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1、动物动物(dngw)细细胞培养胞培养动物动物(dngw)细细胞融合胞融合生产生产(shngchn)单克隆抗体单克隆抗体核移植技术核移植技术动物动物细胞细胞工程工程技术技术其他动物细胞工程技术的基础第1页/共24页第一页，共25页。2.2.1动物(dngw)细胞培养和核移植技术第2页/共24页第二页，共25页。动物(dngw)细胞培养技术 （一）、概念（一）、概念(ginin)(ginin) 是指从动物机体内取出相关的组织，将是指从动物机体内取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。让这些细胞生长和增殖。（二 ）、
2、过程(guchng)第3页/共24页第三页，共25页。转入培养液中进行(jnxng)原代培养第4页/共24页第四页，共25页。相关的概念：相关的概念： 1 1 细胞贴壁：细胞贴壁：悬液中分散的细胞贴附在瓶壁上生长悬液中分散的细胞贴附在瓶壁上生长的特点的特点 2 2 接触抑制：接触抑制：贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖的现象细胞就会停止分裂增殖的现象 3 3 原代培养：原代培养：人们通常将动物组织消化人们通常将动物组织消化(xiohu)(xiohu)后后的初次培养。的初次培养。第5页/共24页第五页，共25页。归纳归纳(gun)：取取 的组
3、织的组织(zzh)(zzh)、器、器官官细胞细胞(xbo)悬浮液悬浮液 酶酶 贴满瓶壁的细胞贴满瓶壁的细胞单个细胞单个细胞动物胚胎或幼龄动物动物胚胎或幼龄动物胰蛋白胰蛋白加入培养液培养加入培养液培养 传代培养传代培养原代培养原代培养第6页/共24页第六页，共25页。思考题：思考题：1 1、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官(qgun)(qgun)或组织做动物细胞培养材料？或组织做动物细胞培养材料？2 2、为什么培养前要将组织细胞分散、为什么培养前要将组织细胞分散(fnsn)(fnsn)成单个细胞？成单个细胞？因为这些因为这些(zhxi)(zhxi)组织或器官
4、，分裂能力旺盛，易于组织或器官，分裂能力旺盛，易于培养。培养。成块组织使细胞靠在一起限制了细胞的生长和增殖，且成块组织使细胞靠在一起限制了细胞的生长和增殖，且细胞不能与培养液充分接触，不利于培养。细胞不能与培养液充分接触，不利于培养。第7页/共24页第七页，共25页。3、胰蛋白酶的作用是什么、胰蛋白酶的作用是什么(shn me)呢？由此可呢？由此可说明细胞间的物质是什么说明细胞间的物质是什么(shn me)成份？成份？催化蛋白质水解。细胞间的物质催化蛋白质水解。细胞间的物质(wzh)(wzh)主要是蛋白主要是蛋白质质( (胶原蛋白等胶原蛋白等) )。4、细胞膜的主要成份、细胞膜的主要成份(ch
5、ng fn)是什是什么？么？蛋白质和磷脂蛋白质和磷脂5、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？能能第8页/共24页第八页，共25页。6 6、既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动物组、既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动物组织分散成单个细胞要注意什么织分散成单个细胞要注意什么(shn me)(shn me)问题呢问题呢？7 7、能够用胃蛋白酶、能够用胃蛋白酶(wi dn bi mi)(wi dn bi mi)代替胰代替胰蛋白酶吗？为什么？蛋白酶吗？为什么？注意注意(zh y)时间的控制时间的控制 不能，因为两者的最适不能，因为两者的最适PHPH不同，而正常组织细胞的生存不同，而正常组
6、织细胞的生存环境与胰蛋白酶的最适环境与胰蛋白酶的最适PHPH较接近较接近第9页/共24页第九页，共25页。1 1 、 无 菌 、 无 毒 的 环 境 ( h u n j n g )( h u n j n g ) 保证细胞(xbo)顺利的生长增殖（添加一定量的抗生素，定期（添加一定量的抗生素，定期(dngq)更换培养液）更换培养液）（葡萄糖、氨基酸、促生长因子（葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元无机盐、微量元素素、 维生素、动物血清等。）维生素、动物血清等。）（四）、动物细胞培养的条件（四）、动物细胞培养的条件2 2、营养、营养第10页/共24页第十页，共25页。3 3、温度(wnd)(
7、wnd)和PHPH 哺乳动物哺乳动物(brdngw)(brdngw)：36.5 0.5, 36.5 0.5, 多数细胞多数细胞PH: 7.27.4PH: 7.27.4 培养箱中提供培养箱中提供(tgng)O2(tgng)O2和和CO2CO2（95%95%空气和空气和5% CO2 5% CO2 ）4、气体环境：、气体环境：第11页/共24页第十一页，共25页。细胞细胞(xbo)(xbo)的的全能性全能性大量大量(dling)(dling)的细胞的细胞植物体或组织植物体或组织(zzh)(zzh)培养结果培养结果葡萄糖、动物血清葡萄糖、动物血清蔗糖、植物激素蔗糖、植物激素培养基特有成分培养基特有成分
8、液体培养基液体培养基固体培养基固体培养基培养基性质培养基性质细胞增殖细胞增殖原理原理动物细胞培养动物细胞培养植物组织培养植物组织培养比较项目比较项目植物组织培养和动物细胞培养的比较植物组织培养和动物细胞培养的比较第12页/共24页第十二页，共25页。1、许多有重要价值的蛋白质生物制品，如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等，都可以借助于动物细胞(xbo)的大规模培养来生产。2、用取自烧伤病人皮肤的健康细胞(xbo)进行培养，可以获得大量自身的皮肤细胞(xbo)，为大面积烧伤的病人移植。3、培养的动物细胞(xbo)用于检测有毒物质。4、医学家培养各种正常的或病变的细胞(xbo)，用于生理、病理、药理等
