再用，用完后应尽快放回冰箱保存。快放回冰箱保存。加试剂顺序：一般先加血清，然后再加红细胞加试剂顺序：一般先加血清，然后再加红细胞悬液，以便核实是否漏加血清。悬液，以便核实是否漏加血清。虽然虽然IgM抗抗A和抗和抗B与相应红细胞的反应温度以与相应红细胞的反应温度以4最强，但为了防止冷凝集现象干扰，一般在最强，但为了防止冷凝集现象干扰，一般在室温室温2024内进行试验，而在内进行试验，而在37条件，可条件，可使反应减弱。使反应减弱。幼儿红细胞抗原未发育完全、老年体弱者抗原幼儿红细胞抗原未发育完全、老年体弱者抗原性较弱，最好采用试管法鉴定血型。性较弱，最好采用试管法鉴定血型。玻片法反应时间不能
5、少于玻片法反应时间不能少于10min，否则较弱凝，否则较弱凝集不能出现，造成假阴性。集不能出现，造成假阴性。正、反定型结果一致才可发报告。正、反定型结果一致才可发报告。反定型法：先天性免疫球蛋白缺陷，长期大量反定型法：先天性免疫球蛋白缺陷，长期大量应用免疫抑制剂，血型抗体可减弱或消失；血清应用免疫抑制剂，血型抗体可减弱或消失；血清中存在自身免疫性抗体、冷凝集素效价增高、多中存在自身免疫性抗体、冷凝集素效价增高、多发性骨髓瘤、免疫球蛋白异常均可造成反定型困发性骨髓瘤、免疫球蛋白异常均可造成反定型困难；新生儿体内可存在母亲输送的血型抗体，且难；新生儿体内可存在母亲输送的血型抗体，且自身血型抗体效价
6、又低，因而出生自身血型抗体效价又低，因而出生6个月以内的个月以内的婴儿不宜做反定型。老年人血清中抗体水平大幅婴儿不宜做反定型。老年人血清中抗体水平大幅度下降或被检者血清中缺乏抗度下降或被检者血清中缺乏抗A及（或）抗及（或）抗B抗抗体，可引起假阴性或血型鉴定错误。体，可引起假阴性或血型鉴定错误。 RH血型血型RH的由来的由来RH是恒河猴（是恒河猴（Rhesus Macacus）外）外文名称的头两个字母。文名称的头两个字母。1940年，年，兰德斯坦兰德斯坦纳纳等科学家在用恒河猴的红细胞免疫豚鼠等科学家在用恒河猴的红细胞免疫豚鼠和家兔，结果在豚鼠和家兔身上获得了一和家兔，结果在豚鼠和家兔身上获得了一
7、种种免疫血清免疫血清，这种血清不但能凝集恒河猴，这种血清不但能凝集恒河猴的红细胞，也可以与部分人的红细胞产生的红细胞，也可以与部分人的红细胞产生凝集反应，也就是说这些人的红细胞跟恒凝集反应，也就是说这些人的红细胞跟恒河猴的红细胞有一个共同的抗原点，故而河猴的红细胞有一个共同的抗原点，故而以恒河猴的字头缩写命名。以恒河猴的字头缩写命名。 RH血型的分类血型的分类RH血型系统血型系统，其中含有，其中含有6种抗原，即种抗原，即C、c、D、d、E、e。凡人体血液红细胞含。凡人体血液红细胞含D抗原抗原（又称（又称RH抗原）为抗原）为RH阳性，否则为阴性。阳性，否则为阴性。这样就使已发现的红细胞这样就使已
8、发现的红细胞A、B、O及及AB四种四种主要血型的人，又都分别一分为二地被划分主要血型的人，又都分别一分为二地被划分为为RH阳性和阴性两种。随着对阳性和阴性两种。随着对RH血型的不血型的不断研究，认为断研究，认为RH血型系统可能是红细胞血型血型系统可能是红细胞血型中最为复杂的一个血型系。中最为复杂的一个血型系。RH血型无天然抗血型无天然抗体，其抗体多由输血（体，其抗体多由输血（RH阴性者被输人阴性者被输人RH阳性血液）或妊娠（阳性血液）或妊娠（RH阴性母亲孕育着阴性母亲孕育着RH阳性胎儿）免疫生成，具有重要临床意义。阳性胎儿）免疫生成，具有重要临床意义。一旦形成抗体，如再输入一旦形成抗体，如再输
