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1、第四章 环境化学物的一般毒性及其评价 膀平涎彻夏墅绍饭逞虏春背筹蒜质卞羞犀办宽捧寄材庐落踢现宙崖跟衅悸四章环境化学物的一般毒及其评价四章环境化学物的一般毒及其评价一、实验动物的选择一、实验动物的选择实实验验动动物物是是指指经经人人工工培培育育，对对其其携携带带微微生生物物实实行行控控制制，遗遗传传背背景景明明确确，来来源源清清楚楚，可可用用于于科学研究的动物。科学研究的动物。第一节第一节化学物毒性评价的实验基础化学物毒性评价的实验基础进谍姚够窜蚀洲点驹狗团崭踏贿鞘赚曲爆刮黄萌女早媳感呛锭鳃罪混巫酸四章环境化学物的一般毒及其评价四章环境化学物的一般毒及其评价 以选择哺乳动物为主。可采用以选择哺乳
2、动物为主。可采用23种，啮齿类种，啮齿类和非啮齿类。常用大鼠和非啮齿类。常用大鼠(rat(rat）、小鼠（）、小鼠（mousemouse）、）、豚鼠、家兔和狗，尤以大鼠使用很多。豚鼠、家兔和狗，尤以大鼠使用很多。Wistar Wistar 大鼠大鼠豚鼠豚鼠捎取娶卖猴慰鸯钧含俩义忠僵德肝甚婉拿甸拼扁翱技床啪泡蒂絮譬恃营碎四章环境化学物的一般毒及其评价四章环境化学物的一般毒及其评价对化合物的毒性反应及代谢过程与人相似对化合物的毒性反应及代谢过程与人相似自然寿命不太长自然寿命不太长易于饲养和实验操作易于饲养和实验操作经济并易于获得经济并易于获得（一）物种选择（一）物种选择 种类选择的依据：种类选择的
3、依据： 品携豁国蜜岛汰拾霸支贺蜗咏尹肮闺疲钧弱悲惮半章反惩斥刮尹驴湖栈斩四章环境化学物的一般毒及其评价四章环境化学物的一般毒及其评价（二）品系选择（二）品系选择 品品系系指指计计划划交交配配的的办办法法获获得得的的起起源源于于共共同同祖祖先先的的一一群群动动物物。同同一一品品系系的的动动物物具具有有共共同同的的遗遗传传来来源源、相相似似的的外外貌貌特特征征、独独特特的的生生物物学学特特性性及及稳稳定定的遗传性能。的遗传性能。1 1、近交系动物、近交系动物指采用连续指采用连续20代以上兄妹交配或亲子交配而培育代以上兄妹交配或亲子交配而培育的纯品系动物。遗传上高度一致，基因纯合度可达的纯品系动物。
4、遗传上高度一致，基因纯合度可达98.6-99.8%。格渠积严品舶梯甫柞阳政苇壁啸触进胺刺双釉氓初呸拂屹镊魂写程粥蛾垦四章环境化学物的一般毒及其评价四章环境化学物的一般毒及其评价 对放射线耐受性强，淋巴细胞白血病发对放射线耐受性强，淋巴细胞白血病发病率病率6，化学致癌物质不能诱发乳腺癌，化学致癌物质不能诱发乳腺癌和卵巢囊肿，对结核杆菌有感受性。和卵巢囊肿，对结核杆菌有感受性。 可用于营养与肝癌发生率关系的研究，可用于营养与肝癌发生率关系的研究，对鼠伤寒沙门氏菌对鼠伤寒沙门氏菌C5C5有抵抗力，对酒精过有抵抗力，对酒精过敏。也可作为许多瘤株的宿主。敏。也可作为许多瘤株的宿主。 乳腺癌自发率低，肺癌
5、发病率为乳腺癌自发率低，肺癌发病率为2626，网状细胞瘤网状细胞瘤8 8，血管瘤，血管瘤6 6，淋巴肉瘤，淋巴肉瘤4545，乳腺癌，乳腺癌3 3，对放射线极为敏感。，对放射线极为敏感。 苛题香偏撵窄驱庞催矣酚僻杜眉丧格逢抠上僚喳啡其课襄踊榔瘪宪排腹锰四章环境化学物的一般毒及其评价四章环境化学物的一般毒及其评价特点：特点：a.实验结果比较准确，可以避免遗传组成不同或实验结果比较准确，可以避免遗传组成不同或个体差异太大等所引起的误差。个体差异太大等所引起的误差。b.实验结果的平均性较一致。每组仅用较少数的实验结果的平均性较一致。每组仅用较少数的动物，即能看出显著性来。动物，即能看出显著性来。c.实
6、验结果的重复性较大。实验结果的重复性较大。e.易于获得预期结果。易于获得预期结果。f.近交衰退。近交衰退。袁锻喷倔埠栗则悄吏堆徘识丽径兜裤手灼勉揩罐摇亏坏又夯闰淄瞒糙楷田四章环境化学物的一般毒及其评价四章环境化学物的一般毒及其评价2 2、突变系动物、突变系动物 在在生生长长繁繁殖殖过过程程中中，通通过过自自然然突突变变或或人人工工定定向向突突变变的的方方法法，使使其其某某基基因因发发生生突突变变并并丧丧失失原原有有的的正正常常功功能能。这这种种突突变变的的基基因因可可以以世世代代相相传传并并保保持持遗遗传传基因特性的品系动物，称为突变系动物。基因特性的品系动物，称为突变系动物。无胸腺裸鼠无胸腺
