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1、PCRPCR技术与技术与遗传病遗传病产前诊断产前诊断1lPCRPCR在在遗传病遗传病产前诊断中的地位产前诊断中的地位lPCRPCR在在遗传病遗传病产前诊断的应用产前诊断的应用2PCRPCR在在遗传病遗传病产前诊断中的地位产前诊断中的地位PCRPCR技术能在短时间内将靶技术能在短时间内将靶DNADNA扩增百万倍，操作简扩增百万倍，操作简便，省时，准确。它不仅能直检突变基因，而且可便，省时，准确。它不仅能直检突变基因，而且可与其它技术结合，使其诊断的准确性几乎达与其它技术结合，使其诊断的准确性几乎达100%.100%.因而它已成为目前遗传病产前诊断的主要手段因而它已成为目前遗传病产前诊断的主要手段
2、. .3产前基因诊断胎儿标本的来源产前基因诊断胎儿标本的来源由于PCR技术本身的特点，即可在短时间内将微量的DNA扩增数百万倍，因此它适应于各种来源的DNA标本.(1)羊水穿刺，在如15周后可经母亲脆壁穿刺获羊水，其内含有大量的胎儿脱细胞5-10ml羊水即可获得足够量的PCR分析DNA样品.(2)绒毛采样，在如早期(9-12周)经阴道在B超引导采取绒毛样品，它含有丰富的DNA.4(3)(3)胎儿血液采集胎儿血液采集: :有简条途径有简条途径: :胎儿脐静脉穿刺，胎儿胎儿脐静脉穿刺，胎儿锁采集锁采集. .(4)(4)胎儿活检胎儿活检: :可用穿刺取样，亦可经胎儿镜取样可用穿刺取样，亦可经胎儿镜取
3、样. .可在可在始始17-1917-19周进行周进行5（一）（一）PCRPCR技术直接诊断遗传病技术直接诊断遗传病（1 1）、对于由）、对于由基因缺失基因缺失突变引起的遗传病可利用缺失区突变引起的遗传病可利用缺失区域的域的DNADNA序列引物直接扩增该区域，看有无特异性的扩增序列引物直接扩增该区域，看有无特异性的扩增产物产物6型地中海贫血型地中海贫血是一组遗传性溶血性是一组遗传性溶血性贫血疾病。由于遗传贫血疾病。由于遗传的的型珠蛋白基因簇型珠蛋白基因簇致使血红蛋白中致使血红蛋白中珠珠蛋白链合成缺如或不蛋白链合成缺如或不足所导致的贫血或病足所导致的贫血或病理状态理状态。（其中缺失其中缺失的基因包
4、括的基因包括1 1、2 2、1 1 和部分和部分基基因。）因。）7u通过孕通过孕15 15 周的羊膜穿刺或孕周的羊膜穿刺或孕7 10 7 10 周周的绒毛取样获得胎儿细胞的绒毛取样获得胎儿细胞, ,提取提取DNADNA进行进行检测检测u用用P C RP C R法法扩增扩增2 2和和1 1 之间区域之间区域, , 长长13 6 b P13 6 b P。u 也也在同在同一个标本同一个标本同时扩增时扩增珠蛋白基珠蛋白基因作为因作为对照对照，长，长110bp 110bp uP C R P C R 后电泳检测。后电泳检测。8l纯合子病人纯合子病人电泳结果只显示一条电泳结果只显示一条110b 110b p
5、 p 的的珠蛋白基因片段。珠蛋白基因片段。l正常个体正常个体则同时显示则同时显示1 1 0b p 1 1 0b p 的的珠珠蛋白基因片段和蛋白基因片段和1 3 6 b p1 3 6 b p的的a a 珠蛋白珠蛋白基因片段。基因片段。l根据特异扩增带的有无即可作出判断。根据特异扩增带的有无即可作出判断。结果：结果：2024/7/239（2 2）对）对基因的重排基因的重排来说，当点突变影来说，当点突变影响到限制性内切酶切点时，将扩增产物响到限制性内切酶切点时，将扩增产物用适当的内切酶切割，然后据电泳图谱用适当的内切酶切割，然后据电泳图谱复制判断有无内切酶切点的改变复制判断有无内切酶切点的改变10镰
6、状细胞性贫血镰状细胞性贫血分子基础是分子基础是珠蛋白基因第珠蛋白基因第6 6 密码子密码子G A G G T G G A G G T G 即即A A T T的转变的转变11l以以P C R P C R 法扩增法扩增- -珠蛋白基因中一个珠蛋白基因中一个294bp294bp片段。片段。l扩增产物以限制性内切酶扩增产物以限制性内切酶OxaNIOxaNI消化（消化（内内切酶切酶OxaNIOxaNI的作用位点为的作用位点为GAGGAG) )。l产物经产物经E BE B染色或银染、电泳染色或银染、电泳12l正常个体正常个体产生产生191bp191bp和和103bp103bp两个片段。两个片段。l纯合子患者纯合子患者则只有一个未被酶解的则只有一个未被酶解的294bp 294bp 的片段。的片段。l杂合子患者杂合子患者总共产生三个片段。总共产生三个片段。可直接观察到不同长度的条带可直接观察到不同长度的条带, , 由此即可进由此即可进行区别行区别。结果：结果：2024/7/2313谢谢谢谢14
