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1、n HC2 HPV检测技术和原理n HC2 HPV检测的特点和优势n HC2 HPV检测的临床应用n全球发病率大约50万/年，女性第二号杀手n我国新发病例约13万/年n新发病例逐年增加，呈年轻化趋势n我国宫颈癌死亡率约2万/年n唯一病因明确的肿瘤唯一病因明确的肿瘤 持续高危型持续高危型HPV感染感染n从HPV感染到宫颈癌，一般需要1020年n早发现、早治疗，可以预防和根治HPV HPV 型别型别型别型别已知的已知的HPV型别有型别有150多种，重要的是区分各种型别的风险程度，即高危型（多种，重要的是区分各种型别的风险程度，即高危型（HR）、）、中危型（中危型（IR）和低危型（）和低危型（LR）
2、HR and IR HPVsn16 18 26 31 33 35 39 45 51 52 53? 56 58 59 66 68 73 82低度子宫颈病变高度子宫颈病变子宫颈癌LR HPVsn6 11 40 42 43 44 54 61 70 72 81 CP6108良性的低度子宫颈改变尖锐湿疣 (生殖器疣)n Hybrid Capture 2简称简称HC2 HPV 检测检测利用基因杂交、化学发光、信号放大的原理在分子水平同时检测被WHO确认的13种高危型-HPV 病毒DNAHC2 HPV检测步骤和原理检测步骤和原理HC2检测方法分为简单的5步Step 1:变性溶解细胞，解链和变性核酸解链和变性
3、核酸, 释放HPV DNA单链HC2 HPV检测步骤和原理检测步骤和原理HC2检测方法分为简单的5步Step 2:杂交全长病毒 RNA探针与HPV病毒靶DNA结合，形成RNA:DNA 复合物复合物全长病毒RNA探针HC2 HPV检测步骤和原理检测步骤和原理HC2检测方法分为简单的5步Step :捕获RNA:DNA 复合物被包被在微孔板上的抗体捕获 一抗特异性结合RNA:DNA 复合物 HC2 HPV检测步骤和原理检测步骤和原理HC2检测方法分为简单的5步Step 4:杂交检测用二抗结合捕获后的复合物二抗偶联有碱性磷酸酶二抗偶联的碱性磷酸酶HC2 HPV检测步骤和原理检测步骤和原理HC2检测方法
4、分为简单的5步Step :产生发光信号 加入碱性磷酸酶的底物 产生化学发光信号，仪器判读发光信号内容简介内容简介nHC2 HPV检测技术和原理nHC2 HPV检测的特点和优势nHC2 HPV检测的临床应用对临床的意义n假阴性率很低n避免漏诊！ HC2 HPV test 临床敏感度最好大规模数据统计分析：nDigene HC2 HPV检测临床敏感度平均在94%nDigene HC2 HPV 联合细胞学检测灵敏度高达100%n基于PCR的HPV检测方法临床灵敏度平均在82%HC2 HPV test 优势业界最好的临床敏感度优势业界最好的临床敏感度PCR和和HC2的的临床敏感性比床敏感性比较： ：综
5、合合19992005年年间的主要研究的主要研究%PCR median 82%HC2 median 94%HPVHPV和细胞学筛查：敏感性和特异性比较和细胞学筛查：敏感性和特异性比较和细胞学筛查：敏感性和特异性比较和细胞学筛查：敏感性和特异性比较 (%) (%) CIN 2/3+CIN 2/3+病例病例 1,5001,500sensspecdigene HC2 HPV test 阴性预测值最高nDigene HC2 HPV 检测阴性预测值高达99.9%，几乎达到100%。HC2阴性的妇女，99.9%不会发展为子宫颈癌n专利全长8000个bps的13中高危型的混合RNA探针，对临床的意义n安全，H
6、C2阴性的妇女筛查时间间隔可延长至-5年，这期间发生宫颈癌的风险很小！ HC2 HPV test 优势阴性预测值最高优势阴性预测值最高99.9%对临床的意义n实验室和人员技能要求条件较大n开展比较容易、质量容易控制n检测结果可靠准确、 HC2 HPV检测简便、可靠n无需DNA提取n无需基因扩增n无需高度清洁的实验环境n操作简便、易培训n灵活适用于大、小样本n实验室内、实验室间高度的可重复性n益于实验室质量控制与管理HC2 HPV test 优势简便、可靠、重复性好优势简便、可靠、重复性好对临床的意义n采用的HPV检测判断标准应该是经过临床验证的，n经过验证的方法检测到的是真正有风险的人群，而不