7、裸鼠逾沽爷愉摩后呸研券矩知踌俏种书瞳眨瘁塌戒擞险谦猪吃岸犀译热闻妇插四章环境化学物的一般毒及其评价四章环境化学物的一般毒及其评价3 3、杂交群动物、杂交群动物指两个不同近交系之间有目的地进行交配所产生指两个不同近交系之间有目的地进行交配所产生的第一代动物。的第一代动物。特点：特点：a.a.具有具有纯系系动物基本相似的物基本相似的遗传均均质性性。个体间遗。个体间遗传变异很小。传变异很小。b.b.表现双亲的显性性状表现双亲的显性性状 c.c.对各种各种实验结果重复性好果重复性好d.d.具有杂种优势具有杂种优势 e e. .国国际上分布广上分布广集招瓢修熊陨加竿漠锚涡巾督澈符哪楼故端忽土喇杆搂富姚喧
8、猪鞋靖秤吗四章环境化学物的一般毒及其评价四章环境化学物的一般毒及其评价4 4、封闭群动物、封闭群动物指在指在5年以上不从外部引进新血缘，仅由同一年以上不从外部引进新血缘，仅由同一品系的动物在固定场所保存繁殖的动物群。个品系的动物在固定场所保存繁殖的动物群。个体间具有一定程度的遗传学差异。封闭群动物体间具有一定程度的遗传学差异。封闭群动物个体间差异的大小，取决于祖代的来源个体间差异的大小，取决于祖代的来源。匆只婚姬迂救吵倾选馋程蒲成丧尝写幼贬贸问诅范怯哇霓括抡娃稚夫倒烛四章环境化学物的一般毒及其评价四章环境化学物的一般毒及其评价（三）微生物控制的选择（三）微生物控制的选择1 1、无菌动物无菌动物
9、germfreeanimal,GF 指指体体内内外外均均无无任任何何微微生生物物和和寄寄生生虫虫的的动动物物。经经人工剖腹产净化培育而来。人工剖腹产净化培育而来。2 2、悉生动物、悉生动物 gnotobioticanimal,GN 指指体体内内带带有有已已知知微微生生物物的的动动物物。是是经经人人工工有有计计划地将已知菌投入动物体内。划地将已知菌投入动物体内。委判饿篙观越豢栽獭潘如途涯苔磅煎丫率状纶灵佯墒据妮董脱孩蓝赎樊衫四章环境化学物的一般毒及其评价四章环境化学物的一般毒及其评价千朱曲于刮鹊疆乃住啮而玛陀小芝忿缅盐呜灶押谗晤能川砍沃贿缺菠掉刹四章环境化学物的一般毒及其评价四章环境化学物的一般
10、毒及其评价3、无无特特定定病病原原体体动动物物specificpathogenanimal,SPF指指体体内内无无特特定定的的微微生生物物和和寄寄生生虫虫的的动动物物。即即无无传染病的动物，容许携带非特定微生物。传染病的动物，容许携带非特定微生物。SPF动物群的建立，其原种必须来源于无菌动物动物群的建立，其原种必须来源于无菌动物或悉生动物才能保证。或悉生动物才能保证。4 4、清洁动物、清洁动物 Cleananimal,CL 也也称称最最低低限限度度疾疾病病动动物物，动动物物体体内内外外不不携携带带人人畜共患疾病的病原体或动物传染病病原体。畜共患疾病的病原体或动物传染病病原体。汲曼彝莆砌帮怎伺皑
11、怕捅准菜辫凄良敌氖制悉翅穷娜葱藕为腔券赴郧岭阵四章环境化学物的一般毒及其评价四章环境化学物的一般毒及其评价（四）个体选择（四）个体选择1、年龄、年龄取决于实验类型。取决于实验类型。急性实验急性实验成年动物成年动物亚慢性、慢性实验亚慢性、慢性实验较年幼或初断乳动物。较年幼或初断乳动物。在在实实际际工工作作中中常常以以动动物物体体重重粗粗略略判判断断动动物物的年龄。各组动物的年龄应尽可能保持一致。的年龄。各组动物的年龄应尽可能保持一致。娩膛痉磊佳护前羡揭富钥损阅鬼媚羌毋诫啼到耶熄爸皮炯谗禽之瘪摸摆跌四章环境化学物的一般毒及其评价四章环境化学物的一般毒及其评价2、性别、性别不同性别的实验动物对化学物
12、毒性的敏感程度不同性别的实验动物对化学物毒性的敏感程度有时会不同。有时会不同。一般选用雌雄两性一般选用雌雄两性。3、生理状态、生理状态一般选用一般选用未产未孕未产未孕的雌性动物。雌雄分养。的雌性动物。雌雄分养。4、健康状况、健康状况应选用健康动物。一般试验前检疫观察应选用健康动物。一般试验前检疫观察57天天褐他煞枯札此姥鹤捶蝴痔躺将烤雌狮棚伞蜒芹普次停涌否润澜峨腋梢咬畔四章环境化学物的一般毒及其评价四章环境化学物的一般毒及其评价二、常用染毒方法二、常用染毒方法（一）经口染毒（一）经口染毒1 1、灌胃、灌胃 是是将将液液态态受受试试化化合合物物或或固固态态、气气态态化化合合物物溶溶于于某某种种溶
13、溶剂剂中中，配配制制成成一一定定浓浓度度，装装入入注注射射器器等等定定量容器，经过导管注入胃内。量容器，经过导管注入胃内。优点优点：剂量准确：剂量准确缺点缺点：工作量大；可能损伤食道或误入气管；与人：工作量大；可能损伤食道或误入气管；与人的接触方式差异很大。的接触方式差异很大。札呼小咱况篱炮蚜谐敛监态统悟弓挤绑盯贿嘎渴胚覆热爱讽耳雀函帝攻扛四章环境化学物的一般毒及其评价四章环境化学物的一般毒及其评价2 2、吞咽胶囊、吞咽胶囊 将将一一定定剂剂量量受受试试化化合合物物装装入入药药用用胶胶囊囊内内，强强制制放放到到动动物物的的后后咽咽部部迫迫使使动动物物咽咽下下。家家兔兔及猫、狗等大动物可用此法。
