《2019版高考生物一轮总复习 生物技术实践 专题1、2 传统发酵技术的应用、微生物的培养与应用课件 选修1 .ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《2019版高考生物一轮总复习 生物技术实践 专题1、2 传统发酵技术的应用、微生物的培养与应用课件 选修1 .ppt（65页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、选修1专题1、2 生物技术实践传统发酵技术的应用、微生物的培养与应用考纲内容能力要求命题分析实验：(1)运用发酵加工食品的基本方法(2)测定食品加工中可能产生的有害物质(3)微生物的分离和培养(4)某种微生物数量的测定(5)培养基对微生物的选择作用(6)利用微生物发酵来生产特定的产物以及微生物在其他方面的应用实验与探究能力实验与探究能力实验与探究能力实验与探究能力实验与探究能力实验与探究能力1.新课标卷以综合题形式考查了传统发酵技术( 泡菜的制作) 、微生物的分离、计数和筛选等。在本部分内容中，微生物的培养、分离及计数考查较多，属于高频考点，2017 考查了微生物的培养、分离及发酵的相关内容。
2、2.命题趋势：以生活实践为背景，以综合题形式考查发酵及微生物培养的相关知识。考纲导读项目果酒果醋腐乳泡菜微生物酵母菌醋酸菌毛霉乳酸菌制作原理在无氧的条件下，酵母菌将葡萄糖分解为酒精等物质在有氧的条件下，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸；缺少糖源时，醋酸菌可将乙醇( 酒精 )变为乙醛，再将乙醛变为醋酸毛霉等微生物产生的蛋白酶和脂肪酶将豆腐中的蛋白质和脂肪分解为小分子的物质在无氧条件下，乳酸菌将葡萄糖分解成乳酸气体条件_有氧_无氧温度1825 _1518 _一、传统发酵技术的应用无氧3035 有氧1.果酒、果醋、腐乳和泡菜的制作原理常温2.酒精的检测重铬酸钾灰绿(1)方法：可用_检测酒精。(2)原理
3、：在酸性条件下，重铬酸钾与酒精反应呈现_色。对氨基苯磺酸玫瑰红标准显色液3.亚硝酸盐含量测定的原理：在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与_发生重氮化反应后，与 N1萘基乙二胺盐酸盐结合，形成_色染料。将显色后的样品与_进行目测比较，可大致估算出泡菜中亚硝酸盐的含量。二、微生物的培养与应用1.培养基(1)培养基是人们按照微生物对营养物质的不同要求，配制出供其_的营养物质。生长繁殖(2)根据物理状态的不同分为半液体培养基、液体培养基和_培养基。固体选择(3)根据培养基的功能可分为基础培养基、_培养基和鉴别培养基。碳源氮源pH(4)每种培养基一般都含有水、_、_、无机盐。另外要满足微生物对_、特殊营养物质及
4、氧气的要求。2.无菌技术707515(1) 巴 氏 消 毒 法 在 _ 煮 30 min 或 者 在 80 煮_min ，可以杀死牛奶中的微生物，并且使牛奶的营养成分不被破坏。灼烧干热芽孢和孢子(2)接种环常用_灭菌；需要干燥且耐高温的物品可采用_灭菌，另外还可以用高压蒸汽灭菌。(3)灭菌和消毒最主要的区别是是否杀死_。3.微生物培养的基本技术接种环涂布器(1)配制培养基：计算称量溶化调 pH分装包扎。(2)灭菌：高压蒸汽灭菌锅加水将培养基放入锅内密封排冷气维持压力取出倒平板(或搁置斜面)。(3)接种平板划线法稀释涂布平板法接种过程：洗净双手点燃酒精灯接种贴标签。接种工具：包括_、_。接种方法
5、：_、_。(4)培养：接种后的培养皿放入恒温箱内培养。4.土壤中分解尿素细菌的分离与计数(1)种菌筛选尿素稀释涂布平板法培养基：选择培养基。显微镜直接计数法特点：_是唯一氮源。(2) 统计菌落数目的方法：_ 、_。(3)设置对照的主要目的：排除实验组中_对实验结果的影响。非测试因素5.分解纤维素的微生物的分离纤维素分解菌的筛选(1)实验原理透明圈纤维素酶的催化原理筛选纤维素分解菌的原理即可根据是否产生_来筛选纤维素分解菌。(2)过程土壤取样：选择富含纤维素的环境中的土壤。 选择培养：用选择培养基培养，以增加纤维素分解菌的数量。 梯度稀释 微生物倒平板挑选产生透明圈的菌落 葡萄糖判断正误1.在家
