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1、牛人工授精技术员培训牛人工授精技术员培训萨吾塔力萨吾塔力.达吾肯达吾肯伊犁畜牧科学研究所伊犁畜牧科学研究所135652469181优选课资牛冷配改良技术要点1、子宫解剖、子宫解剖2、发情鉴定、发情鉴定3、卵泡与黄体、卵泡与黄体4、输精时间、输精时间5、输精部位、输精部位6、难孕牛治疗、难孕牛治疗2优选课资3优选课资4优选课资 1、子宫解剖5优选课资6优选课资2、发情鉴定、发情鉴定7优选课资8优选课资3、卵泡与黄体、卵泡与黄体9优选课资10优选课资11优选课资牛冷冻精液配种的工作房间的要求牛冷冻精液配种的工作房间的要求(1) 有3-5平方米的面积，能放下一个液氮罐和一张工作用桌；使用一间独立的房
2、屋或在一个避静、卫生的房间选用一个角皆可。地面以水泥或砖地为好，易打扫，灰尘少。(2)房间应有水、电，房间及周围环境应干净、卫生、干燥、通风。(3)每日应打扫地面卫生，擦去桌面和器具的尘土，一周(至少一个月)应大扫除一次。(4)房间内不能存放有挥发性气味的药品，室内禁止吸烟、禁止堆放与工作无关的物品。12优选课资牛冷冻精液解冻注意事项牛冷冻精液解冻注意事项(1)所有直接接触冷冻精液的器具及容器都应是灭菌消毒过的。防止液氮罐内和解冻过程中的污染，如镊子、装解冻液和精液的容器等(2)3238是适宜的解冻温度，温度低了影响精子的恢复，高于42会使精子迅速死亡；13优选课资冷冻精液解冻后的存放注意事项
3、冷冻精液解冻后的存放注意事项(1) 解冻后就应将精液从水浴中取出，长时间放在较高的温度下，会加速精子的衰竭；(2) 解冻后尽快输精，常用的解冻液成分比较简单，不能长时间保存精液，解冻后输精越快越好，细管冷冻精液最多不能超过1小时，颗粒冷冻精液最多不能超过2小时；(3) 解冻后不能再次急剧的升温或降温，否则会影响冻精的活力；(4)解冻后需要远距离运输的，可用1015解冻，解冻后用棉花等包裹好，低温保存(5)和携带，可延长精子的存活时间数小时。14优选课资用显微镜检查精液活力用显微镜检查精液活力载玻片、盖玻片和其它接触精液的器具应预热，加热时又要注意不能超过40。注意使用器具的卫生和溶液的质量。显
4、微镜物镜不要直接沾上了精液。对焦距时将显微镜镜头从下往上运动，先将镜头靠近盖玻片，再逐渐轻缓地上移聚焦，以免损坏镜头和载玻片。用放大100200倍观察即可，视野大，可看到精液的总体情况，操作容易。15优选课资输精时间输精时间 发情开始后发情开始后824h适宜输精时间适宜输精时间发情开始发情开始 发情结束发情结束 0 12 24 排卵排卵 输精部位输精部位 卵泡侧的子宫角基部 子宫颈内口处的子宫体基部输精次数 1-2次16优选课资-17优选课资18优选课资19优选课资20优选课资21优选课资22优选课资23优选课资24优选课资25优选课资26优选课资27优选课资直把输精操作技术直把输精操作技术(
5、1)输精员在操作前戴好长臂手套或徒手涂以润滑剂，输精器按操作规程装好精液备用，配种牛保定牢靠；(2)将一只手（左手更方便些）伸入母牛直肠内，掏出粪便，清洗母牛外阴部并擦干。用伸入直肠的手隔着直肠壁找到子宫颈并轻握，主要用大拇指、食指和中指固定和调整子宫颈的位置。另一只手持输精器沿阴道上壁先斜向上，再平直向前，至子宫颈外口处；(3) 双手凭感觉协同操作，主要靠伸入直肠的手调整转动子宫颈的方向通过子宫颈。输精器通过子宫颈的螺旋皱襞后，把精液输入刚过子宫颈内口的子宫体基部或卵泡侧子宫角内。28优选课资直把输精操作注意事项直把输精操作注意事项(1)插入输精管时要小心谨慎，不可用力过猛，以防输精器穿破子
