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1、临床常用免疫学检查 免疫学检测分体液免疫检测和细胞免疫检测。血清免疫球蛋白检测血清补体细胞免疫检测肿瘤标记物检测自身抗体检测第一节 血清免疫球蛋白检测是指具有抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白,由浆细胞产生,存在于机体的血液、体液、外分泌液和某些细胞的表面，与相应抗原结合后发挥其生物学功能。IG根据其功能及理化性质分为IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。一般用免疫比浊法测定。、一.免疫球蛋白G（IgG）检测IgG为人体内含量最多的Ig，占Ig的70-80%，也是唯一透过胎盘的抗体。1.增高 多克隆升高 （Ig多项同时升高）：慢性感染、慢性肝病、肺结核、自身免疫病（RA、SLE等） 单克隆
2、升高：免疫增殖病如MM2.降低 先天或获得性体液免疫缺陷、重链病、轻链病、使用免疫抑制剂等二、免疫球蛋白A（IgA）检测IgA分血清型和分泌型，血清型占Ig的10-15%，分泌型在外分泌系统中具有重要的免疫功能，如呼吸道、消化道、泌尿生殖道的局部感染密切相关。增高：IgA型MM、SLE、RA、肝硬化、肾病等降低：IgA缺陷反复呼吸道感染、泌尿道感染等。三.免疫球蛋白M（IgM）检测IgM是五聚体，为分子量最大的Ig，称为巨球蛋白，占Ig的5-10%，凝集反应和强大的补体激活能力，在机体早期免疫防御中具有重要作用。增高：感染早期、RA、SLE等，巨球蛋白血症。降低：非IgG型重链病，其他类型的M
3、M，免疫缺陷、肾病综合症、使用免疫抑制剂等。四.免疫球蛋白E（IgE）检测IgE是血清中含量最低的一类Ig，属于亲细胞抗体，可与嗜碱性粒细胞、肥大细胞表面IgEFc受体结合，介导I型超敏反应；抗寄生虫免疫中介导ADCC作用，杀伤寄生虫。IgE增高见于：IgE型MM，各种过敏性疾病，寄生虫感染等；第四节 肿瘤标记物检测肿瘤标记物（Tumor marker)是在肿瘤发生和增殖过程中，由肿瘤细胞本身合成、释放或是由机体对肿瘤细胞反应而产生的一类物质。临床主要应用于肿瘤普查、诊断、疗效观察。主要包括蛋白质类、糖类、酶类、激素类等，不反映机体免疫功能状态，用免疫学的方法进行检测。一.甲种胎儿球蛋白甲甲种
4、种胎胎儿儿球球蛋蛋白白（AFPAFP）是是胎胎肝肝合合成成的的一一种种糖糖蛋蛋白白，出出生生后后AFPAFP的的合合成成很很快快受受到到抑抑制制。当当肝肝细细胞胞或或生生殖殖腺腺组组织织发发生生恶恶性性病病变变时时，癌癌细细胞胞出出现现返返祖祖现现象象，以以致致血血液液中中AFPAFP含含量量明明显显升升高高，对对原原发发性性肝肝癌癌的而言，是的而言，是特异性最强特异性最强的标记物。的标记物。参考值参考值 25g/L500g/L500g/L持持续续4 4周周，排排除除妊妊娠娠、生殖腺胚胎肿瘤即可确诊。生殖腺胚胎肿瘤即可确诊。慢慢性性活活动动性性肝肝炎炎和和肝肝硬硬化化病病例例有有30%30%的
5、的低低浓浓度度阳阳性性，多不超过多不超过200g/L200g/L。AFP异质体：临床上也出现良性肝病的AFP值明显升高400g/L，或原发性肝癌的AFP值偏低400g/L。根据血清AFP浓度不易区别良恶性肝病。采用扁豆血凝素LCA亲和双向放射免疫电泳检测，显示血清AFP可分为LCA结合型和LCA非结合型两种异质体，两者同时存在但各占总量的比值因病而异。LCA结合型AFP 25% 肝癌二.癌胚抗原癌胚抗原（CEA）由胎儿胃肠道上皮组织、胰和肝的细胞合成，妊娠6个月后渐减少，出生后含量极低，在部分恶性消化道肿瘤中异常升高。消化道肿瘤如胰腺癌、结肠癌和某些肺癌、乳腺癌等常明显升高。三.前列腺特异抗原