7、是一过性的感染n防治一过性感染或假阳性引起病人的过度恐慌HC2 HPV唯一经过临床验证检测目的：检测病变、而非病毒统一的判定标准：1pg/ml相当于分析灵敏度：5000拷贝/检测判断标准经大样本全球多中心临床验证防止过高的分析灵敏度敏感造成的假阳性HC2 HPV test 优势全球唯一经过临床验证优势全球唯一经过临床验证HPV检测方法用于子宫颈癌筛查特点检测方法用于子宫颈癌筛查特点nHPV检测用于临床子宫颈癌筛查，目的不是简单地检测有无HPV感染的问题，而是发现那些有HPV感染并且存在发展成癌前病变或癌的高风险妇女。n子宫颈癌筛查强调的是临床敏感度而不是分析敏感度nPCR是一种很好的方法，用于
8、分子病毒检测，分析灵敏度很高，10个拷贝数量级的水平都能把病毒检测出来n用于子宫颈癌筛查中的HPV检测方法要求：该检测方法要有很好的临床敏感度，即癌前病变或癌的发病风险，而不是分析敏感度临床采用的HPV DNA检测最好的分析灵敏度阈值是多少？ HPV病毒含量与临床病变的关系Adapted from Snijders et al. Journal of Pathology 2003; 201:1-6Adapted from Snijders et al. Journal of Pathology 2003; 201:1-6由此可见：HC2的分析阈值及判断标准是经过临床验证的由此可见：基于PCR的
9、HPV检测方法检测到许多与临床无关的HPV感染指引推荐数据验证接受认证n美国FDA n欧洲CEn中国SFDAn300多篇专业期刊的学术文章中n超过30个国家，共87.5万多妇女参与的临床试验研究n超过4000万个致癌HPV检测是使用digene HC2 HPV检测 HC2 HPV Test 临床临床HPV检测领域的金标准检测领域的金标准n美国癌症协会指南（2002年）n美国妇产科学会指南（2003年）n中国宫颈癌筛查及早诊早治指引（2003年）n美国妇科肿瘤学会指南（2004年）n世界卫生组织国际癌症研究所推荐（2004年）n国际宫颈癌防治联盟指南（2007年）nEUROGIN会议推荐（200
10、7,2008,2010）内容简介内容简介n HC2 HPV检测技术和原理n HC2 HPV检测的特点和优势n HC2 HPV检测的临床应用n 单独和联合细胞学用于宫颈癌筛查n ASCUS，ASC-H和LSIL病人的分流与管理n CIN、CC治疗后随访digene HC2 HPV 检测的临床应用检测的临床应用中国癌症基金会推荐的联合筛查方案中国癌症基金会推荐的联合筛查方案 高危高危HPVHPV检测检测 + + 液基细胞学检查液基细胞学检查HPVHPV阴性阴性CytoASC-USCytoASC-USHPVHPV阳性阳性CytoASC-USCytoASC-USHPVHPV阴性阴性CytoASC-HC
11、ytoASC-HHPVHPV阳性阳性CytoASC-HCytoASC-H阴道镜检查阴道镜检查/ /多点活检多点活检+ECC+ECC随访随访（次（次/3/3年）年）随访随访（次（次/ /年）年）相应治疗相应治疗(+)(+)( () )EUROGIN推荐的采用推荐的采用HPV作为初筛的筛查流程作为初筛的筛查流程Cuzick et al.; 2008 EUROGIN2010年年EUROGIN推荐推荐HPV 16 分型分型 或或mRNA或或p1625-64岁妇女岁妇女 高危型高危型HPV 检测检测5年后复检年后复检细胞学细胞学阴性阴性阳性阳性正常或边界正常或边界 轻度异常轻度异常阴道镜阴道镜 3-5年
12、后复年后复检检阴道镜阴道镜阴性阴性任何一个任何一个阳性阳性Jack Cuzick, PhD Wolfson Institute of Preventive Medicine St Bartholomews Medical School London, UK，2010 EUROGIN提出HPV分型检测仅用于已被证实为高危型HPV阳性&细胞学阴性的人群2009ASCCP关于关于HPV分型检测应用的临床指引分型检测应用的临床指引1. 30岁以上的妇女，有推荐的筛查指南nASCCP guideline - 2. 对于ASC-US的妇女，不推荐用nASCCP guideline - 对对HPV分型检测限
