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1、一、课题目标一、课题目标研究培养基对微生物的选择作用，进行微生物数量的研究培养基对微生物的选择作用，进行微生物数量的测定。测定。二、课题重点与难点二、课题重点与难点课题重点：对土样的选取和选择培养基的配制。课题重点：对土样的选取和选择培养基的配制。课题难点：对分解尿素的细菌的计数。课题难点：对分解尿素的细菌的计数。（一）筛选菌株（一）筛选菌株微生物的选择培养，是指利用培养基的组成使适宜生微生物的选择培养，是指利用培养基的组成使适宜生长的特定微生物得到较快繁殖的技术，也称为微生物长的特定微生物得到较快繁殖的技术，也称为微生物的的“选择培养选择培养”。在本课题提供的选择培养基的配方中，。在本课题提
2、供的选择培养基的配方中，尿素是培养基中的惟一氮源，因此，原则上只有能够尿素是培养基中的惟一氮源，因此，原则上只有能够利用尿素的微生物才能够生长。但实际上，微生物的利用尿素的微生物才能够生长。但实际上，微生物的培养是一个非常复杂的问题，有些微生物可以利用其培养是一个非常复杂的问题，有些微生物可以利用其他微生物的代谢产物生长繁殖，因此能够在选择培养他微生物的代谢产物生长繁殖，因此能够在选择培养基上生长的微生物不一定是所需要的微生物，还需要基上生长的微生物不一定是所需要的微生物，还需要进一步的验证。进一步的验证。1.想一想，如何从平板上想一想，如何从平板上的菌落数推测出每克样品的菌落数推测出每克样品
3、中的菌落数？中的菌落数？答：统计某一稀释度下平答：统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能统板上的菌落数，最好能统计计3个平板，计算出平板个平板，计算出平板菌落数的平均值，然后按菌落数的平均值，然后按课本旁栏的公式进行计算。课本旁栏的公式进行计算。（二）统计菌落数目（二）统计菌落数目统计菌落数目的理论依据是：当样品的稀释度足够统计菌落数目的理论依据是：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。因此，恰当的稀释度是成功地释液中的一个活菌。因此，恰当的稀释度是成功地统计菌落数目的关键。为了保证结果准确，通常将统计菌落数
4、目的关键。为了保证结果准确，通常将几个稀释度下的菌液都涂布在平板上，培养后再选几个稀释度下的菌液都涂布在平板上，培养后再选择菌落数在择菌落数在30300的平板进行计数。的平板进行计数。实例是为了说明实例是为了说明设置重复组设置重复组的重要性。第一位同学的重要性。第一位同学只涂布了一个平板，没有设置重复组，因此结果不只涂布了一个平板，没有设置重复组，因此结果不具有说服力。第二位同学考虑到设置重复组的问题，具有说服力。第二位同学考虑到设置重复组的问题，涂布了涂布了3个平板，但是，其中个平板，但是，其中1个平板的计数结果与个平板的计数结果与另另2个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，个相差太远
5、，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地将因此，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。个平板的计数值用来求平均值。这个实例启示学生，在设计实验时，一定要涂布至这个实例启示学生，在设计实验时，一定要涂布至少少3个平板，作为重复组，才能增强实验的说服力与个平板，作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性。在分析实验结果时，一定要考虑所设置的准确性。在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组的结果是否一致，结果不一致，意味着操作重复组的结果是否一致，结果不一致，意味着操作有误，需要重新实验。有误，需要重新实验。A同学的结果与其他同学不同，可能的解释有两种。同学的结果与其他同学不同，可能的
6、解释有两种。一是由于土样不同，二是由于培养基污染或操作失误。一是由于土样不同，二是由于培养基污染或操作失误。究竟是哪个原因，可以通过实验来证明。实验方案有究竟是哪个原因，可以通过实验来证明。实验方案有两种。一种方案是可以由其他同学用与两种。一种方案是可以由其他同学用与A同学一样的同学一样的土样进行实验，如果结果与土样进行实验，如果结果与A同学一致，则证明同学一致，则证明A无无误；如果结果不同，则证明误；如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培同学存在操作失误或培养基的配制有问题。另一种方案是将养基的配制有问题。另一种方案是将A同学配制的培同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对
7、照，养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。通过这个事例可以看出，以证明培养基是否受到污染。通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。2.为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？测为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？的数量，选用的稀释范围相同吗？答：这是因为土壤中各类微生物的数量（单位：株答：这是因为土壤中各类微生物的数量（单位：株/kg）是不同的，例如在干旱土壤中
8、的上层样本中：）是不同的，例如在干旱土壤中的上层样本中：好氧及兼性厌氧细菌数约为好氧及兼性厌氧细菌数约为2 185万，放线菌数约为万，放线菌数约为477万，霉菌数约为万，霉菌数约为23.1万。因此，为获得不同类型万。因此，为获得不同类型的微生物，就需要按不同的稀释度进行分离，同时还的微生物，就需要按不同的稀释度进行分离，同时还应当有针对性地提供选择培养的条件。应当有针对性地提供选择培养的条件。（一）培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出菌（一）培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出菌落落对照的培养皿在培养过程中没有菌落生长，说明培养基没有被对照的培养皿在培养过程中没有菌落生长，
9、说明培养基没有被杂菌污染。牛肉膏培养基的菌落数目明显大于选择培养基的数杂菌污染。牛肉膏培养基的菌落数目明显大于选择培养基的数目，说明选择培养基已筛选出一些菌落。目，说明选择培养基已筛选出一些菌落。如果得到了如果得到了2个或个或2个以上菌落数目在个以上菌落数目在30300的平板，则说明的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数。稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数。如果学生选取的是同一种土样，统计的结果应该接如果学生选取的是同一种土样，统计的结果应该接近。如果结果相差太远，教师需要引导学生一起分近。如果结果相差太远，教师需要引导学生一起分析产生差异的原因。析产生差异的原因。提示：反刍动物的瘤胃中含有大量的微生物，其中也包括分提示：反刍动物的瘤胃中含有大量的微生物，其中也包括分解尿素的微生物。由于瘤胃中的微生物多为厌氧菌，接触空解尿素的微生物。由于瘤胃中的微生物多为厌氧菌，接触空气后会死亡，因此分离其中能分解尿素的微生物除了需要准气后会死亡，因此分离其中能分解尿素的微生物除了需要准备选择培养基外，还应参照厌氧菌的培养方法进行实验设计。备选择培养基外，还应参照厌氧菌的培养方法进行实验设计。