6、前前列列腺腺特特异异抗抗原原（PSAPSA）是是前前列列腺腺分分泌泌的的单单链链糖糖蛋蛋白白，存存在在于于前前列列腺腺管管道道的的上上皮皮细细胞胞中中，血血清清中中80%80%以以结结合合形形式式（C-PSAC-PSA）存存在在时时，20%20%以以游游离离形形式式存存在在（F-F-PSAPSA）。）。是是前前列列腺腺癌癌最最有有价价值值的的肿肿瘤瘤标标志志物物，已已被被广广泛泛应应用用于于前前列列腺腺癌癌的的筛筛选选、早早期期诊诊断断。60-90%60-90%前前列列腺腺癌癌患患者者血血清清PSAPSA升升高高，手手术术后后明明显显下下降降。前前列列腺腺良良性性增增生生、前前列腺炎可轻度升高
7、，一般列腺炎可轻度升高，一般20ug/L20ug/L。前前列列腺腺癌癌患患者者血血清清中中F-F-PSAPSA总总PSAPSA比比值值明明显显较较前前列列腺腺增增生生患患者者低低，当当PSAPSA值值为为4 420ng/ml20ng/ml时时，应应用用F-F-PSAPSA总总PSAPSA比比值值来来区区别别癌癌和和增增生生，F-PSAF-PSA和和PSAPSA联联合检测对诊断前列腺癌更有意义。合检测对诊断前列腺癌更有意义。四.糖链抗原19-9糖链抗原19-9（CA-199CA-199) 是一种糖蛋白，胚胎期分布于胎儿胰腺、肝胆、肠等，成人胰、胆等有少量存在。胰腺癌和消化道癌时升高，可辅助诊断这
8、类癌。尤其对胰腺癌有较高特异性和灵敏度。五.癌抗原125癌抗原125（CA125）是一种糖蛋白，存在于卵巢癌的上皮细胞内。当患有卵巢癌和子宫内膜癌时，患者血清CA125水平可明显升高。卵巢癌病人血清CA125水平可明显升高，尤其作为疗效观察和判断复发的标准。六、癌抗原15-3癌抗原15-3（CA15-3）是一种糖蛋白，在乳腺癌患者血清中可见升高。乳腺癌30-50%明显升高，常用于观察乳腺癌治疗疗效及判断有无转移。七.神经元特异性烯醇化酶神神经经元元特特异异性性烯烯醇醇化化酶酶（NSENSE）在在糖糖酵酵解解途途径径中中，烯烯醇醇化化酶酶催催化化甘甘油油分分解解。由由三三个个亚亚基基（、）组组成
9、成，并并形形成成5 5种种同同工工酶酶（ 、 、 、 、 ），亚亚基基同同工工酶酶存存在在于于神神经经元元和和神神经经内内分分泌泌组组织织，与与神神经经内内分分泌泌起起源源的肿瘤有关。的肿瘤有关。小细胞肺癌小细胞肺癌NSENSE水平明显升高水平明显升高神经母细胞瘤神经母细胞瘤NSENSE水平也明显升高水平也明显升高第五节 自身抗体检测正常情况下机体免疫系统不对自身组织、细胞产生免疫应答称为免疫耐受；某些因素可导致的免疫耐受破坏，机体免疫系统对自身抗原产生免疫应答，产生自身抗体。自身抗体检测主要用于诊断自身免疫性疾病（AID）。主要包括SLE、RA、干燥综合征、系统性硬化病、多发性皮肌炎和混合结
10、缔组织病等。一.类风湿因子类风湿因子（RF）是变性的IgG刺激机体产生的一种自身抗体，主要存在于类风湿性关节炎患者的血清和关节液内。类风湿性关节炎约70%阳性，其它自身免疫性疾病也有一定的阳性率，故特异性不高，但对诊断明确的RA，RF的滴度可判断其活动期。二、抗核抗体抗核抗体（ANAANA）是指血清中存在的能和自身组织细胞核不同成分发生反应的自身抗体总称。各种细胞核成分包括脱氧核糖核蛋白（DNP）、DNA、可提取的核抗原（ENA）和RNA等。自身抗体主要是IgG，也可IgM、IgA、IgD、 IgE，无器官、种属特异性，因此可以用鼠肝细胞核或Hep-2细胞核作抗原，用IFA进行检测。根据细胞核
11、的荧光图像可分为均质型、边缘型、颗粒型、核仁型ANA阳性：最多见于未治疗的SLE，阳性率达80-90%，活动期SLE几乎100%阳性，也可见于药物性狼疮、混合性结缔组织病、系统性硬化症、多发性肌炎等SLE常见边缘型、均质型颗粒型多见于混合结缔组织病核仁型多见于系统性硬化症边缘型均质型颗粒型核仁型三.抗DNA抗体抗ds-DNA：抗双链DNA抗体，见于活动期SLE病人，阳性率70-90%，阳性与SLE活动期及狼疮性肾炎发病机制有关。抗ss-DNA：抗单链DNA抗体，见于SLE，阳性率70-95%，尤其合并狼疮性肾炎患者。四.可提取核抗原多肽抗体谱可可提提取取核核抗抗原原（ENAENA）是是细细胞胞
