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1、1.1.基因表达载体的组成：基因表达载体的组成：a.目的基因目的基因 b. 启动子启动子c. 终止子终止子d. 标记基因标记基因1.1.基因表达载体的组成：基因表达载体的组成：2.2.过程过程: :二、基因表达载体的构建二、基因表达载体的构建质粒质粒DNA分子分子2.2.过程过程: :二、基因表达载体的构建二、基因表达载体的构建质粒质粒DNA分子分子限制酶处理限制酶处理同一种同一种2.2.过程过程: :二、基因表达载体的构建二、基因表达载体的构建质粒质粒DNA分子分子限制酶处理限制酶处理一个切口一个切口两个黏性末端两个黏性末端两个切口两个切口获得目的基因获得目的基因同一种同一种2.2.过程过程
2、: :二、基因表达载体的构建二、基因表达载体的构建质粒质粒DNA分子分子限制酶处理限制酶处理一个切口一个切口两个黏性末端两个黏性末端两个切口两个切口获得目的基因获得目的基因DNA 连接酶连接酶同一种同一种2.2.过程过程: :二、基因表达载体的构建二、基因表达载体的构建质粒质粒DNA分子分子限制酶处理限制酶处理一个切口一个切口两个黏性末端两个黏性末端两个切口两个切口获得目的基因获得目的基因DNA 连接酶连接酶重组重组DNA分子（重组质粒）分子（重组质粒）同一种同一种2.2.过程过程: :二、基因表达载体的构建二、基因表达载体的构建3.3.基因表达载体的作用基因表达载体的作用3.3.基因表达载体
3、的作用基因表达载体的作用a. 使目的基因在受体细胞中稳定存在并使目的基因在受体细胞中稳定存在并 遗传给子代遗传给子代b. 同时使目的基因能表达和发挥作用同时使目的基因能表达和发挥作用三、将目的基因导入受体细胞三、将目的基因导入受体细胞三、将目的基因导入受体细胞三、将目的基因导入受体细胞转化转化目的基因进入目的基因进入_内，并内，并且在受体细胞内维持且在受体细胞内维持_和和_的过程的过程受体细胞受体细胞稳定稳定表达表达三、将目的基因导入受体细胞三、将目的基因导入受体细胞转化转化方法方法目的基因进入目的基因进入_内，并内，并且在受体细胞内维持且在受体细胞内维持_和和_的过程的过程受体细胞受体细胞稳
4、定稳定表达表达三、将目的基因导入受体细胞三、将目的基因导入受体细胞转化转化方法方法将目的基因导将目的基因导入植物细胞入植物细胞将目的基因导将目的基因导入动物细胞入动物细胞将目的基因导将目的基因导入微生物细胞入微生物细胞目的基因进入目的基因进入_内，并内，并且在受体细胞内维持且在受体细胞内维持_和和_的过程的过程受体细胞受体细胞稳定稳定表达表达三、将目的基因导入受体细胞三、将目的基因导入受体细胞转化转化方法方法将目的基因导将目的基因导入植物细胞入植物细胞将目的基因导将目的基因导入动物细胞入动物细胞将目的基因导将目的基因导入微生物细胞入微生物细胞农杆菌转化法农杆菌转化法目的基因进入目的基因进入_内
5、，并内，并且在受体细胞内维持且在受体细胞内维持_和和_的过程的过程受体细胞受体细胞稳定稳定表达表达三、将目的基因导入受体细胞三、将目的基因导入受体细胞转化转化方法方法将目的基因导将目的基因导入植物细胞入植物细胞将目的基因导将目的基因导入动物细胞入动物细胞将目的基因导将目的基因导入微生物细胞入微生物细胞农杆菌转化法农杆菌转化法基因枪法基因枪法目的基因进入目的基因进入_内，并内，并且在受体细胞内维持且在受体细胞内维持_和和_的过程的过程受体细胞受体细胞稳定稳定表达表达三、将目的基因导入受体细胞三、将目的基因导入受体细胞转化转化方法方法将目的基因导将目的基因导入植物细胞入植物细胞将目的基因导将目的基
