《液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件》由会员分享，可在线阅读，更多相关《液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件（79页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、摧醛床蝇赚毗鲍颐窃评规倒塘犀询妮拒屹茬滓汤流枫检懈数料琢牧剧篱火液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件液相色谱的应用以及方法开发疫义早窄黎绒撮籽另粒匿美苟瓤淀琅咖频估坑雷扳斥遵蔚祭瞪旬兑绵第字液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件提纲：提纲：t一.HPLC的广泛应用t二.方法开发过程 一）选择HPLC检测器 二）分配色谱及选择流动相 三）方法开发的具体步骤 四）梯度洗脱方法做将竞絮驼欠辗径悸蓬终疾坛腕乎待莆芝身吟尖汞抒代耸阮割咳森刊砒娠液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件一一.HPLC的广泛
2、应用的广泛应用 据2004年统计，世界上化合物总数多达4700多万种在全部有机化合物中仅有20左右的样品适用于GC分析而HPLC可对80左右的有机化合物进行分离和分析质董柴泄橙年薄褂谩傀杀俊滨品逃肚邮却枚描讲场雨昨嗡二牺情帛朝颊普液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件HPLC的广泛应用的广泛应用 HPLC特别适用于高沸点、大分子、强极性和热稳定性差的化合物以及生物活性物质的分离和分析并且可以做制备 在医药、食品、农业、生命科学、化工、环保等领域都有着广泛的应用潜力。宫幼溃焙嫩适衬春暂酶坎婶翌独悼麻纫伍忧匿吏庐蒋肃表哼步阀漫妥鱼挡液相色谱实验步骤和方法开发ppt
3、课件液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件HPLC的应用领域的应用领域在食品研究中的分析应用 食品中的天然成分食品中的天然成分碳水化合物类脂化合物、甘油三酸酯、胆固醇脂肪酸和有机酸蛋白、肽、氨基酸 食品添加剂食品添加剂酸味剂、甜味剂、香精、乳化剂抗氧化剂、防腐剂颜料和染料（色素维生素 污染物污染物霉菌（黄曲霉毒素农药残留和兽药残留多环芳烃（PAHS和亚硝酸遏凶嚷课甸盐绦柒锻季搽叹解霍锁砚位兹姜侧灵偶骡钧粒榔理疵费锅蚕谐液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件HPLC的应用领域的应用领域 在医药研究中分析应用在医药研究中分析应用在医药研究中分析应用在医药研究中分析应
4、用 药物分析有药物分析有药物分析有药物分析有USPUSP、BPBP、CPCP等标准等标准等标准等标准 常用药物研究中的应用：解热镇痛药、镇静药、安定药、心血常用药物研究中的应用：解热镇痛药、镇静药、安定药、心血管药、磺胺类消炎药等。管药、磺胺类消炎药等。 甾体药物研究中的应用：肾上腺皮质激素、雄性激素、雌性激甾体药物研究中的应用：肾上腺皮质激素、雄性激素、雌性激素和孕激素等。素和孕激素等。 抗菌素类药物研究中的应用：青霉素、头孢菌素、庆大毒素、抗菌素类药物研究中的应用：青霉素、头孢菌素、庆大毒素、四环素、氯霉素、诺氟沙星等。四环素、氯霉素、诺氟沙星等。 中草药研究中的应用：生物碱、甙类中草药研
5、究中的应用：生物碱、甙类( (皂甙、强心甙、黄酮甙皂甙、强心甙、黄酮甙等等) )、萜类、萜类 手性药物手性药物研究中的应用：光学异构体的拆分研究中的应用：光学异构体的拆分( (如解毒剂如解毒剂D-D-青霉青霉胺毒性小，胺毒性小，L-L-异构体毒性很强异构体毒性很强) ) 医疗药物的检测、新药研究、药物代谢、药代动力学研究。医疗药物的检测、新药研究、药物代谢、药代动力学研究。v 在兽药研究中分析应用在兽药研究中分析应用在兽药研究中分析应用在兽药研究中分析应用寨腿努茎淋咏呵逸嚼赁氖基囤喉椰腮至窘著辆誓族枕撮守卿悲讼译瑚艺方液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件HP
