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1、肿瘤免疫治疗-肿瘤生物治疗学基础知识1肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识目的与要求：肿瘤免疫学是研究肿瘤发生、发展与机体免疫系统之间的关系，以及应用免疫学原理和手段对肿瘤进行预防、诊断和治疗的一门学科。通过本课程的学习，全面了解机体的抗肿瘤免疫监视机制，包括特异性和非特异性的免疫机制；肿瘤的免疫逃逸机制；免疫编辑假说。深入认识肿瘤与免疫系统相互作用机制，了解肿瘤的生物学特性，以及肿瘤免疫治疗在肿瘤综合治疗中的地位和作用。2肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识第一章、肿瘤免疫学概述第一章、肿瘤免疫学概述肿瘤免疫学（Tumorimmunology）是研究肿瘤抗原、机体的免疫功能与肿瘤发生、发展和转归
2、的相互关系；机体对肿瘤的免疫应答以及肿瘤细胞逃逸免疫效应的机制；肿瘤免疫学诊断；以及免疫学预防和治疗的学科。3肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识第二章、免疫系统的基本组成和功能第二章、免疫系统的基本组成和功能免疫细胞细胞因子主要组织相容性复合体、粘附分子免疫耐受抗肿瘤免疫应答过程机体对肿瘤抗原的免疫应答4肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识免疫系统是机体识别自我和非我，引发免疫应答、执行免疫效应和最终维持自身免疫稳态的组织系统免疫器官：中枢免疫器官胸腺、骨髓外周免疫器官淋巴结、脾脏免疫细胞：主要是指能识别抗原，产生特异性免疫应答的淋巴细胞等各种细胞。细胞因子：机体的免疫细胞和非免疫细胞能合成和分
3、泌小分子的多肽类因子，它们调节多种细胞生理功能，这些因子统称为细胞因子（cytokines）。主要组织相容性复合体：肿瘤抗原递呈抗肿瘤免疫应答：细胞免疫、体液免疫免疫耐受：是指免疫活性细胞接触抗原性物质时所表现的无应答状态（astateofspecificunresponsiveness）5肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识一、免疫细胞一、免疫细胞（一）T淋巴细胞-主要的抗肿瘤效应细胞表面标志：CD3CD8+抗肿瘤作用：A.结合肿瘤抗原，杀伤肿瘤细胞B.分泌细胞因子CD4+抗肿瘤作用：A.辅助激活CTL,B细胞,NK，巨噬细胞;B.分泌细胞因子：IL-2，IFN-，TFN-C.少数属于细胞毒性
4、T细胞具有杀瘤作用6肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识（二）B淋巴细胞-表面标志：CD19介导体液免疫应答（三）NK细胞-表面标志：CD16CD561）非特异性杀伤2）无MHC限制性，无需预先致敏3）不依赖抗体和补体4）ADCC5）释放IFN-7肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识（四）树突细胞-表面标志：CD1a、CD80、CD40、CD86.是目前公认的功能最强的抗原递呈细胞，高表达MHCI类和MHCII类分子功能：DC携带抗原通过MHC限制性途径把抗原递呈给T细胞，激活T细胞而激发免疫应答8肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识（五）巨噬细胞-表面标志：CD681）处理和呈递抗原2）活化的巨噬
5、细胞通过溶酶体酶直接杀伤3）可通过分泌细胞因子间接杀伤肿瘤细胞4）合成和释放NO5）ADCC9肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识二、细胞因子二、细胞因子（一）细胞因子的定义细胞因子（cytokines,CKs）是一类由活化的免疫细胞和非免疫细胞（如成纤维细胞、血管内皮细胞、上皮细胞及某些肿瘤细胞）所分泌的小分子蛋白质的统称，能够作用于分泌细胞本身或邻近其他细胞，具有调节免疫效应、炎症反应等多种生物学活性。10肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识（二）研究的历史细胞因子的研究渊源始于50年代的干扰素研究和60年代的集落刺激因子研究。基因工程技术的迅速发展，带来了细胞因子研究的突破性进展。80-90
6、年代相继克隆出一大批细胞因子，细胞因子的化学本质是多肽，从信息传递的角度，细胞因子是生物体内一类重要的第一信使分子，是细胞内基因表达的产物。11肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识（三）细胞因子的种类按作用分：调节天然免疫的细胞因子：TNF-a、IL-1、IL-6等调节获得性免疫的细胞因子：IL-2、IL-4、IFN-等作用于造血系统的细胞因子：CSF、IL-3、IL-7等按细胞来源分类：免疫细胞产生的细胞因子：IL-2、IL-3、IL-4等非免疫细胞产生的细胞因子：IL-7、IL-8、IL-11、CSF等12肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识细胞因子的作用方式：自分泌作用旁分泌作用内分泌作用。
7、细胞因子的作用特点：多效性重叠性协同性拮抗性双重性13肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识研究意义细胞因子研究具有非常重要的理论和实用意义，它有助于阐明分子水平的免疫调节机理，有助于疾病的预防、诊断和治疗，特别是利用基因工程技术生产的重组细胞因子已用于治疗肿瘤、感染、炎症、造血功能障碍等，并收到良好疗效，具有非常广阔的应用前景。14肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识三、主要组织相容性复合体、粘附分子三、主要组织相容性复合体、粘附分子（一）主要组织相容性复合体同种异体移植物移植后会发生免疫排斥反应，这是由细胞表面的同种异型抗原诱导的，这种抗原称为组织相容性抗原。体内具有多种组织相容性抗原，其中能引
8、起强而迅速的排斥反应者称为主要组织相容性抗原，其编码的基因是一组紧密连锁的基因群，称为主要组织相容性复合体15肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识 人的人的MHCHLA复合体（复合体（6# 染色体）染色体）1. 经典的经典的HLA I类、类、HLA II类基因类基因HLA I类基因（类基因（HLA Ia）：）： HLA-A ( locus ) HLA-B HLA-CHLA II类基因：类基因： HLA-DP ( subrigon ) HLA-DQ ( locus A B ) HLA-DR16肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识2.免疫功能相关基因免疫功能相关基因（1）补体体gene（III类基因）
9、基因）（2）抗原加工、）抗原加工、递呈相关呈相关gene（II类基因）基因）LMP、TAP、HLA-DMHLA-DO、TAP相关蛋白相关蛋白gene17肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识（3）非）非经典的典的HLAI类gene（HLAIb）HLA-E、HLA-G、HLA-F（4）炎症相关）炎症相关geneTNFgene转录调节因子因子MIC（MHCI相关相关 gene）：）：MICA、MICBHSP18肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识（二）粘附分子定义：是一类介导细胞与细胞、细胞与细胞外基质间粘附作用的膜表面糖蛋白作用：参与调节免疫细胞的凋亡参与免疫应答和免疫调节参与免疫细胞的发育和分化19
