外植体无菌接种PPT课件

《外植体无菌接种PPT课件》由会员分享，可在线阅读，更多相关《外植体无菌接种PPT课件（65页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。

1、 第三章第三章 外植体无菌接种外植体无菌接种 一般来说，无论何种类型的细胞工程技一般来说，无论何种类型的细胞工程技术，起始阶段均涉及外植体取材、灭菌、接术，起始阶段均涉及外植体取材、灭菌、接种与培养等基本过程。种与培养等基本过程。一、植物材料的培养与取材一、植物材料的培养与取材 外植体外植体是指用于离体培养的活的植物是指用于离体培养的活的植物组织、器官等材料，是植物离体培养的基础组织、器官等材料，是植物离体培养的基础材料。材料。 1 1、外植体的来源、外植体的来源 - -生长在自然环境下的植物生长在自然环境下的植物 - -有目的地培育在温室控制条件下生长的植物有目的地培育在温室控制条件下生长的

2、植物 - -无菌环境下已经过离体培养的植物无菌环境下已经过离体培养的植物 自自然然环环境境中中生生长长的的植植株株，一一般般带带有有微微生生物物，甚甚至至与与某某些些微微生生物物具具有有寄寄生生关关系系，使使植植株株具具有有内内生生菌菌。取取自自这这些些植植物物的的外外植植体体，在在培培养养过过程程中中会会有有微微生生物物滋滋生，从而影响培养效果。生，从而影响培养效果。 自自然然环环境境生生长长植植株株温室控制条件下生长植株温室控制条件下生长植株已离体培养植株已离体培养植株 多数情况下，应尽量使用温室或人工气多数情况下，应尽量使用温室或人工气候室控制培养的植物材料作为外植体来源，候室控制培养的

3、植物材料作为外植体来源，减少培养过程中的微生物感染概率。同时，减少培养过程中的微生物感染概率。同时，生长在控制条件下的植物可以保持培养料间生长在控制条件下的植物可以保持培养料间的一致性，提高实验的可重复性，也便于培的一致性，提高实验的可重复性，也便于培养技术的规范。养技术的规范。 某些多年生植物或特殊材料，必须取自某些多年生植物或特殊材料，必须取自自然生长的植物，就需要尽可能避免使用那自然生长的植物，就需要尽可能避免使用那些生长过于些生长过于潮湿和不洁净环境潮湿和不洁净环境中的植物。对中的植物。对于培养过程中可能出现内生菌污染的材料，于培养过程中可能出现内生菌污染的材料，应尽量取生长旺盛期的生

4、长点部位作为起始应尽量取生长旺盛期的生长点部位作为起始培养的材料。培养的材料。 2 2、供体植株的管理、供体植株的管理 取取自自室室外外的的外外植植体体材材料料，供供体体植植株株的的管管理理十十分分重重要要，这这与与外外植植体体培培养养时时的的污污染染率率密密切相关。植株管理中应注意：切相关。植株管理中应注意：避避免免昆昆虫虫危危害害 许许多多昆昆虫虫如如蚜蚜虫虫、螨螨类类和和飞飞虱虱是是许许多多植植物物病病虫虫害害的的传传播播媒媒介介，会会引引起植物组织的潜在感染。起植物组织的潜在感染。注意防病注意防病 尤其是真菌和细菌病害的侵染，尤其是真菌和细菌病害的侵染，取自感病植株的外植体，在培养中的

5、污染率取自感病植株的外植体，在培养中的污染率远远高于来自健康植株的外植体，必要时需远远高于来自健康植株的外植体，必要时需使用化学药剂防治病害。使用化学药剂防治病害。控制湿度控制湿度 给供体植株浇水时应从根部给给供体植株浇水时应从根部给水，避免从上部浇水，以免上部形成易于病水，避免从上部浇水，以免上部形成易于病原侵染的湿度环境；尽可能降低温室湿度；原侵染的湿度环境；尽可能降低温室湿度；取材前尽可能保持植株干爽。取材前尽可能保持植株干爽。1 1、材料取材、材料取材 材料选择材料选择 培培养养材材料料应应选选择择有有代代表表性性的的主主要要植植物物、选选择择性性状状优优良良的的种种质质或或特特殊殊的

