细菌培养标本采集及注意事项

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1、细菌培养标本采集及注意事项细菌培养标本采集及注意事项检验检验科科 细细菌菌培培养养必必须须正正确确采采集集标标本本，否否则则直直接接影影响响到到培培养养及及鉴鉴定定结结果果。合合格格的的标标本本，才才有有可可靠靠的的检检验验结结果果，可可以以指指导导临临床床诊诊疗疗，为为临临床床科科学学用用药药和和成成功功的的控控制制感感染染提提供供依依据据，正正确确、合合理理使使用用抗抗菌菌药药物物是是患患者者早早日日康复。康复。一、一、血液培养血液培养当当微生物（细菌）侵入血液迅速繁殖微生物（细菌）侵入血液迅速繁殖, ,超出免疫系统清除这些微生物超出免疫系统清除这些微生物( (细菌细菌) )的能力时形成的

2、能力时形成菌血症。菌血症。1 1、血血培养中常见的分离菌：培养中常见的分离菌： 革兰氏阳性菌革兰氏阳性菌 革兰氏阴性菌革兰氏阴性菌 金黄色金黄色葡萄球菌葡萄球菌 大肠杆菌大肠杆菌 凝固酶凝固酶阴性葡萄球菌阴性葡萄球菌 肺炎肺炎克雷伯菌克雷伯菌 肺炎肺炎链球菌链球菌 阴沟阴沟肠杆菌肠杆菌 A A群群B B群链球群链球 产产气肠杆菌气肠杆菌 肠肠球菌球菌 伤寒伤寒沙门菌沙门菌 绿绿脓杆菌脓杆菌 鲍曼不鲍曼不动杆菌动杆菌 2、采采血血指指征征：发发热热（体体温温3838C C）或或低低温温( (3636C)C)、寒寒战战、白白细细胞胞计计数数10.010.0L L、CRPCRP、中中性性粒粒细细胞胞

3、比比率率、皮皮疹疹、皮皮肤肤黏黏膜膜出出血血、昏昏迷迷、多多器器官官衰衰竭竭、血血压压降降低低、血血液液病病患患者者出出现现粒粒细细胞胞减减少少、血血小小板板减减少少、当当患患者者出出现现上上述述一一种种或或几几种种体体征征时时，应应及及时时做做血血培养培养。 新生儿新生儿可疑菌血症，应同时做尿液、脑脊液培养。可疑菌血症，应同时做尿液、脑脊液培养。 3 3、采采血血时时机机：尽尽量量在在使使用用抗抗菌菌素素之之前前采采血血、尽尽量量在在寒寒战战和和发发热热初初起起时时采采血血、如如患患者者已已经经使使用用抗抗菌菌药药物物进进行行治治疗疗，应应在在下下次用药之前采血。次用药之前采血。 4 4、血

4、液血液标本的采集方法：标本的采集方法： a a、75%75%酒精清洁局部皮肤酒精清洁局部皮肤30s30s以上。以上。 b b、待待皮皮肤肤干干后后，再再用用1%-2.%1%-2.%碘碘酊酊作作用用30s30s或或10%10%碘碘伏伏作作用用90s90s以以上上，从从穿穿刺刺点点中中心心部部位位向向外外画画圈圈消消毒毒，范范围围不不应应小小于于5 5（直直径径），且且不不能能用用手指触摸消毒后的皮肤。手指触摸消毒后的皮肤。 c c、皮皮肤肤碘碘酒酒干干后后（约约1 1分分），用用75%75%酒酒精精脱脱碘碘后后，再再穿穿刺刺采采集集血血液液。采采血血量量成成人人每每瓶瓶5 510ml10ml，婴

