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1、精品课程精品课程 项目三项目三 培养基的配制培养基的配制 http:/ 植物激素植物激素 无机盐无机盐 有机物有机物 培养体支持材料培养体支持材料 辅助物质辅助物质 水水 分分 培培养养基基的的成成分分http:/ 机机 盐盐元素名称元素名称添加形式添加形式大量元素大量元素 （0.5mmol/L ）NKNO3,NH4NO3 PKH2PO4 、NaH2PO4 K KCl 、KNO3CaCaCl2 2H2OMgMg2SO4 7H2O S Mg2SO4 7H2O微量元素微量元素（ 0.5mmol/L） Fe FeNa2-EDTA Zn Zn SO4 B H3BO3MnMnSO4 Cu CuSO4 M
2、oNa2MoO4 2H2O Cl CaCl2 2H2Ohttp:/ 机机 物物v碳水化合物：碳水化合物：提供碳源和调节渗透压，主要是蔗糖。v维生素：维生素：以各种辅酶的形成参与多种代谢活动，对生长，分化等有很好的促进作用，常用的有 VB1和VB6。v天然复合物：天然复合物：促进某些愈伤组织和器官的生长，有椰子汁、香蕉泥、苹果汁等。v肌醇：肌醇：促进愈伤组织生长、胚状体和芽的形成，对组织细胞繁殖、分化有促进作用。v氨基酸：氨基酸：是蛋白质的组成成分，为有机氮源，可直接被细胞吸收利用，培养基中常用的是甘氨酸。http:/ （1 1）生长素类）生长素类 种类：种类：NAA(萘乙酸萘乙酸)、IAA(吲
3、哚乙酸吲哚乙酸)、IBA(吲吲 哚丁酸哚丁酸)、2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸二氯苯氧乙酸) 作用：作用：促进细胞伸长生长和细胞分裂，诱促进细胞伸长生长和细胞分裂，诱导形成愈伤组织，促进生根。导形成愈伤组织，促进生根。 浓度：浓度：0.050.055mg/L5mg/Lhttp:/ （2 2）赤霉素（）赤霉素（GAsGAs） 种类：种类：GA3 作用：作用：主要用于诱导离体芽的萌发和伸长。 注意：注意：不耐热。不耐热。 http:/ （3 3）细胞分裂素（）细胞分裂素（CTKCTK） 种类：种类： KT(激动素)、6-BA(6-苄基腺嘌呤)、 ZT(玉米素)、2ip(异戊烯氨基嘌呤) 作用：作
4、用：促进细胞分裂，诱导芽的形成和丛 芽产生. 浓度：浓度：0.0510.0mg/Lhttp:/ 4）脱落酸（）脱落酸（ABAABA）：）：其作用与赤霉素相反,能促进芽和种子进入休眠状态,促进短日照的植物提前开花.v（5 5）乙烯：）乙烯：v乙烯对组织培养物的影响：乙烯对组织培养物的影响：v 组培中植物组织会释放少量乙烯，对培养物的生长、胚的发生和芽的分化有抑制作用.v克服方法：克服方法：1.降低培养基中蔗糖的浓度或用葡萄糖、麦芽糖代替蔗糖；2.在培养基中加入5-15mg/L的硝酸银也能控制乙烯的形成。http:/ 琼脂琼脂 用量：用量：610g/L 种类：种类：琼脂粉琼脂粉 琼脂条琼脂条 作用
5、：作用：固化作用固化作用 其它其它 玻璃纤维、滤纸桥、海绵等。玻璃纤维、滤纸桥、海绵等。http:/ 培培 养养 基基 类类 型型 完全培养基完全培养基 初代培养基初代培养基 继代培养基继代培养基 固体培养基固体培养基 液体培养基液体培养基 基本培养基基本培养基 诱导培养基诱导培养基 增殖和生根培养基增殖和生根培养基按营养水平按培养阶段按培养进程按态相http:/ v微量种类少微量种类少 v无肌醇无肌醇http:/ v适合双子叶植物，适合双子叶植物， 尤其木本植物组培。尤其木本植物组培。http:/ v无机盐浓度较高无机盐浓度较高http:/ v硝酸钾和硫酸铵含量高硝酸钾和硫酸铵含量高 v适合
