《DNA的限制性酶谱分析实用教案》由会员分享，可在线阅读，更多相关《DNA的限制性酶谱分析实用教案（14页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、一一. 实验目的实验目的 通通过过本本实实验验了了解解(lioji)限限制制性性内内切切酶酶的的作作用用原原理理，限限制制性性酶酶切切技技术术及及限限制制性性酶酶切切图图谱谱的的分分析析方法。方法。 第1页/共13页第一页，共14页。二二. 实验原理实验原理限限制制性性内内切切酶酶是是一一类类(y li)能能识识别别并并切切割割双双链链DNA分分子子中中特特定定核核苷苷酸酸序列的核酸内切酶。序列的核酸内切酶。 第2页/共13页第二页，共14页。限制性酶切反应体系的组成限制性酶切反应体系的组成(z chn)1，DNA2，缓冲液，缓冲液提供限制性酶作用所需的离子浓度及种类；提供限制性酶作用所需的离
2、子浓度及种类；提供限制性酶作用所需的提供限制性酶作用所需的 pH值值3，限制性内切酶，限制性内切酶第3页/共13页第三页，共14页。限制性酶切图谱限制性酶切图谱限制性酶切图谱限制性酶切图谱(tp)(tp)的分析的分析的分析的分析DNA在限制性酶切后往往会形成多条片段，在限制性酶切后往往会形成多条片段，从片段的数量和大小大致可以从片段的数量和大小大致可以(ky)推断推断DNA限制性酶切位点的多少及相对位置。限制性酶切位点的多少及相对位置。我们往往利用我们往往利用DNA分子量分子量Marker读出酶切片读出酶切片段的大小。段的大小。第4页/共13页第四页，共14页。DNADNA分子量分子量Mark
3、erMarker100 bp Marker 100 bp Marker 第5页/共13页第五页，共14页。三三. 实验实验(shyn)方法方法1在在0.5 ml 离离心心管管中中混混和和如如下下试试剂：剂： DNA： 4 l10酶切缓冲液：酶切缓冲液： 2 l无菌水：无菌水： 13 lHindIII： 1 l237水浴水浴 45 min 第6页/共13页第六页，共14页。3 3 3 3取取15l15l15l15l反应液，反应液，1 1 1 1琼脂糖凝胶电泳检测，同琼脂糖凝胶电泳检测，同时以时以 DNA DNA DNA DNA（EcoRI/HindIIIEcoRI/HindIIIEcoRI/Hi
4、ndIIIEcoRI/HindIII）作为分子量）作为分子量MarkerMarkerMarkerMarker4.4.4.4.记录记录(jl)(jl)(jl)(jl)实验结果：对照分子量实验结果：对照分子量MarkerMarkerMarkerMarker，记，记录录(jl)(jl)(jl)(jl)所得片段的数量和大小，并分析所得片段的数量和大小，并分析 DNA DNA DNA DNA有几个有几个HindIIIHindIIIHindIIIHindIII酶切位点酶切位点第7页/共13页第七页，共14页。第8页/共13页第八页，共14页。第9页/共13页第九页，共14页。第10页/共13页第十页，共14页。第11页/共13页第十一页，共14页。第12页/共13页第十二页，共14页。感谢您的观看(gunkn)！第13页/共13页第十三页，共14页。内容(nirng)总结一. 实验目的。限制性内切酶是一类能识别并切割双链DNA分子中特定核苷酸序列的核酸内切酶。DNA在限制性酶切后往往会形成多条片段，从片段的数量和大小(dxio)大致可以推断DNA限制性酶切位点的多少及相对位置。100 bp Marker。1在0.5 ml 离心管中混和如下试剂：。10酶切缓冲液： 2 l。237水浴 45 min。第12页/共13页。感谢您的观看。第13页/共13页第十四页，共14页。