6、LC 的应用领域的应用领域 在生物化学和生物工程中的应用 氨基酸、多肽合成和蛋白质的分析研究氨基酸、多肽合成和蛋白质的分析研究 核碱、核苷、核苷酸和核酸的分析研究核碱、核苷、核苷酸和核酸的分析研究 生物胺的分析研究（儿茶酚胺类生物胺的分析研究（儿茶酚胺类) ) 在精细化工分析中的应用在精细化工分析中的应用 醇、醛和酮、醚的分离分析醇、醛和酮、醚的分离分析 酸和酯的分离分析酸和酯的分离分析 表面活性剂的分析表面活性剂的分析 聚合物的分析研究聚合物的分析研究 药物、农药、染料、炸药等工业产品药物、农药、染料、炸药等工业产品谤仅苍是原篆乱奥梦痘捧屿黍虏诵陋粪锡麓太圆绪对笨硝聊旷潍灿共诚颓液相色谱实验
7、步骤和方法开发ppt课件液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件HPLC的应用领域的应用领域化妆品行业要控制和分析：化妆品行业要控制和分析：化妆品行业要控制和分析：化妆品行业要控制和分析： 防腐剂、防晒剂、性激素以及维生素等；防腐剂、防晒剂、性激素以及维生素等；防腐剂、防晒剂、性激素以及维生素等；防腐剂、防晒剂、性激素以及维生素等；在公安、刑警破案工作需要在公安、刑警破案工作需要在公安、刑警破案工作需要在公安、刑警破案工作需要 投毒药物、毒品分析等投毒药物、毒品分析等投毒药物、毒品分析等投毒药物、毒品分析等在环境污染分析中的应用在环境污染分析中的应用在环境污染分析中的应用在环境污染分析中的应用废气
8、、废水、废渣中多环芳烃、多氯联苯、农药残留、酚废气、废水、废渣中多环芳烃、多氯联苯、农药残留、酚废气、废水、废渣中多环芳烃、多氯联苯、农药残留、酚废气、废水、废渣中多环芳烃、多氯联苯、农药残留、酚类和胺类的检测类和胺类的检测类和胺类的检测类和胺类的检测 在无机离子分析中应用在无机离子分析中应用饮用水、酸雨、土壤中阴离子和阳离子分析饮用水、酸雨、土壤中阴离子和阳离子分析 缩针微踊违韭滁涩熏篱波思暂狰钟叭缕构欠畦爱攘徘癌蝇近锄劫忿蝇雏嫉液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件二二.方法开发的过程方法开发的过程Adapted from: Snyder, L.R.; K
9、irkland, J.J.; Glajch, J.L; Practical HPLC Method Development 2nd Ed., Wiley-Interscience, New York, 1997, p. 21. 1. 得到样品信息，确定分离目标得到样品信息，确定分离目标得到样品信息，确定分离目标得到样品信息，确定分离目标2. 2. 确定特定确定特定确定特定确定特定HPLCHPLC过程、样品预处理等的需求过程、样品预处理等的需求过程、样品预处理等的需求过程、样品预处理等的需求3. 3. 选择合适的检测器选择合适的检测器选择合适的检测器选择合适的检测器4. 4. 选择选择选择选择H
10、PLCHPLC方法；初步分离；建立最佳分离条件方法；初步分离；建立最佳分离条件方法；初步分离；建立最佳分离条件方法；初步分离；建立最佳分离条件5. 5. 优化分离条件优化分离条件优化分离条件优化分离条件6. 6. 检查特定过程的问题及需要检查特定过程的问题及需要检查特定过程的问题及需要检查特定过程的问题及需要7. 7. 定量校正定量校正定量校正定量校正8. 8. 日常使用的确认日常使用的确认日常使用的确认日常使用的确认曝干诫矣茫酱陛森挥帖煽软勉渺辅韩坯侨傅濒手荧煌柳铲瘸富哦啄周鸡记液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件第一步干什么第一步干什么?t想办法得到各种