5、婴幼儿幼儿1 15ml5ml。 d d、培培养养瓶瓶消消毒毒程程序序：70%70%酒酒精精擦擦拭拭血血培培养养橡橡皮皮塞塞，作作用用60s60s；用用无无菌菌棉棉签签清清除除橡橡皮皮塞塞表表面面残残余余酒酒精精。用用注注射射器器采采血血后后立立即即在在床床旁旁接接种种培培养养瓶瓶，并并迅迅速速轻轻摇，充分混匀防止凝固，但又不可剧震以防溶血。摇，充分混匀防止凝固，但又不可剧震以防溶血。 5 5、采采血血的的合合适适套套数数：细细菌菌和和真真菌菌均均一一过过性性存存在在于于血血液液中中，所所以以单单次次血血培培养养检检测测的的敏敏感感性性是是有有限限，为为了了保保证证对对菌菌血血症症的的检检出出率

6、率：每每次次血血培培养养在在不不同同部部位位同同时时或或短短时时间间（1515分分钟钟）采采集集两两套套：成成人人每每套套血血培培养养采采两两瓶瓶：需需氧氧瓶瓶+ +厌厌氧氧瓶瓶。儿儿童童每每套套1 1瓶瓶：需需氧氧瓶瓶（绝绝大大多多数数情情况况）。当当儿儿童童体体重重13KG13KG时时需需采采集集需需氧氧瓶瓶和和厌厌氧氧瓶瓶。成成人人采采血血量量20ml20ml，首首先先注注入入厌厌氧氧瓶瓶. .然然后后再再注注入入需氧瓶。采血量少时要注入需氧瓶。需氧瓶。采血量少时要注入需氧瓶。 6 6、厌厌氧氧菌菌血血症症培培养养高高危危人人群群：腹腹腔腔感感染染、妇妇产产科科疾疾病病、外外科科手手术术

7、、创创伤伤、烧烧伤伤、肿肿瘤瘤、免免疫疫抑抑制制、吸吸入入性性肺肺炎炎、糖糖尿尿病病、心心血血管管病病、慢慢性性口口或或鼻鼻窦窦感感染染、腹腹部部症症状状、咬咬伤伤、破破伤伤风风、蜂蜂窝窝组组织织炎炎（尤尤其其是是肛肛周周及及骶骶周周）脓脓毒毒性性静静脉脉炎炎、等等。( (为为什什么么使使用用厌厌氧氧瓶瓶？它它不不仅仅培培养养厌厌氧氧菌菌，还还能能提提高高兼兼性性厌厌氧氧菌菌的的检检出出率率。临临床床常常见见菌菌血血症症：厌厌氧氧菌菌平平均均约约占占菌菌血血症症4%4%，而而检检出出更更多多的的是是兼兼性性厌厌氧氧菌菌。16%16%链链球球菌菌、17%17%肠肠杆杆菌菌仅仅厌厌氧瓶报阳氧瓶报阳

8、) )。全自动细菌测定系统全自动细菌测定系统 7 7、送送检检标标本本：血血液液、各各种种无无菌菌体体液液（脑脑脊脊液液、骨骨髓髓、胆胆汁汁、胸胸水水、腹腹水水、心包穿刺液等等。）心包穿刺液等等。）注意注意事项事项 a a. .怀怀疑疑菌菌血血症症应应尽尽早早采采血血，体体温温上上升升（38.538.5）采采血可提高阳性率，但也要防止因等待而延误时机血可提高阳性率，但也要防止因等待而延误时机。 b b. .对对已已经经使使用用抗抗菌菌药药物物，而而又又不不能能停停药药者者，也也应应在在下次用药前采血下次用药前采血。 c. .切切忌忌不不要要在在静静滴滴抗抗菌菌药药物物的的静静脉脉处处采采取取血

9、血标标本本，也也不能从静脉导管及动脉插管中取血不能从静脉导管及动脉插管中取血。 d d. .血液注入血培养基前，更换针头反而易导致污染血液注入血培养基前，更换针头反而易导致污染。 e e. .每每例例至至少少采采血血两两次次，间间隔隔0.5-1h0.5-1h，以以利利于于提提高阳性率和区分感染菌与污染菌高阳性率和区分感染菌与污染菌。 f f. .采血，周围静脉为宜采血，周围静脉为宜。 g g. .严严格格执执行行三三步步消消毒毒后后采采血血。注注入入血血液液时时不不能能将注射器内的空气加入血瓶内。绝对不能超出将注射器内的空气加入血瓶内。绝对不能超出10 ml10 ml。二、二、呼吸道呼吸道标本

