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1、探究：探究：培养液中酵母菌培养液中酵母菌种群数量的种群数量的变变化化1a探究：培养液中酵母菌种群数量的探究：培养液中酵母菌种群数量的变变化化目的要求目的要求1、学、学习习利用血球利用血球计计数板数板进进行微生物行微生物计计数的方法数的方法2、实验实验探究培养液中酵母菌种群数量的探究培养液中酵母菌种群数量的变变化化3、注意、注意样样方法的方法的应应用用4、体会影响种群数量、体会影响种群数量变变化的因素化的因素2a1、酵母菌的繁殖方式主要是、酵母菌的繁殖方式主要是:2、酵母菌的呼吸方式是、酵母菌的呼吸方式是:兼性兼性厌厌氧氧(可可进进行有氧呼吸和无氧呼吸行有氧呼吸和无氧呼吸)回回顾顾思考思考: :
2、出芽生殖出芽生殖3、酵母菌的培养条件要注意那些、酵母菌的培养条件要注意那些问题问题?比如要用适宜的温度培养比如要用适宜的温度培养,调节调节好好PH值值,溶氧量的控制等。溶氧量的控制等。酿酿酒和做面包都需要酵母菌。酒和做面包都需要酵母菌。这这些酵母些酵母菌可以用液体培养基（培养液）来培养。培菌可以用液体培养基（培养液）来培养。培养液中酵母菌种群的增养液中酵母菌种群的增长长情况，与情况，与发发酵食品酵食品的制作有密切关系。的制作有密切关系。3a培养液中酵母菌种群数量开始一段培养液中酵母菌种群数量开始一段时间是是“J”型增型增长，由，由于于营养物养物质的消耗，有害代的消耗，有害代谢产物的物的积累，累
3、，PH值的改的改变，种群数量呈种群数量呈“S”型增型增长。探究：培养液中探究：培养液中酵母菌种群数量的酵母菌种群数量的变变化化问题问题：培养液中酵母菌种群的数量是怎培养液中酵母菌种群的数量是怎样样随随时间变时间变化的？化的？温度会影响酵母菌的生温度会影响酵母菌的生长吗长吗？营营养成分会影响酵母菌的生养成分会影响酵母菌的生长吗长吗？ 作出假作出假设设 根据前面所学的知根据前面所学的知识识，针对这针对这一一问题问题作出假作出假设设：讨论讨论探究思路探究思路 探究所需要的菌种和无菌探究所需要的菌种和无菌马铃马铃薯培养液或肉薯培养液或肉汤汤培养液、培养液、试试管、血球管、血球计计数板（数板（2mm2m
4、m2mm2mm方格）、滴管、方格）、滴管、显显微微镜镜等，都由等，都由老老师师提供。提供。 在制在制订计订计划前，你需要思考以下划前，你需要思考以下问题问题，并与同学，并与同学讨论讨论。4a实验设计实验设计将将9支支试试管分成管分成ABC三三组组，每，每组组3支。支。A组为实验组为实验组组，装培养液，装培养液10mL，酵母菌母液，酵母菌母液0.1mL,环环境温度境温度28。B组组装培养液装培养液10mL，酵母菌母液，酵母菌母液0.1mL,环环境温度境温度5，与，与A组组形成温度条件形成温度条件对对照。照。C组组不装培不装培养液，只装无菌水养液，只装无菌水10mL,酵母菌母液酵母菌母液0.1mL
5、,环环境温境温度度28，与，与A组组形成形成营营养条件养条件对对照。照。 5a实验实验操作：操作：(1)、配制无菌、配制无菌马铃马铃薯薯培养液培养液和和酵母菌母液酵母菌母液；(2)、预预先先设计设计分装分装。先每次用。先每次用10mL刻度吸管吸取刻度吸管吸取10mL培养液培养液到到A组组和和B组试组试管，用另一支管，用另一支10mL刻度吸管吸取刻度吸管吸取10mL无菌水无菌水到到C组试组试管。待分装完管。待分装完毕毕，每支，每支试试管加塞后把管加塞后把试试管扎成捆后，管扎成捆后，然后用然后用记记号笔号笔注明培养基的名称、注明培养基的名称、组别组别、日期。、日期。(3)、用高、用高压压蒸汽蒸汽灭
