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1、实验五实验五 DNADNA的细胞化学的细胞化学实验目的实验目的了解了解Feulgen反应的原理，掌握相关操作方法。反应的原理，掌握相关操作方法。实验原理实验原理FeulgenFeulgen反应反应嘌呤碱和脱氧核糖嘌呤碱和脱氧核糖之间的双键打开之间的双键打开SchiffSchiff试剂是由碱性品红和偏重亚硫酸钠相作用，形成无色试剂是由碱性品红和偏重亚硫酸钠相作用，形成无色的品红液，当无色品红与醛基结合形成紫红色的化合物。的品红液，当无色品红与醛基结合形成紫红色的化合物。A紫红色的产生，是由于反应产物的分子内含有醌基，醌基紫红色的产生，是由于反应产物的分子内含有醌基，醌基是一个发色基团，所以具有颜
2、色。是一个发色基团，所以具有颜色。实验原理实验原理FeulegenFeulegen反应反应材料不经过水解或预先用热的三氯醋酸或DNA酶处理，得到的反应是阴性的，从而证明了Feulgen反应的专一性。实验步骤实验步骤DNADNA的细胞化学的细胞化学1.将洋葱鳞茎内表皮置于1mol/LHCl中，加热到60水解8min。2.蒸馏水水洗。（这两步在烧杯中进行）3.Schiff试剂遮光染色20min。（这一步开始，用镊子将表皮置于在玻片上操作）4.用新鲜配制的亚硫酸水溶液洗3次，每次1min。（这个可以用滤纸吸干来换液，也可用吸管吸干来换液）5.水洗2min。6.显微镜检查，细胞中凡是DNA部分应呈现紫红色的阳性反应。对照：材料放在5%三氯乙酸中90oC水浴20min（把DNA抽提掉），直接放入Schiff试剂染色，然后按照46制片观察思考题思考题简述简述Feulgen反应的原理和实验关键步骤。反应的原理和实验关键步骤。绘图示洋葱鳞茎表皮细胞绘图示洋葱鳞茎表皮细胞DNA的分布部位。的分布部位。