10、肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识B7分子：主要分布于B细胞、DC细胞、激活的单核细胞和T细胞CD28-激活T细胞配体CTLA-4-抑制T细胞活化20肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识细胞粘附因子-intracellularadhesionmoleculeICAMICAM-1（CD54）ICAM-2（CD102）ICAM-3（CD50）作用：介导免疫免疫细胞的活化、免疫细胞之间及免疫细胞与其他细胞的接触、免疫细胞对肿瘤细胞的杀伤21肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识(三)抗原递呈MHC-I类分子呈递途径：参与内源性抗原的呈递过程MHC-II类分子呈递途径：参与外源性抗原的呈递过程抗原的交叉呈递
11、：MHCI类分子也能递呈外源性抗原，MHCII类分子也能递呈内源性抗原。MHC体内具有多种组织相容性抗原，其中能引起强而迅速的排斥反应者称为主要组织相容性抗原，其编码的基因是一组紧密连锁的基因群，称为主要组织相容性主要组织相容性复合体（复合体（MHC）HLA22肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识基本概念基本概念抗原加工抗原加工：蛋白：蛋白质抗原在抗原在细胞内被降解成能与胞内被降解成能与MHC分子分子结合的合的肽的的过程。程。抗原抗原递呈呈：MHC分子与抗原分子与抗原肽结合，将其展示于合，将其展示于细胞表面供胞表面供T细胞胞识别的的过程。程。内源性抗原内源性抗原：细胞内胞内产生的蛋白生的蛋白质抗
12、原，包括自抗原，包括自身抗原和非己抗原身抗原和非己抗原-MHC分子分子递呈。呈。外源性抗原外源性抗原：由：由细胞外胞外摄入入细胞内的蛋白胞内的蛋白质抗原，抗原，包括非己抗原和自身抗原包括非己抗原和自身抗原-MHC分子分子递呈。呈。23肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识CellsurfacepeptidesofAgAntigensmustbeprocessedinordertoberecognisedbyTcellsYTTcellresponse无应答无应答无应答无应答SolublenativeAgCellsurfacenativeAgSolublepeptidesofAg抗原肽抗原肽-MHC复
13、合物复合物抗原加工、递呈24肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识25肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识抗原递呈细胞 能摄取、加工、处理抗原并将抗原信息提呈给淋巴细胞的细胞，又称为辅佐细胞。l专职专职APC(professional APC)APC(professional APC) 能组成性表达能组成性表达MHC-IIMHC-II类分子、具有较强的类分子、具有较强的抗原提呈作用，包括巨噬细胞、树突状细胞、抗原提呈作用，包括巨噬细胞、树突状细胞、B B细胞细胞等。等。l兼职兼职APC APC 非组成性地表达非组成性地表达MHC-IIMHC-II类分子，抗原提呈能力类分子，抗原提呈能力弱，包括内皮细
14、胞、纤维母细胞、上皮及间质细胞等。弱，包括内皮细胞、纤维母细胞、上皮及间质细胞等。l肿瘤细胞、病毒感染细胞等也可通过肿瘤细胞、病毒感染细胞等也可通过MHC-IMHC-I类分子途类分子途径提呈抗原。此类径提呈抗原。此类CTLCTL的靶细胞属广义的靶细胞属广义APCAPC。26肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识抗原加工递呈的意义实现免疫系统对非己抗原的免疫监视作用免疫调节作用27肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识四、免疫耐受四、免疫耐受（一）定义：免疫耐受（immune tolerancnce）指抗原诱导特异性淋巴细胞失活或死亡，导致机体不能对该抗原产生应答的现象。 无效应的无效应的非特异非特异性
15、性免疫缺陷免疫缺陷特异性特异性(天然，先天/后天获得性)免疫应答免疫应答无应答无应答免疫抑制免疫抑制(人工，药物/射线)28肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识（二）T细胞免疫耐受中枢性免疫耐受：T细胞的阴性选择T细胞的否定现象外周性免疫耐受：生理性屏障对自身抗原的不识别外周血自身反应性T细胞克隆的清除缺乏激活信号具有潜在自身反应性的T细胞被抑制29肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识（二）B细胞免疫耐受中枢性免疫耐受：克隆排除 克隆无能(clonal anergy) 外周性免疫耐受：已活化的细胞受到大量 抗原持续刺激时，可被 诱发凋亡。30肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识研究免疫耐受的意义及应
16、用研究免疫耐受的意义及应用1.理论方面的意义2.临床治疗方面的意义和应用治疗自身免疫病防止器官移植后的排斥反应肿瘤治疗31肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识五、抗肿瘤免疫应答五、抗肿瘤免疫应答机体抗肿瘤的免疫学效应机制（一）细胞免疫机制细胞免疫在机体抗肿瘤效应中起重要作用。1、CD4+T细胞：参与B细胞、巨噬细胞、NK细胞和CTL细胞的活化和抗肿瘤效应。A.辅助激活CTL,B细胞,NK，巨噬细胞;B.分泌细胞因子：IL-2，IFN-，TNF-C.少数属于细胞毒性T细胞，具有杀瘤作用32肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识2、CD8+T细胞：在机体抵抗肿瘤效应中起关键作用。CTL（细胞毒性T淋巴细
17、胞）A.通过其细胞膜上的T细胞抗原识别受体（TCR），特异性识别MHC分子肿瘤抗原肽复合物，引起T细胞活化、增殖，杀伤肿瘤细胞。B.分泌细胞因子33肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识34肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识3、抗原递呈细胞：M、DCA.通过摄取、加工处理和递呈肿瘤抗原，激发特异性T细胞免疫而发挥抗肿瘤效应。B.活化的巨噬细胞通过溶酶体酶直接杀伤,且可通过分泌细胞因子间接杀伤肿瘤细胞。C.合成和释放NOD.ADCC35肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识36肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识（二）体液免疫机制1、激活补体系统溶解肿瘤细胞2、抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用（ADCC）3
18、、抗体的免疫调理作用4、抗体封闭肿瘤细胞上的某些受体作用5、抗体使肿瘤细胞上的黏附特性改变或丧失作用38肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识AgIL-12IL-12活化活化活化活化DCDCTh1Th1DCDCCTLCTLCD4CD4C CD D4 4IL-12IL-12N NKK/ /N NKKT TTumorIFNIFNIL-2IL-2IFNIFNIL-12IL-12抗肿瘤免疫应答抗肿瘤免疫应答39肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识六、机体对肿瘤抗原的免疫应答六、机体对肿瘤抗原的免疫应答认识肿瘤抗原以及肿瘤抗原在免疫应答中的作用40肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识肿瘤抗原肿瘤抗原细胞胞恶性性