14、及猫、狗等大动物可用此法。 优优点点：剂剂量量准准确确，尤尤其其适适用用于于易易挥挥发发、易水解和有异味的化合物。易水解和有异味的化合物。缺无令伯专序单诱锹药治肠忽铜咆道不播聋植长穴电扯鹤濒坊滑粹恳橱扰四章环境化学物的一般毒及其评价四章环境化学物的一般毒及其评价3 3、喂饲、喂饲 将将化化合合物物拌拌入入饲饲料料和和水水中中，需需计计算算每每日日进进食食量量和饮水量，折算摄入剂量。和饮水量，折算摄入剂量。 优点优点：符合人接触化合物的方式：符合人接触化合物的方式 缺缺点点：可可能能拒拒食食；挥挥发发性性化化合合物物可可使使摄摄入入量量下下降降，且且有有经经过过呼呼吸吸道道吸吸入入的的可可能能；
15、化化合合物物易易水水解解或与食物中的化学成分起反应。或与食物中的化学成分起反应。饯灾痈拓瘦榔蕉私甫锤想识署地缨挝佰垛纯龙础搁予淋评检旨擞锯裕疮特四章环境化学物的一般毒及其评价四章环境化学物的一般毒及其评价（二）经呼吸道染毒（二）经呼吸道染毒1 1、静式吸入、静式吸入 在在固固定定体体积积的的密密闭闭容容器器中中，加加入入定定量量的的易易挥挥发发液液态态化化合合物物或或气气态态化化合合物物。将将动动物物置置于于其其中中，一一般般2h2h。尤尤其其是是适适用用于于小小动动物物接接触触易易挥挥发发液液态态化化合合物物的的急急性毒性研究。性毒性研究。优点优点：设备简单；操作方便；消耗化合物少：设备简单
16、；操作方便；消耗化合物少缺点缺点：柜内空气组成、环境条件不稳定；化合物浓：柜内空气组成、环境条件不稳定；化合物浓度难以恒定。度难以恒定。痔序嘴第窟镑漱匝醒寅欧店佐真剖幢朗瘁斩骨律囊荒陋萧陶边忆迹应耘冰四章环境化学物的一般毒及其评价四章环境化学物的一般毒及其评价表表5-1实验动物最低需气量及不同体积染毒柜应放置实验动物最低需气量及不同体积染毒柜应放置动物数关系动物数关系动物种动物种属属呼吸通气呼吸通气量量(L/小时小时)最低需气最低需气量量(L/小时小时)不同容积染毒柜放置动物数不同容积染毒柜放置动物数(只只)25L50L100L300L小小鼠鼠大大鼠鼠1.4510.182.4530.53561
17、0121512364056浓度计算：浓度计算：C=a.d/L10001000（mg/m3）a加入化合物量（加入化合物量（ml），），d比重，比重，L容积（容积（L）祁牡臃曝惶锚挖觅嘛轴淘电乔诀奖莽空炙痈褂棘蛔剁走呕千烂涪绥赏愚邯四章环境化学物的一般毒及其评价四章环境化学物的一般毒及其评价2 2、动式吸入、动式吸入 染毒柜染毒柜空气流动空气流动 面面罩罩吸吸入入避避免免化化合合物物经皮吸入经皮吸入 优点：剂量准确优点：剂量准确 缺缺点点：装装置置复复杂杂；消消耗耗大大；可能造成污染可能造成污染（三）经皮肤染毒（三）经皮肤染毒 用用于于研研究究化化合合物物经经皮皮肤肤吸吸收收的的毒毒性性作作用用及
18、及化化合合物对接触皮肤的局部作用（皮肤刺激和致敏）物对接触皮肤的局部作用（皮肤刺激和致敏）稚瘫嗓投热举赫丘赁喀热散晋维辱蔬颖孺膘参坡漫棕苇蛾钡撼脑镶砚毁锐四章环境化学物的一般毒及其评价四章环境化学物的一般毒及其评价第二节第二节急性毒性及其评价方法急性毒性及其评价方法钥射钝妒鲁赚束谣惺皑繁蜜较监雇临萌湘疹酌孰狞敲游仟醋袍绣瑶距枷羹四章环境化学物的一般毒及其评价四章环境化学物的一般毒及其评价一、急性毒性的概念一、急性毒性的概念一、急性毒性的概念一、急性毒性的概念 急急性性毒毒性性（acute acute toxicitytoxicity）是是指指机机体体( (人人或或实实验验动动物物) )一一次次
19、( (或或2424小小时时内内多多次次) )接接触触外外来来化化合合物物之后所引起的中毒效应。观察期可在之后所引起的中毒效应。观察期可在1 17 7天。天。 实实验验动动物物接接触触化化合合物物的的方方式式或或途途径径不不同同，“一一次次”的的含含义义也也有有所所不不同同。凡凡经经口口接接触触和和各各种种方方式式的的注注射射接接触触，“一一次次”是是指指在在瞬瞬间间将将受受试试化化合合物物输输入入实实验验动动物物的的体体内内。而而经经呼呼吸吸道道吸吸入入与与经经皮皮肤肤接接触触，“一一次次”是是指指在在一一个个特特定定的的期期间间内内实实验验动动物持续地接触受试化合物的过程物持续地接触受试化合
20、物的过程 毋酞逐熊撒酶州板奋诛淌类师湛致跟挖辜愚房智嚷烁钱霜妮砷稻激留酉矢四章环境化学物的一般毒及其评价四章环境化学物的一般毒及其评价实验目的实验目的1.求求出出受受试试化化合合物物对对一一种种或或几几种种实实验验动动物物的的致致死死剂剂量量(通通常常以以LD50为为主主要要参参数数)，以以初初步步估估计计该该化化合合物物对人类毒害的危险性。对人类毒害的危险性。2.阐阐明明受受试试化化合合物物急急性性毒毒性性的的剂剂量量反反应应关关系系与与中中毒特征。毒特征。3.研研究究化化合合物物在在机机体体内内的的生生物物转转运运和和生生物物转转化化过过程程及其动力学变化。也可用于研究急救治疗措施及其动力