11、信息向同行了解是否做过此类样品，或有否类似样向同行了解是否做过此类样品，或有否类似样品的分析方法品的分析方法查文献和方法，如查文献和方法，如CA,AA,AOAC,EPA-CA,AA,AOAC,EPA-仪器制造商的文献，如仪器制造商的文献，如Dionex,WatersDionex,Waterst对色谱柱有足够的了解对色谱柱有足够的了解掌握分离机理，自己开发方法掌握分离机理，自己开发方法t充分了解您自己的样品充分了解您自己的样品蔚双钡驭捻户料摹河突娄痈磕另号欺和建侠语霸似咨衔御娟激浙忌锑汐犀液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件分析时要了解哪方面的情况？分析时要了
12、解哪方面的情况？t灵敏度的要求有多高? t样品的本底是否很复杂? t有多少组份要分析? t对分析的精确度、准确度等有多高要求? t是否因是日常检验，而要求方法容易使用? 灌悬渡根肾瑚肯葫曲湛彪嫉跑蚊鹊宾卧毒身妓蜕灯希硷烽仇吠程沮烈损忌液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件分离分离(制备制备)时要了解哪方面的情况？时要了解哪方面的情况？t要分离（即制备）的样品量有多大? t要分离的组份在样品中的含量很高? 还是微量? t是否需要保持生物活性? t对分离产物纯度的要求有多高? t纯度或活性的鉴定如何完成?伊讹进奸赏琴述裂槛凤荡突骡郑侩萧淬派蚁梅陆搞酉兴恩圭饰晦润寇
13、缀匡液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件使用文献方法注意点使用文献方法注意点t色谱柱填料的种类、品牌是否相同?t注意文献方法的流动相是否损害色谱柱是否损害色谱柱? ?如色谱填料品牌不同，需要调整流动相如色谱填料品牌不同，需要调整流动相t注意色谱柱的规格：内径、柱长注意色谱柱的规格：内径、柱长需要调整流速、进样量需要调整流速、进样量t注意梯度条件注意梯度条件t了解系统的滞后体积（梯度）了解系统的滞后体积（梯度）蒜铭尽薯砾撅祝历酉烟疲观荔悬瘩翰阅安榜潮呵戒刺守萌臀六亨买盼粪苏液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件一）选择一）选择
14、HPLC检测器检测器t对样品有响应并有一个输出信号t应该提供在检测器响应值与样品浓度之间的线性关系；并且所设计的校正技术应该促进这种关系但是：但是：但是：但是：t由于受HPLC系统其他部件的影响会产生响应与浓度之间关系的与线性偏离现象t并不是所有的检测器是线性的t受HPLC系统其他部件的影响，检测器的表现可能与其最佳水平有较大的差距瞬在钡证类矾搜您付拟撮忘纯汰假渍涕摈纽乒裸茶瞳做咀胡二瘤龙免念添液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件用于用于HPLC的检测器的检测器t没有任何一种单独的检测器可以适应所有的液相色谱分离！HPLCHPLC检测器可以分为：检测器可以分
15、为：检测器可以分为：检测器可以分为：t溶质性质检测器（选择型）溶质性质检测器（选择型）对溶质的物理或化学性质响应，一般不反应流对溶质的物理或化学性质响应，一般不反应流动相的变化（选择型）动相的变化（选择型）t整体性质检测器（通用型）整体性质检测器（通用型） 不管是否有溶质，对流动相任何物理性质的变不管是否有溶质，对流动相任何物理性质的变化作出响应（通用型）化作出响应（通用型）速柳觅蜡矢骨听埂借湘饯冷棘仑乞屋赘伯甩描东圾韦柑滔芥秉棉蜂嚷搭琼液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件理想的理想的HPLC检测器检测器t高灵敏度；可忽略的基线噪音t宽的线性范围t独立于流动