9、入RH阳性血液，可发阳性血液，可发生严重输血反应。再孕育生严重输血反应。再孕育RH阳性胎儿可发生阳性胎儿可发生新生儿溶血症新生儿溶血症。 RH血型的分布血型的分布RH血型的发现，对更加科学地指导输血型的发现，对更加科学地指导输血工作和进一步提高血工作和进一步提高新生儿溶血病新生儿溶血病的实验诊的实验诊断和维护母婴健康，都有非常重要的作用。断和维护母婴健康，都有非常重要的作用。据有关资料介绍，据有关资料介绍，RH阳性血型阳性血型在我国汉族在我国汉族及大多数少数民族人中约占及大多数少数民族人中约占99.7%，个别少，个别少数民族约为数民族约为90%。在国外的一些民族中，。在国外的一些民族中，RH阳
10、性血型的人约为阳性血型的人约为85%，其中在欧美白，其中在欧美白种人中，种人中，RH阴性血型阴性血型人约占人约占15% 。 在我国，在我国，RH阴性血型只占千分之三属阴性血型只占千分之三属于于稀有血型稀有血型。RH阴性阴性A型、型、B型、型、O型、型、AB型的比例是型的比例是3：3：3：1。 二、用品准备二、用品准备 RH试剂血清【抗试剂血清【抗D】，待检者红】，待检者红细胞，各型阴、阳性对照红细胞。其他细胞，各型阴、阳性对照红细胞。其他材料同材料同ABO血型鉴定。血型鉴定。 三、方法操作方法操作盐水介质法盐水介质法(1)试管法试管法 取小取小试管试管3支，支，1支注明抗支注明抗D，另，另1支
11、注明阳性对照，最后支注明阳性对照，最后1支注明阴性支注明阴性对照。对照。将室温将室温盐水盐水反应活性的抗反应活性的抗D血清血清各各1滴加入上述试管内。滴加入上述试管内。抗抗D试管中加入试管中加入1滴滴5待检者红细胞待检者红细胞(盐水、血清盐水、血清) 悬液，悬液，阳性对照及阴性对照试管中分别加入相应阳性对照及阴性对照试管中分别加入相应的阳性红细胞及阴性红细胞悬液的阳性红细胞及阴性红细胞悬液1滴；滴；轻轻轻混匀，于轻混匀，于3000r/min离心离心15s；取出轻取出轻轻摆动观察有无凝集。轻摆动观察有无凝集。(2)平板法平板法 取洁净平板取洁净平板1块，用记号笔划出反应块，用记号笔划出反应小格，
12、在左侧注明抗小格，在左侧注明抗D，中间段注明阴性对，中间段注明阴性对照，右侧注明阳性对照；照，右侧注明阳性对照；将室温盐水反将室温盐水反应的抗应的抗D血清各血清各1滴加入上述小格内；滴加入上述小格内；抗抗D小格内加入待检者小格内加入待检者5红细胞悬液红细胞悬液1滴，阳滴，阳性对照小格内加入阳性对照红细胞悬液性对照小格内加入阳性对照红细胞悬液1滴，滴，阴性对照小格加入阴性对照红细胞悬液阴性对照小格加入阴性对照红细胞悬液1滴；滴；用干净玻璃棒搅拌红细胞悬液与试剂血用干净玻璃棒搅拌红细胞悬液与试剂血清充分混合；清充分混合；连续轻轻倾斜转动平板，连续轻轻倾斜转动平板，一般在一般在2min内观察结果，或