12、核核蛋蛋白白的的提提取取物物，根根据据相相对对分分子子量量的的不不同同分分为为不不同同的的组组分分。如如SmSm、核核糖糖体体、Scl-70Scl-70、Jo-1Jo-1、SS-ASS-A、SS-BSS-B等等。自自身身免免疫疫性性疾疾病病时时机机体对它们产生不同的抗体。一般用体对它们产生不同的抗体。一般用IBTIBT检测。检测。抗抗SmSm抗抗体体：SLESLE标标记记抗抗体体。仅仅在在SLESLE可可检检出出此此种种抗抗体体，阳阳性性率率 20-30%20-30%，称称为为肾肾保保护护性性抗抗体体，阳阳性性时时肾肾损损发发生率低或肾损程度低，预后较好。生率低或肾损程度低，预后较好。 抗抗R
13、NPRNP抗体：抗体：抗核糖核蛋白抗体。抗核糖核蛋白抗体。MCTDMCTD阳性率最高。阳性率最高。抗抗SS-A/SS-A/抗抗SS-BSS-B：抗抗干干燥燥综综合合症症A A抗抗原原及及B B抗抗原原抗抗体体，在在SjSSjS检检出出率率最最高高6060% %左左右右，一一般般抗抗SSBSSB与与抗抗SSASSA同同时时存存在。在。抗抗JO-1JO-1抗抗体体：多多发发性性肌肌炎炎/ /皮皮肌肌炎炎(PM/DM)(PM/DM)标标记记抗抗体体，检出率检出率10-25%10-25%。抗抗Scl-70Scl-70抗抗体体：系系统统性性硬硬化化症症(PSS)(PSS)标标记记抗抗体体，检检出出率率3
14、0-40%30-40%。病毒性肝炎标志物检测病毒性肝炎(viral hepatitis)是由多种肝炎病毒引起的，以肝脏炎症和坏死病变为主的一组传染病。按照病原分类，目前已经确定的病毒性肝炎共有5型，即甲型(HAV)、乙型(HBV)、丙型(HCV)、丁型(HDV)、戊型(HEV)。近年来还发现庚型(HGV)和输血传播病毒(TTV)，但其致病性还有待进一步确定。7种病毒中，除HBV和TTV属于DNA病毒外，其余均属于RNA病毒。甲型和戊型肝炎是粪-口传播途径，传染源是食物和水，以急性感染为主，未见慢性患者和病毒携带者。乙型、丙型和丁型肝炎是垂直传播、血液传播和性传播途径，传染源是慢性患者和病毒携带
15、者，绝大多数属于慢性感染和亚临床感染。甲型肝炎病毒抗体测定IgM型抗体阳性是特异性的早期诊断指标，感染后约1-4周后出现，存在于起病后6个月之内。IgG型抗体出现于恢复期，可持久存在，是保护性抗体，即获得免疫力的标志，也是既往感染的标志。丙型肝炎病毒抗体测定IgG型抗体和IgM型抗体并非保护性抗体，阳性说明血液有传染性，抗病毒治疗后， IgG型抗体一般不会在短时间内转阴，不能作为早期诊断指标和疗效监测指标。IgM型抗体可作用于早期诊断，可反映病情的活动性。乙型肝炎标志物检测 HBV HBV基因组结构基因组结构pre-s1pre-s2SP PC Cpre-cXHBV DNA 3.2 kb乙乙 肝
16、肝pre-S1 pre-S1蛋白蛋白pre-S2 pre-S2蛋白蛋白S HBsAgpre-C HBeAgC HBcAgP DNAPX HBxAg编码编码HBsAgpre-S2pre-S1SP Ppre-s1出现时间：出现时间：HBV感染后感染后26个月个月持续时间：持续时间：急性自限性肝炎：急性自限性肝炎：6个月内可消失个月内可消失慢性肝炎或病毒携带者：可持续阳性慢性肝炎或病毒携带者：可持续阳性1. HBsAgHBsAg 有抗原性而无传染性有抗原性而无传染性HBVS 基因基因整合整合肝细胞肝细胞DNA持续表达持续表达“空心汤团空心汤团”HBsAg有无传染性要看有无传染性要看HBV-DNA是否