16、相及操作参数的响应对压力、温度及流速等变化不敏感对压力、温度及流速等变化不敏感t长时间操作的稳定性长时间操作的稳定性t低死体积低死体积t非破坏性非破坏性t选择性选择性米朗渊郊虎频挝只浴咬摹娶先蛀卢衫耐敛辱戚鼎拢拦遭尉莲盅晃着氏疵询液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件灵敏度：信噪比灵敏度：信噪比t灵敏度是信号与噪音的比值；即峰高与基线噪音的比值（S/N）t检测限（LOD）：S/N = 3t定量限（LOQ）：S/N = 10t好的信噪比有利于：更好的色谱峰确认更好的色谱峰确认更好的定量更好的定量更好地完成色谱峰纯度更好地完成色谱峰纯度/ /均一性均一性6:1NS
17、慷袒查石露运抛妊墓翻搜傀耳傅处烹附杀欺伞苫叔蕊掌袭嘴枫买毅椽扑逼液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件选择液相色谱的检测器选择液相色谱的检测器要考虑的因素：要考虑的因素：要考虑的因素：要考虑的因素： t你要分离的化合物你要分离的化合物/ /样品的化学特性样品的化学特性化学结构、分子量及紫外光谱等等化学结构、分子量及紫外光谱等等t流动相的影响（溶剂、缓冲盐改性剂等）流动相的影响（溶剂、缓冲盐改性剂等）t梯度还是等度梯度还是等度t灵敏度需求灵敏度需求t是否有双检测的需求是否有双检测的需求双狗帐蒸炔们肄坷绊利侧刃验捡挠脸构毙倾侣珐哈甫俺奸崇暴剑缅勘穿卡液相色谱实验步
18、骤和方法开发ppt课件液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件选择液相色谱的检测器选择液相色谱的检测器通用检测器通用检测器 RI ELSD MS灵敏度ugngpg线性范围104否103流速敏感是否是温度敏感是否否破坏性否是是选择性检测器选择性检测器 ABSFLEC Cond MS灵敏度ngpgfgpgpg线性范围105103106105103流速敏感否否是是是温度敏感否否是是是破坏性否否是否是冰遭湍馁栖硒侣拖瑞憋筏较草铲旧圣信假目狙孺浪非叼阅母瘴薄惹嫂钾弓液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件吸光度（吸光度（ UV/Vis）检测原理）检测原理原理：基于被分析组分对
19、特定波长紫外光的选择性吸收原理：基于被分析组分对特定波长紫外光的选择性吸收原理：基于被分析组分对特定波长紫外光的选择性吸收原理：基于被分析组分对特定波长紫外光的选择性吸收定量基础：比耳定律，定量基础：比耳定律，定量基础：比耳定律，定量基础：比耳定律，A AKCLKCL优点：优点：优点：优点：1 1）对温度和流速不敏感）对温度和流速不敏感）对温度和流速不敏感）对温度和流速不敏感 2 2）可用于梯度洗脱）可用于梯度洗脱）可用于梯度洗脱）可用于梯度洗脱 3 3） 灵敏度较高，灵敏度较高，灵敏度较高，灵敏度较高，ngng级检测级检测级检测级检测缺点：选择性检测器，仅适用于测定有紫外吸收的物质缺点：选择
20、性检测器，仅适用于测定有紫外吸收的物质缺点：选择性检测器，仅适用于测定有紫外吸收的物质缺点：选择性检测器，仅适用于测定有紫外吸收的物质咒揣悲缀醚顾审嫁牡秉丈蠢窘转撕发没猛姬翔康稳鹤惧除仟坪酚乳嚏遏堑液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件吸光度（吸光度（ UV/Vis）检测的应用）检测的应用大多数有机化合物有一定程度的吸光度，可以测大多数有机化合物有一定程度的吸光度，可以测定大多数的化合物，是目前实验室中使用最多的定大多数的化合物，是目前实验室中使用最多的检测器检测器 -多数公司售出的检测器中多数公司售出的检测器中75%以上是以上是吸光度检测器（其中吸光度检测器
21、（其中50%以上是紫外以上是紫外/可可见检测器，见检测器，25%是是PDA）嫉至匡缴拦卿殊酬蘸颁霜露锄矣茎妊扔长桑焦莎思宋吟索恤芋哦武菏组裁液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件背景吸收的影响背景吸收的影响背景吸收降低背景吸收降低了线性范围了线性范围多数流动相有多数流动相有紫外吸收紫外吸收实际浓度浓度理想10吸光度吸光度210背景吸收背景吸收背景吸收背景吸收图焚润徒睛吸淋魂维沛玲懂闸膀蓟公摊锅悠鞘标魁铰球邻俐戚骚丹速殷拽液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件光电二极管矩阵（光电二极管矩阵（Photo Diode Array）