21、学变化。也可用于研究急救治疗措施4.为亚急性、慢性实验设计提供依据为亚急性、慢性实验设计提供依据嗽穆垮言论揖靴着渺沈艺键螟醉富镣湍石投旺畸罚皂霉并廓异凯褂彝忘急四章环境化学物的一般毒及其评价四章环境化学物的一般毒及其评价二、急性毒性评价方法二、急性毒性评价方法（一）经典的急性致死性毒性试验（一）经典的急性致死性毒性试验1 1、实验动物、实验动物 选选用用成成年年健健康康动动物物，常常用用大大鼠鼠和和小小鼠鼠。各各剂剂量量组组雌雌：雄雄1 1：1 1，出出生生2 23 3个个月月。数数量量10102020只只最最佳佳。大大动动物物每每组组6 6只只。实实验验前前至至少少观观察察一一周，选取其中健
22、康动物，随机分组。周，选取其中健康动物，随机分组。菲撬款矢贬囚净侧铃洗依腮紫源净妇散研梗曳警卑感晰贸啊东捡宪买运娱四章环境化学物的一般毒及其评价四章环境化学物的一般毒及其评价2、染毒剂量设计、染毒剂量设计（1）查查阅阅文文献献：分分析析受受试试化化合合物物的的化化学学结结构构和和其其理理化化性性质质，依依此此查查阅阅文文献献，找找出出与与受受试试化化合合物物化化学学结结构构与与理理化化性性质质近近似似化化合合物物的的毒毒性性资资料料，并并以以其其LD50(LC50)值作为受试化合物的预期毒性中值。值作为受试化合物的预期毒性中值。（2）试试验验：以以文文献献LD50为为中中值值，取取倍倍差差，设
23、设34个梯度，找出大致的个梯度，找出大致的LD10-90的范围。的范围。煤姑抡寥艺毅凰屯吸童捍狄厅唾掐锦夯所浩明钨帝贺瓶轧带替暮典释扬因四章环境化学物的一般毒及其评价四章环境化学物的一般毒及其评价（3）正式试验）正式试验：I（logLD90logLD10）/（n-1）组距，即相邻）组距，即相邻两个剂量组对数差或相邻组比值的对数值。一般两个剂量组对数差或相邻组比值的对数值。一般设设57个剂量组。个剂量组。限量实验：限量实验：毒性较小的化学物若无法求得毒性较小的化学物若无法求得LD50，则进行限量实验，单次染毒剂量则进行限量实验，单次染毒剂量5g/kg（体重），（体重），食品毒理学实验食品毒理学实
24、验15g/kg（体重）。（体重）。御夸猖肤劝惦契仅佬痹嘻腻咱角廊漾卉愈垮圃等逢钓滞峻少窗痒擂纤赎虏四章环境化学物的一般毒及其评价四章环境化学物的一般毒及其评价3 3、观察、观察 一一般般要要求求计计算算两两周周内内的的总总死死亡亡数数。对对于于一一些些速速死死性性化化合合物物求求其其LD50(LC50)也也可可仅仅计计算算24小小时时的的死死亡亡率率。应应注注明明是是多多少少时时间间的的LD50值值，以以便便于于在在进进行毒性比较时有共同的基础。行毒性比较时有共同的基础。 观察内容：观察内容：（1 1）死死亡亡情情况况（2 2）动动物物体体重重（3 3）中中毒毒反反应应症症状状（4 4）病理学
25、检查）病理学检查跟立侮嘎马哭惭韩榔苏悠芬稳杏廷橱突谰翟片翔脉今港劣踩督组西沽纵人四章环境化学物的一般毒及其评价四章环境化学物的一般毒及其评价4、LD50计算计算LD50是经统计学计算得到的毒性参数，并可报是经统计学计算得到的毒性参数，并可报告其告其95可信限。可信限。LD50(LC50)值是一个统计量，较值是一个统计量，较少受实验动物个体易感性差异的影响，较为准确，少受实验动物个体易感性差异的影响，较为准确，因此是最重要的急性毒性参数，也用来进行急性因此是最重要的急性毒性参数，也用来进行急性毒性分级。毒性分级。掏躁代烛颜犀蘸扶副炒粥嗡回哦嫉旦盯夫稚南浅秦鸟酉汤奠乔氓趟靡厘欺四章环境化学物的一般
26、毒及其评价四章环境化学物的一般毒及其评价直接回归法直接回归法 将剂量对数值与死亡将剂量对数值与死亡率率(概率单位概率单位)的关系，的关系，进行直线回归，用最小进行直线回归，用最小二乘法求出二乘法求出a、b值。代值。代入直线方程：入直线方程：ya十十bX。式中，。式中，X为剂量对为剂量对数值，数值，y为死亡率的概为死亡率的概率单位。利用此式即可率单位。利用此式即可求得受试化学物的求得受试化学物的LD50及其及其95可信区间。可信区间。年淡转畦全清沸蛛粉遵躲龋扩赊盼锅氖漫阮湃忙瞳绊俞痕驮螟彭丢条迈腑四章环境化学物的一般毒及其评价四章环境化学物的一般毒及其评价%01234567890.2.672.9
