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1、实验技术六放线菌的培养与形态观察 一、实验目的一、实验目的1. 1. 学习并掌握用玻璃纸培养放线菌的方法；学习并掌握用玻璃纸培养放线菌的方法；2. 2. 观察放线菌的培养特征；观察放线菌的培养特征；3. 3. 初步了解放线菌的个体形态特征。初步了解放线菌的个体形态特征。二、基本原理 玻璃纸具有半透膜性，其透光性与载玻片基本相同。将灭菌的玻璃纸覆盖在琼脂平板表面，然后将放线菌接种于玻璃纸上，经培养使放线菌生长在玻璃纸上。观察时，将长菌的玻璃纸剪取小片，贴放在载玻片上，直接镜检。这种方法可观察到放线菌的自然生长状态，也便于观察不同生长期的形态。三、实验器材三、实验器材1. 菌种：405（球孢链霉菌
2、）和 4029（紫色链霉菌）；2. 培养基：高氏号培养基；3. 其他器材：无菌平皿、无菌玻璃纸、无菌盖玻片、无菌玻璃涂棒、1mL无菌吸管、盛有9mL无菌水试管若干支、无菌镊子、酒精灯、接种环、剪刀、载玻片、显微镜等。四、实验步骤四、实验步骤1. 玻璃纸灭菌 将玻璃纸和滤纸剪成与培养皿大小相同的圆形纸片，用水浸泡后把湿滤纸和玻璃纸交互重叠地放在培养皿中，使滤纸和玻璃纸隔开，然后进行湿热灭菌，备用。2. 制备琼脂玻璃纸平板培养物（1）将高氏一号琼脂培养基熔化后倒平板，待凝固后，无菌操作用镊子将玻璃纸覆盖在琼脂平板上，展平。（2）稀释菌液：将放线菌斜面菌种制成10-3的孢子悬液。（3）接种：用1mL
3、无菌吸管取0.2mL孢子悬液滴加在玻璃纸平板上，然后用无菌涂棒涂抹均匀。也可用接种环挑取菌种斜面菌苔在玻璃纸上划线。（4）培养：将平板倒置于28-30下培养5-7天。 在洁净载玻片上加一杯水，用剪刀剪取小片玻璃纸，菌面朝上平贴在玻片的水滴上（勿产生气泡），先用低倍镜观察，再用高倍镜找到适宜部位，用油镜仔细观察。要区别基内菌丝、气生菌丝、孢子丝及孢子的形态、粗细和颜色的差异。3. 自然生长状态的观察注意：1. 接种时注意玻璃纸与培养基间不宜有气泡，以免影响其表面放线菌的生长；2. 操作过程，勿碰动玻璃纸菌面上的培养物。五五、思考题思考题1. 1. 为什么在培养基上放了玻璃纸后放线菌为什么在培养基上放了玻璃纸后放线菌仍能生长？仍能生长？2. 2. 玻璃纸法可否用于其他微生物？为什么？玻璃纸法可否用于其他微生物？为什么？