19、变过程程中中出出现的的新新抗抗原原(neoantigen)及及过度度表表达达的的抗抗原物原物质的的总称。称。 包包括括突突变的的癌癌基基因因和和抗抗癌癌基基因因编码的的蛋蛋白白、病病毒毒诱导的的肿瘤瘤细胞胞表表面面常常常常表表达达病病毒毒基基因因编码的的蛋蛋白白、共同肿瘤抗原、胚胎抗原。41肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识肿瘤抗原的分类肿瘤抗原的分类根据特异性分类根据特异性分类1）肿瘤特异性抗原瘤特异性抗原(tumorspecificantigen,TSA)肿瘤瘤细胞胞所所特特有有的的或或只只存存在在于于某某种种肿瘤瘤细胞胞而而不不存在于正常存在于正常细胞的新抗原。胞的新抗原。2）肿瘤相关抗
20、原瘤相关抗原(tumorassociatedantigen,TAA） 非非肿瘤瘤细胞胞所所特特有有、正正常常细胞胞和和其其它它组织上上也也存在的抗原，存在的抗原，细胞癌胞癌变时，含量增加。，含量增加。42肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识机体对肿瘤抗原的免疫应答机体对肿瘤抗原的免疫应答机体抗肿瘤的免疫学效应机制十分复杂，涉及多种免疫成分，包括先天性免疫（非肿瘤特异性免疫）和获得性免疫（肿瘤特异性免疫），二者共同参与机体免疫机体免疫。对于免疫原性较强的肿瘤，特异性免疫应答起主要作用对于免疫原性较弱的肿瘤，非特异性免疫应答更重要43肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识第三章、免疫调节机制免疫调节-指
21、抗原驱动的免疫应答过程中，通过免疫细胞之间，免疫细胞与免疫分子之间及免疫系统与其他系统之间的相互作用，使免疫应答维持在适当的强度和时限以保证机体免疫功能的稳定的生物学过程。免疫细胞调节：调节型T细胞NKT细胞T细胞巨噬细胞44肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识调节型T细胞（regulatoryTcells,Treg）促进一些抑制性细胞因子的分泌、下调免疫共刺激分子和粘附分子的表达、抑制细胞增殖、促进细胞凋亡、抑制自身反应性T细胞的免疫反应以及抑制传统T细胞的活化等。其免疫抑制机制尚不十分清楚45肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识NKT细胞是一类特殊的T细胞亚群，既表达T细胞受体，同时又能表达N
22、K的表明标记CD16146肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识T细胞在抗微生物感染免疫和抗肿瘤免疫中发挥重要作用47肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识巨噬细胞抗肿瘤的作用机制抗肿瘤功能的抑制及促肿瘤生长的机制48肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识肿瘤对机体免疫功能的影响肿瘤对机体免疫功能的影响肿瘤诱导的抑制性细胞Ts抑制性巨噬抑制性巨噬细胞胞肿瘤诱导的体液抑制因子封封闭抗体抗体肿瘤细胞产物的免疫抑制作用TGF-，IL-1049肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识第四章、肿瘤免疫逃逸机制抗原缺失和调变 肿瘤细胞MHC IMHC I分子表达低下肿瘤细胞表面抗原被封闭肿瘤细胞缺乏协同刺激信号肿瘤细胞的“
23、漏逸”免疫抑制作用肿瘤抗原诱发免疫耐受肿瘤细胞抗凋亡或诱导免疫细胞凋亡50肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识肿瘤细胞“漏逸”某些突变可以是肿瘤细胞迅速生长从而超过了机体的抗肿瘤免疫效应，导致宿主不能有效地清除大量生长地肿瘤细胞，称为肿瘤细胞地“漏逸”51肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识肿瘤细胞的免疫原性降低 肿瘤细胞异常的HLAHLA表型 A。正常细胞HLA I类分子表型(举例)。肿瘤细胞异常HLA I类分子表型； B。全部丢失，包括HLA-A、 HIA-B、HLA-C； C。HLA一条单元型丢失，即HLA-A、HLA-B、 HLA-C三位点均丢失一半等位基因； D。某一位点丢失(此处为HL
24、A-B或A位点)； E。某一等位基因丢失(此处为HLA-B44)。 52肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识肿瘤表达免疫抑制分子和诱导淋巴细胞凋亡肿瘤的免疫豁免TumorTGF-FasL攻击攻击TcFasFasL53肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识肿瘤诱发免疫抑制1、肿瘤诱导免疫抑制细胞抑制性T细胞抑制性NKT细胞抑制性巨噬细胞54肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识2、肿瘤诱导免疫抑制因子转化生长因子白细胞介素-10前列腺素TumorTGF-免疫抑制免疫抑制55肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识3、肿瘤诱导T细胞成分和功能紊乱T细胞亚群紊乱Th1/Th2漂移T细胞信号通路异常56肿瘤免疫治疗肿
25、瘤生物治疗学基础知识肿瘤血管内皮细胞与免疫逃逸肿瘤血管内皮细胞表面各种细胞粘附分子地表达水平降低肿瘤血管内皮细胞MHC类分子的表达异常肿瘤血管内皮细胞的抗自由基损伤活性增强肿瘤血管内皮细胞合成细胞外基质能力增强57肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识第五章、肿瘤免疫学理论的演变58肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识免疫监视学说Burnet提出免疫监视学说：机体在生长发育的过程中，其体细胞会时常发生突变，有些突变可能会导致细胞恶化转化。当具有异常增殖能力的肿瘤细胞在体内形成时，它们携带新的抗原决定簇，随着肿瘤细胞的增殖，当新的抗原达到一定数量时，就开始产生胸腺依赖性免疫反应，最终排斥肿瘤。59肿瘤
26、免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识人类的免疫监视现象免疫缺陷或免疫抑制的个体具有更高的肿瘤发生率。对移植后应用免疫抑制剂的患者和先天性免疫缺陷患者的追踪观察结果显示其肿瘤发生的相对危险度明显增高。60肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识肿瘤免疫编辑此假说认为，免疫系统既可能清除肿瘤细胞或对肿瘤细胞产生非保护性免疫反应，又可能促进免疫无反应性或免疫耐受性的产生。肿瘤细胞在于免疫系统的相互作用过程终，免疫原性强的克隆被清除，免疫原性弱的克隆被保留，肿瘤细胞基因组的不稳定性导致免疫原性更弱的克隆最终形成优势肿瘤细胞群体。3个过程：免疫清除；免疫平衡；免疫逃逸61肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识第六章、肿
27、瘤的免疫治疗基本原理：提高肿瘤抗原免疫原性，激发和增强机体抗肿瘤免疫应答，提高肿瘤对抗瘤免疫效应的敏感性，在体内外诱生肿瘤特异性效应细胞和分子等。抗肿瘤免疫治疗包括主动免疫治疗、被动免疫治疗。62肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识一、细胞因子治疗1、干扰素1）I型干扰素：由单核巨噬细胞、病毒诱导的成纤维细胞、转化的B细胞产生 种类：IFN-、IFN-、IFN-、IFN-等 作用：抑制肿瘤细胞周期、诱导细胞凋亡 调节免疫反应 感染肿瘤血管生成 其它作用：抗病毒2）II型干扰素：由活化的T细胞、原始的Th0细胞和NK细胞产生 种类：IFN- 作用: 激活巨噬细胞、NK细胞等直接杀伤癌细胞 延长细胞
