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1、实验实验六六粗糙脉胞菌粗糙脉胞菌顺顺序四分子分析序四分子分析粗糙脉胞菌顺序四分子分析课件实验目的实验目的l1.了解粗糙脉胞菌的生活周期及特性；了解粗糙脉胞菌的生活周期及特性；l2.学习粗糙脉胞菌的培养方法和杂交技术；学习粗糙脉胞菌的培养方法和杂交技术；l3.学习顺序四分子的遗传学分析方法，进行学习顺序四分子的遗传学分析方法，进行有关基因与着丝点距离的计算和作图。有关基因与着丝点距离的计算和作图。粗糙脉胞菌顺序四分子分析课件实验材料实验材料l1 1粗糙链孢霉野生型菌株，粗糙链孢霉野生型菌株，LysLys+ +，分生孢，分生孢子粉红色；子粉红色；l2 2粗糙链孢霉赖氨酸缺陷型菌株，粗糙链孢霉赖氨酸
2、缺陷型菌株，LysLys- -，分生孢子白色。分生孢子白色。 粗糙脉胞菌顺序四分子分析课件实验原理实验原理l本实验用赖氨酸缺陷型与野生型杂交，得到的子囊本实验用赖氨酸缺陷型与野生型杂交，得到的子囊孢子分离为孢子分离为4个黑色的（个黑色的（+）和和4个灰色的（个灰色的（-）。l黑色孢子为野生型，赖氨酸缺陷型孢子成熟迟，在黑色孢子为野生型，赖氨酸缺陷型孢子成熟迟，在野生型孢子成熟变黑时，还未变黑，而呈浅灰色；野生型孢子成熟变黑时，还未变黑，而呈浅灰色；l根据黑色孢子和灰色孢子在子囊中的排列顺序，可根据黑色孢子和灰色孢子在子囊中的排列顺序，可知合子在减数分裂时，基因知合子在减数分裂时，基因LysLy
3、s和着丝粒之间发生交和着丝粒之间发生交换的情况，最终可有两大类型的子囊出现，即换的情况，最终可有两大类型的子囊出现，即第一第一次分裂分离子囊次分裂分离子囊和和第二次分裂分离子囊第二次分裂分离子囊。粗糙脉胞菌顺序四分子分析课件实验原理实验原理第一次分裂分离子囊第一次分裂分离子囊第二次分裂分离子囊第二次分裂分离子囊粗糙脉胞菌顺序四分子分析课件AAaa或或aaAAAaAaaAaAAaaAaAAa粗糙脉胞菌顺序四分子分析课件实验原理实验原理l第一次分裂分离形成的子囊为第一次分裂分离形成的子囊为非交换型子囊非交换型子囊；l第二次分裂分离形成的子囊为第二次分裂分离形成的子囊为交换型子囊交换型子囊；第二次分
4、裂分离子囊的出现，是由于有关的基因和着丝粒之第二次分裂分离子囊的出现，是由于有关的基因和着丝粒之间发生了一次交换的结果。间发生了一次交换的结果。l染色体上两个基因座之间的距离越远，则它们之间染色体上两个基因座之间的距离越远，则它们之间发生交换的频率越高。因此，发生交换的频率越高。因此，第二次减数分裂分离第二次减数分裂分离的子囊越多，说明基因和着丝粒间的距离越远的子囊越多，说明基因和着丝粒间的距离越远。粗糙脉胞菌顺序四分子分析课件实验原理实验原理第二次分裂分离子囊数第二次分裂分离子囊数 1/2 1/2子囊总数子囊总数 100% 100% 着丝粒与基因间的重组率着丝粒与基因间的重组率 = =MII
5、 1/2 MI + MII 100% 100% 重组率重组率 = =或：或：基因与着丝粒间距离（图距）：基因与着丝粒间距离（图距）： 重组率去掉重组率去掉% %即为图距，单位为厘摩（即为图距，单位为厘摩（cMcM）。）。粗糙脉胞菌顺序四分子分析课件实验步骤实验步骤l1.菌种活化菌种活化l2.杂交接种杂交接种l3.培养培养 l4.压片观察压片观察粗糙脉胞菌顺序四分子分析课件实验步骤实验步骤l4.压片观察：压片观察：将附有子囊果的滤纸条放入将附有子囊果的滤纸条放入3%来苏尔溶液来苏尔溶液10min，杀死孢子，以防止污染实验室；，杀死孢子，以防止污染实验室；取一载玻片，滴取一载玻片，滴12滴滴3%来
6、苏尔溶液，然后用接来苏尔溶液，然后用接种针挑出子囊果放在载玻片上；种针挑出子囊果放在载玻片上；盖上另一载玻片，用手指压片，将子囊果压破；盖上另一载玻片，用手指压片，将子囊果压破；置显微镜下观察置显微镜下观察粗糙脉胞菌顺序四分子分析课件实验结果实验结果l可观察到一个子囊果中散出可观察到一个子囊果中散出3040个子囊；个子囊；l观察子囊孢子的排列情况；观察子囊孢子的排列情况；粗糙脉胞菌顺序四分子分析课件实验结果实验结果l观察一定数目的子囊果，记录每个杂交型观察一定数目的子囊果，记录每个杂交型完整子囊的类型，并计算出完整子囊的类型，并计算出Lys基因与着丝基因与着丝粒间的距离。粒间的距离。1. 填表填表2. 列出计算公式及结果列出计算公式及结果3. 绘制显微镜下观察到的杂交子囊的图绘制显微镜下观察到的杂交子囊的图粗糙脉胞菌顺序四分子分析课件注意！注意！l本次实验观察过的载玻片、用过的本次实验观察过的载玻片、用过的镊子等物品都需镊子等物品都需放入消毒液中浸泡放入消毒液中浸泡10分钟后取出清洗分钟后取出清洗，以防污染实验，以防污染实验室！室！粗糙脉胞菌顺序四分子分析课件