6、宫颈或子宫壁(没必要输入太深)。(2)个别母牛努责，直肠壁收缩紧张，子宫颈也向后移。这时，可把手前伸，刺激肠壁，使其放松，然后握住子宫颈向前推，使阴道壁伸展，以便于输精管插入。(3)有些母牛子宫垂入腹腔，可用手握住子宫颈慢慢往上提，才便于输精管通过。29优选课资(4)有时输精管已到达子宫颈口，就是不好插入，这可能是子宫颈开张不好，有炎症、颈口有疤痕等，或许是已孕母牛假发情，遇到这些情况要认真检查，诊断清楚，妊娠牛强行深部输精会引起流产。(5)操作时应主要靠直肠内的手调整子宫的位置，不能靠持输精器的手硬戳。(6)术者最好先将阴唇掰开(或由助手协助)，把输精器插入阴道后再将操作手伸入直肠，也可将伸
7、入直肠的手臂往侧下压，使阴门裂张开，这样输精器头部不会碰到阴唇外部，不易被污染。30优选课资牛配种时间不宜过早牛配种时间不宜过早母牛发情持续时间母牛发情持续时间 18-24小时小时排卵排卵 发情结束后的发情结束后的6-12小时小时 精子在母牛生殖道的存活时间精子在母牛生殖道的存活时间 12-20小时小时精子在子宫和输卵管内获能需数小时精子在子宫和输卵管内获能需数小时卵子排出后能够保证正常受精的时间为数小时卵子排出后能够保证正常受精的时间为数小时31优选课资母牛发情适时输精时间母牛发情适时输精时间母牛发情后的母牛发情后的12-24小时是适宜的输精时间，小时是适宜的输精时间，6-27小小时也可以。
8、时也可以。凌晨或上午发情的牛可在下午或傍晚配种，下午或傍凌晨或上午发情的牛可在下午或傍晚配种，下午或傍晚发情的牛可以在第二天上午配种。晚发情的牛可以在第二天上午配种。一次输精配种，在发情后一次输精配种，在发情后18-24小时。小时。 有些发情持续时间长、排卵延迟的牛需第三次输精，有些发情持续时间长、排卵延迟的牛需第三次输精，以确保精卵能够结合受精。以确保精卵能够结合受精。32优选课资母牛一次发情输精次数母牛一次发情输精次数有经验的技术员，在发情开始后的18-24小时一次输精即可达到满意地受胎率(60)。两次输精法，即在母牛发情后约12小时(早晨或上午发情，在下午或傍晚配种，下午发情的牛第二天早
9、配种)第一次输精，间隔约12小时第二次输精。发情时间延长的母牛需第三次输精。33优选课资输精部位输精部位卵泡侧的子宫角基部。子宫颈内口处的子宫体基部两角及子宫体基部三点输精子宫颈难通过的牛也可输入子宫颈深部，当然这会损失一部分精液。常规操作 轻缓地将精液输在刚通过子宫颈内口处的子宫体基部。可用食指在子宫颈内口和子宫体部轻轻触摸输精器的头部确定位置。34优选课资为什么输精部位不能太深？为什么输精部位不能太深？直把输精不是越深越好。没有必要将精液送得超过子宫角的弯曲部，这是因为：(1) 精子在发情母牛的子宫内运行的很快。精子在发情母牛的子宫内运行的很快。十多分钟甚十多分钟甚至几分钟即可到达输卵管，
10、精子在子宫内运行有助于精子的获能。至几分钟即可到达输卵管，精子在子宫内运行有助于精子的获能。(2) 子宫结构子宫结构 子宫角向下弯曲，发情时子宫水肿和充血，输精器子宫角向下弯曲，发情时子宫水肿和充血，输精器插的太深容易损伤子宫内膜，影响了受胎。插的太深容易损伤子宫内膜，影响了受胎。(3) 准确输精准确输精 如果是左手在直肠内操作，输精器很容易进入右侧如果是左手在直肠内操作，输精器很容易进入右侧子宫角内；如果是右手在直肠内操作，输精器容易进入左侧子宫角。盲子宫角内；如果是右手在直肠内操作，输精器容易进入左侧子宫角。盲目将精液输的太深，可能使排卵侧无精子而使卵子无法受精。目将精液输的太深，可能使排