28、周期、抑制肿瘤细胞的生长和增殖 促进MHC-I、II类分子和抗原递呈细胞尚共刺激分子的表达 在干扰素的调节下，IFN-可诱导Th0向Th1分化，抑制向Th2分化，增强细胞免疫和CTL的杀伤活性临床药物：基因工程产品，已国产化。 干扰灵、赛若金 、因特芬、派罗欣。 63肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识适应症：干扰素主要用于治疗晚期毛细胞白血病、肾癌、黑色素瘤、kaposi肉瘤、慢性粒细胞性白血病和中低度恶性非霍奇金淋巴瘤，其他曾用于骨肉瘤、乳腺癌、多发性骨髓瘤、头颈部癌和膀胱癌等。对慢性乙、丙型肝炎也有效。用法：第1周300万单位，皮下注射，每周23次，第2周每次加到500600万单位，第3周
29、加到9001000万单位连续6周，共8周为1疗程。干扰素亦可局部注射（瘤周浸润）、腔内注射（癌性胸腹腔积液）或膀胱内灌注。64肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识毒副作用：高剂量干扰素具有一般生物制剂的反应即发热、流感样症状，肌肉酸痛等，其次是轻度骨髓抑制。一般对肝肾功能无影响，少数有转氨酶、血肌酐升高。65肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识2、白细胞介素-2（IL-2)来源：主要由激活的T淋巴细胞分泌和表达，此外NK、转化的B细胞和LAK细胞也可产生作用：促进T细胞增殖及相应的细胞因子分泌刺激NK生长并增强其杀细胞活性诱导LAK、NK、TIL扩增及细胞因子的分泌促进B细胞分化、增殖和产生抗体参
30、与机体的炎症反应、抗肿瘤免疫反应和移植排斥反应临床药物：基因工程IL-2欣吉尔、德路生、远策欣。66肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识适应症：用于肾细胞癌、黑色素瘤、乳腺癌、膀胱癌、肝癌、直肠癌、淋巴瘤、肺癌等恶性肿瘤的治疗。用于癌性胸腹水的控制。用于手术后、放疗及化疗后的肿瘤治疗，可增强机体免疫功能。也用于自身免疫性疾病和病毒性、细菌性疾病的治疗，如乙肝、结核病。用法：1）胸腹腔注射100-200万IU/次，每周1-2次，2-4周为一疗程。2）局部注射根据癌灶大小决定剂量，每次每个病灶不少于610万IU，隔日1次，4周为一疗程。3）皮下注射60-100万IU/m3，每日1次，每周5次，4周为
31、一疗程。4）静脉滴注40-80万IUIU/m3，每日1次，缓慢滴注，每周5次，4周为一疗程。67肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识毒副作用：治疗中常见副反应为发热、寒战、乏力、恶心、轻度食欲下降等。其他少见的副反应包括局部反应、皮疹、血压下降、水潴留、转氨酶升高等。这些副反应多为轻度、易耐受，停药后可自行缓解。必要时可给与消炎痛或给予升压等措施对症处理。68肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识3、IL12：主要是由抗原呈递细胞（如单核巨噬细胞、树突细胞及B淋巴细胞产生）作用：诱导Th0分化为Th1，增强细胞免疫应答促进NK、T细胞增殖，诱导LAK、TIL产生，并增强上述细胞的杀伤功能诱导Th1、
32、NK分泌IFN-促进巨噬细胞分泌一氧化氮，杀伤肿瘤细胞抑制肿瘤血管的生成增强肿瘤细胞表达MHC-III类分子，提高肿瘤细胞对免疫效应细胞的易感性增加抗原递呈细胞对肿瘤抗原的递呈功能69肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识动物试验：应用基因工程技术，将IL-12基因导入肿瘤细胞、树突细胞、成纤维细胞等，制成肿瘤疫苗，使IL-12在局部分泌，诱发机体的抗肿瘤免疫。70肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识临床试验：最近的一个多中心、随机的临床试验，重组人(rHu)IL-12分别以003g、025g或05gkg2周x12周，治疗46例慢性乙型肝炎病人。与治疗前比较，治疗结束和随访12周后HBVDNA水平显
33、著降低(P0001)。对IL-12的效应与剂量相关，治疗结束时病毒清除3个剂量组依次为7、13和25；随访结束时5例HBeAg阴转。较大剂量较易有不良反应，包括淋巴细胞和嗜中性细胞数中度减少，3例未完成疗程；注射处可有局部反应；仅1例检出对rHulL-12的抗体。71肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识Ohe等对IL-12治疗癌患者的临床病例作了回顾性的总结报道：IL-12治疗临床上可观察到IL-10产生和NK细胞、LAK活性短暂增高，少数患者能取得部分疗效，但显著性疗效的病例尚未见报道，而且有许多毒副作用，如发热、疲劳、流感样反应、关节痛、肌痛、白细胞减少、肝功能损害等。 尽管如此，IL-12
34、治疗前景不可低估。临床证实，IL-12能恢复由实体瘤转移患者PBMC获得的NK细胞活性，IL12还能增强毛细胞白血病患者NK细胞活性。随着对IL-12抗肿瘤机制研究的深入及IL-12用药剂量、途径、协同用药等方面的改进，IL-12将会成功发展为有重要临床应用价值的抗癌新药。72肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识4、IL-4：主要由活化的T淋巴细胞（特别是Th2细胞）产生。作用：促进休止期的B细胞活化，促进B细胞分泌IgE，增加B细胞的抗原递呈功能，促进体液免疫应答。维持胸腺细胞和活化T细胞的生长，诱导Th2产生，抑制Th1分泌细胞因子。诱导NK细胞增殖。激活巨噬细胞，促进其抗原递呈和杀伤肿瘤细
35、胞的作用。诱导外周血单个核细胞分泌M-CSF和G-CSF，增强中性粒细胞介导的吞噬、杀伤功能和抗体依赖性细胞介导的细胞毒效应（ADCC）应用：主要用于DC细胞的诱导、扩增。73肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识5、肿瘤坏死因子TNF1）TNF-：主要来源于LPS、细菌DNA等抗原分子激活的单核巨噬细胞、其它细胞如T淋巴细胞、B淋巴细胞等产生的。作用：影响免疫反应过程影响非免疫细胞促进细胞因子分泌调控细胞凋亡全身反应2）TNF-：主要由Th1、CD8T细胞和早期的B细胞产生作用：是炎症过程的重要组成成分74肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识6、集落刺激因子：是一种低分子量糖蛋白，能够在体内外选择
36、性刺激造血干细胞增生、分化成某一谱系的细胞分类：G-CSF,M-CSF,GM-CSF,IL-3,EPO,SCF75肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识7、胸腺素分为两族作用：1）具有免疫增强作用，可促进T细胞、NK、LAK等细胞的增殖及杀伤活性2）参与细胞骨架的形成，通过对肌动蛋白的调节，参与某些肿瘤的转移76肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识二、肿瘤的主动免疫治疗应用肿瘤抗原或模拟肿瘤抗原的疫苗刺激机体免疫系统，激发或增强机体的抗肿瘤特异性免疫应答，阻止肿瘤生长、扩散和复发。77肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识肿瘤疫苗肿瘤疫苗与传统疫苗在概念上不同，它主要不是用于肿瘤的预防，而是通过瘤苗的接
37、种来刺激机体对肿瘤的免疫应答来治疗肿瘤。该法应用的前提是肿瘤抗原能刺激机体产生免疫反应。对手术后清除微小转移瘤灶和隐匿瘤、预防肿瘤转移和复发有较好的效果。78肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识1、肿瘤细胞疫苗、肿瘤细胞疫苗即通过自体肿瘤细胞粗提取物，经物理化学或生物手段处理后抑制其生长能力，保持其免疫原性，但其免疫原性好，需加入佐剂如卡介苗等以增强免疫原性，但效果不甚理想。79肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识2、肿瘤基因工程疫苗、肿瘤基因工程疫苗肿瘤基因工程疫苗通过基因重组技术，将目的基因导入受体细胞而制备的疫苗。80肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识1)、提高机体抗肿瘤能力将外源基因导入免
