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1、Acme HPLCHPLC Basic 1目录目录HPLC HPLC 基本理论基本理论 溶剂传输系统溶剂传输系统 ( (泵泵) ) 进样器进样器 色谱柱色谱柱 检测器检测器 流动相流动相2什么是色谱图什么是色谱图? ?样品与流动相、固定相之间的吸收、分配、离子交换、体积排阻等作用，将混合组分分离成各个独立的组分。分离、定性、定量 ：分析色谱分离、纯化 ：制备色谱 InjectionInjection（进样）（进样） InteractionInteraction（相互作用）（相互作用） ElutionElution（洗脱）（洗脱） abacbc aabcbc abacbc aabcbc a b
2、c a b c 3色谱方法的发展历程色谱方法的发展历程部分片断部分片断洗脱洗脱溶溶剂剂(s)色色谱谱柱柱样品样品Tswett (1906)Tswett (1906)4色谱色谱分析分析 气相气相色谱色谱 液相液相色谱色谱 - 流动相流动相 : : 气体气体 - 流动相流动相: : 液体液体 - 样品的挥发性样品的挥发性 - 样品的溶解性样品的溶解性 - M.W. 500 - 热稳定性热稳定性 - 常温分析常温分析 - 离子化合物离子化合物 -分离分离: 亲和力和力 及沸点不同及沸点不同 - 分离分离: 固定相和流动相的相互固定相和流动相的相互 亲和力不同亲和力不同5HPLC系统的配置系统的配置流
3、动相溶剂瓶流动相溶剂瓶泵泵进样进样器器色色谱谱柱柱检测检测器器数数据工作站据工作站梯度设备梯度设备（脱气机）（脱气机）馏分收集器馏分收集器6溶剂传输系统溶剂传输系统 ( (泵泵) )7泵泵 将溶剂（流动相）从溶剂瓶传送到进样器 泵 - 流速和压力的稳定性 - 操作方便, 可用于多种不同的溶剂 - 防止脉冲的系统 - 可用于等梯度模式和梯度模式 - 持久耐用 8溶剂瓶溶剂瓶过滤头过滤头高灵敏组件高灵敏组件传感器传感器高压过滤器高压过滤器泵泵 出口出口T型型三通三通单向阀出口单向阀出口单向阀入口单向阀入口右泵头右泵头Inlet manifoldassembly溶溶剂剂 draw off assem
4、bly 左泵头左泵头单向阀出口单向阀出口单向阀入口单向阀入口机械马达驱动机械马达驱动流路图流路图9泵泵操作模式操作模式 等梯度模式 - 分析过程中，溶剂组分保持不变 梯度模式 - 分析过程中，按时间改变溶剂组分 - 单泵 : 低压梯度模式 - 并联泵 : 高压梯度模式10等梯度模式等梯度模式-色色谱谱柱柱泵泵检测检测器器进样进样器器溶溶剂剂瓶瓶数数据工作站据工作站- 最基本的配置- 在分析过程中，泵有效地传输组分不变的溶剂11梯度模式梯度模式-按时间改变溶剂组分1)单泵 : 氦脱气和真空脱气低压模式低压模式溶剂溶剂A溶剂溶剂B泵泵混合器混合器122) 并联泵泵泵A泵泵B高压模式高压模式溶溶剂剂
5、A溶溶剂剂B混合器混合器13操作操作泵泵的注意点的注意点1. 必须对溶剂进行脱气 2. 勿空转3. 使用缓冲溶液之后一定要用水清洗 4. 检查溶剂间的可混合性5. 启动泵之前要灌泵6. 控制脉冲7. 检查泵压14进样阀进样阀15进样进样阀阀流动相中加载样品，使流动相把样品带入色谱柱 进样阀 - Rheodyne 进样阀 (手动进样阀) - 自动进样器16使用使用进样进样阀的注意点阀的注意点1. 使用进样针前要清洗干净，并去除气泡 2. 清洗进样针 : 选择样品易于溶解的溶剂3. 附加清洗方法 : 使用过的溶剂 丙酮 二氯甲烷4. 使用自动进样器针管清洗溶液时要格外注意5. 连接管线越短越好 (
6、进样阀和色谱柱, 色谱柱和检测器)6. 管线的错误连接会导致死体积的发生17Rheodyne Rheodyne 进样进样阀阀1. 定量环进样阀 进样量由定量环体积决定2. 需要定期清洗定量环18进样方式进样方式1.全充满全充满 - - 进样量是固定时进样量是固定时 - - 进样体积进样体积 : : 定量环体积的三倍以上定量环体积的三倍以上 - - 正确性正确性 : 0.1%: 10 m常用于制备常用于制备用途用途大小大小26硅胶形状硅胶形状不规则形不规则形球形球形27孔径大小孔径大小 孔径大小 : nm or 选择孔径大小的方法M.W.推荐选用的孔径推荐选用的孔径10,000300 1,000
