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1、丹参素钠的有关物质检查的实验研究Stillwatersrundeep.流静水深流静水深,人静心深人静心深Wherethereislife,thereishope。有生命必有希望。有生命必有希望一一.实验目的实验目的通过通过HPLCHPLC研究丹参素钠中可能混有的杂质,研究研究丹参素钠中可能混有的杂质,研究丹参素钠的固有性质,贮藏条件,考察影响原料丹参素钠的固有性质,贮藏条件,考察影响原料药和制剂质量的贮藏条件,为贮藏、处方和加工药和制剂质量的贮藏条件,为贮藏、处方和加工工艺提供资料。工艺提供资料。 二二.实验仪器与试剂实验仪器与试剂本实验采用本实验采用HPLCHPLC法测定法测定色谱柱:色谱柱
2、:DiamonsilTM C18 DiamonsilTM C18 规格:规格:5m,4.6200mm 5m,4.6200mm 流动相:甲醇流动相:甲醇- -水(含水(含1%1%乙酸)缓冲溶液(乙酸)缓冲溶液(5:955:95)流速:流速:1.0ml/min 检测波长:检测波长:280nm 供试品:丹参素钠原料溶于流动相的溶剂供试品:丹参素钠原料溶于流动相的溶剂三三.实验思路实验思路3.1 3.1 利用利用HPLCHPLC测验检测丹参素钠中可能混有的结构类似物质。测验检测丹参素钠中可能混有的结构类似物质。3.2 3.2 考察影响丹参素钠原料药和制剂成分的影响因素,为考察影响丹参素钠原料药和制剂成
3、分的影响因素,为贮藏提供信息。贮藏提供信息。3.3 3.3 在杂质可以分离提取的情况下,分离出杂质并且在杂质可以分离提取的情况下,分离出杂质并且对其进行分析,确定杂质成分。(还未完成)对其进行分析,确定杂质成分。(还未完成)四四.实验过程实验过程4.2 4.2 供试品的配制供试品的配制 精密量取本品丹参素钠精密量取本品丹参素钠14.14mg14.14mg,取流动相,取流动相5ml5ml溶解本品,稀释溶解本品,稀释1010倍作为供试品。倍作为供试品。 4.1 4.1 流动相的配制流动相的配制 取去离子水洗净的取去离子水洗净的500ml500ml棕色试剂瓶,精密量取甲棕色试剂瓶,精密量取甲醇醇20
4、ml20ml,再用,再用500ml500ml量筒取蒸馏水量筒取蒸馏水380ml380ml,用,用10ml10ml量筒取乙量筒取乙酸酸4ml4ml,混合摇匀后,放入超声仪,除气泡,混合摇匀后,放入超声仪,除气泡10min10min。 4.3 4.3 供试品处理供试品处理 用塑料样品管取少量供试品,分别进行光照、灯照、用塑料样品管取少量供试品,分别进行光照、灯照、3030加热、加热、5050加热、加热、7070加热、加热、9090加热等处理。加热等处理。4.4 HPLC4.4 HPLC试验试验 利用所选的色谱柱和流动相对未处理的供试品以及处利用所选的色谱柱和流动相对未处理的供试品以及处理后的供试品
5、进行洗脱,记录色谱图。理后的供试品进行洗脱,记录色谱图。4.5 4.5 色谱图分析处理色谱图分析处理 分组比较色谱图的主峰以及杂质峰,得出结论。分组比较色谱图的主峰以及杂质峰,得出结论。五五. .实验结论实验结论5.1 5.1 供试品供试品HPLCHPLC测试得出图谱测试得出图谱T=13.773T=13.773时,出现最大峰时,出现最大峰T=18.248T=18.248时,出现含量最高的杂质峰时,出现含量最高的杂质峰5.2 5.2 比较比较3030、50 50 、70 70 和和90 90 加热加热40min40min后后HPLCHPLC测试后得到的色谱图。测试后得到的色谱图。 30 30加热
6、加热40min 5040min 50加热加热40min40min 70 70加热加热40min 9040min 90加热加热40min40min 分析:分析:名称名称T1T1峰面积峰面积T2T2峰面积峰面积303015.97315.9732237589.1002237589.10021.96521.965 126810.102126810.102505015.88215.8822284040.0002284040.00021.80721.807 128375.797128375.797707015.64815.6482154601.5002154601.50021.53221.532 1331
7、12.000133112.000909015.76515.7652372821.2502372821.25021.66521.665 164736.953164736.953结论:随着温度升高,主杂质结论:随着温度升高,主杂质A A含量升高。丹参素钠本品含量升高。丹参素钠本品应该在低温处保存。应该在低温处保存。 5.3 5.3 比较比较9090加热加热3.53.5小时、小时、4.54.5小时和小时和5 5小时的色谱图,小时的色谱图,以及冷却以及冷却2 2天后继续加热的色谱图。天后继续加热的色谱图。 90 90加热加热3.53.5小时小时 90 90加热加热4.54.5小时小时 9090加热加热