6、的基基因因型。型。 快快速速繁繁殖殖时时应应在在植植株株生生长长的的最最适适时时期期取取材材，花花药药培培养养应应在在花花粉粉发发育育到到单单核核期取材。期取材。cmcm之之间间。胚胚胎胎培培养养或或脱脱毒毒在在0.50.5cmcm以以下下。材材料太大易污染，材料太小难于成活。料太大易污染，材料太小难于成活。 采收采收 从从生生长长健健壮壮的的无无病病虫虫害害的的植植株株上上选选取取发发育育正正常常的的器器官官和和组组织织。最最好好采采用用茎茎尖尖，后后代代性状较稳定，携带细菌较少性状较稳定，携带细菌较少。 二、预处理与表面灭菌二、预处理与表面灭菌 1 1、预处理、预处理 先对植物材料进行修剪

7、整理，去掉不需先对植物材料进行修剪整理，去掉不需要部分，将准备使用的植物材料（外植体）要部分，将准备使用的植物材料（外植体）在在流水中冲洗流水中冲洗20-6020-60分钟分钟，备用。如特别不洁，备用。如特别不洁的外植体，可先用加有洗涤剂的水清洗的外植体，可先用加有洗涤剂的水清洗10-1510-15分钟，再用流水冲洗干净。分钟，再用流水冲洗干净。 2 2、表面灭菌、表面灭菌（1 1）操操作作人人员员穿穿戴戴灭灭菌菌过过的的工工作作服服、口口罩罩。进进入入接接种种室室前前双双手手用用洗洗涤涤剂剂清清洗洗干干净净，操作前再用操作前再用70%70%酒精或消毒剂擦洗双手。酒精或消毒剂擦洗双手。（2 2

8、）操操作作期期间间双双手手和和台台面面常常用用70%70%酒酒精精或或消消毒毒剂剂擦擦拭拭。超超净净工工作作台台使使用用前前必必须须用用紫紫外灯照射杀菌，然后开启风机。外灯照射杀菌，然后开启风机。 （3 3）接种用工具（解剖刀、剪刀、镊子）接种用工具（解剖刀、剪刀、镊子）可放入可放入70-75%70-75%酒精中，使用时需火焰灼烧灭酒精中，使用时需火焰灼烧灭菌，冷却后使用。菌，冷却后使用。 （4 4）外植体放入超净工作台内，置）外植体放入超净工作台内，置70-70-75%75%酒精中酒精中5-60 5-60 秒，秒，0.10.1氯化汞氯化汞6-106-10分钟，或分钟，或10%10%的漂白粉上

9、清液中的漂白粉上清液中10-1510-15分钟，然后用无分钟，然后用无菌水冲洗菌水冲洗3-53-5次。灭菌时需进行搅动。次。灭菌时需进行搅动。 表面灭菌剂种类较多，可选取表面灭菌剂种类较多，可选取1-21-2种使用。种使用。 常用灭菌剂使用浓度及效果比较表常用灭菌剂使用浓度及效果比较表灭菌剂灭菌剂 使用浓度使用浓度 持续时间持续时间 去除的难易去除的难易 效果效果次氯酸钙次氯酸钙 9-10 9-10 5-30 5-30分钟分钟 易易 很好很好次氯酸钠次氯酸钠 2 2 5-30 5-30分钟分钟 易易 很好很好氯化汞氯化汞 0.1-1 0.1-1 5-10 5-10分钟分钟 较难较难 最好最好抗