11、卵侧无精子而使卵子无法受精。35优选课资36优选课资37优选课资细管冷冻精液的解冻和装枪细管冷冻精液的解冻和装枪细管取出后首先在空气中停留几秒，然后用32-38水浴升温水浴时间0.25ml细管停留约15秒钟， 0.5ml装的细管停留约20秒钟。精液溶解后，从水浴中取出，用较干的酒精棉球或灭菌的棉花、卫生纸等擦干细管外壁 ，再用专用细管剪刀将细管的封口端垂直剪开，开口端朝前装入输精枪，钢芯对准细管棉塞部，法式卡苏枪将枪体放入塑料外套至头部，固定紧备用。日式金属输精枪无外套，将头部与体部旋紧即可。38优选课资使用细管冷冻精液注意事项使用细管冷冻精液注意事项(1) 不要在温水中浸泡时间太长。(2)
12、水浴解冻的容器最好能将细管冻精解冻时横置，如果需将细管垂直放入，将棉塞端朝下。(3) 细管冻精取出后不要急忙将细管放入水中，先在空气中放置几秒，让细管口内的液氮充分挥发，以防止细管“放炮”。(4) 剪塑料细管封口时，应使用专用的细管剪刀，这样剪的口齐而且园，输精时精液不易倒流。(5) 注意细管和细管剪刀的卫生，因为细管口部分要接触精液。39优选课资(6) 往输精枪里装细管时，将输精枪的钢芯先插入细管的棉塞端口内，以防推精液时钢芯走到细管外。如果推精液时阻力很大，可能就是钢芯跑到细管外了或是钢芯不直。(7) 用法式卡苏枪将金属枪体放入塑料外套时要行至塑料外套的头部，否则输精时头部的塑料部分可能会
13、打折。塑料外套长了，应剪去一段。(8) 输精部位不能太深，尤其是使用有塑料外鞘的输精枪，许多塑料外鞘的头部不光滑，很容易损伤子宫内膜。(9) 输精器枪体不要碰折，钢丝弯曲后推细管棉塞困难。 (10) 个别青年母牛或土杂种母牛子宫颈开口小，没有输精枪体的直径粗，无法通过子宫颈。碰到这种情况，可用颗粒精液输精，颗粒精液的输精器比细管输精枪细。没有颗粒精液时，可将细管精液推入试管内，加入近1毫升生理盐水或其它解冻液，用颗粒输精器输精。 40优选课资41优选课资液氮罐在使用中需要注意什么问题？液氮罐在使用中需要注意什么问题？ (1) 液氮罐放置在荫凉避静处，室内通风。 (2) 运输和搬运中要防止震荡和
14、碰撞。贮存罐不能作为运输罐使用。 (3) 罐外保持卫生，罐内注意无菌。许多病菌在液氮低温下不会死亡，液氮罐内也可能传播病菌，因此不要用不卫生的器具接触液氮，不要将不卫生的绳袋等放入罐内。每年应将罐内清洗一次，液氮罐停用时，应将罐内的颗粒等清理干净，否则罐内会生霉菌。 (4) 取冻精后及时盖罐塞。为了减少液氮消耗，罐口处可用塑料、胶皮等适当密封，但仍要留有通气的缝隙，不可绝对密封。 (5) 注意液氮面，绝对不能干罐，干罐后罐内保存的东西即报废，液面高度剩1/3时应补充液氮。如果添加不方便，应将精液沉至罐底，浸入液氮中。42优选课资冷冻精液在取用中应注意什么问题？冷冻精液在取用中应注意什么问题？
15、(1) 取冻精时，提筒只允许提至液氮罐颈口水平线下，严禁提出罐口，而且停留时间不能超过10秒，需要继续操作时，应将提筒浸入液氮后再提起操作。(2) 向另一液氮罐转移冻精时，提筒离开液氮面的时间不能超过5秒；(3) 颗粒冻精要放入系口的纱布袋内，不能直接放入提筒内，否则取冻精后提筒再次入液氮时，提筒内液氮沸腾，冻精会漂出提筒，可将纱布袋口线绳系一个可滑动的活扣，易开易合，取用方便。(4) 取冻精的镊子，拴冻精袋的线绳等接触冻精和液氮的物品要卫生。(5) 取颗粒冻精时，用止血钳比镊子好，冻精不易滑落。43优选课资6 6、难孕牛治疗、难孕牛治疗44优选课资难孕牛的概念难孕牛的概念母牛不孕症为暂时性或
16、永久性的繁殖障碍。繁殖率降低，则产奶量下降，饲养管理和治疗及配种开支增大。诊断标准为全年配种牛的纯种奶牛，一般产奶量的母牛产后80天、高产奶牛120天，青年牛20月龄、超过这个时间即属难孕牛。农牧区饲养的牛，由于季节和饲养管理条件的限制，常季节性发情，正常配种3个情期不孕的牛或参加配种70天未受胎的牛为难孕牛。45优选课资难孕牛诊断难孕牛诊断(1)调查病史，查明原因、症状、发病头数、年龄、饲养管理、精液品质、输精技术、繁殖史、既往症等。(2)临床检查 全身、阴道、直肠检查。(3)实验室检查 在实验室做微生物、子宫内膜活组织和激素测定等。46优选课资先天性不孕症治疗先天性不孕症治疗(1)幼稚病生