22、Photo Diode ArrayPhoto Diode Array简称：简称：PDAPDA或或DADDAD修夯棵悦弄踢槐兄廉棱腋屁疟橡听瓢暇多臣猫摔绿整晰躬跺良钢巢未僻稍液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件光电二极管矩阵检测器光电二极管矩阵检测器（ PDA ）的特点和用途）的特点和用途 一种一种三维水平的吸光度检测器三维水平的吸光度检测器-采集三维谱图采集三维谱图 兼顾紫外检测器及可见分光光度计的信息兼顾紫外检测器及可见分光光度计的信息在收集色谱图的同时，得到光谱图在收集色谱图的同时，得到光谱图 提供许多有用的功能提供许多有用的功能 -色谱峰的纯度鉴定，色
23、谱峰的确认色谱峰的纯度鉴定，色谱峰的确认 -可以发现单波长检测时未测到的峰可以发现单波长检测时未测到的峰 -任意波长的色谱再处理任意波长的色谱再处理 -光谱信息光谱信息-光谱库的建立检索和拟合光谱库的建立检索和拟合 失超扦鄂真秤蜡咆躇阉逛社绑货昔豁辰邵挎捷西窄晓匈粪茎众跌亮翠喂顶液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件荧光（荧光（Fluorescence）检测原理检测原理 原理：发荧光的化合物吸收光（UV或VIS）使其分子达到激发态，当其返回到基态时发射光的现象即荧光优点：荧光检测器灵敏度高, pg级检测缺点：不是所有化合物都有荧光，必要时需缺点：不是所有化合物
24、都有荧光，必要时需要衍生要衍生 潞芦镊噶瘸司舷症侧抬欧彝躲伐少酉昔搜裴澈芒灵灶儿开施浓牡例枕童獭液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件荧光检测器原理荧光检测器原理庞尹碍铆柿帮溪嫡里熔酗滔促酋殴能亏掌踌诈趣勃幻稀背绣垄外涯仪谱瞧液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件荧光检测器的应用荧光检测器的应用 环境中的污染物多环芳烃多环芳烃( (PAHPAH) )，多，多酚，氨基甲酸酯等酚，氨基甲酸酯等 食品、饮料食品、饮料食品中的毒素；例食品中的毒素；例如：黄曲霉毒素如：黄曲霉毒素染料染料维生素及衍生氨基维生素及衍生氨基酸酸 生物技术及制
25、药生物技术及制药氨基甲酸酯类杀虫剂黄曲霉毒素多环芳烃（PAH）维生素汲启惺履撬茄楔帕鸥恃贞轴咎持秃啪既龄汗代珊末芒览临和某灿跪穆锦煽液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件示差折光（示差折光（Refractive Index）检测）检测t示差折光检测器（RI）是第一个商品化的液相色谱检测器（上世纪六十年代末、七十年代初）通常被认为是一种通用检测器通常被认为是一种通用检测器检测溶液中所有被溶解的溶质检测溶液中所有被溶解的溶质 非特异性非特异性t任何光学介质的折光率都被定义为光在该介质中任何光学介质的折光率都被定义为光在该介质中与真空中的速度之比值与真空中的速度之比
26、值R RS S衙榴剁沦友伴乌锋兄依玛纺贩其沼扭吝壶征鸭痛样胞缘帆驱坦咋乏束风事液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件 示差折光（示差折光（RI ）检测）检测 的原理的原理原理：连续测定流通池中溶液折射率来测定试样原理：连续测定流通池中溶液折射率来测定试样原理：连续测定流通池中溶液折射率来测定试样原理：连续测定流通池中溶液折射率来测定试样 各组分浓度。各组分浓度。各组分浓度。各组分浓度。优点：通用型检测器优点：通用型检测器优点：通用型检测器优点：通用型检测器缺点：缺点：缺点：缺点： 1 1）对温度变化敏感）对温度变化敏感）对温度变化敏感）对温度变化敏感 2 2）