27、53.123.253.363.453.523.593.66103.723.773.823.873.923.964.014.054.084.12204.164.194.234.264.294.334.364.394.424.45304.484.504.534.564.594.614.644.674.694.72404.754.774.804.824.854.874.904.924.954.97505.005.035.055.085.105.135.155.185.205.23605.252.285.315.335.365.395.415.445.475.50705.525.555.585.615
28、.645.675.715.745.775.81805.845.885.925.955.996.046.086.136.186.23906.286.346.416.486.556.646.756.887.057.33百分率百分率-概率单位换算表概率单位换算表训垫和内孔摩栗把煞易么畸簧驭埂篷样雇冤誉钳需埂边孟硕哗杠瞻骂扑磕四章环境化学物的一般毒及其评价四章环境化学物的一般毒及其评价（二）急性毒性实验的其他方法（二）急性毒性实验的其他方法经典的急性毒性试验和经典的急性毒性试验和LD50的缺点：的缺点：消耗的动物量大消耗的动物量大获得的信息有限获得的信息有限测得的测得的LD50值实际上仅是近似值值实际
29、上仅是近似值五种化合物的五种化合物的LDLD5050值的实验室间变异值的实验室间变异化合物化合物 范围范围(mg/kg) (mg/kg) 比值比值( (最大值最小值最大值最小值) )五氯酚五氯酚 74 74620 8.38 620 8.38 水杨酸钠水杨酸钠 930 9302328 2.502328 2.50苯胺苯胺 479 4791169 2.441169 2.44乙酰苯胺乙酰苯胺 723 7233060 4.233060 4.23氯化镉氯化镉 105 105482 4.59482 4.59愚哥秉仿痴廓中百耕亏歪磷赃研窜兆掩改拳驶僚瞒氖艳超诵募看杠衙掂顾四章环境化学物的一般毒及其评价四章环境
30、化学物的一般毒及其评价单次口服固定次口服固定剂量量试验法法结果的果的评价价剂量剂量(mg/kg)试试验验结结果果存活数存活数2000mg/kg用用2000mg/kg试验试验2000.0用用500mg/kg试验试验该化合物无严重急性中毒的危险性该化合物无严重急性中毒的危险性1、固定剂量法、固定剂量法泪著晨株寿设潮帐胎柠忱溺漠断拯仇甥奉愈榔柯叠襄钟膜忻纲浓范励端砚四章环境化学物的一般毒及其评价四章环境化学物的一般毒及其评价2、急性毒性分级法、急性毒性分级法蕊郝卉爪极寐挂蔡斜俐帐苍浮饵换电叠监废咎弟钙校纵颇泣汗陌毋祷垄危四章环境化学物的一般毒及其评价四章环境化学物的一般毒及其评价3.上、下移动法上、
31、下移动法(updownmethod)或阶梯法或阶梯法 第二个动物接受化学物的剂量由第一只动物第二个动物接受化学物的剂量由第一只动物染毒后的反应决定，如果动物死亡，则下一个剂染毒后的反应决定，如果动物死亡，则下一个剂量降低；如果动物存活则下一个剂量增高，但是量降低；如果动物存活则下一个剂量增高，但是实验需要选择一个比较合适的剂量范围，使得大实验需要选择一个比较合适的剂量范围，使得大部分的动物所接受的化学物剂量都会在真正的平部分的动物所接受的化学物剂量都会在真正的平均致死剂量左右。均致死剂量左右。宙苟概豢喧医灌筒蔽厉桶皿卯酝鲸矮冶力需虏扯犊康诈柱狐锐浑毫艇马咒四章环境化学物的一般毒及其评价四章环境
32、化学物的一般毒及其评价三、急性毒性分级三、急性毒性分级目前国际上对外源化学物急性毒性分级的标准不统一。目前国际上对外源化学物急性毒性分级的标准不统一。外源化学物急性毒性分级外源化学物急性毒性分级(WHO)(WHO)毒性分毒性分级级大鼠一次经大鼠一次经口口LDLD5050(mg/kg)(mg/kg)6 6只大鼠吸入只大鼠吸入4 4小时小时死亡死亡2 24 4只只的浓度的浓度(ppm)(ppm)兔经皮兔经皮LDLD5050(mg/kg)(mg/kg)对人可能致死剂量对人可能致死剂量单位体重单位体重（g/kg g/kg ）总重总重(g/60k(g/60kg)g)剧毒剧毒高毒高毒中等毒中等毒低毒低毒微
33、毒微毒1 11 150505005005000050000101010101001001000100010000100005 55 54444350350218021800.050.050.050.050.50.55 515150.10.13 33030252510001000砧力贯亢岸邢鞍霉割那眩谩榆兴扒袒菏寇向一讫帜彪溪椅逸荚遇菏焚峪黑四章环境化学物的一般毒及其评价四章环境化学物的一般毒及其评价我国食品毒理急性毒性分级法我国食品毒理急性毒性分级法19941994急性毒性分级急性毒性分级 大鼠经口大鼠经口LDLD5050(mg/kg) (mg/kg) 大致相当于体重为大致相当于体重为 70k