7、 分子量大分子量大无孔形无孔形28填料特性填料特性孔径大小孔径大小 & & 分配分配 : : - - 孔径小孔径小 = = 柱效高柱效高 = = 减小谱带展宽现象减小谱带展宽现象 球形或不规则形球形或不规则形 : : - - 不规则形不规则形= = 表面积大表面积大 = = 碳载量高碳载量高 - - 球形球形 = = 柱压低柱压低 = = 寿命长寿命长 - - 球形球形= = 很好的结构稳定性很好的结构稳定性 = = 寿命长寿命长 微粒大小微粒大小 - - 微粒小微粒小 = = 所能承受的操作压力高所能承受的操作压力高 = = 柱效高柱效高29色谱柱色谱柱 材料 - Steel 色谱柱 - P
8、EEK 色谱柱 分离原理 - 正相色谱柱 - 反相色谱柱 - 离子交换色谱柱 - 体积排阻色谱柱30色谱柱色谱柱材料材料 Steel 色谱柱 : 钢卡套柱 柱接头 PEEK色谱柱 Radial-Pak 色谱柱 31分离方法分离方法 正相分离 反相分离 离子交换 体积排阻321. 1. 正相正相 ( (吸附吸附) ) 官能团的极性 使用疏水性、非极性的溶剂 极性大的化合物后流出Si-OH-OHSi-OHO正己烷正己烷极性极性33正相正相色谱柱色谱柱 Silica phase（硅胶柱） - Resolve silica, u-Porasil, Nova-Pak silica - Hypersil
9、silica, Nucleosil silica, Zorbax silica 键合固定相 - Nova-Pak CN, NH2 - u-Bondapak CN, NH2 - Resolve CN, NH2 - Hypersil CPS, APS - Lichrosorb CN, NH2, Diol - Zorbax CN, NH2342. 2. 反相分离反相分离 ( (分配原理分配原理) ) 键合固定相（C18，C8，CN，ph）与被分析物之间的分配作用，达到分离待测物的目的 使用极性溶剂 非极性的化合物后流出-Si-O-Si-C18 -OHCH3CN/H2O非极性非极性35反相反相色谱柱色
10、谱柱- u-Bondapak C18, CN, Phenyl- Resolve C8, C18, CN, Phenyl - Lichrosorb RP-18, RP-8- Delta-pak C18, C8- Symmetry C18, C8 - Symmetryshield RP8- Hypersil ODS, Phenyl CPS- Zorbax ODS, C8, CN, Phenyl N, Phenyl36C18色谱柱色谱柱Silica(SiO2)AcidTreatment(酸酸处理理)FreeSilanol(Si-OH)(硅硅羟基基)ChemicalBondingofC18(键合合)E
11、nd-cappingbyTMS(封尾封尾)ElementAnalysis37封端技术封端技术-Si-O-Si-(CH3)3-Si-OHnon-polar-Si-O-Si-C18-Si-O-Si-C18TMS-Clnon-polar-Si-O-Si-C18-Si-O-Si-C1838正相和反相对比表正相和反相对比表样品出柱次序样品出柱次序溶剂溶剂（流动相）（流动相）极性极性填料（固定相）极性填料（固定相）极性反相反相正相正相极性极性 非极性非极性 非极性非极性非极性（先）非极性（先） 极性极性极性（先极性（先）393.离子交换离子交换 分离原理：各离子所具有的不同的电荷吸引力+-相反离子相反离子