13、制分型检测限制.2009年年3月月SOG发表声明限制分型的使用发表声明限制分型的使用.2009年年12月月ASCCP在推出分型应用的指引后，有新增说明，对分型应用作出明在推出分型应用的指引后，有新增说明，对分型应用作出明确限制确限制.两个指南中提出：两个指南中提出：n不能用于准备接种疫苗前的人群不能用于准备接种疫苗前的人群HPV感染情况的评估感染情况的评估n不能用于宫颈癌初筛不能用于宫颈癌初筛n不能用于不能用于ASCUS妇女的分流妇女的分流医生需要知道的事实医生需要知道的事实1：临床适合进行：临床适合进行HPV分型检测的人群有多大？分型检测的人群有多大？96% Pap- & HPV-In a
14、general screening population of 798,000 Kaiser patients, 96% of the women age 30+ did not require any further follow-up.4%Pap- & HPV+Castle, PE, et al. Obstet Gynecol 2009;113:595600.最初被检测为最初被检测为HPV+ & Pap- 的人，的人，大部分在大部分在6个月内感染自动清除个月内感染自动清除60% at 6 mos became Pap- & HPV-Clavel C, et al. Brit J Cance
15、r, 2001;89:1616-1623.40% remained Pap- & HPV+大部分妇女在大部分妇女在6个月内通过自身免疫力清除感染，对这部分人群采用分型检测只会额外增加的个月内通过自身免疫力清除感染，对这部分人群采用分型检测只会额外增加的费用，而不会带来任何益处费用，而不会带来任何益处医生需要知道的事实医生需要知道的事实2：这些浓缩人群的患：这些浓缩人群的患CIN2+风险风险n临床真正需要分型检测的人群即高危HPV+&Cyto-的人群只有不到n在这一小部分可用分型检测的人群中，未来进展为CIN2+风险仅有3.75%n对于这部分人群采用对于这部分人群采用12月内重月内重复细胞学和复
16、细胞学和HPV检测的随访方检测的随访方法，仍然是个有效的方法法，仍然是个有效的方法?“在一个比较好的筛查人群中在一个比较好的筛查人群中HPV阳性，细胞学阴性的妇女发展为阳性，细胞学阴性的妇女发展为CIN2+的风险只的风险只有有2.4 to 5.1%.” ACOG, 2008.ACOG Practice Bulletin, Number 99. Obstet Gynecol. 2008;112:1419-1444.HPV检测共识检测共识HPV检测作为初筛首选方法HPV检测比细胞学具有更高的敏感性HPV检测比细胞学更客观，更标准化HPV检测作为初筛方法，对HPV+/PAP-的人群的追踪管理将成为重
17、点。 n 宫颈癌筛查n ASCUS/ASC-H/LSIL/AGC的分流与管理n CIN、CC治疗后随访 HC2 HPV 检测的临床应用检测的临床应用nASCUS是临床医生和细胞学技术人员及受检者遇到最多的困惑o大部分是正常的o复查细胞学，时间、精力、财力的过多投入，失访率高ndigene HC2 HPV Testo1999年，FDA认可HC2高危型HPV检测用于分流ASCUS o2001年，美国国家癌症研究院 ALTS研究 (ASC-USLSILTriageStudy)ASCUS管理的首选方法是高危型HPV-DNA检测ASCUSASCUS、AGCAGC的分流与管理的分流与管理2006,2007
18、ASCCP关于关于ASC-US病人的分流管理病人的分流管理2006,2007ASCCP关于关于ASC-H病人的分流管理病人的分流管理2006,2007ASCCP关于关于LSIL病人的分流管理病人的分流管理2006,2007ASCCP关于关于AGC病人的分流管理病人的分流管理2006,2007ASCCP关于关于AGC病人的后续管理病人的后续管理n 宫颈癌筛查n ASCUS/ASC-H/LSIL/AGC的分流与管理n CIN、CC治疗后随访digene HC2 HPV 检测的临床应用检测的临床应用组织学确诊的组织学确诊的CIN1（原细胞学为（原细胞学为ASCUS 或或LSIL)的病人管理的病人管理组织学确诊的组织学确诊的CIN2,3的病人管理的病人管理宫颈病变术后的追踪与管理宫颈病变术后的追踪与管理术前、术后HC2检测有助于n提示病灶是否清除干净n了解是否有复发可能 n术后6、12个月复查，HPV检测结果仍为阳性，提示 有残留或复发可能 将风险降至最低、为患者提供最有效的保护