6、花粉、花药培养适合花粉、花药培养 http:/ v用品：用品：水池、塑料盆、塑料桶、下水用过滤网，水池、塑料盆、塑料桶、下水用过滤网，各种规格刷子。各种规格刷子。v2、洗涤液：、洗涤液： v 洗衣粉洗衣粉 洗洁精洗洁精 高锰酸钾高锰酸钾 稀盐酸稀盐酸 v 重铬酸钾重铬酸钾+浓硫酸混合液浓硫酸混合液v3、洗涤标准：、洗涤标准： 透明锃亮，内外壁水膜均一，不挂水珠。透明锃亮，内外壁水膜均一，不挂水珠。http:/ 水水冲冲 洗洗4-5次次晾干晾干/烘烘干备用干备用已用过的已用过的培养器皿培养器皿新购置新购置 培养器皿培养器皿1%稀HCl浸浸泡泡12h污染瓶污染瓶高高 压压 灭灭 菌菌http:/
7、根据药品性质将母液配制成以下四类：根据药品性质将母液配制成以下四类：v（1）大量元素）大量元素v 可以混在一起配制成可以混在一起配制成1020倍液，倍液，注意离子注意离子之间沉淀，如之间沉淀，如CaCa2+2+和和S0S04 42-2-，CaCa2+2+、MgMg2+2+和和POPO4 43-3-一起一起溶解后，会产生沉淀，一定要溶解后，会产生沉淀，一定要分别单独配制分别单独配制充分充分溶解再放入母液中。溶解再放入母液中。http:/ 2，4-D4-D可用少量可用少量0.1mol/L0.1mol/L的的NaOHNaOH溶解后，再加水定溶解后，再加水定容。容。http:/ http:/ 合合 物
8、物名名 称称原配方量原配方量mg扩大扩大 倍数倍数称取量称取量mg母液体积母液体积(ml)配制配制1升培养基应升培养基应移取量移取量(ml)母液母液名称名称43165010165001000100大量元大量元素母液素母液319001019000CaCl2H2O44010 4400MgSO4 7H2O370103700KH2PO417010 1700MnSO4H2O22.31002230100010微量元微量元素母液素母液ZnSO47H2O8.6100860CoCl6H2O0.0251002.5CuSO45H2O0.0210025H3BO36.2100620Na2MO42H2O0.25100 2
9、5KI0.83100 83FeSO47H2O28.71002870100010铁盐铁盐母液母液Na2-EDTA37.31003730烟酸烟酸(Vpp)0.5502550010有机物有机物母液母液盐酸吡哆醇盐酸吡哆醇0.55025盐酸硫胺素盐酸硫胺素0.1505肌醇肌醇100505000甘氨酸甘氨酸250100http:/ 培养基熬制培养基熬制 灭菌灭菌称取蔗糖、琼脂称取蔗糖、琼脂 封封 口口 分分 装装 定定 容容接接 种种确定配方确定配方四、培养基制作与灭菌四、培养基制作与灭菌调调PH值值 流流 程程http:/ 制备培养基时母液取用量（制备培养基时母液取用量（ml）=1000浓缩倍浓缩倍数数制备培养基数量（制备培养基数量（L）v2、适量蒸馏水放入加热容器，蒸馏水应少于所制、适量蒸馏水放入加热容器，蒸馏水应少于所制培养基数量，约终体积的培养基数量，约终体积的2/3-3/4，接通电源加热。，接通电源加热。v3、向加热容器中加入称量好的琼脂。搅拌加热，、向加热容器中加入称量好的琼脂。搅拌加热，至完全溶化。至完全溶化。http:/ v8、迅速分装到培养瓶中，封口灭菌备用。、迅速分装到培养瓶中，封口灭菌备用。http:/ 可保存可保存36周，室温下两周内周，室温下两周内用完。用完。定期更新：不易长期保存。定期更新：不易长期保存。http:/