12、样品样品40色谱柱色谱柱填料填料阳离子阳离子色谱柱色谱柱阴离子阴离子色谱柱色谱柱SO3-NR3+COO-NH3+41离子交换离子交换色谱柱色谱柱 IC-pak Anion/Cation SAX(Strong Anion Exchanger)/SCX Protein-pak DEAE/SP HR424.体积排阻体积排阻43体积排阻体积排阻色谱柱色谱柱 GPC : Styragel HR, HT, HMW Series Aqueous GPC : Ultrahydrogel Series(凝胶渗透) Aqueous GFC : Protein-pak Series(凝胶过滤)44色谱柱色谱柱的选择
13、的选择正己烷正己烷YSilica,PorasilN甲醇甲醇YCN,Ph,C8,C18THFNGPC:StyragelHR,HT,HMWY离子性离子性NYNR3,COO,SO3M.W.2000有机溶液有机溶液Y水水GPC:UltrahydrogelProtein-pakNY45保留时间保留时间检检测测器器响响应应值值tR(B)tR(A) tt0tR(A)W(A)W(B)46容量因子容量因子k=VR-V0V0tR-t0t0tRt0V VR R = = 保留体积保留体积 V V0 0 = = 死体积死体积t t R R = = 保留时间保留时间 t t 0 0 = = 死时间死时间ttR R = =
14、 相对保留时间相对保留时间47选择性选择性tR(B)-t0tR(A)-t0tR(B)tR(A) =检检测测器器响响应应值值tR(B)tR(A) tt0tR(A)W(A)W(B)48柱效柱效49分离度分离度R= tW tWA+WB22 tWA+WB检检测测器器响响应应值值tR(B)tR(A) tt0tR(A)W(A)W(B)50分离度分离度R = = R = = N N2 2 t t WWb b1 1 4 4 - 1 - 1 k k2 21 + k1 + k2 2柱效柱效选择性选择性容量因子容量因子51色谱柱色谱柱保存方法保存方法 色谱柱色谱柱 : : 用不与填料反应的溶剂填满用不与填料反应的溶
15、剂填满 1) 1) 正相正相色谱柱色谱柱 : : 正己烷正己烷 2) 2) 反相反相色谱柱色谱柱 : : 清洗之后用清洗之后用60-70% 60-70% 有机有机溶剂溶剂(CH(CH3 3CN, MeOH)CN, MeOH)填满填满 长期保管长期保管 : 100% MeOH, CH: 100% MeOH, CH3 3CNCN523) 3) 离子交换离子交换色谱柱色谱柱 - 无机阴、阳离子色谱柱 长期保管: 10% CH3CN 短期保管: 流动相 or 5% CH3CN * IC-pak 阳离子色谱柱 : 2mM HNO3 - 有机阳离子色谱柱 长期保管: 10% EtOH 短期保管: 水，在
16、4 - 有机阴离子色谱柱 : 水，在4534) 4) 体积排阻体积排阻色谱柱色谱柱GPC色谱柱 : 指定的溶剂 Aqueous GPC 色谱柱 : 0.05% 叠氮化钠/水或 20% 有机溶剂Aqueous GFC 色谱柱 : 0.05% 叠氮化钠/水或 20% 有机溶剂54色谱柱色谱柱的清洗的清洗1. 1. 正相色谱柱正相色谱柱( (柱容量的柱容量的1010倍倍) ) 甲醇甲醇- -甲吡酮甲吡酮 氯化物氯化物- -庚烷庚烷( (异辛烷异辛烷) ) 2. 2. 反相反相色谱柱色谱柱 ( (柱容量的柱容量的1010倍倍) ) 水水- -甲醇甲醇- -氯仿氯仿- -甲醇甲醇- -水水 3. 3.
17、离子交换离子交换色谱柱色谱柱 阳离子阳离子色谱柱色谱柱 : : 水水-0.1M -0.1M NaOHNaOH- -水水-30% -30% 乙酸乙酸 (or 0.1N HNO(or 0.1N HNO3 3 ) ) 水水 阴离子阴离子色谱柱色谱柱 : : 水水-0.1M NaOH(12ml)-0.1M NaOH(12ml)-水水- - 30% 30% 乙酸乙酸 (12ml)(12ml) 4. 4. 体积排阻体积排阻色谱柱色谱柱 流动相流动相55检测器检测器56检测器检测器输出比例于样品量的电子信号 要求 1. 信噪比 : 高2. 噪音、漂移 :小3. 检测限 : 小4. 稳定的流速、温度、压力5.