17、同时存在是否同时存在慢性乙肝患者慢性乙肝患者HBsAg的表达模式的表达模式2 2. . 抗抗- -HBsHBs出现时间：急性感染后期或出现时间：急性感染后期或HBsAg 消失后消失后抗抗-HBs为保护性抗体为保护性抗体其出现标志着其出现标志着HBV感染进入恢复期感染进入恢复期HBV CHBV C区基因区基因前前C区区C 区区前前C / / C 蛋白蛋白HBeAgHBcAg表表 达达分泌到细胞外分泌到细胞外HBeAg进入血液中进入血液中3. HBeAgHBeAg是病毒复制和传染性强的标志是病毒复制和传染性强的标志4. 抗抗-HBe出现时间：随着出现时间：随着HBeAg的消失而出现的消失而出现抗抗
18、-HBe的出现标志着病毒复制的出现标志着病毒复制减少减少、传染性、传染性降低。降低。抗抗- HBe（+）多见于多见于HbeAg转阴的病人，但转阴的病人，但非保护性非保护性抗体抗体，不能抑制，不能抑制HBV增殖。增殖。 5. HBcAg乙乙 肝肝HBcAg主要存在于主要存在于HBV感染的肝细胞内或感染的肝细胞内或Dane颗粒颗粒 核心中，进入血液中很快分解。核心中，进入血液中很快分解。一般血清学方法检测不到一般血清学方法检测不到HBcAg，而只能检测到抗而只能检测到抗-HBc6. 抗抗-HBc抗抗HBc-IgM：是是HBV感染者病毒活动的标志感染者病毒活动的标志抗抗HBc-IgG：凡凡 HBV感
19、染者均可阳性感染者均可阳性HBcAg的免疫原性最强的免疫原性最强不是保护性抗体，有不是保护性抗体，有IgM、 IgA、 IgG可终身阳性可终身阳性7. HBV DNA是病毒复制和有传染性最直接的证据是病毒复制和有传染性最直接的证据乙乙 肝肝测测定定DNA，等等于于测测定定HBV，它它与与HbeAg同同时时升高，对判断病情和肝炎疗效有实用价值。升高，对判断病情和肝炎疗效有实用价值。8. pre-s1、pre-s2抗原测定抗原测定是是HBVHBV侵侵入入肝肝细细胞胞的的主主要要结结构构成成分分，pre-s1pre-s1pre-s1pre-s1、pre-s2pre-s2pre-s2pre-s2蛋蛋蛋
20、蛋白白白白阳阳阳阳性性性性提提提提示示示示HBVHBVHBVHBV复复复复制制制制活活活活跃跃跃跃，乙乙乙乙肝肝肝肝活活活活动期标志物。动期标志物。动期标志物。动期标志物。HBsAg 抗抗-HBs HBeAg 抗抗-HBe 抗抗-HBc HBsAg 抗抗-HBs HBeAg 抗抗-HBe 抗抗-HBc 急性肝炎早期，传染性强急性肝炎早期，传染性强乙肝病毒标志物的常见组合分析HBsAg 抗抗-HBs HBeAg 抗抗-HBe 抗抗-HBc HBsAg 抗抗-HBs HBeAg 抗抗-HBe 抗抗-HBc 急急性性或或慢慢性性现现症症感感染染，传传染染性性强强。“大三阳大三阳”HBsAg 抗抗-H
21、Bs HBeAg 抗抗-HBe 抗抗-HBc HBsAg 抗抗-HBs HBeAg 抗抗-HBe 抗抗-HBc 有无传染性应结合有无传染性应结合HBV DNA检测结果检测结果“小三阳小三阳”HBsAg 抗抗-HBs HBeAg 抗抗-HBe 抗抗-HBc HBsAg 抗抗-HBs HBeAg 抗抗-HBe 抗抗-HBc 有过有过HBV感染，目前有无传染性应结合感染，目前有无传染性应结合HBV DNA结果结果HBsAg 抗抗-HBs HBeAg 抗抗-HBe 抗抗-HBc HBsAg 抗抗-HBs HBeAg 抗抗-HBe 抗抗-HBc HBV感染的恢复期，有免疫力，无传染性感染的恢复期，有免疫力，无传染性HBsAg 抗抗-HBs HBeAg 抗抗-HBe 抗抗-HBc HBsAg 抗抗-HBs HBeAg 抗抗-HBe 抗抗-HBc 注射疫苗后；注射疫苗后；过去有过过去有过HBV感染获得免疫感染获得免疫力力HBsAg 抗抗-HBs HBeAg 抗抗-HBe 抗抗-HBc HBsAg 抗抗-HBs HBeAg 抗抗-HBe 抗抗-HBc 窗口期，抗窗口期，抗-HBs即将出现；即将出现；HBV感染已过感染已过