6、灭菌菌锅锅灭灭菌菌；(4)、接种菌种接种菌种：用：用灭灭菌干菌干净净的的1mL刻度吸管每次吸取刻度吸管每次吸取0.1mL酵酵母菌母液，往每支母菌母液，往每支试试管中加入。（注意滴加量不要太多，避免管中加入。（注意滴加量不要太多，避免初始菌数初始菌数过过多。）多。）(5)、培养培养：将：将A、C试试管置于管置于28的恒温箱中培养。将的恒温箱中培养。将B试试管管置于置于5的恒温箱中培养。（的恒温箱中培养。（5的恒温箱可由某些型号冰箱保的恒温箱可由某些型号冰箱保温室温室设设定定5时时代替。）代替。）(6)、计计数和数和记录记录：每天取：每天取样时间样时间大体一致，每次每大体一致，每次每组组按序号取按
7、序号取一支一支试试管。管。计计数数过过程中一定要遵守无菌操作程中一定要遵守无菌操作规规范，取范，取样样的吸管的吸管要干要干净净且分开使用，每次取且分开使用，每次取样样前要前要试试管振管振荡摇荡摇匀。匀。显显微微镜镜下下进进行行细细胞胞计计数后，立即将数据填到数后，立即将数据填到记录记录表格中。表格中。6a分析分析结结果，得出果，得出结论结论将所得数将所得数值值用曲用曲线图线图表示出来，分析表示出来，分析实验结实验结果是否支持你果是否支持你所做的假所做的假设设。酵母菌的种群数量在酵母菌的种群数量在营营养条件有限的情况下是呈养条件有限的情况下是呈“S”型增型增长长，但之后会下降。温度、，但之后会下
8、降。温度、营营养成分会影养成分会影响酵母菌种群数量的响酵母菌种群数量的变变化。化。探究的探究的结论结论：7a一、怎一、怎样进样进行酵母菌的行酵母菌的计计数？数？提示：提示：对对一支一支试试管中的培养液管中的培养液(可定可定为为10ml)中的酵母菌逐个中的酵母菌逐个计计数是非常困数是非常困难难的，可以采用的，可以采用抽抽样检测样检测的方法：先将盖玻片放在的方法：先将盖玻片放在计计数室上，数室上，用吸管吸取培养液，滴于用吸管吸取培养液，滴于盖玻片盖玻片边缘边缘，让让培养培养液液自行渗入，多余培养液用自行渗入，多余培养液用滤纸滤纸吸去，稍待片吸去，稍待片刻，待酵母菌刻，待酵母菌细细胞全部胞全部沉降到
9、沉降到计计数室底部数室底部，将，将计计数板数板放在放在载载物台的中央，物台的中央，计计数数一个小方格内一个小方格内的酵母菌数的酵母菌数量，再以此量，再以此为为根据，根据，估算估算试试管中管中的酵母菌的酵母菌总总数。数。8a介介绍绍:血球血球计计数板的构造数板的构造1、血球、血球计计数板：数板：是是显显微微镜镜上的外挂物件，可用来上的外挂物件，可用来测测量量细细胞，胞，细细菌等一些微小物体的菌等一些微小物体的长长度，度，还还有就是有就是测测量数量数量，如量，如单单位体位体积细积细胞的数量。血球胞的数量。血球计计数板是由一数板是由一块块比比普通普通载载玻片厚的特制玻片制成的。玻片中有四条下凹玻片厚
10、的特制玻片制成的。玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台，中的槽，构成三个平台，中间间的平台的平台较宽较宽，其中，其中间间又被又被一短横槽隔一短横槽隔为为两半，每半两半，每半边边上面上面,刻有一个方格网。刻有一个方格网。9a化化放大后的方格网放大后的方格网计计数室数室 I H G F E D C B A251616252、方格网的构成：、方格网的构成：方格网上刻有方格网上刻有9个大方格，其中个大方格，其中只有只有中中间间的一个大方格的一个大方格为计为计数室，数室，计计数室通常有两种数室通常有两种规规格：一种是大方格内分格：一种是大方格内分为为16中格，每一中格又分中格，每一中格又分为为25小格；另