10、菌素抗菌素 4-50 4-50mgmgL 30-60L 30-60分钟分钟 中中 较好较好酒精酒精 70-75% 0.2-2 70-75% 0.2-2分钟分钟 易易 好好过氧化氢过氧化氢 10-12% 5-15 10-12% 5-15分钟分钟 最易最易 好好三、外植体的接种三、外植体的接种无菌接种无菌接种 外植体的接种是把经过表面灭菌后的外植体的接种是把经过表面灭菌后的植物材料切碎或分离出器官、组织、细胞、植物材料切碎或分离出器官、组织、细胞、转放到无菌培养基上的全部操作过程。整转放到无菌培养基上的全部操作过程。整个过程均需无菌操作。个过程均需无菌操作。（1 1）借助接种用工具将材料切割分离。

11、）借助接种用工具将材料切割分离。（2 2）将将培培养养基基放放入入超超净净工工作作台台内内，火火焰焰灼灼烧烧培培养养基基瓶瓶口口，然然后后打打开开培培养养瓶瓶口口，置置培培养养瓶瓶为为斜斜角角，避免灰尘落入平中。避免灰尘落入平中。（3 3）迅迅速速将将切切割割分分离离下下的的所所需需组组织织、细细胞胞、器器官，放入培养基上，及时盖上瓶盖。官，放入培养基上，及时盖上瓶盖。（4 4）工具用后应及时灭菌，避免交叉污染。）工具用后应及时灭菌，避免交叉污染。（5 5）工作人员操作时禁止不必要的谈话。）工作人员操作时禁止不必要的谈话。 接种接种时在近火焰在近火焰处打开瓶口，打开瓶口，使瓶使瓶倾斜，以免空气

12、中微生物斜，以免空气中微生物落入瓶中落入瓶中正 确 错 误整个接种操作应在近火焰处进行，整个接种操作应在近火焰处进行，且动作要迅速且动作要迅速正 确 错 误 接种接种过程中尽可能达到程中尽可能达到悬空要求空要求防止操作带来的污染正 确 错 误接种时不得用手接触瓶盖内壁或瓶口正 确 错 误瓶盖朝上放，接种完毕后立即盖好瓶口正 确 错 误接种完一瓶用火烧用具以防止接种完一瓶用火烧用具以防止交叉污染产生交叉污染产生种子和分生种子和分生种子和分生种子和分生组织组织：培养：培养：培养：培养时时通常将其通常将其通常将其通常将其贴贴放在培养基表放在培养基表放在培养基表放在培养基表面，而不是插到培养基内部，以

13、免供氧不足面，而不是插到培养基内部，以免供氧不足面，而不是插到培养基内部，以免供氧不足面，而不是插到培养基内部，以免供氧不足正 确 错 误接种茎段：注意形接种茎段：注意形接种茎段：注意形接种茎段：注意形态态学下端插入培养基内，而形学下端插入培养基内，而形学下端插入培养基内，而形学下端插入培养基内，而形态态学上端露于空气中学上端露于空气中学上端露于空气中学上端露于空气中正 确 错 误第五节第五节 外植体的培养外植体的培养 接接种种只只是是完完成成了了离离体体培培养养的的第第一一步步，植植物物离离体体培培养养和和栽栽培培植植物物一一样样，生生长长过过程程中中也也受受到到各各种种环环境境因因素素的的

14、影影响响。培培养养条条件件是是离离体体培培养养能能否否成成功功的的关关键键。在在培培养养基基条条件件适适宜宜的的基基础础上上，影影响响试试管管苗生长的主要因素有光照、温度、湿度、氧气。苗生长的主要因素有光照、温度、湿度、氧气。一、外植体的培养条件一、外植体的培养条件1 1、光照、光照 光光照照对对植植物物生生长长发发育育有有重重要要作作用用，是是离离体体培培养养中中非非常常重重要要的的环环境境因因素素。光光照照强强度度、光光质质以以及及光光照照时时间间，对对细细胞胞的的增增殖殖、器器官官的的分分化化都都有有很很大大影影响响。除除特特殊殊要要求求外外，一一般般都都采采用用日日光光灯灯作作光光源源