6、庭中用鲜葡萄制作果酒时，应向发酵罐中持续通入空气。()2. 腐乳的制作利用了毛霉等微生物产生的蛋白酶和脂肪酶。()3.用稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时，只要稀释度足够高，一般就能在培养基表面形成单个菌落。()答案：1.2.3.菌种酵母菌醋酸菌毛霉乳酸菌生物分类真核生物原核生物真核生物原核生物代谢类型异养兼性厌氧异养需氧异养需氧异养厌氧繁殖方式适宜条件下出芽生殖二分裂孢子生殖二分裂生产应用酿酒、发面酿醋制作腐乳制作泡菜、酸奶发酵条件前期需氧、后期不需氧一直需氧一直需氧一直无氧考点一微生物与发酵原理考点梳理1.与传统发酵有关的几种微生物的比较2.果酒、果醋、腐乳、泡菜的制作过程及注意事项(1)果酒、
7、果醋制作过程：挑选葡萄冲洗榨汁酒精发酵果酒；挑选葡萄冲洗榨汁酒精发酵醋酸发酵果醋。注意事项a.材料的选择与处理：选择新鲜的葡萄，榨汁前，先将葡萄洗干净再去除枝梗。b.防止发酵液被污染：榨汁机要清洗干净并晾干；发酵瓶要清洗干净，并用体积分数为 70%的酒精消毒，或用洗涤剂洗涤；装入葡萄汁后，封闭充气口。c.控制好发酵的条件：葡萄汁装入发酵瓶时，要留有 1/3 的空间，其目的是先让酵母菌进行有氧呼吸快速繁殖，增加菌种，耗尽氧气再进行酒精发酵；控制好温度：果酒制作时，温度控制在 1825 ，果醋制作时，温度严格控制在 3035 ；注意是否需要通气：果醋发酵时，需要适时通过充气口充气。(2)腐乳制作过
8、程：让豆腐上长出毛霉加盐腌制加卤汤装瓶密封腌制。注意事项a.控制好材料中盐、酒的用量：盐和酒精过少，不足以抑制微生物的生长；酒精含量过多，则会延长腐乳成熟的时间。b.防止杂菌污染：用来腌制腐乳的玻璃瓶要洗涮干净并用沸水消毒；装瓶时，操作要迅速小心，封瓶时，最好将瓶口通过酒精灯的火焰，防止瓶口被污染。c.注意发酵时的温度。(3)泡菜制作过程：选择原料修整、洗涤、晾晒、切分成条状或片状配制泡菜盐水把处理后的原料、盐水等其他调味料装入瓶中发酵成品。注意事项a.泡菜坛的选择：选用无裂纹、无砂眼、坛沿深、盖子吻合好的泡菜坛。b.材料的选择及用量：蔬菜应新鲜，若放置的时间过长，蔬菜中的硝酸盐易被还原成亚硝
9、酸盐；清水与盐的质量比是41，盐水要煮沸后冷却待用，煮沸盐水可达到杀菌和去除氧气的作用。c.氧气的控制：坛盖边沿的水槽中要注满水，发酵过程中，要及时补充蒸发掉的水分，以保证乳酸菌发酵的无氧环境。高考探究考向微生物与发酵原理典例 1(2017 年江苏卷)下列关于“腐乳的制作”实验的叙述，正确的是()A.控制发酵温度的主要目的是腐乳调味B.腐乳制作后期加入香辛料和料酒有防腐作用C.毛霉的主要作用是分解脂肪和淀粉D.成品腐乳表面的黏性物质主要由细菌产生解析温度通过影响酶的活性影响腐乳发酵，控制发酵的温度主要有利于毛霉等微生物的生长和腐乳发酵，A 错误；香辛料和料酒都能抑制微生物的生长，具有防腐作用，
10、B 正确；毛霉的主要作用是产生蛋白酶和脂肪酶，将蛋白质和脂肪分解成小分子化合物，C 错误；成品腐乳表面的黏性物质主要是毛霉产生的，毛霉属于真菌，D 错误。答案B考向预测1.(2017 年新课标卷)豆豉是大豆经过发酵制成的一种食品。为了研究影响豆豉发酵效果的因素，某小组将等量的甲、乙两菌种分别接入等量的 A、B 两桶煮熟大豆中并混匀，再将两者置于适宜条件下进行发酵，并在 32 h 内定期取样观测发酵效果。回答下列问题：(1)该实验的自变量是_、_。(2)如果发现发酵容器内上层大豆的发酵效果比底层的好，说明该发酵菌是_。(3)如果在实验后，发现 32 h 内的发酵效果越来越好，且随发酵时间呈直线上