18、 梯度分析 6. 选择性57检测限检测限/ /定量限定量限检测限检测限:S/N=2或或3定量限定量限:S/N=大约大约1058检测器检测器 光学检测器 1. 紫外/可见光检测器 2. 荧光检测器 3. 示差检测器 4. 蒸发光散射检测器（ELSD） 电化学检测器 1. 电导检测器 2. 电化学检测器59检测器检测器的特征的特征对温度的对温度的敏感度敏感度RIUV/VIS荧光荧光电化学电化学电导电导响应响应选择性选择性对流速的对流速的敏感度敏感度ussssugngpgpgngYESNONOYESYESYESYESYESNONOu : 通用性通用性, s : 选择性选择性ELSDuNO60紫外紫外
19、/ /可见光吸收可见光吸收检测器检测器光源中的特殊波长通过流动池，一部分被吸收、光源中的特殊波长通过流动池，一部分被吸收、另一部分通过样品。另一部分通过样品。 特定样品对特定波长的吸光度高。特定样品对特定波长的吸光度高。被吸收的光能比例于样品浓度被吸收的光能比例于样品浓度 A = bc ( Lambert- Beers Law )A = bc ( Lambert- Beers Law ) A : A : 吸光度吸光度 : : 摩尔吸光系数摩尔吸光系数 b : b : 光程长光程长 C : C : 样品的浓度样品的浓度61紫外紫外/ /可见光吸收可见光吸收检测器检测器 1)1) 固定形固定形 -
20、 - 按光源可使用几个固定的波长按光源可使用几个固定的波长 - - 波长波长: 214,229,254,265,280,313,340,405,436,546nm: 214,229,254,265,280,313,340,405,436,546nm 2)2) 可变形可变形 - - 在波长在波长190-900nm190-900nm范围中选择范围中选择 灯灯流动池流动池 光电二极管光电二极管RS 样品入口样品入口Hg 254Zn 214Cd 229D2 可变可变UV 检测检测器器To amplifier62 3)光电二极管阵列检测器光电二极管阵列检测器 -同时扫描同时扫描190-800nm之间的波
21、长之间的波长光电二极管阵列光电二极管阵列检测检测器器氘灯氘灯棱镜棱镜池子池子全息光栅全息光栅二极管阵列二极管阵列512Diodes190-800nm63常用溶剂透过波长下限常用溶剂透过波长下限溶溶剂剂透过波长下限透过波长下限溶溶剂剂透过波长下限透过波长下限水水180n-庚烷庚烷197甲醇甲醇210环乙胺环乙胺200n-丙醇二酸丙醇二酸205四氯化碳四氯化碳265乙腈乙腈190氯仿氯仿245THF230苯苯280丙酮丙酮330甲苯甲苯285乙酸甲酯乙酸甲酯260二氯甲烷二氯甲烷232乙酸乙酯乙酸乙酯260四氯乙烯四氯乙烯280硝基甲烷硝基甲烷3801,2-二氯乙烷二氯乙烷22564利用利用PDA
22、检测器的药物分析检测器的药物分析65荧光荧光检测器检测器的光路图的光路图光源光源反射镜子反射镜子激发光滤光片激发光滤光片激发光裂缝激发光裂缝调焦镜调焦镜电子束分裂器电子束分裂器光电光电二极管二极管流动池流动池收集镜收集镜镜子镜子发射光裂缝发射光裂缝发射光滤光片发射光滤光片光电倍增管光电倍增管66用用FLD分析分析PAH组分组分 1 萘萘2 anthraquinon 蒽醌蒽醌3 acenaphthylene4 acenaphthene 5 fluorene 6 phenanthrene 7 anthracene 8 fluoranthene 9 pyrene 10 benzo(a)anthrac
23、ene 11 chrysene 12 benzo(b)fluoranthene 13 benzo(k)fluoranthene 14 benzo(a)pyrne 15 dibenzo(ah)anthracene 16 benzo(ghi)perylene 17 indeno(123-cd)pyrne样品平均 水 色谱柱 HP PAH 250 x 2.1mm (22C) 流动相 水/已胫 梯度分析检测器 UV/VIS 270nm FLD EX=275, EM=350 67示差折光示差折光检测器检测器原理 - - 测定根据样品浓度变化而改变的折射率之差测定根据样品浓度变化而改变的折射率之差 - -