6、因导入动物细胞入动物细胞将目的基因导将目的基因导入微生物细胞入微生物细胞农杆菌转化法农杆菌转化法基因枪法基因枪法花粉管通道法花粉管通道法目的基因进入目的基因进入_内，并内，并且在受体细胞内维持且在受体细胞内维持_和和_的过程的过程受体细胞受体细胞稳定稳定表达表达三、将目的基因导入受体细胞三、将目的基因导入受体细胞转化转化方法方法将目的基因导将目的基因导入植物细胞入植物细胞将目的基因导将目的基因导入动物细胞入动物细胞将目的基因导将目的基因导入微生物细胞入微生物细胞农杆菌转化法农杆菌转化法基因枪法基因枪法花粉管通道法花粉管通道法显微注射法显微注射法目的基因进入目的基因进入_内，并内，并且在受体细胞
7、内维持且在受体细胞内维持_和和_的过程的过程受体细胞受体细胞稳定稳定表达表达三、将目的基因导入受体细胞三、将目的基因导入受体细胞转化转化方法方法将目的基因导将目的基因导入植物细胞入植物细胞将目的基因导将目的基因导入动物细胞入动物细胞将目的基因导将目的基因导入微生物细胞入微生物细胞农杆菌转化法农杆菌转化法基因枪法基因枪法花粉管通道法花粉管通道法显微注射法显微注射法感受态细胞感受态细胞目的基因进入目的基因进入_内，并内，并且在受体细胞内维持且在受体细胞内维持_和和_的过程的过程受体细胞受体细胞稳定稳定表达表达检检测测四、目的基因的检测与鉴定四、目的基因的检测与鉴定检检测测导入检测：导入检测： 目的
8、基因是否导入受体细胞目的基因是否导入受体细胞四、目的基因的检测与鉴定四、目的基因的检测与鉴定检检测测导入检测：导入检测： 目的基因是否导入受体细胞目的基因是否导入受体细胞方法方法DNA分子杂交分子杂交四、目的基因的检测与鉴定四、目的基因的检测与鉴定DNA附着在膜上附着在膜上硝化纤维素硝化纤维素加探针加探针报告基因报告基因(含荧光素分子含荧光素分子)变性变性DNA杂交杂交（如检测（如检测SARS病毒等）病毒等）abcd检检测测导入检测：导入检测： 目的基因是否导入受体细胞目的基因是否导入受体细胞方法方法DNA分子杂交分子杂交表达检测表达检测四、目的基因的检测与鉴定四、目的基因的检测与鉴定检检测测
9、导入检测：导入检测： 目的基因是否导入受体细胞目的基因是否导入受体细胞方法方法DNA分子杂交分子杂交表达检测表达检测转录检测转录检测 分子杂交分子杂交四、目的基因的检测与鉴定四、目的基因的检测与鉴定检检测测导入检测：导入检测： 目的基因是否导入受体细胞目的基因是否导入受体细胞方法方法DNA分子杂交分子杂交表达检测表达检测转录检测转录检测 分子杂交分子杂交翻译检测翻译检测抗原抗体杂交抗原抗体杂交四、目的基因的检测与鉴定四、目的基因的检测与鉴定四、目的基因的检测与鉴定四、目的基因的检测与鉴定检检测测导入检测：导入检测： 目的基因是否导入受体细胞目的基因是否导入受体细胞方法方法DNA分子杂交分子杂交
10、表达检测表达检测转录检测转录检测 分子杂交分子杂交翻译检测翻译检测抗原抗体杂交抗原抗体杂交分分子子检检测测法法鉴定鉴定鉴定鉴定抗虫鉴定抗虫鉴定抗病鉴定抗病鉴定活性鉴定等活性鉴定等鉴定鉴定抗虫鉴定抗虫鉴定抗病鉴定抗病鉴定活性鉴定等活性鉴定等个体水平的鉴定个体水平的鉴定1.（多选）一个基因表达载体的构建（多选）一个基因表达载体的构建 应包括应包括 A. 目的基因目的基因 B. 启动子启动子 C. 终止子终止子 D. 标记基因标记基因1.（多选）一个基因表达载体的构建（多选）一个基因表达载体的构建 应包括应包括 A. 目的基因目的基因 B. 启动子启动子 C. 终止子终止子 D. 标记基因标记基因2