38、疫细胞，其表达产物作用于免疫细胞，促进免疫细胞生长、分化，从而提高机体的抗肿瘤能力。目前研究较多的是细胞因子基因的转导，如IL-2、IL-4、IL-6、IL-12、IL-15、IL-18、IFN-以及GM-CSF等。实验显示，在各种细胞因子中，以GMCSF基因修饰的肿瘤细胞疫苗效果最好，这与其诱导DC成熟有关。81肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识2)、增强肿瘤免疫原性通过表达肿瘤所缺乏的某些分子，以增强其免疫原性。如将B7B7基因导入具有肿瘤抗原的肿瘤细胞，不仅能恢复肿瘤特异性免疫反应，也可增强IL-2IL-2的抗瘤活性。一些肿瘤相关抗原（TAATAA）基因的转导研究，显示也可以增强其免疫原
39、性，如CEACEA、AFPAFP、gp100gp100、MART-1MART-1。82肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识3)、基因产物直接杀伤瘤细胞如TNF基因导入肿瘤细胞可使局部持续分泌TNF、从而直接杀伤肿瘤细胞。83肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识3、肽疫苗肽疫苗肽疫苗主要包括以下二种：1）、癌基因、抑癌基因突变肽疫苗目前已合成的p21-K-Ras-125突变肽、EGFRvIII突变肽和Her2/neu肽等。2）、病毒相关疫苗如EB病毒与鼻咽癌、Burkitt淋巴瘤，HBV与肝癌，人类T细胞白血病病毒与成人T细胞白血病。84肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识4、核酸疫苗核酸疫苗核酸疫苗
40、是由能引起保护性免疫反应的抗原基因片段及其载体构建而成。包括DNA疫苗和RNA疫苗。85肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识5、抗独特型抗体疫苗抗独特型抗体疫苗抗独特型抗体疫苗具有模拟抗原及免疫调节的双重作用，能克服机体免疫抑制，打破免疫耐受，故能代替肿瘤抗原诱导特异性主动免疫反应。肿瘤抗原可诱导抗体(Ab1)产生，该抗体可变区的独特型决定簇具有免疫源性，可诱导抗体Ab2产生，称为抗独特性抗体。在这些Ab2中，有的可模拟原来的抗原结构诱导抗原的特异性免疫反应，可作为肿瘤疫苗应用。86肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识有些已进入、期临床：卵巢癌相关抗原CA125的独特型疫苗：AcA125黑色素瘤的
41、独特性疫苗：BEC2、TriGem等淋巴瘤的独特性疫苗：Id-KLH乳腺癌的独特性疫苗：1E10结直肠癌的独特性疫苗：105AD787肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识6、树突状细胞（DC）疫苗肿瘤抗原属于内源性抗原，机体主要依靠CTL免疫应答杀伤肿瘤细胞。但肿瘤细胞表面的MHC-抗原肽段复合物表达水平低，需要经体内抗原提呈细胞加工、处理，提供诱导T细胞活化的第二信号，才能激发肿瘤特异性CTL的产生。由于DC在诱导体液免疫应答和细胞免疫应答中的重要功能，目前认为，DC在启动抗肿瘤免疫的抗原呈递中发挥重要作用。88肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识Dendriticcellsconnectinn
42、ateimmunityandadaptiveimmunity89肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识体外实验证实，人DC至少有三条来自于不同前体细胞的发育途径：1）CD34+细胞分化为DC2）外周血单核细胞分化为DC3）淋巴样DC前体细胞分化途径90肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识临床应用肿瘤抗原可以基因、多肽、蛋白、甚至完整细胞的形式负荷给DC，因此DC疫苗的制备明显比基因修饰的肿瘤细胞疫苗容易，因而促进了DC疫苗进入临床试验。1996美国斯坦福大学的Hsu等首先采用抗独特型抗体负荷的DC疫苗治疗了4例B细胞型淋巴瘤，3例获部分缓解。91肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识临床应用Nestle
43、(1998)等采用肿瘤细胞溶解物或MHCII类分子限制的多肽抗原负荷DC，然后与免疫佐剂KLH（keyholeLimpethemocyanin）联合应用治疗了16例转移性黑色素瘤，其中2例获完全缓解，3例获部分缓解，1例获微小反应；在反应的5例患者中，有2例为肿瘤细胞溶解物负荷的DC疫苗。92肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识由于大多数肿瘤抗原未被识别，因此肿瘤细胞溶解物负荷的DC疫苗可使更多的患者接受此种方法治疗。93肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识三、肿瘤的被动免疫治疗（一）、抗体靶向治疗1.抗肿瘤单克隆抗体直接体内应用很多进入临床治疗试验，包括抗白细胞分化抗原CD19、CD20、CD2
44、2、CD33，表皮生长因子受体（EGFR），MUC1，前列腺特异性抗原（PSA），前列腺特异性膜抗原（PSMA），癌基因cerbB2产物，神经节苷酯GD3、GM2等抗原的单抗。94肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识2.抗肿瘤单克隆抗体与抗肿瘤药物、生物毒素、细胞因子或放射性核素偶联：生物毒素，如假单胞菌毒素或蓖麻毒素放射线同位素，如131I、186Re、177Lu、90Y、212Bi、67Cu、等单抗作为导向物可增加毒素、放射性同位素等在肿瘤局部的浓度，增加对肿瘤的杀伤力或诱导肿瘤局部的免疫反应。95肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识3.基因工程抗体-毒素（或酶）融合蛋白直接杀瘤4.抗肿瘤单克
45、隆抗体和抗效应细胞表面分子的抗体组成双特异性抗体，可引导杀瘤效应细胞向肿瘤灶集中5.胞内抗体在肿瘤细胞内表达，特异性作用于致瘤的癌基因产物或端粒酶96肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识（二）、肿瘤过继性免疫治疗向肿瘤患者体内输注具有抗瘤活性的免疫细胞，直接杀伤肿瘤细胞或激发机体抗肿瘤免疫效应。回输的效应细胞包括：在体外用肿瘤抗原或淋巴因子激活的淋巴细胞（CIK、TIL等）、导入外援细胞因子基因并表达相应产物的淋巴细胞等。97肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识1、LAK细胞LAK细胞是在1980年由美国国立癌症研究所Rosenberg发现，并在1982年由Grimm等命名的。这是一类由IL-2激
46、活的能够杀伤NK抵抗的新型免疫细胞，是一种强烈的，广谱的，具有杀瘤活性的细胞。随后临床上广泛应用于肿瘤等疾病治疗。但由于LAK细胞活性的维持需要IL-2，而IL-2副作用大，而且在以后的临床总结中发现LAK细胞疗效较低，现已基本不用。98肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识2、CD3AK细胞是在LAK细胞基础上，用抗CD3单抗和IL-2联合诱导的杀瘤细胞。由于使用了抗CD3单抗刺激，减少了IL-2的用量，降低LAK治疗的毒副作用，且CD3AK的抗肿瘤活性大大高于LAK细胞。山东胡伟等对晚期恶性肿瘤患者输注自体CD3AK细胞1个疗程后,实体瘤组治疗有效率为25.45%,临床获益率为74.54%;淋