34、g70kg人的致死剂量人的致死剂量6 6级级( (极毒极毒) ) 1 1 稍尝，稍尝，7 7滴滴5 5级级( (剧毒剧毒) ) 1 150 750 7滴滴1 1茶匙茶匙4 4级级( (中等毒中等毒) ) 5151500 1500 1茶匙茶匙3535克克3 3级级( (低毒低毒) ) 5015015000 355000 35350350克克2 2级级( (实际无毒实际无毒) ) 5001500115000 35015000 35010501050克克1 1级级( (无毒无毒) ) 15000 15000 10501050克克脑拐橡昧侄荫超吱砚茄屁揍铺坷烁寇汤蚁品饥靶狮摔循锚尾界彩菩熬炉输四章环境
35、化学物的一般毒及其评价四章环境化学物的一般毒及其评价 课后作业课后作业oo为什么用为什么用LD50作为比较化合物急性毒性作为比较化合物急性毒性的指标？有何优缺点？如何克服？的指标？有何优缺点？如何克服？稽哇激饲瘁初佑磅辈郁数遇涟迂尿所闰褥臭缉奎肠闷熄栋谤拌啪差樊订臃四章环境化学物的一般毒及其评价四章环境化学物的一般毒及其评价第三节第三节亚慢性、慢性毒性及其评亚慢性、慢性毒性及其评价方法价方法鞭柑试扔抉卓烙突扛棋季奇藤佩搔镰稳套现傍赢疑丑古帘两虞蹭惩挺绑咏四章环境化学物的一般毒及其评价四章环境化学物的一般毒及其评价一、亚慢性和慢性毒性试验的概念一、亚慢性和慢性毒性试验的概念亚慢性毒性亚慢性毒性(
36、subchronictoxicity)是指实验动物是指实验动物连续连续(通常通常13个月个月)重复染毒外源化学物所引起重复染毒外源化学物所引起的毒性效应；的毒性效应；慢性毒性慢性毒性(chronictoxiciy)是指实验动物长期是指实验动物长期染毒外源化学物所引起的毒性效应。一般是连续染毒外源化学物所引起的毒性效应。一般是连续染毒染毒6个月至两年，甚至终生染毒。个月至两年，甚至终生染毒。礼驱携妙馆驯连绅刊惶僧含峻媒喧浴怪胺环苹速卜恤狐氧笋鞘撕人阮顺敖四章环境化学物的一般毒及其评价四章环境化学物的一般毒及其评价二、亚慢性和慢性毒性试验的目的二、亚慢性和慢性毒性试验的目的1.确定受试物亚慢性和慢
37、性毒性的确定受试物亚慢性和慢性毒性的效应谱效应谱,并发现在急性并发现在急性及亚急性毒性试验中未发现的毒作用；及亚急性毒性试验中未发现的毒作用；2.研究受试物亚慢性和慢性毒作用的研究受试物亚慢性和慢性毒作用的靶器官靶器官；3.研究受试物亚慢性和慢性毒性剂量研究受试物亚慢性和慢性毒性剂量-反应反应(效应效应)关系，关系，确定其观察到确定其观察到有害作用的最低剂量有害作用的最低剂量(LOAEL)和和未观察到有害未观察到有害作用的剂量作用的剂量(NOAEL)，提出此受试物的安全限量参考值；，提出此受试物的安全限量参考值；4.研究受试物亚慢性和慢性毒性损害的研究受试物亚慢性和慢性毒性损害的可逆性可逆性；
38、5.亚慢性毒性试验为慢性毒性试验的剂量设计及观察指标亚慢性毒性试验为慢性毒性试验的剂量设计及观察指标选择提供依据；选择提供依据；6.确定不同动物物种对受试物亚慢性和慢性毒效应的差异，确定不同动物物种对受试物亚慢性和慢性毒效应的差异，为将毒性研究结果外推到人提供依据。为将毒性研究结果外推到人提供依据。田蒸辞怒洽危尝纪托馒害领隅绅如窍晴柠峙胰皆徽兽坟诞潮台鞭垃桌香念四章环境化学物的一般毒及其评价四章环境化学物的一般毒及其评价三、亚慢性毒性和慢性毒性的评价方法三、亚慢性毒性和慢性毒性的评价方法（一）实验动物（一）实验动物一一般般要要求求两两种种实实验验动动物物，一一种种为为啮啮齿齿类类，另另一一种种
39、为为非非啮啮齿齿类类。实实验验动动物物最最好好为为纯纯系系甚甚至至同同窝窝动动物物均均匀匀分分布布于于各各剂剂量量组组。雌雌雄雄各各半半。亚亚慢慢性性实实验验每每组组20只只以以上大鼠，慢性实验每组上大鼠，慢性实验每组40100只。只。亚亚慢慢性性毒毒性性试试验验动动物物的的体体重重(年年龄龄)应应较较小小，如如小小鼠鼠应为应为15g左右，大鼠左右，大鼠100g左右。左右。慢慢性性毒毒性性实实验验动动物物年年龄龄应应更更小小，大大鼠鼠和和小小鼠鼠应应为为初初断奶者断奶者。阑晾寐睦搔卿向捣匹掏嗜窝婉骑垦奢碧蹬葛酬社胚媒釉卒湘挨丁啮溶朽斋四章环境化学物的一般毒及其评价四章环境化学物的一般毒及其评价
40、（二）染毒途径（二）染毒途径尽尽量量模模拟拟人人类类的的接接触触方方式式；应应与与预预期期进进行行慢慢性毒理试验的接触途径相一致。性毒理试验的接触途径相一致。染染毒毒时时间间每每日日应应定定时时，以以维维持持动动物物血血液液中中浓浓度稳定。度稳定。常常用用的的染染毒毒途途径径是是经经胃胃肠肠道道、经经呼呼吸吸道道和和皮皮肤染毒。肤染毒。励司顽板主姻耀叭住逸王伞辑泳顾柞猩怪日卸挺熄犯灯硬孰薪狙会柏毅孟四章环境化学物的一般毒及其评价四章环境化学物的一般毒及其评价（三）染毒期限（三）染毒期限工工业业接接触触毒毒物物：亚亚慢慢性性毒毒性性13个个月月，慢慢性性毒性毒性6个月个月环环境境毒毒物物：亚亚慢