11、. 下列关于基因表达载体的叙述不正下列关于基因表达载体的叙述不正确的是确的是A. 启动子是与启动子是与RNA聚合酶识别和结合聚合酶识别和结合的部位，是起始密码的部位，是起始密码B. 启动子和终止子都是特殊结构的启动子和终止子都是特殊结构的DNA短片段，对短片段，对mRNA的转录起调控作用的转录起调控作用C. 标记基因是为了鉴别受体细胞中是标记基因是为了鉴别受体细胞中是否有目的基因从而便于筛选否有目的基因从而便于筛选D. 基因表达载体的构建视受体细胞及基因表达载体的构建视受体细胞及导入方式不同而有所差别导入方式不同而有所差别2. 下列关于基因表达载体的叙述不正下列关于基因表达载体的叙述不正确的是
12、确的是A. 启动子是与启动子是与RNA聚合酶识别和结合聚合酶识别和结合的部位，是起始密码的部位，是起始密码B. 启动子和终止子都是特殊结构的启动子和终止子都是特殊结构的DNA短片段，对短片段，对mRNA的转录起调控作用的转录起调控作用C. 标记基因是为了鉴别受体细胞中是标记基因是为了鉴别受体细胞中是否有目的基因从而便于筛选否有目的基因从而便于筛选D. 基因表达载体的构建视受体细胞及基因表达载体的构建视受体细胞及导入方式不同而有所差别导入方式不同而有所差别3. 基因工程中科学家常用细菌、酵母基因工程中科学家常用细菌、酵母菌等微生物作为受体细胞，原因是菌等微生物作为受体细胞，原因是 A. 结构简单
13、、操作方便结构简单、操作方便B. 繁殖速度快繁殖速度快 C. 遗传物质含量少、简单遗传物质含量少、简单D. 性状稳定、变异少性状稳定、变异少3. 基因工程中科学家常用细菌、酵母基因工程中科学家常用细菌、酵母菌等微生物作为受体细胞，原因是菌等微生物作为受体细胞，原因是 A. 结构简单、操作方便结构简单、操作方便B. 繁殖速度快繁殖速度快 C. 遗传物质含量少、简单遗传物质含量少、简单D. 性状稳定、变异少性状稳定、变异少4. 基因工程常用的受体细胞有基因工程常用的受体细胞有 大肠杆菌大肠杆菌 枯草杆菌枯草杆菌 支原体支原体动植物细胞动植物细胞ABCD4. 基因工程常用的受体细胞有基因工程常用的受
14、体细胞有 大肠杆菌大肠杆菌 枯草杆菌枯草杆菌 支原体支原体动植物细胞动植物细胞ABCD5. 基因工程是在基因工程是在DNA分子水平上进分子水平上进行设计施工的，在基因操作的基本步骤行设计施工的，在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是中，不进行碱基互补配对的步骤是A. 人工合成基因人工合成基因B. 目的基因与运载体结合目的基因与运载体结合C. 将目的基因导入受体细胞将目的基因导入受体细胞D. 目的基因的检测和表达目的基因的检测和表达5. 基因工程是在基因工程是在DNA分子水平上进分子水平上进行设计施工的，在基因操作的基本步骤行设计施工的，在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步
15、骤是中，不进行碱基互补配对的步骤是A. 人工合成基因人工合成基因B. 目的基因与运载体结合目的基因与运载体结合C. 将目的基因导入受体细胞将目的基因导入受体细胞D. 目的基因的检测和表达目的基因的检测和表达6. 采用基因工程的方法培育抗虫棉，下采用基因工程的方法培育抗虫棉，下列导入目的基因的做法正确的是列导入目的基因的做法正确的是将毒素蛋白质注射到棉受精卵中将毒素蛋白质注射到棉受精卵中 将将编码毒素蛋白的编码毒素蛋白的DNA序列注射到棉受精卵中序列注射到棉受精卵中 将编码毒素蛋白的将编码毒素蛋白的DNA序列与细菌质粒重序列与细菌质粒重组，注射到棉的子房并进入受精卵中组，注射到棉的子房并进入受精