47、巴瘤组有效率为83.33%,临床获益率为91.67%。99肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识在利用外周血淋巴细胞制备免疫效应细胞的研究中，为增加效应细胞的数量和杀瘤活性，常添加一些激活剂如抗CD3单抗，植物血凝素PHA等，以提高免疫治疗疗效。实验显示PHA预刺激虽能促进IL-2激活的杀伤细胞的增殖，但对杀伤活性并无明显改善，而培养15天以上，经PHA预刺激的P-LAK和P-CD3AK细胞杀伤活性显著提高，且PHA与抗CD3单抗有协同效应。100肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识3、TIL细胞肿瘤浸润的淋巴细胞，是从新鲜的肿瘤组织中分离出来，体外经IL-2，抗CD3单抗，TNF等刺激，经20-4
48、5天培养，获得的具有一定特异性的抗肿瘤细胞。其局限在于分离困难，体外培养时间过长。101肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识我们于1997-1998年选择21例癌性胸腹水患者，其中肺癌4例，乳腺癌5例，肠癌4例，骨癌7例，胰腺癌1例。所有病例均经病理学和细胞学诊断。共抽取33次胸腹水做TIL细胞培养，抽取胸水2502200ml，腹水量12004400ml。21例患者中14例经16次的TIL胸腹腔回输治疗。回输期间隔天皮下注射IL-250万单位。14例患者回输治疗结果显示总有效率为78.57%，其中3例胸腹水消失，并观察1个月无复发，1个月后检查胸腹水无瘤细胞；8例胸腹水有明显减少，并控制1个月以
49、上；3例仅控制12周。102肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识4、TAK细胞TAK是由可溶性肿瘤抗原，抗CD3单抗和IL-2共同诱导的杀瘤细胞。用可溶性肿瘤抗原诱导细胞识别肿瘤，以提高杀瘤亲和性；用抗CD3单抗诱导所有T细胞活化，培养出以CD8+T细胞为主的杀瘤细胞。TAK细胞不仅增加了杀瘤的特异性，且体外增殖快，IL-2用量低。103肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识我们用盐析法提取胃癌可溶性抗原（TSA），并用抗CD3单抗和IL-2共同刺激正常人的外周血单核细胞，培养10天后，经流式细胞仪表型分析，表明其免疫效应细胞以CD8+T细胞为主，其细胞增殖速度，增殖水平与CD3AK和LAK相比明显
50、升高，且对抗原来源的胃癌细胞具有极强的杀伤活性（98.5%），高于CD3AK（82.1%）和LAK（62.05%）。104肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识我们于1996-1998年，采用静脉或口服化疗和免疫效应细胞输注为主体的化学免疫疗法，治疗晚期原发性肝癌18例。收治的38例晚期原发性肝癌病人中，18例采用化学免疫疗法（甲组），同期收治的晚期肝癌患者，除对症处理外，单用静脉化疗或肝动脉插管化疗20例，列为对照组（乙组）。总缓解率（CR+PR）：甲组22.22%（4/18），乙组无1例缓解。105肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识5、CIK细胞是将人外周血单个核细胞经体外用各种细胞因子共同刺
51、激培养所获得的免疫细胞。由于同时表达CD3和CD56分子，故又称为NK样T细胞，CIK细胞兼具有T淋巴细胞强大的抗瘤活性和NK细胞的非MHC限制性杀瘤特点，其抗肿瘤活性远大于LAK和TIL。因此被认为是新一代肿瘤过继细胞免疫治疗的首选方案。刺激因子除了抗CD3单抗、IL-2外，还需用IFN-和IL-1等细胞因子。106肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识CIK细胞杀伤机制、识别由于CIK的细胞杀伤作用是非MHC限制性的，故CD4、CD8在其识别肿瘤细胞或病毒感染的细胞过程中并非必不可少。细胞表面粘附分子LFA-1ICAM-1在CIK细胞识别过程中起关键作用。对正常细胞无毒性作用。107肿瘤免疫治
52、疗肿瘤生物治疗学基础知识、杀伤CIK细胞对肿瘤细胞或感染细胞的直接杀伤：CIK细胞在受到外源性抗CD3McAb或敏感靶细胞刺激时会释放具有细胞毒性的胞浆颗粒物到膜外空间，其中CD3+CD56+细胞可产生最大的颗粒释放量。这些胞浆颗粒物对靶细胞具有直接杀伤作用。炎性细胞因子的杀伤活性：培养的CIK细胞可以分泌多种细胞因子，如IFN-、TNF-（肿瘤坏死因子-）、IL-2等，不仅对靶细胞有直接抑制作用，还可通过调节机体免疫系统反应性间接杀伤靶细胞。诱导肿瘤细胞凋亡：CIK细胞在培养过程中表达FasL（型跨膜糖蛋白），一方面增强了其对FasL+肿瘤细胞引发的Fas-FasL凋亡的抵抗性，还可通过对F
53、as+（型跨膜糖蛋白）肿瘤细胞诱导凋亡行使其对肿瘤细胞的慢性杀伤作用，保证抗瘤活性的长期持久。108肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识CIK细胞的杀瘤特点1、增殖速度快CIK细胞中的效应细胞CD3+CD56+细胞在正常人外周血中极其罕见，仅1%5%，在体外经多因子培养2830天，CD3+CD56+细胞迅速增多，较培养前升幅可达1000倍以上。且所占百分比也大幅上升，细胞毒活性亦达峰值。2、杀伤活性高、杀瘤谱广CIK细胞的总杀伤单位（TLU）为LAK细胞的73倍甚至更高，CIK细胞的瘤细胞抑制Log指数为2.53.5，较LAK细胞的瘤细胞抑制指数高2个Log。其抗病毒活性大大增强。因没有T淋巴细
54、胞杀伤时的MHC限制性，故对于多种肿瘤细胞系和新鲜肿瘤组织均表现出强大的杀伤活性。3、对多重耐药肿瘤细胞同样敏感CIK细胞对化疗药物敏感的亲本细胞和不敏感的转化细胞均具有强大的杀伤活性，两者比较无差别。4、杀瘤活性不受CsA、FK506等免疫抑制剂的影响免疫抑制剂CsA（环孢霉素A）和FK506（普乐可复）不影响靶细胞诱导的CIK细胞脱颗粒，并且CIK细胞对靶细胞的杀伤活性不会因此降低。5、对正常骨髓造血前体细胞毒性很小CIK细胞对正常髓系克隆生成几乎没有影响，对GM-CFU（粒细胞巨噬细胞集落形成单位）仅有不足1级的抑制。6、能抵抗肿瘤细胞引发的效应细胞Fas-FasL凋亡CIK细胞内有抗凋
55、亡基因表达，并检出多种保护基因，如Bcl-2等和survivin的转录水平上调。CIK细胞具备合成FasL的能力，CIK细胞可以对抗体内FasL阳性肿瘤所引发的效应细胞活性下降。109肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识CIK制备采集：外周血单个核细胞。分离：PBMNC经淋巴细胞分离液分离、洗涤后悬浮于含10%AB血清的RPMI1640中。培养：第一天培养加入-IFN1000U/ml，24小时后加入IL-21000U/ml，在37，5%CO2孵箱中培养。以后每3天更换培养液补加IL-21000U/ml；培养710天。无菌检测：细菌霉菌培养阴性；热源检测阴性。收获：收集细胞，加入含1%白蛋白的生理
56、盐水洗涤三遍。110肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识111肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识112肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识CIK治疗回输：洗涤后的细胞悬浮于1%白蛋白生理盐水中，将CIK细胞通过输血器经静脉输给患者。疗程：培养的第8-10天开始，分四次回输，每次间隔1-2天。自回输CIK细胞前一天起,连续每日静脉输注IL-2，每日剂量为100万单位直到回输结束。113肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识观察指标1、CIK培养前后免疫标志检测（包括CD3、CD4、CD8、CD3CD56等）2、CIK回输前后患者外周血免疫标志检测（包括CD3、CD4、CD8、CD3CD56等）3、CIK