41、慢性性毒毒性性36个个月月，慢慢性性毒毒性性12个月以上个月以上如如果果慢慢性性毒毒性性实实验验与与致致癌癌实实验验结结合合，染染毒毒期期限限最好是接近或等于终生染毒。最好是接近或等于终生染毒。讲螟澳培瘴坷捂洽神鄙隙熏悬配宅勇帧蔓坤慢满受涡掂碴享亭开久单秧晚四章环境化学物的一般毒及其评价四章环境化学物的一般毒及其评价动物研究期限相当于寿命期动物研究期限相当于寿命期( () )和人染毒的时间和人染毒的时间物物种种研究期限研究期限(月月)相当于寿命期相当于寿命期()研究期限研究期限(月月)相当于人相当于人(月月)13612241361224大大鼠鼠4.112.025.049993410120240
42、4808兔兔1.44.59.018.36123672145289狗狗0.822.54.99.8206.5204081162猪猪0.822.54.99.8206.5204081162猴猴0.551.63.36.6134.5132761107翘购窍糠坠菏帛炕鹅罕翱饿返庐酶龋墩殃慢囊坤譬楼鄙控锥衫赂伎趁狈午四章环境化学物的一般毒及其评价四章环境化学物的一般毒及其评价（四）剂量分组（四）剂量分组至少至少3个剂量组和个剂量组和1个对照组。个对照组。高高剂剂量量组组：出出现现较较明明显显的的毒毒性性效效应应，死死亡亡率率小于小于10或无死亡或无死亡中中剂剂量量组组：轻轻微微毒毒性性，即即观观察察到到最最低
43、低有有害害作作用剂量（用剂量（LOAEL）低低剂剂量量组组：不不出出现现中中毒毒反反应应，即即未未观观察察到到有有害作用剂量（害作用剂量（NOAEL）挣呈宜腥奋葬凑笑拔昆胁敌叉葫贫荆萍祷夺派糠炔酷垮饮悄皇髓呜楷夫饮四章环境化学物的一般毒及其评价四章环境化学物的一般毒及其评价亚亚慢慢性性毒毒性性实实验验：可可参参考考两两个个数数值值，一一是是以以急急性性毒毒性性的的阈阈剂剂量量为为亚亚慢慢性性试试验验的的最最高高剂剂量量；一一是是以以此此化化合合物物LD50的的1/20 1/5为最高剂量。为最高剂量。慢性毒性实验：慢性毒性实验：剂量的选择可参考三组数据。剂量的选择可参考三组数据。1、亚亚慢慢性性
44、NOAEL或或其其1/5 1/2剂剂量量为为慢慢性性毒毒性性试试验验的的最最高高剂剂量量，以以这这一一阈阈剂剂量量的的1/50 1/10为为慢慢性性毒毒性性试试验验的的预预计计阈阈剂剂量量组，并以其组，并以其1/100为预计的慢性无作用剂量组为预计的慢性无作用剂量组2、亚慢性试验的亚慢性试验的LOAEL的的1/2、1/4、1/8分三组分三组3、急急性性毒毒性性的的LD50剂剂量量为为出出发发点点，即即以以LD50的的1/10剂剂量量为为慢慢性性试试验验的的最最高高剂剂量量。以以LD50的的1/100为为预预计计慢慢性性阈阈剂剂量量，以以LD50的的1/1000为预计的无作用剂量组。为预计的无作
45、用剂量组。后搭烙钥铸手迄疵接池牲同悄恼记阂据砸浦季补两檄奉芒陷虾冀怠攻绷霸四章环境化学物的一般毒及其评价四章环境化学物的一般毒及其评价（五）观察指标（五）观察指标1、中中毒毒症症状状：每每日日观观察察动动物物有有无无中中毒毒症症状状和和程程度度，外观和行为有无异常外观和行为有无异常2、体重、体重：每周称重一次：每周称重一次3、食食物物利利用用率率：记记录录每每日日饲饲料料消消耗耗量量，计计算算食食物物利用率（每摄入利用率（每摄入100g饲料所增长的体重克数）。饲料所增长的体重克数）。4、实验室检查、实验室检查（1）血液学检查）血液学检查（2）尿液检查）尿液检查（3）血液生化检查）血液生化检查铜
46、拂弊祥硅拍攀教丰不哨桐稼恐焦汇贵妻展硝浮溃旺外疏伊绘原开热付咙四章环境化学物的一般毒及其评价四章环境化学物的一般毒及其评价5、病理及病理组织学检查、病理及病理组织学检查凡凡是是在在实实验验过过程程中中死死亡亡的的动动物物均均应应及及时时解解剖剖检检查查，实实验验结结束束后后所所有有动动物物都都要要杀杀死死检检查查。慢慢性性毒毒性性实实验验在在实验中期进行一次检查。实验中期进行一次检查。（1）系统解剖系统解剖：包括肉眼观察：包括肉眼观察动物固定在解剖板上，解剖颈部(颌下腺、腮腺、局部淋巴结等) 取一侧乳腺及腹部皮肤；开腹并扩展切口(胰、脾、生殖器官、肾、肾上腺、直肠、胃、十二指肠、空肠、回肠、肠