15、，光光照照强强度度1000-50001000-5000LxLx，根根据据不不同同植植物物或或器器官官需需要要，可可以以每每天天连连续续光光照照12-1612-16小小时时，也也可可每每天天光光照照1616小小时时，8 8小时黑暗。小时黑暗。2 2、温度、温度 离离体体培培养养中中对对温温度度的的控控制制比比光光照照更更为为重重要要，大大所所数数植植物物最最适适温温度度在在23-3223-32之之间间。培培养养室室温温度度是是252252。低低于于1515时时，培培养养的的组组织织生生长长停停顿顿，高高于于3535对对生生长长也也不不利利。因因此此，培培养养室室应应安安装装空空调机或其他的控温设

16、备。调机或其他的控温设备。3 3、湿度、湿度 培养瓶内相对湿度通常是培养瓶内相对湿度通常是100%100%，而环境中的，而环境中的相对湿度会直接影响培养基的水分蒸发。因此，相对湿度会直接影响培养基的水分蒸发。因此，培养过程中，培养室一般要求相对湿度保持在培养过程中，培养室一般要求相对湿度保持在70-80%70-80%，相对湿度过低影响培养物生长和分化，相对湿度过低影响培养物生长和分化，应向室内喷洒水，以提高湿度；过高杂菌滋生，应向室内喷洒水，以提高湿度；过高杂菌滋生，大量污染，应及时地通风除湿。大量污染，应及时地通风除湿。4 4、氧气、氧气 离离体体培培养养的的试试管管苗苗是是需需要要氧氧气气

17、的的，在在固固体体培培养养或或液液体体静静置置培培养养时时，如如果果组组织织完完全全浸浸入入培培养养基基中中，与与氧氧气气隔隔绝绝，就就会会停停止止生生长长。因因此此，接接种种时时要要有有部部分分组组织织合合空空气气接接触触。振振荡荡培培养养是是解解决决通通气气的的良良好好办办法法。固固体体培培养养中中，如如瓶瓶塞塞不不透透气气，培培养养物物也也不不能能生生长长，要要选选择择通通气气性性好好的的培培养养瓶瓶盖盖，增增加加可可利利用用的的氧氧气气，迅迅速速除除去去释释放放出出来来的的COCO2 2，有有利利于外植体外层细胞开始分裂。于外植体外层细胞开始分裂。组织培养步骤图组织培养步骤图（1 1）

18、准备阶段）准备阶段 查阅相关文献，根据已成功培养的相近植物资料，结合查阅相关文献，根据已成功培养的相近植物资料，结合实际制定出切实可行的培养方案。实际制定出切实可行的培养方案。 根据实验方案配制适当的化学消毒剂以及不同培养阶段根据实验方案配制适当的化学消毒剂以及不同培养阶段所需的培养基，并经高压灭菌或过滤除菌后备用。所需的培养基，并经高压灭菌或过滤除菌后备用。（2 2）外植体的选择与消毒）外植体的选择与消毒 选择合适的部位作为外植体，采回后经过处理，然后进选择合适的部位作为外植体，采回后经过处理，然后进行消毒处理。行消毒处理。 将消毒后的外植体在无菌条件下切割成一定大小的小块，将消毒后的外植体

19、在无菌条件下切割成一定大小的小块，或剥离出茎尖、挑出花药，接种到启动培养基上。或剥离出茎尖、挑出花药，接种到启动培养基上。（3 3）启动培养）启动培养 接种后的材料置于培养室或光照培养箱中培养，促使接种后的材料置于培养室或光照培养箱中培养，促使外植体中已分化的细胞脱分化形成愈伤组织，或顶芽、腋外植体中已分化的细胞脱分化形成愈伤组织，或顶芽、腋芽直接萌发形成芽。芽直接萌发形成芽。 将愈伤组织转移到分化培养基分化成不同的器官原基将愈伤组织转移到分化培养基分化成不同的器官原基或形成胚状体，最后发育形成再生植株。或形成胚状体，最后发育形成再生植株。（4 4）增殖培养）增殖培养 分化形成的芽、原球茎数量