11、一种是大方格内小格；另一种是大方格内分分为为25中格，每一中格又分中格，每一中格又分为为16小格。但是不管小格。但是不管计计数室数室是哪一种构造，它是哪一种构造，它们们都有一个共同的特点，即都有一个共同的特点，即每一大方每一大方格都是由格都是由1625=2516=400个小方格个小方格组组成。成。10a3、使用方法、使用方法: 将血球将血球计计数板用数板用擦擦镜纸镜纸擦擦净净，在中央的，在中央的计计数室上加数室上加盖盖专专用的盖玻片，将稀用的盖玻片，将稀释释后的酵母菌后的酵母菌悬悬液，用吸管吸取液，用吸管吸取一滴置于盖玻片的一滴置于盖玻片的边缘边缘，使菌液，使菌液缓缓缓缓渗入，多余的菌液渗入，
12、多余的菌液用吸水用吸水纸纸吸取，稍待片刻，使酵母菌全部沉降到血球吸取，稍待片刻，使酵母菌全部沉降到血球计计数室内，加盖盖玻片。数室内，加盖盖玻片。11a5、单单位位换换算算:以以1mm1mm为为例，大方格的例，大方格的长长和和宽宽各各为为1mm，深度，深度为为0.1mm，其体，其体积为积为0.1mm3。换换算算为为1mL：1000/0.1=104即即1mL是是104个个0.1mm3。4、计计数室的数室的规规格：格：计计数室数室长长宽宽有：有：1mm1mm,2mm2mm,3mm3mm等等深度均深度均为为0.1mm。12a如果使用如果使用规规格格为为16格格25格的格的计计数室，要数室，要按按对对
13、角方位，取左上、右上、左下、右下角方位，取左上、右上、左下、右下4个中个中格格(即即100个小格个小格)的酵母菌数。的酵母菌数。如果使用如果使用规规格格为为25格格16格的格的计计数室，除数室，除了取其了取其4个个对对角方位外，角方位外，还还需再数中央的一个中需再数中央的一个中格格(即即80个小方格个小方格)的酵母菌数（五点取的酵母菌数（五点取样样法）。法）。出芽的酵母菌，芽体达到母出芽的酵母菌，芽体达到母细细胞大小一半胞大小一半时时，即，即可作可作为为两个菌体两个菌体计计算。算。 6、如何、如何计计数呢？数呢？13a规规格格为为25格格16格的格的计计数室，五点取数室，五点取样样法法14a7
14、、盖玻片下的培养液厚度、盖玻片下的培养液厚度为为0.1mm，请请推算出将推算出将一个小方格范一个小方格范围围内的酵母菌数，内的酵母菌数，换换算成算成10ml培养液培养液中酵母菌中酵母菌总总数的公式。数的公式。每每1ml菌液中所含的酵母菌个数菌液中所含的酵母菌个数计计算公式算公式（以（以1mm1mm为为例）：例）：（1）16格格25格的血球格的血球计计数板数板计计算公式算公式酵母酵母细细胞数胞数/ml=(100小格内酵母小格内酵母细细胞个数胞个数/100)400104稀稀释释倍数倍数即：一小方格内酵母菌个数即：一小方格内酵母菌个数4106稀稀释释倍数倍数（2）25格格x16格的血球格的血球计计数
15、板数板计计算公式算公式酵母酵母细细胞数胞数/ml=(80小格内酵母小格内酵母细细胞个数胞个数/80)400104稀稀释释倍数倍数即：一小方格内酵母菌个数即：一小方格内酵母菌个数4106稀稀释释倍数倍数15a课课本中大方格的本中大方格的长长和和宽宽各各为为2mm，深度，深度为为0.1mm，其体，其体积为积为0.4mm3。换换算算为为1mL：1000/0.4=2.5103，即，即1mL是是2.5103个个 0.4mm3。则则：每：每1ml菌液中所含的酵母菌个数菌液中所含的酵母菌个数计计算公式算公式（2mm 2mm ）：（1）16格格25格的血球格的血球计计数板数板计计算公式算公式酵母酵母细细胞数胞