9、方面的研究。（五）、动物（五）、动物(dngw)(dngw)细胞培养技细胞培养技术的应用术的应用第13页/共24页第十三页，共25页。第14页/共24页第十四页，共25页。（一）、概念(ginin)： 将动物将动物(dngw)(dngw)的一个细胞的细胞核的一个细胞的细胞核, ,移如入一个已移如入一个已经去核的卵母细胞中经去核的卵母细胞中. .使其重组并发育成一个新的胚使其重组并发育成一个新的胚胎胎, ,这个新的胚胎最终发育为动物这个新的胚胎最终发育为动物(dngw)(dngw)个体个体. .克隆动物克隆动物(dngw)：用核移植的方法得到的动物：用核移植的方法得到的动物(dngw)。动物细胞
10、核移植第15页/共24页第十五页，共25页。（二）、分类（二）、分类(fn li)：胚胎细胞核移植胚胎细胞核移植：体细胞核移植体细胞核移植：细胞分化程度细胞分化程度(chngd)低，恢低，恢复复全能性容易全能性容易 细胞分化程度高，恢复细胞分化程度高，恢复(huf)全能性困难全能性困难第16页/共24页第十六页，共25页。体细胞的核移植过程(guchng)第17页/共24页第十七页，共25页。（四）、体细胞核移植技术的应用(yngyng)前景 1、在畜牧业中可以加速家畜遗传改良的进程、在畜牧业中可以加速家畜遗传改良的进程(jnchng)，促进优良畜群繁育。，促进优良畜群繁育。2、保护、保护(b
11、oh)濒濒危物种危物种3、转基因克隆动物可以、转基因克隆动物可以作为生物反应器来生产作为生物反应器来生产医用蛋白质，另外还可医用蛋白质，另外还可以作为组织器官的移植以作为组织器官的移植的供体的供体第18页/共24页第十八页，共25页。（五）、体细胞核移植技术(jsh)(jsh)存在的问题 1、成功率底下。2、绝大多数的克隆动物存在着畸形(jxng)率高、死亡率高、易出现早衰等问题。3、克隆动物的食品安全性问题存在着争议。第19页/共24页第十九页，共25页。 2 2、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞是是 （ ） A A获得获得(hud)(h
12、ud)不死性的细胞不死性的细胞 B B1010代以内细胞代以内细胞 C C原代细胞原代细胞 D D传代细胞传代细胞1 1、动物细胞工程技术的基础是、动物细胞工程技术的基础是 （ ） A. A.动物细胞融合动物细胞融合 B. B.单克隆抗体单克隆抗体(kngt)(kngt) C. C.胚胎移植胚胎移植 D. D.动物细胞培养动物细胞培养A AD D课堂课堂(ktng)反馈反馈练习练习第20页/共24页第二十页，共25页。3 3、在动物细胞培养的有关叙述中正确的是：（、在动物细胞培养的有关叙述中正确的是：（ ）A A、动物细胞培养的目的只是为了、动物细胞培养的目的只是为了(wi le)(wi le
13、)获得大量的获得大量的细胞细胞 分泌蛋白分泌蛋白B B、动物细胞培养前要用胰蛋白酶使细胞分散、动物细胞培养前要用胰蛋白酶使细胞分散C C、细胞的癌变发生在原代培养向传代培养的过渡、细胞的癌变发生在原代培养向传代培养的过渡 过过程中程中D D、培养至、培养至5050代后传代细胞遗传物质没有发生改变代后传代细胞遗传物质没有发生改变B B第21页/共24页第二十一页，共25页。4 4、一般说来，动物细胞体外培养需要满足、一般说来，动物细胞体外培养需要满足(mnz)(mnz)以下条件（以下条件（ ）无毒的环境无毒的环境(hunjng) (hunjng) 无菌的环境无菌的环境(hunjng) (hunj
14、ng) 培养基需要加入血清培养基需要加入血清 温度与动物体温相似温度与动物体温相似 需要需要O2O2，不需要，不需要CO2 CO2CO2 CO2能调节培养液能调节培养液PHPHA A、 B B、 C C、 D D、 D D第22页/共24页第二十二页，共25页。5 5、下图是动物细胞培养的基本过程示意图。请据此回、下图是动物细胞培养的基本过程示意图。请据此回答：答：（1 1）容器）容器(rngq)A(rngq)A中放置的是动物器官或组织。它中放置的是动物器官或组织。它一般取自一般取自_。（2 2）容器）容器(rngq)A(rngq)A中的动物器官或组织首先要进行中的动物器官或组织首先要进行的处
15、理是的处理是 ，然后用，然后用 酶处理，这是酶处理，这是为了使细胞分散开来，这样做的目的是为了使细胞分散开来，这样做的目的是 。动物动物(dngw)胚胎或幼胚胎或幼龄动物龄动物(dngw)剪碎剪碎胰蛋白胰蛋白(dnbi)使细胞与培养液充分接触，便于培养使细胞与培养液充分接触，便于培养第23页/共24页第二十三页，共25页。谢谢您的观看(gunkn)！第24页/共24页第二十四页，共25页。内容(nirng)总结动物细胞培养。悬液中分散的细胞贴附在瓶壁上生长(shngzhng)的特点。贴壁细胞分裂生长(shngzhng)到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖的现象。因为这些组织或器官，分裂能力旺盛，易于培养。6、既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动物组织分散成单个细胞要注意什么问题呢。1、无菌、无毒的环境。3、转基因克隆动物可以作为生物反应器来生产医用蛋白质，另外还可以作为组织器官的移植的供体。2、绝大多数的克隆动物存在着畸形率高、死亡率高、易出现早衰等问题第二十五页，共25页。