20、有限，采用适当的增殖培分化形成的芽、原球茎数量有限，采用适当的增殖培养基经反复多次切割转接。养基经反复多次切割转接。 当芽苗繁殖到一定数量后，再将一部分用于壮苗生根，当芽苗繁殖到一定数量后，再将一部分用于壮苗生根，另一部分保存或继续扩繁。进行脱毒苗培养的还要进行病另一部分保存或继续扩繁。进行脱毒苗培养的还要进行病毒检测。毒检测。 （5 5）生根培养）生根培养 刚形成的芽苗往往比较弱小，多数无根，此时可降刚形成的芽苗往往比较弱小，多数无根，此时可降低或不加细胞分裂素浓度，提高生长素浓度，促进芽苗低或不加细胞分裂素浓度，提高生长素浓度，促进芽苗生根，提高其健壮度。生根，提高其健壮度。（6 6）炼苗

21、移栽）炼苗移栽 选择生长健壮，有选择生长健壮，有3 35 5条根的生根苗进行炼苗，移条根的生根苗进行炼苗，移栽到疏松透气的基质中，注意保温、保湿、遮荫。当苗栽到疏松透气的基质中，注意保温、保湿、遮荫。当苗完全成活后，再移向大田。完全成活后，再移向大田。拟定培养方案拟定培养方案外植体预处理外植体预处理外植体无菌接外植体无菌接种种启动培养启动培养分化出芽、胚分化出芽、胚状体或原球茎状体或原球茎继代增殖培养继代增殖培养生根培养生根培养炼苗移栽炼苗移栽成活供生产使成活供生产使用用植物组织培养的一般程序植物组织培养的一般程序 培养基配制灭菌培养基配制灭菌二、外植体的成苗途径（第三章后讲）二、外植体的成苗

22、途径（第三章后讲）外植体的成苗途径有三种：外植体的成苗途径有三种：（一）外植体（一）外植体- -愈伤组织愈伤组织- -完整植株。完整植株。 具体又可分为三种：具体又可分为三种： 1 1、愈伤组织、愈伤组织- -同时长芽和根同时长芽和根- -植株。植株。2 2、愈伤组织、愈伤组织- -茎茎- -根根- -植株。植株。3 3、愈伤组织、愈伤组织- -根根- -芽芽- -植株。植株。（二二）外外植植体体- -胚胚状状体体- -植植株株。可可从从以以下下几几种种培培养养物物中产生：中产生：1 1、器官上发生。、器官上发生。2 2、愈伤组织上发生。、愈伤组织上发生。3 3、游离单细胞发生。、游离单细胞发

23、生。4 4、小孢子发生。、小孢子发生。 诱导胚状体比诱导芽数量多、速度快、结构完整。诱导胚状体比诱导芽数量多、速度快、结构完整。 （三）外植体（三）外植体- -直接形成根与芽直接形成根与芽- -植株。如茎尖培养植株。如茎尖培养 三、培养中常见问题三、培养中常见问题（一）（一）污染污染的原因及其预防措施的原因及其预防措施1 1、污染原因、污染原因 污染是指在组织培养过程中培养基和污染是指在组织培养过程中培养基和培养材料滋生杂菌，导致培养失败的现象。培养材料滋生杂菌，导致培养失败的现象。 病原菌：细菌及真菌两大类。病原菌：细菌及真菌两大类。细菌污染特点细菌污染特点- -菌斑呈黏液状，接种后菌斑呈黏