16、卵中 将编将编码毒素蛋白的码毒素蛋白的DNA序列与质粒重组，导序列与质粒重组，导入入细细菌感染棉的体细胞，再进行组织培养菌感染棉的体细胞，再进行组织培养A BC D6. 采用基因工程的方法培育抗虫棉，下采用基因工程的方法培育抗虫棉，下列导入目的基因的做法正确的是列导入目的基因的做法正确的是将毒素蛋白质注射到棉受精卵中将毒素蛋白质注射到棉受精卵中 将将编码毒素蛋白的编码毒素蛋白的DNA序列注射到棉受精卵中序列注射到棉受精卵中 将编码毒素蛋白的将编码毒素蛋白的DNA序列与细菌质粒重序列与细菌质粒重组，注射到棉的子房并进入受精卵中组，注射到棉的子房并进入受精卵中 将编将编码毒素蛋白的码毒素蛋白的DN
17、A序列与质粒重组，导序列与质粒重组，导入入细细菌感染棉的体细胞，再进行组织培养菌感染棉的体细胞，再进行组织培养A BC D7. 有关基因工程的叙述中，错误的是有关基因工程的叙述中，错误的是A. DNA连接酶将黏性末端的碱基对连接连接酶将黏性末端的碱基对连接起来起来 B. 限制性内切酶用于目的基因的获得限制性内切酶用于目的基因的获得C. 目的基因须由运载体导入受体细胞目的基因须由运载体导入受体细胞D. 人工合成目的基因不用限制性内切酶人工合成目的基因不用限制性内切酶7. 有关基因工程的叙述中，错误的是有关基因工程的叙述中，错误的是A. DNA连接酶将黏性末端的碱基对连接连接酶将黏性末端的碱基对连
18、接起来起来 B. 限制性内切酶用于目的基因的获得限制性内切酶用于目的基因的获得C. 目的基因须由运载体导入受体细胞目的基因须由运载体导入受体细胞D. 人工合成目的基因不用限制性内切酶人工合成目的基因不用限制性内切酶8. 有关基因工程的叙述正确的是有关基因工程的叙述正确的是 A. 限制酶只在获得目的基因时才用限制酶只在获得目的基因时才用B. 重组质粒的形成在细胞内完成重组质粒的形成在细胞内完成C. 质粒都可作为运载体质粒都可作为运载体D. 蛋白质的结构可为合成目的基因提蛋白质的结构可为合成目的基因提 供资料供资料8. 有关基因工程的叙述正确的是有关基因工程的叙述正确的是 A. 限制酶只在获得目的
19、基因时才用限制酶只在获得目的基因时才用B. 重组质粒的形成在细胞内完成重组质粒的形成在细胞内完成C. 质粒都可作为运载体质粒都可作为运载体D. 蛋白质的结构可为合成目的基因提蛋白质的结构可为合成目的基因提 供资料供资料9.目的基因导入受体细胞后，是否可以目的基因导入受体细胞后，是否可以稳定维持和表达其遗传特性，只有通过鉴定稳定维持和表达其遗传特性，只有通过鉴定和检测才能知道。下列属于目的基因检测和和检测才能知道。下列属于目的基因检测和鉴定的是鉴定的是检测受体细胞中是否有目的基因检测受体细胞中是否有目的基因 检测受体细胞中是否有致病基因检测受体细胞中是否有致病基因 检测目检测目的基因是否转录出的
20、基因是否转录出mRNA 检测目的基因检测目的基因是否翻译出蛋白质是否翻译出蛋白质A. B.C. D.9.目的基因导入受体细胞后，是否可以目的基因导入受体细胞后，是否可以稳定维持和表达其遗传特性，只有通过鉴定稳定维持和表达其遗传特性，只有通过鉴定和检测才能知道。下列属于目的基因检测和和检测才能知道。下列属于目的基因检测和鉴定的是鉴定的是检测受体细胞中是否有目的基因检测受体细胞中是否有目的基因 检测受体细胞中是否有致病基因检测受体细胞中是否有致病基因 检测目检测目的基因是否转录出的基因是否转录出mRNA 检测目的基因检测目的基因是否翻译出蛋白质是否翻译出蛋白质A. B.C. D.10. 基因工程是