16、数/ml=(100小格内酵母小格内酵母细细胞个数胞个数/100)4002.5103稀稀释释倍数倍数即：一小方格内酵母菌个数即：一小方格内酵母菌个数106稀稀释释倍数倍数（2）25格格x16格的血球格的血球计计数板数板计计算公式算公式:酵母酵母细细胞数胞数/ml=(80小格内酵母小格内酵母细细胞个数胞个数/80)4002.5103稀稀释释倍数倍数即：一小方格内酵母菌个数即：一小方格内酵母菌个数106稀稀释释倍数倍数16a使酵母菌混合均匀。使酵母菌混合均匀。不需要，因不同不需要，因不同时间时间取取样样已形成已形成对对照。照。需要。尽量减少需要。尽量减少误误差。差。对对每个每个样样品品计计数三次数三
17、次,取其平均取其平均值值。二、从二、从试试管中吸出培养液管中吸出培养液进进行行计计数之前，建数之前，建议议你将你将试试管管轻轻轻轻振振荡荡几次。几次。这这是是为为什么？什么？ 三、本探究需要三、本探究需要设设置置对对照照吗吗？如果需要？如果需要,请讨论对请讨论对照照组应组应怎怎样设计样设计和操作，如果和操作，如果不需要，不需要，请说请说明理由。明理由。四、需要做重复四、需要做重复实验吗实验吗？17a五、怎五、怎样记录结样记录结果？果？记录记录表怎表怎样设计样设计？18a. 只只计计数相数相邻邻两两边边及其及其顶顶角的角的酵母酵母细细胞数胞数稀稀释释培养液。稀培养液。稀释释的目的是便于酵母菌的目
18、的是便于酵母菌悬悬液的液的计计数，以每数，以每小方格内含有小方格内含有4-5个酵母个酵母细细胞胞为为宜，一般稀宜，一般稀释释10倍即可。倍即可。八、血球八、血球计计数板的清数板的清洁洁血球血球计计数板使用后，用自来水冲洗，切勿用硬物洗刷，洗数板使用后，用自来水冲洗，切勿用硬物洗刷，洗后自行晾干或用吹后自行晾干或用吹风风机吹干，或用机吹干，或用95%的乙醇、无水乙醇、丙的乙醇、无水乙醇、丙酮酮等有机溶等有机溶剂剂脱水使其干燥。通脱水使其干燥。通过镜检观过镜检观察每小格内是否残留菌体察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物，若不干或其他沉淀物，若不干净净，则则必必须须重复清洗直到干重复清洗直到干净为净为
19、止。止。六、如果一个小方格内酵母菌六、如果一个小方格内酵母菌过过多，多，难难以数清，以数清，应应当当采取怎采取怎样样的措施？的措施？ 七、七、对对于于压压在小方格界在小方格界线线上上的酵母菌，的酵母菌，应应当怎当怎样计样计数？数？ 19a表达和交流表达和交流1、向全班、向全班汇报汇报本小本小组组7天的数据，算天的数据，算出每一天全班各出每一天全班各组组数据的平均数据的平均值值，根据平，根据平均均值值重新画酵母菌种群数量的增重新画酵母菌种群数量的增长长曲曲线线。将将这这个增个增长长曲曲线线与本小与本小组组的曲的曲线进线进行比行比较较，分析其相似程度，并做出合理的解分析其相似程度，并做出合理的解释释。2、根据各、根据各组组平均数据画出的增平均数据画出的增长长曲曲线线有没有什么有没有什么总趋势总趋势？如果有，作出？如果有，作出说说明。明。如果如果设计设计了无菌水的了无菌水的对对照，也画出增照，也画出增长长曲曲线线。20a3、影响酵母菌的种群数量增、影响酵母菌的种群数量增长长的因素可的因素可能是什么？能是什么？除了本除了本实验实验中温度、中温度、营营养以外养以外还还包括包括酵母菌菌种本身性酵母菌菌种本身性质质、接种、接种时间时间、p值值、接种量、溶氧量等影响因素。接种量、溶氧量等影响因素。21a