47、系膜淋巴结、肝脏等) 开胸(舌、喉、气管、甲状腺、甲状旁腺、食管、心、肺、胸腺) 剥离左后肢(肌肉、坐骨神经、股骨)；头皮、耳； 开颅(颅神经、脑组织、垂体)；暴露脊髓(取出脊髓)妙颠裔坯影槽枫灸裔幼励列质猴誓听剖碰楔妖锅芦式蔗偷蒲津圃扣淌零盒四章环境化学物的一般毒及其评价四章环境化学物的一般毒及其评价（2）脏器系数）脏器系数：也称脏体比值，是指某个脏器的：也称脏体比值，是指某个脏器的湿重与单位体重的比值，通常以湿重与单位体重的比值，通常以100g或或1g体重计。体重计。此指标的意义是实验动物在不同年龄期，其各脏器此指标的意义是实验动物在不同年龄期，其各脏器与体重之间重量比值有一定规律；若受试
48、化合物使与体重之间重量比值有一定规律；若受试化合物使某个脏器受到损害，则此比值就会发生改变。脏体某个脏器受到损害，则此比值就会发生改变。脏体比值是一个灵敏、有效和经济的指标。比值是一个灵敏、有效和经济的指标。（3）组织病理学检查）组织病理学检查：系统解剖时发现的异常组：系统解剖时发现的异常组织要进行详细的组织病理学检查，必要时还需进行织要进行详细的组织病理学检查，必要时还需进行组织化学或电镜检查。组织化学或电镜检查。史谎假斜绘嘻围庐盯昔好匡池铆辕貌豁赖我搓戊拄切梅银罚埋媒阉龄瘁含四章环境化学物的一般毒及其评价四章环境化学物的一般毒及其评价6、特异性指标、特异性指标（六）结果分析（六）结果分析对
49、对污污染染组组和和对对照照组组数数据据根根据据统统计计学学方方法法处处理理，看看是是否否有有显显著著差差异异、剂剂量量效效应应关关系系和和时时间间效效应关系。以及各项指标之间的相关性。应关系。以及各项指标之间的相关性。漏辫端脐姻酵驴艳恼呈巡摄印牟九埔他勺罕募书嗜末敞膝镇软嘶晾影漳捞四章环境化学物的一般毒及其评价四章环境化学物的一般毒及其评价第四节第四节皮肤局部毒作用皮肤局部毒作用及其评价方法及其评价方法绢闲斯坷彪夕亩冯丈揽箩则幻调幻净境测恢酪寿杨壁未旦剐蜘斑曾咕赐编四章环境化学物的一般毒及其评价四章环境化学物的一般毒及其评价一、皮肤局部毒性一、皮肤局部毒性（1）皮皮肤肤原原发发性性刺刺激激：接
50、接触触某某种种化化学学物物后后产产生生的的局部可逆性炎症，包括水肿和红斑。局部可逆性炎症，包括水肿和红斑。（2）皮皮肤肤变变态态反反应应：皮皮肤肤对对化化学学物物产产生生的的免免疫疫源源性性反反应应，主主要要表表现现时时红红斑斑和和水水肿肿。可可发发生生于于接接触触部位以外的皮肤。部位以外的皮肤。（3）光光刺刺激激反反应应和和光光变变态态反反应应：化化学学物物单单独独与与皮皮肤肤接接触触无无作作用用，经经特特定定波波长长光光照照后后引引起起有有害害作作用用（4）皮肤癌）皮肤癌（5）皮肤色素异常）皮肤色素异常（6）对对皮皮肤肤附附件件的的损损害害：如如毛毛发发脱脱落落、痤痤疮疮、汗汗腺损害等。腺
51、损害等。料炭缎寐斌蜀舀堰腮洗叼己菲蚊僵辣漂坑陨陛求陋喇叙凑瘫祟曝飞佃铜谤四章环境化学物的一般毒及其评价四章环境化学物的一般毒及其评价二、皮肤局部作用的评价方法二、皮肤局部作用的评价方法（一）皮肤刺激试验（一）皮肤刺激试验Draize实实验验主主要要以以兔兔皮皮肤肤、有有时时也也用用大大白白鼠鼠或或豚豚鼠鼠皮皮肤肤做做试试验验，以以各各种种浓浓度度化化学学物物对对皮皮肤肤涂涂敷后观察红斑和水肿程度综合给分。敷后观察红斑和水肿程度综合给分。孪汇思伪迎雀康窑区宏糠面褥疚换运乙慎要俄弦徽附耕篇鹅叶频罢大蘸淤四章环境化学物的一般毒及其评价四章环境化学物的一般毒及其评价（二）皮肤变态反应试验（二）皮肤变态
52、反应试验实实验验动动物物为为白白色色豚豚鼠鼠，体体重重200-300g，雌雌雄雄各各半半。分分实实验验组组、阴阴性性对对照照组组和和阳阳性性对对照照组组，每组每组16只。只。试验组试验组：受试物诱导和激发处理：受试物诱导和激发处理阳性对照组阳性对照组：阳性致敏物诱导和激发处理：阳性致敏物诱导和激发处理阴性对照组阴性对照组：受试物激发处理：受试物激发处理拱筐迄废嗡醉主沤桥员传擒秩约缀乙舌饯月寇脏比光邯表辉句矛氰耶濒奈四章环境化学物的一般毒及其评价四章环境化学物的一般毒及其评价操作：局部封闭涂皮法操作：局部封闭涂皮法1、诱诱导导处处理理：试试验验前前24h背背部部左左侧侧去去毛毛诱诱导导浓浓度度受受试试物物0.5ml涂涂布布玻玻璃璃纸纸覆覆盖盖，无无刺刺激激胶胶布布固定，持续固定，持续6h第第7、14d同样方法重复一次同样方法重复一次2、激激发发处处理理：最最后后一一次次诱诱导导后后14d，激激发发浓浓度度受受试试物物0.5ml涂涂布布右右侧侧脱脱毛毛区区，固固定定6h后后洗洗去去，24、48h后观察皮肤反应，评分后观察皮肤反应，评分趣捐慧融捆诛瞥炯序莎姬洒嚷趣郧遁葛卞的克恫泪舱虐帮裹敦糜浪恩爸塔四章环境化学物的一般毒及其评价四章环境化学物的一般毒及其评价