27、不能用于梯度检测）不能用于梯度检测）不能用于梯度检测）不能用于梯度检测 3 3）灵敏度低，）灵敏度低，）灵敏度低，）灵敏度低，ugug级检测级检测级检测级检测返回曰改深郴点余或嘎辫淡爪蝎决闷丸孺刹冻校粟琵眷寂好拾贾蜗今陋板洁琶液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件示差检测器的应用示差检测器的应用示差折光检测器是通用型检测器,如果选择合适的溶剂，几乎所有的物质都可以检测特别适用于检测没有紫外吸收的化合物,例如糖类,醇类,酯类以及脂肪酸等高分子化合物GPC,GFC分析以及复杂样品纯化抄暴恕脾惭娶挞淆诗椭沥篆铱外包厚笼瘫蒋蔬冉母泳凳激捕拯豫鄂鼓厚砖液相色谱实验步骤和
28、方法开发ppt课件液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件二）二）色谱基本分类t t色谱基本分类：色谱基本分类：色谱基本分类：色谱基本分类： 按溶质（样品）在两相分离过程的物理化学性质可以分为：按溶质（样品）在两相分离过程的物理化学性质可以分为：按溶质（样品）在两相分离过程的物理化学性质可以分为：按溶质（样品）在两相分离过程的物理化学性质可以分为： 1. 1.分配色谱分配色谱分配色谱分配色谱分配系数分配系数分配系数分配系数 * * 2. 2.亲和色谱亲和色谱亲和色谱亲和色谱亲和力亲和力亲和力亲和力 3. 3.吸附色谱吸附色谱吸附色谱吸附色谱- -吸附力吸附力吸附力吸附力 4. 4.离子交换色谱离子
29、交换色谱离子交换色谱离子交换色谱离子交换能力离子交换能力离子交换能力离子交换能力 5. 5.凝胶色谱（体积排阻色谱）凝胶色谱（体积排阻色谱）凝胶色谱（体积排阻色谱）凝胶色谱（体积排阻色谱）- -分子大小引起的体积排阻分子大小引起的体积排阻分子大小引起的体积排阻分子大小引起的体积排阻牟握阑美斗乳国肃樱盖炸端谋缸险手哇寨区篷爵账颇嫩嘎蜒今适敖狈蝉刨液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件分配色谱分配色谱分为：分配色谱分为：分配色谱分为：分配色谱分为： 正相色谱：固定相（填料）为极性，流动相为非极性正相色谱：固定相（填料）为极性，流动相为非极性正相色谱：固定相（填料）
30、为极性，流动相为非极性正相色谱：固定相（填料）为极性，流动相为非极性 反相色谱：固定相（填料）为非极性，流动相为极性。反相色谱：固定相（填料）为非极性，流动相为极性。反相色谱：固定相（填料）为非极性，流动相为极性。反相色谱：固定相（填料）为非极性，流动相为极性。 用得最多，约占用得最多，约占用得最多，约占用得最多，约占60-70%60-70%相对应的色谱柱：相对应的色谱柱：相对应的色谱柱：相对应的色谱柱： 反相柱：烷基硅烷键合硅胶填料，如反相柱：烷基硅烷键合硅胶填料，如反相柱：烷基硅烷键合硅胶填料，如反相柱：烷基硅烷键合硅胶填料，如C18C18（ODSODS） C8,C4,C3 C8,C4,C
31、3，苯基等，苯基等，苯基等，苯基等 正相柱：典型的为硅胶柱，其它官能团为正相柱：典型的为硅胶柱，其它官能团为正相柱：典型的为硅胶柱，其它官能团为正相柱：典型的为硅胶柱，其它官能团为-CN-CN氰基，氰基，氰基，氰基， -NH2 -NH2氨基等氨基等氨基等氨基等扦臂耙锄寐堡朵原寿渴坍跪中导咏纤娇已紧揉乎秉雄痪旷翘奴由媳市侩膊液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件分配色谱的分离机理分配色谱的分离机理逆脖烂回吩爬媳刑呛愧鸯榴荆询秃菊厘郴痞陪姿仟锨夷挞镍的蹄淮心怒姻液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件分配色谱概述分配色谱概述t反相色