11、升关系，则无法确定发酵的最佳时间；若要确定最佳发酵时间，还需要做的事情是_。(4)从大豆到豆豉，大豆中的成分会发生一定的变化，其中，蛋 白 质 转 变 为 _ ， 脂 肪 转 变 为_。解析：(1)该实验的自变量是菌种、发酵时间。(2)如果发现发酵容器内上层大豆的发酵效果比底层的好，说明该发酵菌是好氧菌。(3)如果在实验后，发现 32 h 内的发酵效果越来越好，且随发酵时间呈直线上升关系，则无法确定发酵的最佳时间；若要确定最佳发酵时间，还需要做的事情是延长发酵时间，观测发酵效果，最好的发酵效果所对应的时间即为最佳发酵时间。(4)从大豆到豆豉，大豆中的成分会发生一定的变化，其中，蛋白质转变为氨基
12、酸和多肽，脂肪转变为脂肪酸和甘油。答案：(1)菌种发酵时间(2)好氧菌(3)延长发酵时间，观测发酵效果，最好的发酵效果所对应的时间即为最佳发酵时间(4)氨基酸和多肽脂肪酸和甘油2.乙醇等“绿色能源”的开发备受世界关注，利用玉米秸秆生产燃料酒精的大致流程为：(1)玉米秸秆预处理后，应该选用_酶和_酶形成纤维二糖，再使用_酶使之转化为发酵所需的葡萄糖。(2)从以下哪些微生物中可以提取上述酶？_(多选)。A.酿制果醋的醋酸菌B.生长在腐木上的霉菌C.制作酸奶的乳酸菌D.反刍动物瘤胃中生存的某些微生物(3)若从土壤中分离产生这种酶的微生物，所需要的培养基为_(按功能分)，培养基中的碳源为_，微生物在纯
13、化培养时常用方法是_和_。(4)发酵阶段需要的菌种是_，生产酒精时要控制的必要条件是_。答案：(1)C1CX葡萄糖苷(2)BD(3)选择培养基纤维素平板划线法稀释涂布平板法(4)酵母菌无氧(密封或密闭)3.下图是泡菜的制作及测定亚硝酸盐含量的实验流程示意图，请据图分析，回答下列问题：(1)制作泡菜宜选用新鲜的蔬菜或其他原料，原因是_。(2)制备泡菜的盐水中，清水与盐的质量比为_，盐水煮沸的目的是为了杀灭杂菌，冷却后再使用的目的是为了保证_等微生物的生命活动不受影响。(3)泡菜的制作方法不当，很容易造成泡菜变质，甚至发霉变味，发霉主要与_有关。(4)测定亚硝酸盐含量的方法是_。(2)41乳酸菌答
14、案：(1)亚硝酸盐含量低(3)霉菌(4)比色法考点二微生物的实验室培养考点梳理1.微生物的营养物质及功能：微生物的营养物质主要有碳源、氮源、无机盐和水这四大类。此外还要满足不同微生物生长对 pH、特殊营养物质以及氧气的需求。营养物质定义作用主要来源碳源能提供所需碳元素的物质构成生物体的细胞物质和一些代谢产物，有些是异养生物的能源物质无机化合物(CO2、NaHCO3)，有机化合物(糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等)氮源能提供所需氮元素的物质合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物无机化合物(N2、NH3、铵盐、硝酸盐)，有机化合物 (尿素、牛肉膏、蛋白胨等)(1)微生物最常利用的碳源是糖类，尤其是葡萄糖
15、；最常利用的氮源是铵盐、硝酸盐。(2)对异养微生物来说，含 C、H、O、N 的化合物既是碳源又是氮源、能源。(3)有些培养基不需要添加特殊营养物质，生物自己能合成，如大肠杆菌能合成某些维生素作为特殊营养物质。划分标准培养基种类特点和用途化学成分天然培养基利用动、植物或微生物体(包括用其提取物)制成的培养基。优点是营养丰富、种类多样、配制方便、价格低廉，缺点是化学成分不清楚、不稳定。主要用于微生物学实验培养或发酵工业合成培养基按微生物的营养要求精确设计，用多种高纯化学试剂配制成的培养基。优点是成分及量确切可知，缺点是价格较贵、配制复杂，且微生物生长比较一般。主要用于微生物的分类和鉴定2.培养基的