10、标本培养培养 人人体体的的上上呼呼吸吸道道有有常常居居菌菌群群，下下呼呼吸吸道道是是无无菌菌，但但下下呼呼吸吸道道分分泌泌物物经经上上呼呼吸吸道道排排出出时时通通常常受受到到正正常常菌菌群群的的污污染染，故故要要正正确确采采集集标标本本，并并结结合合临临床床表表现现是是否否有该细菌引起的感染。有该细菌引起的感染。1 1、呼吸道呼吸道标本（痰）中常见的分离细菌标本（痰）中常见的分离细菌革革兰兰氏氏阳阳性性菌菌 革革兰兰氏阴性菌氏阴性菌链链球球菌菌（草草绿绿、肺肺炎炎、化化脓脓性性链链球球菌菌） 肺肺炎炎克克雷雷伯伯及及其其它它克克雷雷伯伯菌菌葡萄球菌（表皮葡萄球菌（表皮. .金黄色等其它葡萄球菌

11、金黄色等其它葡萄球菌） 大肠大肠埃希菌及其它肠杆菌、埃希菌及其它肠杆菌、微微球球菌菌、肠肠球球菌菌 沙沙雷雷菌菌、变形杆菌。不动杆菌变形杆菌。不动杆菌结结核核分分枝枝杆杆菌菌、酵酵母母样样真真菌菌。等等等等。 铜铜绿绿假假单单胞胞菌菌及及其其它它假假单胞单胞菌菌2 2、痰痰：自然咳痰法：自然咳痰法: : 清清晨晨起起床床后后用用凉凉开开水水漱漱口口多多次次，以以除除去去口口腔腔内内大大量量杂杂菌菌，用用力力咳咳出出呼呼吸吸道道深深部部的的脓脓痰痰，直直接接吐吐入入干干净净、清清洁洁、干干燥燥、不不渗渗漏漏、不不吸吸水水的的广广口口带带盖的容器中，标本量要盖的容器中，标本量要1ml1ml。标本要

12、尽快送检。标本要尽快送检。 咳咳嗽嗽无无力力或或昏昏迷迷，可可用用吸吸痰痰管管经经鼻鼻腔腔或或口口腔腔经经气管腔内吸痰及支气管灌洗液送气管腔内吸痰及支气管灌洗液送检检。 4 4、痰痰量量极极少少者者可可用用4545 3%-10%3%-10%的的氯氯化化钠钠溶溶液液约约25ml25ml雾雾化化。对对于于咯咯痰痰量量少少的的幼幼儿儿, ,可可轻轻轻轻压压迫迫胸胸骨骨上上部部的的气气管管，当当其其咯咯痰痰后后用用无无菌菌棉棉拭拭子子采采集集标标本本。或或用用弯弯压压舌舌板板向向后后压压舌舌，将将拭拭子子伸伸入入咽咽部部，小小儿儿经经压压舌舌刺刺激激咳咳咳咳嗽嗽时时，可可喷喷出出肺肺部部或或气气管管分

13、分泌物粘在拭子上送检。泌物粘在拭子上送检。 5 5、咽咽拭拭子子、口口腔腔拭拭子子：（无无菌菌拭拭子子）患患者者清清水水漱漱口口后后，有有检检查查者者将将其其舌舌外外拉拉，用用棉棉拭拭子子将将咽咽后后壁壁或或悬悬雍雍垂垂的的后后侧侧反反复复檫檫拭拭数数次次; ;化化脓脓性性扁扁桃桃体体炎炎、口口腔腔念念珠珠菌菌时时直直接用棉拭子在病灶部位檫拭。接用棉拭子在病灶部位檫拭。注意事项注意事项 尽尽可可能能在在使使用用抗抗菌菌素素之之前前采采集集标标本本，痰痰标标本本的的采采集集以以晨晨痰痰为为佳佳，采采样样后后应应立立即即送送检检以以免免污污染染。忌忌送送唾唾液液。采采咽咽拭拭子子时时，棉棉拭拭子子