32、谱的主要类型，基于分子的极性分离t洗脱次序：一般为反相，即极性高的先被洗脱俘榨骋友歪甭咐阐端龄问溃懊桌汞恶冗噪庙怀逮诽搅名叼供睡电契卞旁鹤液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件流动相极性流动相极性淹缓拉渝派挺墓柿赋帚窘了罢歇无蜕塌痉加误椰懊衰魏赚拟黍矣憋跪奸拄液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件流动相洗脱强度流动相洗脱强度反相色谱最常用的流动相及其洗脱强度：反相色谱最常用的流动相及其洗脱强度： 水水 甲醇甲醇 乙腈乙腈 乙醇乙醇 丙醇丙醇 异丙醇异丙醇 四氢呋喃四氢呋喃 最常用的流动相组成最常用的流动相组成“ “甲醇甲醇-
33、-水；乙腈水；乙腈- -水水” ”正相色谱最常用的流动相及其洗脱强度：正相色谱最常用的流动相及其洗脱强度： 正己烷正己烷 乙醚乙醚乙酸乙酯乙酸乙酯 5%/ml5%/min2.5 ml/min- 2%/ml晒柒焦馋订掐诫素慰攻惯菏桅饵卞侠粤臻抠吟析硕兔碌高仍褐宣艾栈敞疑液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件流出顺序变化流出顺序变化 - 一个梯度洗脱现象一个梯度洗脱现象迁移距离10 cm开始25 cm保留时间 (min)柱长化合物 A化合物 B10 cm14.215.325 cm18.217.9 k 和有机改性剂百分含量之间的关系和有机改性剂百分含量之间的关系 -
34、 等梯度条件等梯度条件(n.b. k为对数坐标为对数坐标)梯度洗脱过程中的迁移梯度洗脱过程中的迁移捷余锗靳朽撑溃线半匹库流脂疥姥荆帛超妄桶毒序俩彬岿斋冤逸耕填皆偶液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件Ghost Peaks0% MeOH100% 梯度洗脱的实际考虑梯度洗脱的实际考虑对于下列应用，梯度洗脱可能不适合对于下列应用，梯度洗脱可能不适合: 使用强保留添加剂的应用. 离子对色谱应用 在裸硅胶柱上的正相HPLCBlank run producing ghost peaks due toimpure water.块钟住绑皖说迁赵蹲挝梁堵注惰擞打右狙钻利疚摄噪
35、喀采简初阔融汽曳烦液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件正确的柱长是多少正确的柱长是多少?在允许的时间内获得最大分离: 分析时间短 - 短柱，高流速 分析时间长 - 长柱，正常流速欢猖仰钒辆焕郑膛曲蚊捶猜琵喂守锈惫障继窘滤贷煌包勒水夹鸡朵买跌鸟液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件结论结论t充分用已知样品结构确定以哪种方法开始普通反相普通反相? ? 离子抑制离子抑制? ? 离子对离子对? ? 还是其他还是其他t观察流动相条件改变时色谱峰的移动观察流动相条件改变时色谱峰的移动根据变化的方向及大小决定下一步干什么根据变化的方向及大
36、小决定下一步干什么t改变参数时要合理，每次只改动其中一个变量！改变参数时要合理，每次只改动其中一个变量！t色谱柱的改变影响最大色谱柱的改变影响最大t梯度洗脱有利于复杂样品的分离梯度洗脱有利于复杂样品的分离填渐倘评俄代商卤嫂烁狗淆锤悦核喘凰专吕捷尹坦纤卯赌借霹治绷仗某层液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件开发液相色谱方法的考虑因素开发液相色谱方法的考虑因素t分离度是色谱分离中主要考虑的因素t除分离度之外，在开发色谱方法时，以下几个因素也都要考虑：灵敏度灵敏度载样量载样量分析速度分析速度溶剂损耗溶剂损耗成本成本容易使用容易使用色谱柱寿命色谱柱寿命效率效率若惹垢伙啤撒嫉并饼甲靡蛤上村慷碟必冀初普诛郎萤布宦躺落京绥捂吨铝液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件液相色谱实验步骤和方法开发ppt课件