16、种类划分标准培养基种类特点和用途化学成分半合成培养基主要以化学试剂配制，同时还加有某种或某些天然成分的培养基。特点是配制方便，成本低，微生物生长良好。主要用于工业生产物理状态液体培养基呈液体状态的培养基，用于微生物学实验和生产固体培养基呈固体状态的培养基，用于菌种分离、鉴定、菌落计数、检测杂菌、育种、菌种保藏等半固体培养基在液体培养基中加入少量凝固剂(如 0.2%0.5%的琼脂)而制成的半固体状态的培养基。可用于观察细菌的运动能力，进行厌氧菌的培养及菌种保藏等(续表)划分标准培养基种类特点和用途功能选择性培养基根据某微生物的特殊营养要求或其对某些物理、化学因素的抗性而设计的培养基，具有使混合菌
17、样中的劣势菌变成优势菌的功能。可用于菌种筛选鉴别培养基一类加有能与目的菌的无色代谢产物发生显色反应的指示剂，从而达到只需用肉眼辨别颜色就能方便地从近似菌落中找到目的菌菌落的培养基。可用于菌种鉴别、计数(续表)(1)加入培养基中的凝固剂(如琼脂)，一般不能被微生物利用，只起到凝固作用。(2)选择培养基一般只生长具有特定目的的微生物，鉴别培养基中可以存在其他微生物，而且能鉴别特定的微生物。项目概念常用方法应用的范围消毒使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物(不包括芽孢或孢子)煮沸消毒法：在100 煮沸56 min一般物品巴氏消毒法：7075 煮30 min或在80
18、 煮15 min一些不耐高温的液体，如牛奶化学药剂消毒法如用酒精擦拭双手，用氯气消毒水源等紫外线消毒法：30 W紫外灯照射30 min接种室3.消毒与灭菌项目概念常用方法应用的范围灭菌使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物(包括芽孢和孢子)灼烧灭菌，用酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧接种工具的灭菌干热灭菌：160170 下灭菌12 h玻璃器皿、金属工具的灭菌高压蒸汽灭菌：121 条件下，灭菌1530 min培养基及容器的灭菌(续表)注：消毒与灭菌最大的区别是芽孢和孢子是否存活。接种方法操作过程注意事项平板划线法接种环灭菌取菌液在培养液上划线培养皿倒置培养(1)接种环的灼烧：第一次灼烧：避免接种环
19、上可能存在的微生物污染培养物；每次划线之前的灼烧：杀死上次划线结束后残留在接种环上的菌种，使每次划线的菌种均来自上次划线末端；划线结束的灼烧：杀死接种环上残留的菌种，避免污染环境和感染操作人员(2)灼烧接种环之后，要冷却后才能伸入菌液，以免温度太高而杀死菌种(3)划线时最后一区域不要与第一区域相连(4)划线用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破4.常用的微生物接种方法(1)接种方法的比较接种方法操作过程注意事项稀释涂布平板法稀释菌液取菌液于培养基表面涂布器灭菌均匀涂布菌液培养皿倒置培养稀释操作：每支试管及其中 9 mL 水、移液管均需灭菌；操作时，试管口和移液管应在离酒精灯火焰 12 cm
20、处涂布器的灭菌：涂布器用体积分数为 70%的酒精消毒，取出时多余酒精在烧杯中滴尽，沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃后冷却；不要将过热的涂布器放在盛放酒精的烧杯中，以免引燃其中的酒精(续表)(2)倒平板的注意事项培养基灭菌后，需冷却至 50 左右，才能用来倒平板。整个操作过程需在酒精灯火焰旁进行，避免杂菌污染。平板冷凝后要倒置的原因：防止皿盖上的冷凝水珠落入培养基，造成污染。高考探究考向微生物的培养典例 2(2014 年四川卷)有机农药苯磺隆是一种除草剂，长期使用会污染环境。研究发现，苯磺隆能被土壤中某些微生物降解。分离降解苯磺隆的菌株和探索其降解机制的实验过程如下图甲、乙所示：甲乙(1) 微生