14、应应避避免免触触及及舌舌、口口腔腔黏黏膜膜和和唾唾液液。采采集集标标本本前前数数小小时时不不可可用用消消毒毒药药物物漱漱口口或或接触病灶。接触病灶。泌尿道标本培养泌尿道标本培养尿路感染通常有患者自身的常居菌上行至膀胱所致。尿路感染通常有患者自身的常居菌上行至膀胱所致。1 1. .尿中常见分离菌尿中常见分离菌革兰氏阳性菌革兰氏阳性菌 革兰氏阴性菌革兰氏阴性菌金黄色金黄色葡萄球菌葡萄球菌 大肠大肠埃希菌埃希菌血浆血浆凝固酶阴性葡萄球菌凝固酶阴性葡萄球菌 克雷伯菌属克雷伯菌属肠肠球菌球菌 变形变形杆菌属杆菌属A A群链球菌群链球菌 淋病淋病奈瑟奈瑟菌菌结核结核分枝杆菌分枝杆菌 肠肠杆菌属杆菌属念珠念

15、珠菌菌 假单胞菌属假单胞菌属 沙雷菌属沙雷菌属 动杆菌属动杆菌属 3 3、中段尿中段尿 （1 1）采集）采集方法方法 女女性性 采采样样前前用用肥肥皂皂水水或或0.1%0.1%的的高高锰锰酸酸钾钾溶溶液液冲冲洗洗外外阴阴，用用手手指指将将阴阴唇唇分分开开排排尿尿，弃弃其其前前段段尿尿，不不终终止止排尿，留取中段尿排尿，留取中段尿2-3ml2-3ml于无菌管内于无菌管内。 男男性性用用肥肥皂皂水水清清洗洗尿尿道道口口，或或0.1%0.1%的的碘碘伏伏溶溶液液消消毒毒尿尿道道口口，上上翻翻包包皮皮，灭灭菌菌纱纱布布擦擦干干，弃弃其其前前段段尿尿，不不终止排尿，留取中段尿终止排尿，留取中段尿2-3m

16、l2-3ml于无菌管内于无菌管内。 采集标本以晨起第一次尿液为采集标本以晨起第一次尿液为佳佳 留留置置导导尿尿者者采采集集法法拔拔去去闭闭式式引引流流的的集集尿尿袋袋，弃弃去去导导尿尿管管前前段段尿尿液液，留留无无污污染染的的膀膀胱胱内内尿尿液液2-3ml2-3ml送检。不可从集尿袋下端留取标本。送检。不可从集尿袋下端留取标本。 2 2、泌泌尿尿系系统统临临床床诊诊断断为为：患患者者出出现现尿尿频频、尿尿急急、尿尿痛痛等等尿尿路路刺刺激激症症状状，或或有有下下腹腹触触痛痛、肾肾区区叩叩痛痛、伴伴或或不不伴伴发发热热，并并具具有有下下列列情情况况之一之一： a a、尿尿检检白白细细胞胞男男性性5

17、5个个/ /高高倍倍视视野野，女女性性1010个个/ /高高倍视野。倍视野。 b、有有典型的尿路感染典型的尿路感染症状症状 c c、有有肉眼可见脓尿或肉眼可见脓尿或血尿血尿 d d、尿分析白细胞和或亚硝酸盐、尿分析白细胞和或亚硝酸盐阳性阳性 e e、不明原因的发热而无其他局部、不明原因的发热而无其他局部症状症状 f f、留置导尿管的病人出现、留置导尿管的病人出现发热发热 g g、膀胱排空功能、膀胱排空功能受损受损 h h、泌尿系统疾病手术前、泌尿系统疾病手术前注意事项注意事项 a a. .若若细细菌菌培培养养结结果果为为两两种种或或两两种种以以上上细细菌菌，需需考考虑虑污污染染可可能能，建建议