24、 流动池流动池 : : 样品池、参品池样品池、参品池- - 参品池是以流动相填满参品池是以流动相填满 分析期间流动相只流过样品池分析期间流动相只流过样品池 应用范围 - - 聚合物聚合物, , 糖糖 - - 用于分析以紫外检测器和荧光检测器无法检测的样品用于分析以紫外检测器和荧光检测器无法检测的样品68Structure of RI Detector69应用于凝胶渗透色谱系统应用于凝胶渗透色谱系统 测定高分子物质的分子量测定高分子物质的分子量 - - 用标样画出校正曲线，用用标样画出校正曲线，用R.TR.T决定未知样品的分子量决定未知样品的分子量 分析条件分析条件 - - 检测器检测器 : R
25、I : RI 检测器检测器 水溶性水溶性 GPC GPC 脂溶性脂溶性 GPC GPC 色谱柱色谱柱 Ultrahydrogel Ultrahydrogel Styragel(HR, HT)Styragel(HR, HT) 标样标样 支链淀粉支链淀粉 苯乙烯苯乙烯70GPC色谱图色谱图71使用使用RI检测器分析糖检测器分析糖72电化学检电化学检测器测器 当组分被氧化或还原时当组分被氧化或还原时, 电流与浓度成比例电流与浓度成比例参比电极参比电极工作极工作极电解电解 (流流动动相相)辅助电极辅助电极分析物被氧化分析物被氧化(+)/还原还原 (-)73ELSD 检测器 ZAM 3000ELSDEL
26、SD 检测检测器器 ZAM 3000 ZAM 3000 是高灵敏的通用是高灵敏的通用检测检测器器ELSDELSD检测用紫外检测器、示差检测器无法检测器检测用紫外检测器、示差检测器无法检测器的物质，可检测任何不挥发性物质，而且还可用的物质，可检测任何不挥发性物质，而且还可用于梯度洗脱。于梯度洗脱。ZAM 300074工作原理工作原理75雾化器样品溶液（流出液）被特殊制样品溶液（流出液）被特殊制作的玻璃雾化器雾化。作的玻璃雾化器雾化。76样品处理样品被雾化之后，一部分蒸发带到检测器，大部样品被雾化之后，一部分蒸发带到检测器，大部分被凝成小滴掉下排出。分被凝成小滴掉下排出。雾化器和蒸发管的材质是玻璃
27、，因此不易被化学雾化器和蒸发管的材质是玻璃，因此不易被化学侵蚀，而且易于清洗。侵蚀，而且易于清洗。77检测器的气体流速喷雾气体在蒸发管内被喷雾气体在蒸发管内被与辅助气体和混合。与辅助气体和混合。检测器位于蒸发管上端检测器位于蒸发管上端喷雾气体辅助气体废液78检测池结构蒸发管蒸发管检测检测室室LED LED 光源光源LEDLED光源长时间光源长时间提供稳定光能。提供稳定光能。79分析磷脂组分组分: :Phosphatidyl choline / Lysophosphatidyl choline色谱柱色谱柱: :Merck Lichrospher 100diol-5 125 x 4 mm色谱柱温度
28、: 40 C溶剂溶剂: :梯度洗脱A: n-正己烷 / 2-Propanol / 乙酸/ 三乙胺B: 水 / 2-Propanol / 乙酸/ 三乙胺ELSD-Detection:ELSD-Detection:气体 压力 (喷雾气体): 1,0 bar气体 流速 (辅助气体): 1,7 L/min温度: 50 C80分析糖组分组分: :Xylose / Glucose / Saccharose / Lactose色谱柱色谱柱: :HyperSil APS, 5, 250 x 4.6 mm色谱柱温度: ambient溶剂溶剂: :乙腈:水 90:10, 流速: 1,0 mL/minELSD-EL
29、SD-检测检测: :气体 压力 (喷雾气体): 1,6 bar气体 流速 (辅助气体): 1,5 L/min温度: 50 C81分析有机酸溶液组分组分: :Malic acid / Succinic acis / Fumaric acid色谱柱色谱柱: :Inertsil ODS-3, 5 m, 250 x 4,6 mm色谱柱温度: ambient溶剂溶剂: :0,01% Trifluoro 乙酸(TFA) in 90/10 甲醇/水.ELSD-Detection:ELSD-Detection:气体 压力 (喷雾气体): 1,6 bar气体 流速 (辅助气体)： 1,5 L/min温度: 50