57、细胞回输前后患者不良反应的观察。114肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识115肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识临床应用体内回输CIK细胞,可以在没有损伤机体免疫系统结构和功能的前提下,直接杀伤肿瘤细胞,并可调节和增强机体的免疫功能。特别适应于那些对手术、放疗、化疗已无适应证的晚期肿瘤患者,因而成为治疗肿瘤的重要辅助治疗方法,为预防肿瘤复发、改善生存质量提供了新途径。一般在放疗、化疗后间隔24周,机体免疫力有所恢复时,输入CIK细胞,可提高肿瘤患者的缓解率并在清除微小残留病灶方面发挥重要作用。116肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识Combinedtranscatheterarterialch
58、emoembolizationandcytokineinducedkillersforhepatocellularcarcinoma67patientswithhepatocellularcarcinoma21patientsweretreatedwithTACE+CIK46patientsweretreatedwithTACEonly.Result:Themediansurvivalperiodofcontrolledgroupandobservedgroupis22months(95%C7,37),10months(95%C8,12)respectively.Thesix-month,on
59、eyear,andtwoyearslivingrateswere85.71%,58.35%,48.62%and69.05%,32.74%,3.97%respectively117肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识Kaplan-Meieranalysissurvivalfor67hepatocellularcarcinoma118肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识典型病例典型病例患者，男，61岁，于2009.6.25因“右上腹闷痛1周”住我院，入院查B超:右肝实性占位（结合临床：倾向原发性肝癌）伴门脉癌栓形成。MRI(NO.9401):1.右肝占位，考虑肝硬化恶变并门脉癌栓形成，肿瘤大小约：11
60、.2x6cm。2.脾肿大并少量腹水3.双肾囊肿。AFP:204628ng/ml。诊断为：1.原发性肝癌伴门脉主干癌栓（IIIA期）2.乙肝后肝硬化3.右肺错构瘤术后4.C7、T9局部骨质缺损。入院后予2009.6.29、2009.7.22、2009.8.24行介入治疗，共用FUDR3.0、艾恒600mg。同时配合CIK细胞免疫疗法。2009.8.31复查AFP:49249ng/ml。MRI:1.原发性肝癌介入治疗后较前好转，部分病灶存活，肿瘤大小约：6.4x4.88cm。疗效评价：好转。119肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识典型病例典型病例患者，男，38岁，于2008.10.24以“反复腹胀
61、痛1月”为主诉就诊我院。当时B超、CT:右肝多发实性占位，考虑原发性肝癌（最大者大小约11.4x10.2x15cm），门脉高压并脾肿大；AFP:375.3ng/ml，AFP-L3:18.5；肝穿细胞学见肝细胞癌。分别于2008.10.31、2008.11.30、2009.1.6、2009.2.23，2009.6.22行肝动脉化疗栓塞术，共用泽菲7.2，艾恒900mg，碘化油93ml，治疗后出现栓塞后综合症，对症处理后缓解。期间配合CIK免疫治疗2疗程。v2009.8.19复 查AFP:2.79ng/ml，MRI：肝癌介入治疗后：肿瘤存活区域较前缩小。120肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识典型
62、病例典型病例患者，男，51岁。2003.2.21因“右上腹闷痛”在外院查彩超示：肝右后下段占位性病变，约3.0cm。AFP1274ng/ml。拟诊“原发性肝癌硬化型”，在上海逸仙医院行“肝右叶部分切除术”。术后病理：肝细胞癌分化中等伴坏死,癌旁腺管内见癌栓。2003.4.21复查AFP51.79ng/ml，我院行TACE术，予“脱氧氟尿苷、0.75、顺铂60mg、表阿霉素20mg”肝动脉灌注；另“表阿霉素30mg+碘油5ml”，其中4ml肝右动脉、余1ml肝左动脉灌注。于2003.5.31、2003.6.6复查AFP分别为255ng/ml、309ng/ml。遂于2003.6.19再行TACE术
63、，予“表阿霉素40mg+碘油5ml”肝固有动脉灌注。术后复查AFP正常。2003.6、2003.8、2003.10、2003.12分别给予CIK一疗程（隔天一次，共4次）配合白介素-2免疫治疗，无明显反应。2004.5，2005.3，2005.11分别行3疗程的CIK治疗。目前身体状况良好，每半年复查1次，各项指标均正常，未做其他治疗。2009.5.21检查，乙肝病毒DNA500拷贝数/毫升，甲胎蛋白2.07ng/ml，甲胎蛋白异质体25ng/ml，肝功正常。121肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识典型病例典型病例患者，女，52岁。于2003.08在我院诊断为“左乳腺癌”，行左乳腺癌改良根治术
64、，期间查CT示：肝内多发肝硬化结节。2005.03在福州军区总医院查PET/CT示：肝右叶内异常代谢灶，考虑恶性肿瘤。后在 上 海 中 山 医 院 诊 断 为 ”肝 癌 “， 查 AFP 2603ng/ml，2005.3.17行TACE术1次，用FUDR1000mg，艾恒200mg，EADM50mg，碘油10ml。2005.4.15在我院复查肝CT示：肝内多发病变（最大约8.0cmX5.0cm）介入治疗后，血AFP28.9ng/ml。于2005.4、2005.7、2005.10行CIK免疫治疗3疗程。其间2005.8查AFP1.16ng/ml。2007.4、2008.11分别给予CIK一疗程，
65、目前身体状况良好，每3个月复查1次，各项指标均正常。2009.4.8检查，甲胎蛋白0.61ng/ml，肝功正常，但CEA4.08ng/ml，CA153正常。122肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识CIK输注不良反应免疫活性细胞回输后患者可出现一过性类流感样症状，如发热（体温37.539.5），轻度头痛、乏力、关节酸痛，持续时间均不超过12h，可自行缓解，所有患者均能很好耐受治疗。123肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识由于该治疗技术能在一定程度上打破免疫耐受、进而清除病毒和肿瘤细胞，成为主要的抗肿瘤细胞疗法。2001年CIK疗法作为经常性医疗项目，进入全国医疗服务价格项目规范。目前在我省也列入
66、各级医保项目。124肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识6、DC-CIKMarten等将外周血来源的CIK细胞和同源DC细胞共培养一段时间后发现,DC和CIK细胞的增殖能力明显增强,共培养14d后CIK细胞的增殖倍数比共培养7d时高出2倍左右。共培养24h后,DC细胞白细胞介素12的分泌量为单独培养时的6.93倍,与DC细胞共培养的CIK细胞对肿瘤细胞的杀伤活性显著提高。在当前对肿瘤特异性抗原了解相对较少的情况下,应用DCCIK细胞作为肿瘤放化疗和手术后的辅助治疗有重要临床意义。125肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识7、NK细胞是机体固有免疫的重要成员，它的作用不仅是参与免疫巡逻并向宿主“报告
