《免疫标记技术第1节免疫标记技术的基本概念》由会员分享，可在线阅读，更多相关《免疫标记技术第1节免疫标记技术的基本概念（55页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、免疫标记技术第1节免疫标记技术的基本概念 第一第一节节 免疫免疫标记标记技技术术的基本概念的基本概念一、免疫标记与标记免疫的概念二、常用的免疫标记物质 免疫免疫标记标记与与标记标记免疫免疫免疫免疫标记标记技技术术：标记物与免疫活性物质的联接技术标记标记免疫技免疫技术术：以标记免疫物质检测相应靶物质的技术常用的免疫常用的免疫标记标记物物质质类别 标记物 用途荧光素 FITC、RB200、TRITC 免疫组化 镧系元素螯合物 免疫分析测定放射性核素 3H、14C、32P、57Gr 免疫分析测定 125I、131I酶 HRP、AP 免疫组化 免疫分析测定化学发光物 Luminol、lucigenin
2、 免疫分析测定金属颗粒 胶体金、铁蛋白 免疫组化 免疫分析测定 第二第二节节 酶酶标记标记技技术术一、常用标记方法二、标记免疫物的分离与鉴定常用常用标记标记方法方法1、常用酶 辣根过氧化物酶（HRP） 碱性磷酸酶（AP）2、标记方法 戊二醛交联法 过碘酸盐氧化法戊二戊二醛醛交交联联法法 (一步法）一步法）抗体-NH2 + COH-（CH2）3-COH + NH2-酶抗体-NH2 =CH-（CH2）3-CH = NH2-酶抗体-NH2 =CH-（CH2）3-CH = NH2-抗体酶-NH2 =CH-（CH2）3-CH = NH2-酶戊二戊二醛醛交交联联法（二步法）法（二步法）COH-（CH2）3
3、-COH + NH2-酶抗体-NH2 + CHO-（CH2）3-CH = NH2-酶抗体-NH2 =CH-（CH2）3-CH = NH2-酶过过碘酸碘酸盐盐氧化法氧化法OOOOOONaIO4OOOHOOOHOH+ NH2抗体OOONN抗体抗体H2ON抗体NaBH4Schiff碱酶-五炭糖环标记标记免疫物的分离与免疫物的分离与鉴鉴定定1、分离 目的：去除游离酶 方法：盐析、柱层析2、鉴定 抗体活性 酶活性 标记物纯度 第三第三节节 荧荧光光标记标记技技术术一、常用标记方法二、标记免疫物的分离与纯化常用常用标记标记方法方法1、荧光素的概念2、生物标记荧光素的要求3、常用荧光素标记原理与方法 生物生
4、物标记荧标记荧光素的要求光素的要求1、具有与蛋白质共价结合的能力2、荧光效率高3、能与背景物质形成鲜明对比4、不影响蛋白质的生物、免疫活性5、标记方法安全、简便6、标记物稳定，易保存FITCFITC的的标记标记原理与方法原理与方法荧光素-N=C=S + NH2-抗体荧光素-N-C-N-抗体H S HRB200RB200的的标记标记原理与方法原理与方法荧光素-SO3Na + PCl5荧光素-SO2 Cl + PCl3 + NaCl荧光素-SO2 Cl + NH2-抗体 荧光素-SO2 -NH-抗体 + HCl 标记标记免疫物的分离与免疫物的分离与鉴鉴定定1、分离 目的：去除游离荧光素 方法：柱层
5、析2、鉴定 抗体活性 标记物结合度 F/P比值的应用意义 第四第四节节 放射性核素放射性核素标记标记技技术术一、常用标记方法二、标记免疫物的分离与纯化常用常用标记标记方法方法1、常用放射性核素2、125I 的标记方法 直接法（氯胺T法） 间接法（连接法）直接法（直接法（氯氯胺胺T T法）法）OH-NHCHONH-CH2OH-NHCHONH-CH2Na125I 4。C125I氯胺T间间接法（接法（连连接法）接法）CH2OHOH-C-C-O-N-C-CH2H O O=C-C-CH2CH2OHOH-C-C-O-N-C-CH2H O O=C-C-CH2+ Na125I氯胺T125INSHPP间间接法（