24、液状，接种后1-21-2天发现。天发现。污染途径：污染途径： 外植体带菌外植体带菌 培养基及器皿灭菌不彻底培养基及器皿灭菌不彻底 操作人员未遵守操作规程操作人员未遵守操作规程 真菌污染的特点真菌污染的特点- -污染部分长有不同污染部分长有不同颜色的霉菌，接种后颜色的霉菌，接种后3-103-10天发现。天发现。 污染途径：污染途径： 周围环境不清洁周围环境不清洁 超净工作台过滤装置失效超净工作台过滤装置失效 培养瓶的口径过大培养瓶的口径过大2 2、污染的预防措施、污染的预防措施防止材料带菌的措施防止材料带菌的措施- -茎尖作外植体时，进行预培养（无糖）或茎尖作外植体时，进行预培养（无糖）或暗培养

25、。无糖营养液或自来水使枝条抽枝，暗培养。无糖营养液或自来水使枝条抽枝，以新抽嫩枝作外植体。以新抽嫩枝作外植体。- -晴天取材，下午取材，经日晒过可杀死部晴天取材，下午取材，经日晒过可杀死部分细菌或真菌。分细菌或真菌。- -接种时除去外部韧皮组织，只接内部的分接种时除去外部韧皮组织，只接内部的分生组织。生组织。 （2 2）外植体的灭菌）外植体的灭菌 - -多次灭菌法，次氯酸钠多次灭菌法，次氯酸钠- -无菌水无菌水- -次氯酸次氯酸钠钠- -多种药液交替浸泡法，肥皂水多种药液交替浸泡法，肥皂水- -酒精酒精- -次次氯酸钠氯酸钠- -无菌水。无菌水。器皿与金属器械的灭菌器皿与金属器械的灭菌 玻璃器

26、皿可采用湿热灭菌或干热灭菌玻璃器皿可采用湿热灭菌或干热灭菌 金属器皿一般火焰灭菌，也可干热灭菌金属器皿一般火焰灭菌，也可干热灭菌布质制品的灭菌布质制品的灭菌 湿热灭菌湿热灭菌无菌操作室的灭菌无菌操作室的灭菌 2%2%新捷尔灭或新捷尔灭或70%70%酒精擦拭（喷雾），紫酒精擦拭（喷雾），紫外灯照射，定期甲醛和高锰酸钾熏蒸。外灯照射，定期甲醛和高锰酸钾熏蒸。严格按照操作程序。严格按照操作程序。（二）外植体的（二）外植体的褐变褐变及其防止措施。及其防止措施。1 1、褐变的原因、褐变的原因 褐变是指外植体在培养过程中体内的多褐变是指外植体在培养过程中体内的多酚氧化酶被激活，使细胞内的酚类物质氧化酚氧化

27、酶被激活，使细胞内的酚类物质氧化成棕褐色的醌类物质，这种致死的褐变物向成棕褐色的醌类物质，这种致死的褐变物向外扩散致使培养基逐渐变成褐色，抑制其它外扩散致使培养基逐渐变成褐色，抑制其它酶的活性，影响外植体的分化，最后变褐死酶的活性，影响外植体的分化，最后变褐死亡的现象。亡的现象。 基因型基因型 某些植物酚类物质含量较多。某些植物酚类物质含量较多。外植体的生理状态外植体的生理状态 幼年的材料培养含醌类物幼年的材料培养含醌类物质较少。质较少。培养基的成分培养基的成分- -过高的无机盐浓度过高的无机盐浓度- -生长调节物质使用不当，生长调节物质使用不当，BABA过多过多- -分生能力强的材料，氧化受

28、抑制，褐变也被抑制分生能力强的材料，氧化受抑制，褐变也被抑制- -培养条件不适宜，温度过高或光照过强，褐变加培养条件不适宜，温度过高或光照过强，褐变加速。速。材料转移时间材料转移时间 时间过长引起材料褐变。时间过长引起材料褐变。2 2、褐变的防止措施、褐变的防止措施选择适宜的外植体及最佳培养基。选择适宜的外植体及最佳培养基。连续转移。连续转移。加抗氧化物。加抗氧化物。加活性炭。加活性炭。0.1-0.5%0.1-0.5%活性炭活性炭 （三）（三）玻璃化玻璃化现象及其预防措施现象及其预防措施1 1、玻璃化现象及其产生原因、玻璃化现象及其产生原因玻璃化是在细胞生长过程中的环境产生变玻璃化是在细胞生长