17、殖器官发育不全；治疗：公畜刺激；按摩卵巢子宫；激光穴位照射。激素治疗法有： HCG静脉注射或肌肉注射2500-5000单位；PMSG 1500IU 肌肉注射；雌二醇或苯甲酸雌二醇 5-20mg； 已烯雌酚 5-20mg。47优选课资(2)两性畸形两性畸形(雌雄间体，半阴阳)无法治疗、淘汰；(3)异性孪生不孕异性孪生不孕受雄激素影响在性分化中造成，染色体异常，直检时摸不出正常的子宫和卵巢，阴道短小，为盲端，输精器无法插入；这种母牛应淘汰。(4)生殖道畸形生殖道畸形单子宫角单子宫角子宫颈闭锁子宫颈闭锁双颈双口双颈双口膣肛膣肛48优选课资49优选课资后天性不孕症治疗后天性不孕症治疗(1)营养性：瘦弱
18、、过肥、饲料不全价、品质不良。VitA10-20万单位，间隔5-7天，用3-4次；VitD2.5-10万单位，间隔7天用3-4次，同时加强运动和光照；VitE 100-200ml，间隔5-7天使用3次；日粮中补充比例适当的矿物质和微量元素。(2)气候性：严冬、酷暑。(3)管理性：高产、使役过度。(4)繁殖技术性：漏配，技术操作不过关。(5)衰老性：绝情期13-15岁。50优选课资休情母牛常用的治疗方法休情母牛常用的治疗方法FSH 100 -200单位 生理盐水稀释3- 4ml，肌肉注射 ；LH 100-200单位 生理盐水稀释3- 4ml，肌肉注射；HCG 静脉注射2500-5000单位，肌肉
19、注射5000-20000单位；LHRH-A 200-1000微克肌肉注射；PMSG 1000-2000 IU肌肉注射；孕激素 注射、埋植或阴道栓法处理912天；雌二醇 20-30mg一次肌肉注射。三合激素 按1ml/100kg肌肉注射 ；LHRH-A 25-100g，隔9天后PGF2 ；电针、激光或催情的中药方剂；垂体后叶素；胎盘组织液20ml；浓盐水灌注子宫。51优选课资持久黄体的诊断和治疗持久黄体的诊断和治疗未妊娠，近期也未配种的母牛，经2-3次检查，同部位存在着同一黄体20天以上可确诊为持久黄体。治疗方法：PGF2类似物，宫注1支，肌注2-3支。52优选课资母牛排卵延迟治疗方法母牛排卵延
20、迟治疗方法排卵延迟是因为LH分泌不足。治疗方法在配种输精时，肌肉注射LHRH-A 25g-100g或LH 200单位或hCG 2000-3000单位。在下一次发情配种时应及时用药治疗，以促进卵泡成熟和排卵。53优选课资母牛卵泡囊肿治疗母牛卵泡囊肿治疗母牛发生卵泡囊肿是因为LH分泌不足。严重时发展为“慕雄狂” 。治疗方法：LHRH-A 25-100g一次肌注；LH 200单位一次肌注。HCG 2000-3000单位一次肌注或静注； 黄体酮 50-100mg连续5-7天 ，肌注；孕激素类 避孕药注射、埋植；地塞米松 10-20mg 肌注 ；FSH200-400单位，使卵泡成熟排卵；挤破 效果不佳，
21、往往会复发；穿刺注射，通过尻部或穹隆部穿剌直接将药注入卵泡；摘除卵巢。54优选课资母牛黄体囊肿治疗母牛黄体囊肿治疗黄体囊肿：未排卵的卵泡黄体化，卵泡直径2.5cm，体内不足所致，但母牛表现安静，体内孕激素水平高。这是与卵泡囊肿的主要区别。治疗方法：PGF2 宫注1支，肌注23支。用激素催情的其它方法也可使用，但是治疗效果慢一些。如果卵巢上有黄体，即使黄体2.5cm或黄体有波动感(泡状黄体，内含液体)都属正常情况，不属囊肿。55优选课资免疫性不孕的原因免疫性不孕的原因免疫性不孕多是重复多次的输精，使母牛体内产生抗精子抗体所致。目前缺乏有效、实用地诊断方法，屡配不孕母牛怀疑是这个原因时，可停止几个情期的配种，以降低体内精子抗体的滴度。56优选课资