18、议重重新新留留取取标标本本送检送检。 b b. .尿尿液液中中不不得得加加入入防防腐腐剂剂，消消毒毒剂剂否否则影响阳性检出率。则影响阳性检出率。脓液及病灶分泌物脓液及病灶分泌物 微微生生物物（细细菌菌）存存在在于于周周围围环环境境中中，也也存存在在于于皮皮肤肤、粘粘膜膜表表面面，它它们们通通过过破破坏坏的的皮皮肤肤或或粘粘膜膜进进入入通通常常无无菌菌的的组组织织引引起起感感染染，在在一一个个或或多多个个解解剖剖部部位位形形成成小小脓脓庖庖或或包包裹裹性性脓脓肿肿。细细菌菌和和真真菌菌（条条件件致致病病菌菌或或致致病病菌菌）都都可可导导致致炎炎性性渗渗出出，渗渗出出物物由由白白细细胞胞、侵侵入入

19、病病原原体体( (细细菌菌) )、体液及纤维蛋白混合组成，即：脓液。体液及纤维蛋白混合组成，即：脓液。 1 1、伤口、伤口： 表面伤口拭子采集表面伤口拭子采集方法方法 皮皮肤肤与与皮皮下下组组织织，包包括括手手术术切切口口、褥褥疮疮溃溃疡疡、新新生生儿儿脐炎、婴儿脓疮病脐炎、婴儿脓疮病。 用无菌生理盐水或用无菌生理盐水或75%75%的酒精擦去病灶表面渗液的酒精擦去病灶表面渗液； 用无菌棉拭子抹去及较深部的脓液分泌物或组织送检用无菌棉拭子抹去及较深部的脓液分泌物或组织送检； 采采集集褥褥疮疮溃溃疡疡标标本本时时应应采采集集褥褥疮疮边边缘缘的的脓脓性性分分泌泌物物，拭拭子子放放在在运运送送培培养养

20、基基中中立立即即送送检检。注注意意事事项项：不不要要采采集集创创口口表表面面的渗液。的渗液。 2 2. .伤伤口口、脓脓肿肿、窦窦道道、坏坏疽疽组组织织采采集集方方法法及及注注意意事事项项 闭闭锁锁性性脓脓肿肿用用碘碘酒酒和和酒酒精精消消毒毒皮皮肤肤后后，用用灭灭菌菌注注射射器穿刺抽取全部脓液送检器穿刺抽取全部脓液送检。 伤伤口口处处若若有有脓脓及及渗渗出出物物要要用用无无菌菌棉棉签签深深入入各各种种窦窦道道中中擦擦拭拭，用用小小刀刀刮刮取取，穿穿刺刺抽抽吸吸或或手手术术切切除除获获得得深深处处伤伤口口标本标本； 当当创创伤伤出出血血时时，敷敷有有药药物物在在2h2h以以内内及及烧烧伤伤在在1

21、2h12h内内均不应采集标本，此时获得阳性结果机会甚少。均不应采集标本，此时获得阳性结果机会甚少。 3. 3.烧伤创面烧伤创面 烧烧伤伤创创面面需需要要脓脓性性分分泌泌物物，焦焦痂痂迅迅速速分分离离变变棕棕黑黑、黑黑或或紫紫罗罗兰兰色色，烧烧伤伤边边缘缘水水肿肿。患患者者发发烧烧3838或或低体温低体温3636，合并低血压。，合并低血压。 用用无无菌菌生生理理盐盐水水冲冲洗洗伤伤口口创创面面。由由于于创创面面部部位位不不同同，细细菌菌种种类类也也不不尽尽相相同同，要要用用灭灭菌菌棉棉拭拭子子采采集集多个部位的炎症区送检。多个部位的炎症区送检。胃肠道标本培养胃肠道标本培养 正正常常人人的的肠肠道