29、过程中的环境产生变化，试管苗为了适应变化了的环境而呈玻化，试管苗为了适应变化了的环境而呈玻璃状。主要原因是：璃状。主要原因是：激素浓度激素浓度 BABA浓度提高，导致玻璃化苗浓度提高，导致玻璃化苗的产生。的产生。琼脂浓度琼脂浓度 琼脂浓度低，玻璃化苗增加。琼脂浓度低，玻璃化苗增加。温度温度 低温易形成玻璃化苗。低温易形成玻璃化苗。光照时间光照时间 一般要求一般要求10-12h10-12h，大于，大于15h15h玻璃苗增加。玻璃苗增加。通风条件通风条件 培养瓶容量小，气体交换培养瓶容量小，气体交换不良，玻璃化苗多。不良，玻璃化苗多。离子水平离子水平 植物种类不同，离子形态植物种类不同，离子形态比

30、例量要求不同。比例量要求不同。2 2、预防措施、预防措施控制无机营养成分，降低氮（铵态氮）和氯。控制无机营养成分，降低氮（铵态氮）和氯。提高蔗糖和琼脂浓度提高蔗糖和琼脂浓度降低细胞分裂素和赤霉素浓度，增加生长素比例。降低细胞分裂素和赤霉素浓度，增加生长素比例。增加自然光照增加自然光照1000-1800lx1000-1800lx，控制光照时间，控制光照时间8-12h8-12h。适温生长，热击处理防止玻璃化发生。适温生长，热击处理防止玻璃化发生。使用透气性好的封口膜。使用透气性好的封口膜。培养基中加入间苯三酚、根皮苷或多效唑、矮壮培养基中加入间苯三酚、根皮苷或多效唑、矮壮素。素。 第五节第五节 试

31、管苗的驯化移栽（后讲）试管苗的驯化移栽（后讲）一、试管苗的特点一、试管苗的特点1 1、试管苗的生态环境、试管苗的生态环境 组织培养出来的苗通称试管苗或组培苗。组织培养出来的苗通称试管苗或组培苗。 试管苗长期生活在密闭容器中，形成其试管苗长期生活在密闭容器中，形成其独特生态系统，与外界环境相比，有四大差独特生态系统，与外界环境相比，有四大差异异高恒温高恒温 试管苗整个生长过程中采用的是恒温培试管苗整个生长过程中采用的是恒温培养，温差很小。并且温度一般控制在养，温差很小。并且温度一般控制在2525+ +22甚至更高。甚至更高。 外界环境条件温度不断变化，其调节由外界环境条件温度不断变化，其调节由太

32、阳辐射决定，温差很大，而且一般不会达太阳辐射决定，温差很大，而且一般不会达到到2525+ +22。 高湿高湿试管瓶内水分移动途径有两条：试管瓶内水分移动途径有两条： 试管苗水分从气孔蒸腾试管苗水分从气孔蒸腾 培养基向外蒸发，凝结后又进入培培养基向外蒸发，凝结后又进入培养基养基 水分移动循环造成瓶内相对湿度接水分移动循环造成瓶内相对湿度接近近100%100%，远远大于瓶外空气湿度，故试管，远远大于瓶外空气湿度，故试管苗蒸腾小。苗蒸腾小。弱光弱光 试管瓶内光照一般比太阳光弱，幼试管瓶内光照一般比太阳光弱，幼苗生长也较弱，不能受太阳光直接照射。苗生长也较弱，不能受太阳光直接照射。无菌无菌 试管苗所在