21、物生长繁殖所需的主要营养物质有碳源、水、_四类，该实验所用的选择培养基只能以苯磺隆作为唯一碳源，其原因是_。(2)与微生物培养基相比，植物组织培养的培养基常需添加生长素和_，这些植物激素一般需要事先单独配置成_保存备用。(3)纯化菌株时，通常使用的划线工具是_。划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌，第二划线区域的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误有_。(4)为探究苯磺隆的降解机制，将该菌种的培养液过滤离心，取上清液做图乙所示实验。该实验的假设是_ ，该实验设计是否合理？为什么？_。解析(1)微生物生长所需要的主要营养物质包括碳源、氮源、水和
22、无机盐。使用选择培养基是因为其允许特定的微生物生长，同时又能抑制或阻止其他微生物的生长。(2)植物组织培养常需要添加的植物激素有生长素和细胞分裂素。MS 培养基的成分一般先分别配制成母液备用。(3)平板划线法接种时通常用接种环划线。第二区域只有第一条线无菌落，而其他的划线都有菌落，很可能是因为接种环在灼烧后未冷却，第一次划线时将菌种烫死，而后接种环冷却，能正常划线，也可能是第一次划线时划线未从第一区域末端开始，使接种环上无菌种。(4)题中实验为取得菌种培养液过滤离心后取上清液，加入蛋白酶处理后，测得其对苯磺隆的降解率。由此可判定实验假设是目的菌株通过分泌某种蛋白质来降解苯磺隆。但由于缺乏空白对
23、照，不能比较蛋白酶的处理是否降低苯磺隆降解率，该实验不能得出相应结论。答案(1)氮源和无机盐确保只有能利用苯磺隆的微生物能正常生长和繁殖(2)细胞分裂素母液接种环灼烧后未冷却；划线未从第一区域(3)接种环末端开始不合理，缺少空(4)目的菌株能分泌降解苯磺隆的蛋白质白对照(1)每次划线前和划线后，接种环都要进行灼烧灭菌，因此需要灼烧接种环 6 次。其中第一次灼烧是为了防止杂菌污染；每次划线前灼烧是为了杀死残留菌种，保证每次划线菌种来自上次划线末端；最后一次灼烧是为了防止接种的微生物扩散，造成新的污染。(2)下一次划线的菌种来源是上一次划线的最末端，所以前几次划线都是上一次的尾和下一次的首相连的，
24、但是第五次划线不与第一次划线相连。(3)在第五次划线上的菌落往往是由一个细菌繁殖形成的。(4)实际上菌落数都要小于细菌数，因为有的菌落是两个或多个细菌形成的。成分蛋白胨乳糖蔗糖K2HPO4指示剂琼脂含量/g10.05.05.02.00.212.0将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到 1000 mL考向预测4.(2017 年江西赣中南五校联考)下表是某公司研发的一种培养大肠杆菌菌群的培养基配方，请根据表格和所学知识回答下列相关问题：(1)从生态系统的成分上看，大肠杆菌属于_。(2)若根据用途划分，该培养基属于_(填“选择”或“鉴别”)培养基。若要用上述培养基来筛选出土壤中的尿素分解菌，培养基的营养成
25、分必需怎样更改？_，并用_作为指示剂。(3)在微生物培养的过程中，为防止杂菌污染，需要对培养基和培养皿进行_；操作者的双手需要进行清洗和_。(4)图 1 和图 2 是培养某细菌的结果图，其对应的接种方法分别是_和_，这两种方法接种后培养基上都可以得到由单个细胞繁殖所形成的_。图 1 所用的接种方法可用来对活菌进行计数。此外，测定微生物数目的另一种方法是_。图 1图 2(5)以下过程中所利用的主要微生物的细胞结构与大肠杆菌较相似的有_。A.制作果酒C.制作泡菜B.由果酒制作果醋D.制作腐乳解析：(1)大肠杆菌只能从环境中摄取有机物，不能自己合成有机物，属于分解者。(2)该培养基中含有指示剂，属于
26、鉴别培养基。尿素分解菌可以分解尿素，而其他微生物不能，因此可将培养基中的蛋白胨改为尿素用于筛选土壤中的尿素分解菌，并用酚红作为指示剂，尿素分解菌分解尿素产生的 NH3 可使酚红变红。(3)培养微生物时，培养基和培养皿需要灭菌，操作者双手需要进行消毒。(4)图 1 采用的是稀释涂布平板法，图2 采用的是平板划线法。单个微生物细胞繁殖所形成的细胞群叫菌落。(5)A、B、C、D 中所用到的主要微生物分别是酵母菌、醋酸菌、乳酸菌、毛霉，醋酸菌、大肠杆菌和乳酸菌都是原核细胞，结构相似。答案：(1)分解者(2)鉴别 将蛋白胨改成尿素酚红(3)灭菌消毒(4)稀释涂布平板法平板划线法菌落显微镜直接计数法(或“