6、接法（连连接法）接法）CH2OHOH-C-C-O-N-C-CH2H O O=C-C-CH2CH2OHH-C-C-N-蛋白质H O H+ NH2-蛋白质125I125I标记标记免疫物的分离与免疫物的分离与鉴鉴定定1、分离 目的：去除游离放射性核素 方法：柱层析2、鉴定 游离放射性核素含量 免疫活性 比放射性（mCi/mg）应用意义本章小本章小结结1、免疫标记技术的概念2、常用免疫标记物质及其标记方法3、标记免疫物质的分离与鉴定思考思考题题1、何谓免疫标记技术？2、常用的免疫标记物质有哪些？3、酶标记的主要方法有哪些？4、F/P比值的实用意义如何？5、何谓比放射性？有何意义？ 第一第一节节 标记标
7、记免疫技免疫技术术的分的分类类一、按指示标记物质划分的类型二、按测定方式划分的类型三、按测定用途划分的类型1、酶免疫技术2、荧光免疫技术3、放射免疫技术4、发光免疫技术5、金免疫技术按指示按指示标记标记物物质质划分的划分的类类型型1、均相型（homogenous）2、非均相型（heterogeneous）按按测测定方式划分的定方式划分的类类型型均相型（均相型（homogenous）非均相型非均相型（heterogeneous）双双标记标记均相均相荧荧光免疫光免疫测测定定酶酶扩扩大免疫大免疫测测定技定技术术1、免疫测定技术2、免疫组化技术按按测测定用途划分的定用途划分的类类型型 第二第二节节 酶
8、酶联联免疫吸附免疫吸附试验试验一、ELISA技术的原理与方法二、 ELISA技术的操作注意要点ELISA技技术术的原理与方法的原理与方法间接法 夹心法 竞争法间间接法接法夹夹心法心法竞竞争法争法酶酶标仪标仪酶酶标仪标仪ELISA技技术术的操作注意要点的操作注意要点试剂器材操作环节 合适工作浓度 第三第三节节 荧荧光抗体技光抗体技术术一、荧光抗体技术的原理与方法二、荧光抗体技术的操作注意要点荧荧光抗体技光抗体技术术的原理与方法的原理与方法直接法间接法补体法双标记法 直接法间接法补体法双标记法荧荧光抗体技光抗体技术术的操作注意要点的操作注意要点标本处理染色操作 结果观测荧荧光光显显微微镜镜荧荧光光
9、显显微微镜镜使用原理使用原理激发滤片（BG）吸收滤片（OG）标本FITC吸收光峰值：490-495nm FITC发射光峰值：520-530nmBG：325-500 OG：410-650激激发滤发滤片片吸收吸收滤滤片片荧荧光光滤镜滤镜使用原理使用原理 第四第四节节 放射免疫放射免疫测测定技定技术术一、放射免疫测定技术的原理与方法二、放射免疫测定技术的操作注意要点结合相游离相放射免疫分析法的原理与方法放射免疫分析法的原理与方法1 2 5 10 20 50 10040302010未未标记标记抗原含量抗原含量结结合、合、游游离离相相放放射射性性含含量量比比值值液液闪仪闪仪计计数器数器放射免疫放射免疫测测定技定技术术的操作注意要点的操作注意要点反应的温度与时间结合相与游离相的分离免疫免疫标记标记技技术术的比的比较较 FIA ELISA RIA敏感性 较低 高 高特异性 高 高 高重复性 差 好 好检测对象 Ag/Ab Ag/Ab Ag本章小本章小结结1、标记免疫技术的类型2、ELISA技术的原理与方法3、荧光抗体技术的原理与方法4、RIA技术的原理与方法