8、5 5小时小时 名称名称T1峰面峰面积T2峰面峰面积T3峰面峰面积3.53.5小小时 13.640 2619930.25018.273 123294.29721.507 13120.0004.54.5小小时 14.323 3154075.50019.190 146609.12521.927 89245.7195 5小小时14.315 2291581.75019.240 102740.70323.007 120617.898分析分析9090加热加热5 5小时冷却后小时冷却后9090继续加热继续加热1 1小时小时 90 90加热加热2 2小时小时结论:高温加热时间长出现新的杂质结论:高温加热时间长
9、出现新的杂质B B(T3T3峰),且随着峰),且随着加热时间的增加杂质的含量增加,冷却后此杂质减少甚加热时间的增加杂质的含量增加,冷却后此杂质减少甚至消失,再次加热后又会产生,可能为丹参素钠热分解至消失,再次加热后又会产生,可能为丹参素钠热分解产生。产生。名称名称T1T1峰面积峰面积T2T2峰面积峰面积9090加热后冷却加热后冷却 13.23213.232 9812465.0009812465.000 17.66517.665 176151.297176151.297继续加热继续加热1 1小时小时12.89812.898 9280839.0009280839.000 17.13217.132
10、501651.844501651.844继续加热继续加热2 2小时小时13.03213.032 8673404.0008673404.000 17.39817.398 519512.688519512.688分析分析5.4 5.4 比较供试品光照和灯照后的色谱图比较供试品光照和灯照后的色谱图日照日照7 7小时小时灯照灯照2424小时小时灯照灯照4545小时小时分析分析名称名称T1T1峰面积峰面积T2T2峰面积峰面积日照日照7 7小时小时13.76513.7652267644.0002267644.000 18.19818.1986531.0006531.000灯照灯照2424小时小时13.79
11、813.7982234676.2502234676.250 18.30718.30715239.20015239.200灯照灯照4545小时小时13.77313.7732053741.7502053741.750 18.24818.24821620.19921620.199结论:供试品中杂质结论:供试品中杂质A含量随光照时间增加而增加。含量随光照时间增加而增加。5.5 5.5 实验结论实验结论 丹参素钠原料药在高温时会出现新的杂质,丹参素钠原料药在高温时会出现新的杂质,杂质杂质B B含量随温度升高而升高,充分冷却后新含量随温度升高而升高,充分冷却后新出现的杂质出现的杂质B B会消失。原料药中的
12、主杂质会消失。原料药中的主杂质A A含量含量会随温度升高而升高。丹参素钠中主要成分会会随温度升高而升高。丹参素钠中主要成分会随光照时间增长而降低。由以上可知丹参素钠随光照时间增长而降低。由以上可知丹参素钠原料药应置于低温避光处保存。原料药应置于低温避光处保存。六六. .实验中问题讨论实验中问题讨论6.1 6.1 流动相的酸度对保留时间的影响流动相的酸度对保留时间的影响6.2 6.2 对于高温下出现的对于高温下出现的B B杂质的研究杂质的研究6.3 6.3 实验中不足实验中不足6.1 6.1 流动相酸度对保留时间的影响流动相酸度对保留时间的影响实验的流动相定的乙酸含量是实验的流动相定的乙酸含量是
13、1%1%,保留时间是,保留时间是13.5min13.5min左右,但是仍有小峰难以分离出来,而有一次实验中,左右,但是仍有小峰难以分离出来,而有一次实验中,配制流动相时我们错误地少加了乙酸,此时的保留时配制流动相时我们错误地少加了乙酸,此时的保留时间是间是16min16min左右,分离效果更佳,因此接下来的实验可左右,分离效果更佳,因此接下来的实验可以采用低酸度来增加保留时间提高分离效果。以采用低酸度来增加保留时间提高分离效果。6.2 6.2 关于关于B B杂质杂质1.1.高温加热后高温加热后B B杂质的含量增加,此时,供试品溶液杂质的含量增加,此时,供试品溶液放置后颜色发生变化,出现淡粉红色
14、,可能为放置后颜色发生变化,出现淡粉红色,可能为B B物质物质溶解后带的颜色。溶解后带的颜色。2.2.高温后出现大量高温后出现大量B B杂质并且丹参素钠主峰的峰面积杂质并且丹参素钠主峰的峰面积减少,而冷却后减少,而冷却后B B杂质峰减小主峰增大,因此,杂质峰减小主峰增大,因此,B B杂质杂质可能是丹参素钠热分解产生。可能是丹参素钠热分解产生。6.3 6.3 实验中不足实验中不足1.1.流动相是每次实验前配制,去离子水以及乙酸的量不流动相是每次实验前配制,去离子水以及乙酸的量不精确,可能会对供试品的洗脱造成一定的影响。精确,可能会对供试品的洗脱造成一定的影响。2.2.加热处理时是在塑料样品管中进行,是否有杂质在加加热处理时是在塑料样品管中进行,是否有杂质在加热中进入无法确定。热中进入无法确定。3.3.光照处理时,日照与灯照的时间不同,以此对照出的光照处理时,日照与灯照的时间不同,以此对照出的结果可信度不高。结果可信度不高。七七. .实验展望实验展望丹参素钠中的杂质到底是什么?丹参素钠中的杂质到底是什么?丹参酚酸丹参酚酸B B?丹参酮丹参酮IIAIIA?咖啡酸?咖啡酸?