27、血球计数板计数法”) (5)BC5.无菌操作是微生物接种技术的关键。传统发酵技术和微生物分离、纯化、应用过程及植物组织培养和动物细胞培养过程中，均要无菌操作。回答下列相关问题：(1)消毒和灭菌是两个不同的概念，灭菌是指彻底杀灭微生物使其永远丧失生长繁殖的能力。消毒指仅杀死一部分对人体有害的病原菌而对被消毒的物体基本无害。下列哪些事物适用于消毒处理？_。皮肤饮用水牛奶注射器培养皿接种环培养基果汁酱油手术刀A.C.B.D.以上全部(2)配制培养基时各种成分在溶化后分装前必须进行_，接种前要进行_，在整个微生物的分离和培养中，一定注意要在无菌条件下进行。(3)在微生物的实验室培养中，获得纯净培养物的
28、关键是_。上图是利用_法进行大肠杆菌接种，把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。为达到这一目的，操作上应注意：每次划线前要_。冷却后从上一区划线末端开始划。首尾区_。(4)培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对固体培养基应采用的检测方法是_，观察培养基上是否有菌落产生。(5)利用培养基不仅可以分离培养大肠杆菌，也可以进行植物组织培养。与大肠杆菌培养明显不同的是，用于组织培养的培养基中还需要加入_。(6)有位同学在家制作泡菜时，为避免杂菌污染而向泡菜坛中加入了青霉素，结果发酵失败，原因可能是_。解析：(1)应采用消毒，应采用灭菌，故选 A。(2)配制培养基时各种成分在溶化后分装前
29、必须调整pH，培养基接种前要进行高压蒸汽灭菌，再进行倒平板。(3)微生物实验室培养的关键在于防止杂菌污染，采用平板划线法接种，需要注意的是连续划线时，每次划线前要灼烧接种环，同时划线结束首尾区不能相连。(4)检测培养基是否被污染，对固体培养基应采用的检测方法是将未接种(或接种等量无菌水)的培养基在适宜的温度下放置适当时间，观察培养基上是否有菌落产生。(5)植物组织培养的 MS 培养基中需要加入植物激素(生长素和细胞分裂素)。(6)制作泡菜时，为避免杂菌污染而向泡菜坛中加入了青霉素，结果发酵失败，原因可能是青霉素杀死了乳酸菌。答案：(1)A (2)调整 pH 高压蒸汽灭菌(3)防止外来杂菌的入侵
30、平板划线灼烧接种环不连接(不重叠)(4)将未接种(或接种等量无菌水)的培养基在适宜的温度下放置适当时间(5)植物激素(或生长素和细胞分裂素)(6)青霉素杀死了乳酸菌项目分离分解尿素的细菌分离分解纤维素的微生物原理提供有利于目的菌株生长的条件(如营养、温度、pH 等)，同时抑制其他微生物的生长，常用选择培养基筛选刚果红可以与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后，红色复合物无法形成，出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌考点三微生物的分离与计数考点梳理1.分离土壤中分解尿素的细菌与分离分解纤维素的微生物的比较项目分离分解尿素的细菌分离分解纤维素的微生物
31、过程土壤取样样品稀释培养与观察土壤取样选择培养梯度稀释将样品涂布于含刚果红(CR) 的鉴别纤维素分解菌的培养基上挑选产生透明圈的菌落发酵培养鉴定酚红指示剂(变红)刚果红(产生透明圈)选择培养基固体培养基，尿素为唯一氮源液体培养基，纤维素为唯一碳源鉴别培养基液体固体(续表)2.统计菌落数目的方法(1)稀释涂布平板法原理：当样品的稀释浓度足够高时，培养基表面生长的一个菌落来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。操作a.设置重复组，增强实验的说服力与准确性。b.为了保证结果准确，一般选择菌落数在 30300 的平板进行计数。计算公式：每克样品中的菌株数