22、道栖栖居居大大量量的的不不同同种种类类的的微微生生物物（细细菌菌），具具有有维维护护健健康康的的重重要要作作用用。疾疾病病时致腹泻。时致腹泻。 1 1、粪便培养检查的送检指征：、粪便培养检查的送检指征： a a、粪便涂片镜检白细胞、粪便涂片镜检白细胞5 5HP. HP. b b. .重症腹泻重症腹泻. . c c. .体温体温 38.5. d. 38.5. d.血便血便. . e e. .便中有脓液便中有脓液. . f f. .未经抗菌药物治疗的持续性腹泻患者未经抗菌药物治疗的持续性腹泻患者. . g g. .来自疫区的患者。来自疫区的患者。 2 2、粪粪便便采采集集:a.:a.选选取取脓脓血

23、血、黏黏液液粪粪便便2-3g2-3g，液液体体粪粪便便取取絮絮状状物物1-2ml1-2ml。盛盛于干净干燥盒中及时送检。于干净干燥盒中及时送检。 肛肛拭拭子子在在无无法法获获得得粪粪便便的的情情况况下下，可可用用经经无无菌菌甘甘油油水水或或无无菌菌生生理理盐盐水水湿湿润润的的肛肛拭拭子子插插入入肛肛门门4-5cm4-5cm（幼幼儿儿2-3cm2-3cm）处处，轻轻轻轻旋旋转转擦擦取取直直肠表面黏液后取出，置运送培养基中送检。肠表面黏液后取出，置运送培养基中送检。注意事项注意事项 标标本本要要采采集集新新鲜鲜的的，陈陈旧旧标标本本影影响响阳阳性检出率性检出率； 切忌粪尿混合切忌粪尿混合； 标本在

24、病理早期或治疗前采集标本在病理早期或治疗前采集； 一一般般认认为为用用抗抗菌菌药药三三天天后后，标标本本培培养病原菌阴性养病原菌阴性。 采采集集标标本本时时忌忌用用吸吸水水性性物物品品采采集集或或送检。（如棉签、或尿不湿、卫生纸、等。）送检。（如棉签、或尿不湿、卫生纸、等。）脑脊液脑脊液 1 1、采采集集方方法法：无无菌菌方方法法收收集集脑脑脊脊液液3-5ml3-5ml，置于无菌试管或注射器中立即送检。置于无菌试管或注射器中立即送检。 2 2、注意、注意事项事项 （1 1）采采集集标标本本后后立立即即送送检检，因因脑脑膜膜炎炎奈奈瑟瑟菌菌离离体体后后迅迅速速自自溶溶，肺肺炎炎链链球球菌菌及及流

25、流感感嗜嗜血血杆杆菌菌也也易易死亡死亡； （2 2）疑为上述细菌感染时，应注意保温。）疑为上述细菌感染时，应注意保温。穿刺液标本穿刺液标本 穿穿刺刺液液：包包括括胸胸水水、腹腹水水、心心包包液液、关节液、鞘膜液。关节液、鞘膜液。 1 1、采采集集方方法法：胸胸腹腹水水采采集集5-10ml,5-10ml,心心包包液液、关关节节液液收收集集2-5ml2-5ml，置置于于无无菌菌试试管管或注射器中，立即送检或注射器中，立即送检。 注意事项注意事项 标标本本采采集集应应在在患患者者用用药药之之前前或或停停止止用用药药1-1-2 2天后进行天后进行； 疑疑为为淋淋病病性性关关节节炎炎患患者者的的关关节节液液，采采集集后后立立即送检即送检。 不能用棉拭子浸蘸标本送检。不能用棉拭子浸蘸标本送检。 注注明明标标本本名名称称：如如、胸胸水水或或腹腹水水、关关节节液液等等等等。