33、环境无菌，与外界有菌试管苗所在环境无菌，与外界有菌环境不同，试管苗也无菌，同时，培养环境不同，试管苗也无菌，同时，培养瓶内气体环境较为特殊，与外界环境有瓶内气体环境较为特殊，与外界环境有很大差异。很大差异。 2 2、试管苗特点、试管苗特点试管苗生长细弱、茎叶表面角质层不发达试管苗生长细弱、茎叶表面角质层不发达叶绿体的光合作用较差叶绿体的光合作用较差叶片气孔数目少，活性差叶片气孔数目少，活性差根的吸收功能差根的吸收功能差对逆境的适应性和抵抗能力较差对逆境的适应性和抵抗能力较差二、试管苗的驯化二、试管苗的驯化1 1、驯化的目的、驯化的目的 提高试管苗对外界环境条件的适应性，提高试管苗对外界环境条件

34、的适应性，提高光合能力，使试管苗健壮，提高试管苗提高光合能力，使试管苗健壮，提高试管苗移栽成活率。移栽成活率。2 2、驯化原则、驯化原则 调节温湿光和无菌等环境要素，开始调节温湿光和无菌等环境要素，开始和培养条件相似，后期与预计栽培条件相似。和培养条件相似，后期与预计栽培条件相似。3 3、驯化方法、驯化方法 将长有完整试管苗的培养瓶由培养室将长有完整试管苗的培养瓶由培养室转到半遮荫的自然光下锻炼，并打开瓶盖转到半遮荫的自然光下锻炼，并打开瓶盖注入少量自来水使幼苗逐渐降低温度，转注入少量自来水使幼苗逐渐降低温度，转向有菌，一般进行向有菌，一般进行1-21-2周。周。 三、试管苗的移栽三、试管苗的

35、移栽1 1、常规移栽法、常规移栽法 将已诱导出大量根的试管苗，驯化将已诱导出大量根的试管苗，驯化3-53-5天，移到无菌混合土中，当长出天，移到无菌混合土中，当长出2-32-3片新叶片新叶时，栽到田间或盆钵中。时，栽到田间或盆钵中。 2 2、直接移栽法、直接移栽法 直接将试管苗移栽到盆钵的方法。直接将试管苗移栽到盆钵的方法。3 3、嫁接移栽法、嫁接移栽法 用试管苗做接穗嫁接在同一植物的实生苗上。用试管苗做接穗嫁接在同一植物的实生苗上。 嫁接移栽优点：嫁接移栽优点：1 1、移栽成活率高。、移栽成活率高。2 2、适用范围广，嫁接移栽也适用于弱苗或污、适用范围广，嫁接移栽也适用于弱苗或污染苗。染苗。

36、3 3、需时间短，、需时间短，2020天成活，缓苗期天成活，缓苗期10-1510-15天。天。4 4、植株生长发育较快。、植株生长发育较快。四、提高试管苗移栽成活率的途径四、提高试管苗移栽成活率的途径1 1、壮苗移栽比弱苗移栽成活率高、壮苗移栽比弱苗移栽成活率高2 2、生长素（、生长素（NAANAA）利于生根）利于生根3 3、低无机盐浓度生根效果好、低无机盐浓度生根效果好4 4、活性炭利于嫩茎生根、活性炭利于嫩茎生根5 5、避免太阳直射，温度、避免太阳直射，温度25-3025-30，湿度在，湿度在85%85%以上以上6 6、使试管苗逐渐从无菌向有菌过渡、使试管苗逐渐从无菌向有菌过渡思考题：思考题：1 1、分别写出、分别写出MSMS、N6N6、WhiteWhite培养基特点。培养基特点。2 2、写出培养基高压灭菌操作程序。、写出培养基高压灭菌操作程序。3 3、简述植物离体培养的无菌操作程序。、简述植物离体培养的无菌操作程序。4 4、玻璃化现象的原因及其预防措施。、玻璃化现象的原因及其预防措施。5 5、试分析外植体培养中污染的防治措施。、试分析外植体培养中污染的防治措施。6 6、说明试管苗驯化原则、目的和方法。、说明试管苗驯化原则、目的和方法。7 7、简述提高试管苗移栽成活率途径。、简述提高试管苗移栽成活率途径。