30、 C82分析聚苯乙烯标样混合剂组分组分: :Polystyrene mix 18700 / 8300 / 2360色谱柱色谱柱: :Jordi Gel DVB, 500 , 500 x 10 mm 色谱柱温度: ambient溶剂溶剂: :THF, 流速 1 mL/min.ELSD-Detection:ELSD-Detection:气体 压力 (喷雾气体): 1,0 bar气体 流速 (辅助气体): 1,1 L/min温度: 35 C83分析聚乙二醇组分组分: :Polyethylene Glycol色谱柱色谱柱: :OptoSil ODS-2, 5 m, 300 x 4 mm色谱柱温度: a
31、mbient溶剂溶剂: :梯度洗脱 A: 水/甲醇 80/20 B: 水/甲醇 50/50 流速 : 1mL/min ELSD-Detection:ELSD-Detection:气体 压力 (喷雾气体): 1,0 bar气体 流速 (辅助气体): 1,5 L/min温度: 50 C84分析高级醇组分组分: :Higher Alcohols色谱柱色谱柱: :Inertsil ODS-3, 40 x 4 mm溶剂溶剂: :水/乙腈 5/95 ELSD-Detection:ELSD-Detection:气体 压力 (喷雾气体): 1,0 bar气体 流速 (辅助气体): 1,5 L/min温度: 5
32、0 C85检测尿素组分组分: :Urea 5mg/100 mL in 80/20 乙腈 / 水色谱柱色谱柱: :溶剂溶剂: :80/20 乙腈 / 水 ELSD-Detection:ELSD-Detection:气体 压力 (喷雾气体): 1,0 bar气体 流速 (辅助气体): 1,1 L/min温度: 25 C86用用ECD检测儿茶酚胺检测儿茶酚胺87电导电导检测器检测器流流动动相相流流动动相相和样品和样品88用电导检测器分析阴离子用电导检测器分析阴离子89色谱色谱数据工作站数据工作站控制器控制器数据处理数据处理网络工作网络工作90工作站的发展历程工作站的发展历程91溶剂溶剂92溶剂的条件
33、溶剂的条件 流流动动相相 - HPLC 等级(水 : 18.2兆欧) - 粘度低 - 溶剂的可混合性 (混合性值差 : 小于15 ) - 不可以改变固定相 - 溶解性 - 透过波长下限, 折射率 : 低93溶剂的可溶性溶剂的可溶性Acetone15乙腈乙腈11n-Butyl acetate22N-Butyl alcohol15Chlorobenzene21Chloroform19Cyclohexane28Dichloromethane20n,n-Dimethylformaide12Dimethyl sulfoxide91,4-Dioxane17Ethyl acetate19Ethyl ethe
34、r23Heptane29Hexane29iso-Octane29Isobutyl alcohol15Isopropyl alcohol15甲醇甲醇12Methyl ethyl ketone17Pyridine16Tetrahydrofuran17Toluene2394流动相流动相的混合的混合 过滤过滤 -水性过滤膜水性过滤膜(PVDF):用水活化用水活化-有机过滤膜有机过滤膜(PTFE):用甲醇活化用甲醇活化 脱气脱气 -去除空气、氧气、气泡去除空气、氧气、气泡-真空脱气真空脱气:过滤过滤+脱气脱气-氦脱气氦脱气:把氦气灌入把氦气灌入溶溶剂剂中中-超声波处理超声波处理95使用缓冲液使用缓冲液1
35、)离子化合物离子化合物:抑制离子抑制离子2)生理学样品生理学样品:调节调节PH3)分离成离子对分离成离子对:调节离子浓度调节离子浓度96抑制离子抑制离子- 色色谱谱柱柱: Metachem Polaris C18-A 5um,1504.6mm- Eluent: ACN:20mM KH2PO4=10:90 (用乙酸调节用乙酸调节pH 3.3 )- 检测检测: UV 225nm- 流速流速: 1.4 ml/min97离子对离子对- 色色谱谱柱柱: Metachem Polaris C18-A 5um,1504.6mm-洗脱液洗脱液: ACN:20mM KH2PO4=10:90 (用用 乙酸调节乙酸调节pH 3.3 )- 检测检测: UV 225nm- 流速流速: 1.4 ml/min98