67、”损伤，还有其内在的抗肿瘤活性，包括溶解肿瘤细胞和释放细胞因子或阻断血管发生以阻碍肿瘤生长。126肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识NK细胞受体和配体细胞受体和配体127肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识MICA分子MIC (MHC class I-related molecules,MIC)为MHC-I类相关分子人类MIC家族共有7个基因( MICAMICG)与经典的HLA基因产物相比MICA的表达不受HLA-I类和II类的限制128肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识MICA分子 NKG2DMICANKcellTumorcell乳腺癌患者：乳腺癌患者：恶性组织：（恶性组织：（53.25.6）
68、%良性组织：（良性组织：（38.57.5）%正常组织：正常组织：不表达不表达129肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识因此，肿瘤细胞表面MICA存在是NK细胞杀伤肿瘤的重要分子机制。通过测定肿瘤细胞表面MICA的表达水平，可预测NK细胞为主的免疫治疗的疗效。换句话说，可以根据患者肿瘤组织MICA水平决定是否进行免疫治疗或采取何种免疫治疗，避免了盲目性。美国已经开始该方面的临床治疗研究130肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识（三）、过继性免疫效应细胞治疗的优点(1)免疫细胞在体外处理，可绕过体内肿瘤免疫障碍的种种机制，从而选择性地操作抗肿瘤免疫反应:如新鲜分离的肿瘤浸润性淋巴细胞（tumorinf
69、iltratinglymphocyte，TIL）往往缺乏抗肿瘤效应，而在体外一定条件下培养一段时间后可恢复特异性抗肿瘤作用；在体外培养条件下，肿瘤抗原特异性耐受的免疫细胞可被逆转。131肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识(2)免疫细胞的活化及效应过程往往由一些细胞因子介导，而目前基因工程可大量克隆不同的细胞因子，也可大量克隆肿瘤抗原或多肽，这使体外活化扩增大量的抗肿瘤免疫细胞更为可行方便。132肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识(3)免疫细胞的体外活化扩增可避免一些制剂体内大量应用带来的严重毒副作用，如:IL2、TNF、IL4、IL7、IL12等具有抗肿瘤作用，抗CD3单克隆抗体(MabCD3
70、)的体内应用可激活T淋巴细胞，但这些制剂由于其复杂的多种作用，在体内大量应用可导致严重的甚至致死性副作用，这也是这些因子难以被批准临床使用的重要原因，而在体外操作可避免这些副作用。133肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识(4)目前已能在体外大量扩增自体或异基因的抗肿瘤免疫细胞，其数量大于肿瘤疫苗在体内激活的效应细胞数，一些体外培养的免疫细胞已进入临床治疗试验。实验显示肿瘤疫苗在体内应用可增加体内的肿瘤特异性CTL数量，但到一定时候，体内的CTL到达平台期而不再增加，这主要由体内存在的特异性及非特异性免疫调节网络限制了CTL克隆的扩增。而在体外培养可突破此调节网络，大量扩增免疫效应细胞。134肿
71、瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识理想的过继性免疫细胞治疗应具有以下特点:(1)可大量获得，实验室研究及临床实践显示，临床治疗量的免疫细胞应在11010以上(2)为肿瘤特异性(3)抗肿瘤活性强(4)体内应用可耐受(5)可聚集在肿瘤灶(6)可在体内存活、增殖135肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识四、免疫治疗的作用四、免疫治疗的作用肿瘤免疫治疗即能够直接清除体内的残存肿瘤细胞，又能够提高机体的整体免疫功能，还具有将患者个体化的肿瘤抗原信息递呈给体内肿瘤免疫杀伤细胞的独特作用。肿瘤免疫治疗已成为临床上继手术、化疗、放疗之后的第四种最有效的肿瘤治疗方法。在肿瘤综合治疗方案中，免疫治疗成为提高肿瘤治愈率
72、和有效率的一个关键措施。136肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识五、免疫治疗的原则虽然目前免疫治疗的方法还不是很有效的，只能配合其他疗法作为一种辅助手段。但从肿瘤免疫的理论看，它涉及的是肿瘤发生发展的内部因素和内部矛盾性。随着它的迅速发展，为肿瘤的免疫治疗提出了广泛的可能。从宿主与肿瘤相互斗争这一矛盾出发，从增强宿主对肿瘤的免疫能力，以及消除肿瘤对免疫功能的抑制两个方面入手，并继续在增强机体非特异性免疫能力方面进行研究，肿瘤的免疫治疗是大有希望的。137肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识(1)增强宿主对肿瘤的免疫能力：1）提纯改造抗原，提高抗原的免疫作用2）发挥细胞免疫的作用进行过继免疫治疗3
73、）利用细胞因子激活抗肿瘤免疫4）抗体导向治疗（2）消除肿瘤对免疫的对抗如何清除免疫抑制因子的作用，是肿瘤免疫治疗很有希望的一个方面。138肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识六、免疫治疗的评价1、临床评价：病灶变化-临床查体和影像学检查（CT、MRI、B超、等）内镜检查肿瘤标志物肝功、肾功、血象等的改善其他139肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识2、免疫监测-观察CTL的反应、认定CTL反应的细胞类型、等，从而评价机体对免疫治疗的反应1）迟发超敏试验（DTH）-体内抗原特异性免疫监测技术2）机体免疫功能检测体液免疫指标：定量分析抗原特异性抗体的数量和功能检验科细胞免疫功能：FCM技术检测淋巴细胞
74、表面标志CD3、CD4、CD8、CD19、CD28、CD16/CD56、CD25、HLA-DR、等等。内研室Th1、Th2类因子检测：应用FCM-CBA技术，采用磁珠微阵列技术，同时测定血清中46种免疫相关因子的水平内研室140肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识3）T细胞增殖反应-3H测定法4）T细胞毒性检测：51Cr释放试验LDHMTT（WST-1）5）T细胞限制性稀释分析法（LDA）-分析未知频率的淋巴细胞克隆、定量检测外周血中最初抗原T特异性淋巴细胞的数目或频率。操作复杂，被ELISPOT等新技术所取代141肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识6）细胞因子检测-测定T淋巴细胞分泌的因子ELISA（酶联免疫技术）-检测T淋巴细胞分泌于细胞外的因子ELISPOT（酶联免疫斑点技术）-检测T淋巴细胞分泌于细胞外的因子FCM（流式细胞术）-检测T淋巴细胞胞内细胞因子142肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识7）其他P-MHCtetramer技术-检测细胞表面受体（TCR）与MHC分子递呈的多肽的相互作用定量PCR技术-检测细胞因子基因、T细胞受体复合物基因等表达水平，反应T淋巴细胞功能状态143肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识谢 谢144肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识此课件下载可自行编辑修改，供参考！感谢您的支持，我们努力做得更好！145肿瘤免疫治疗肿瘤生物治疗学基础知识