13、按试剂说明书内观察结果，或按试剂说明书规定的时间观察结果。规定的时间观察结果。 四、结果判读四、结果判读 抗抗D试管中出现凝集，而阴性对照试管试管中出现凝集，而阴性对照试管不凝集，阳性对照试管凝集，待检者为不凝集，阳性对照试管凝集，待检者为阳阳性性；抗；抗D试管和阴性对照管均不凝集，阳性试管和阴性对照管均不凝集，阳性对照试管凝集，待检者为对照试管凝集，待检者为阴性阴性。玻片法同。玻片法同试管法。试管法。五、临床意义五、临床意义 无论是无论是RH阴性还是阴性还是RH阳性其差别仅仅阳性其差别仅仅是血型的不同，都属健康人群。是血型的不同，都属健康人群。 RH阴性者不能接受阴性者不能接受RH阳性者血液
14、，因阳性者血液，因为为RH阳性血液中的抗原将刺激阳性血液中的抗原将刺激RH阴性人阴性人体产生体产生RH抗体。如果再次输入抗体。如果再次输入RH阳性血阳性血液，即可导致溶血性输血反应。但是，液，即可导致溶血性输血反应。但是，RH阳性者可以接受阳性者可以接受RH阴性者的血液阴性者的血液 RH阴性的女性在输了阴性的女性在输了RH阳型的血阳型的血后，血液里产生了抗体，就不能再怀后，血液里产生了抗体，就不能再怀RH阳性的孩子了，否则婴儿多半难以阳性的孩子了，否则婴儿多半难以存活。也有部分存活胎儿由于溶血所存活。也有部分存活胎儿由于溶血所产生的大量胆红素进入脑细胞，引起产生的大量胆红素进入脑细胞，引起新生
15、儿中枢神经细胞病变（称为核黄新生儿中枢神经细胞病变（称为核黄疸，核黄疸残废率极高）即使幸存也疸，核黄疸残废率极高）即使幸存也会影响病儿的智力发育和运动能力。会影响病儿的智力发育和运动能力。 这是因为这是因为RH阴性母亲怀孕后，母亲和阴性母亲怀孕后，母亲和孩子的血在胎血中有一层膜隔开，可以交孩子的血在胎血中有一层膜隔开，可以交换营养物质，代谢产物和氧气，但血液不换营养物质，代谢产物和氧气，但血液不直接流通，只有在某些原因下如外伤、炎直接流通，只有在某些原因下如外伤、炎症等，胎儿的血球可流入母体，而胎儿得症等，胎儿的血球可流入母体，而胎儿得自父亲的血型如果恰恰与母亲不合，那么，自父亲的血型如果恰恰
16、与母亲不合，那么，只要胎儿的红细胞进入母体，其红细胞上只要胎儿的红细胞进入母体，其红细胞上的抗原就能刺激母亲产生相应的抗体，这的抗原就能刺激母亲产生相应的抗体，这种抗体再通过种抗体再通过胎盘胎盘进入胎儿的血液循环，进入胎儿的血液循环，与孩子红细胞上的抗原起作用，即发生与孩子红细胞上的抗原起作用，即发生抗抗原抗体反应原抗体反应，使大量红细胞被破坏，溶解，使大量红细胞被破坏，溶解，发生贫血。同时产生大量胆红素，因而发发生贫血。同时产生大量胆红素，因而发生黄疸。生黄疸。 RH阴性女性如果不输阴性女性如果不输RH阳性的血，阳性的血，则可生育第一胎，这是由于第一胎怀则可生育第一胎，这是由于第一胎怀孕时，
17、孕妇体内产生的抗体量较少，孕时，孕妇体内产生的抗体量较少，还不足以引起胎儿发病。如果第一胎还不足以引起胎儿发病。如果第一胎是是RH阳性，那么以后就不能继续生育阳性，那么以后就不能继续生育了。了。 如果男性是如果男性是RH阴性，那么生完阴性，那么生完RH阳性的孩子后也不要生育第二胎。阳性的孩子后也不要生育第二胎。一般来讲，一般来讲，RH溶血比溶血比ABO溶血症状溶血症状出现早而且重，出现早而且重，RH溶血一般发生在第溶血一般发生在第二胎，二胎，ABO溶血可发生在第一胎。新溶血可发生在第一胎。新生儿溶血病与遗传因素密切相关，因生儿溶血病与遗传因素密切相关，因此再次怀孕的胎儿发病机会更多、症此再次怀孕的胎儿发病机会更多、症状也更重。但是男性输完状也更重。但是男性输完RH阳性的血阳性的血后不会丧失生育能力。后不会丧失生育能力。