32、(C/V)M，其中 C 代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V 代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M 代表稀释倍数。(2)显微镜直接计数法：原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量。方法：用计数板计数。缺点：不能区分死菌与活菌。高考探究考向微生物的分离与纯化典例 3(2016 年新课标卷)某同学用新鲜的泡菜滤液为实验材料纯化乳酸菌。分离纯化所用固体培养基中因含有碳酸钙而不透明，乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙。回答下列问题：(1)分离纯化乳酸菌时，首先需要用_对泡菜滤液进行梯度稀释，进行梯度稀释的理由是_。(2)推测在分离纯化所用的培
33、养基中加入碳酸钙的作用有_和_。分离纯化时应挑选出_的菌落作为候选菌。(3)乳酸菌在20长期保存时，菌液中常需要加入一定量的_(填“蒸馏水”“甘油”或“碳酸钙”)。解析(1)分离纯化乳酸菌时，首先需要用无菌水对泡菜滤液进行梯度稀释；进行梯度稀释的理由是在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的乳酸菌将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。(2)在分离纯化所用的培养基中加入碳酸钙的作用有中和乳酸菌代谢过程中产生的乳酸和利于乳酸菌的识别和分离；分离纯化时应挑选出在平板上有透明圈的菌落作为候选菌。(3)乳酸菌在20长期保存时，菌液中常需要加入一定量的甘油。泡菜滤液中菌的浓度高，直接培养很难答
34、案(1)无菌水分离到单个菌落(2)中和乳酸菌代谢过程中产生的乳酸利于乳酸菌的识别和分离具有透明圈(3)甘油考向预测6.(2014 年新课标卷)植物秸秆中的纤维素可被某些微生物分解。回答下列问题：(1)分解秸秆中纤维素的微生物能分泌纤维素酶，该酶是由3 种组分组成的复合酶，其中的葡萄糖苷酶可将_分解成_。(2)在含纤维素的培养基中加入刚果红(CR)时，CR 可与纤维素形成_色复合物。用含有 CR 的该种培养基培养纤维素分解菌时，培养基上会出现以该菌的菌落为中心的_。培养基 酵母膏 无机盐淀粉纤维素粉 琼脂 CR 溶液水甲乙(3)为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落，某同学设计了甲、
35、乙两种培养基(成分见下表)：注：“”表示有，“”表示无。据表判断，培养基甲_(填“能”或“不能”)用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是_；培养基乙_(填“能”或“不能”)用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是_。解析：(1)纤维素是一种以葡萄糖为单体形成的高分子化合物。纤维素能被土壤中某些微生物分泌的纤维素酶分解，如下图：(2)刚果红与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后，红色复合物无法形成，出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，我们可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。(3)纤维素分解菌选择培养基属于液体培养基，纤维素分解菌鉴别培养基属于固体培养基， 要分离和鉴别纤维素分解菌， 需要以纤维素为唯一碳源的培养基， 培养基乙不具有选择的作用。答案：(1)纤维二糖葡萄糖(2)红透明圈(3)不能纤维素分解菌选择培养基属于液体培养基，不能用于分离单菌落不能培养基中没有纤维素粉