21、在基因工程是在DNA分子水平上进行分子水平上进行设计施工的。在基因操作的基本步骤中，设计施工的。在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是不进行碱基互补配对的步骤是A. 人工合成目的基因人工合成目的基因B. 目的基因的检测和表达目的基因的检测和表达C. 将目的基因导入受体细胞将目的基因导入受体细胞D. 目的基因与运载体结合目的基因与运载体结合10. 基因工程是在基因工程是在DNA分子水平上进行分子水平上进行设计施工的。在基因操作的基本步骤中，设计施工的。在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是不进行碱基互补配对的步骤是A. 人工合成目的基因人工合成目的基因B. 目的基因的检测
22、和表达目的基因的检测和表达C. 将目的基因导入受体细胞将目的基因导入受体细胞D. 目的基因与运载体结合目的基因与运载体结合11. （多选）人们利用基因工程的方法，（多选）人们利用基因工程的方法，用大肠杆菌生产人类胰岛素，这一过程涉用大肠杆菌生产人类胰岛素，这一过程涉及到及到A. 用适当的酶对胰岛素基因与运载体用适当的酶对胰岛素基因与运载体进行切割并连接进行切割并连接B. 把重组后的把重组后的DNA分子导入受体细菌分子导入受体细菌内进行扩增内进行扩增C. 检测重组检测重组DNA分子是否导入受体细分子是否导入受体细菌内并表达出性状菌内并表达出性状D. 筛选出能产生胰岛素的筛选出能产生胰岛素的“工程
23、菌工程菌” 11. （多选）人们利用基因工程的方法，（多选）人们利用基因工程的方法，用大肠杆菌生产人类胰岛素，这一过程涉用大肠杆菌生产人类胰岛素，这一过程涉及到及到A. 用适当的酶对胰岛素基因与运载体用适当的酶对胰岛素基因与运载体进行切割并连接进行切割并连接B. 把重组后的把重组后的DNA分子导入受体细菌分子导入受体细菌内进行扩增内进行扩增C. 检测重组检测重组DNA分子是否导入受体细分子是否导入受体细菌内并表达出性状菌内并表达出性状D. 筛选出能产生胰岛素的筛选出能产生胰岛素的“工程菌工程菌” 12. 下列哪项不属于基因工程技术的步骤下列哪项不属于基因工程技术的步骤 A. 基因转移基因转移
24、B. 基因扩增基因扩增C. 基因检测基因检测 D. 基因表达基因表达 12. 下列哪项不属于基因工程技术的步骤下列哪项不属于基因工程技术的步骤 A. 基因转移基因转移 B. 基因扩增基因扩增C. 基因检测基因检测 D. 基因表达基因表达 1.利用大肠杆菌可以生产出人的胰岛素，利用大肠杆菌可以生产出人的胰岛素，联系前面有关细胞器功能的知识，结合基因联系前面有关细胞器功能的知识，结合基因工程操作程序的基本思路，思考一下，若要工程操作程序的基本思路，思考一下，若要生产人的糖蛋白，可以用大肠杆菌吗？生产人的糖蛋白，可以用大肠杆菌吗？寻根问底：寻根问底：1.利用大肠杆菌可以生产出人的胰岛素，利用大肠杆菌
25、可以生产出人的胰岛素，联系前面有关细胞器功能的知识，结合基因联系前面有关细胞器功能的知识，结合基因工程操作程序的基本思路，思考一下，若要工程操作程序的基本思路，思考一下，若要生产人的糖蛋白，可以用大肠杆菌吗？生产人的糖蛋白，可以用大肠杆菌吗？有些蛋白质肽链上有共价结合的糖链，有些蛋白质肽链上有共价结合的糖链，这些糖链是在内质网和高尔基复合体上加这些糖链是在内质网和高尔基复合体上加工完成的，内质网和高尔基复合体存在于工完成的，内质网和高尔基复合体存在于真核细胞中，大肠杆菌不存在这两种细胞真核细胞中，大肠杆菌不存在这两种细胞器，因此，在大肠杆菌中生产这种糖蛋白器，因此，在大肠杆菌中生产这种糖蛋白是
26、不可能的。是不可能的。寻根问底：寻根问底： 2.根据农杆菌可将目的基因导入双根据农杆菌可将目的基因导入双子叶植物的机理子叶植物的机理,你能分析出不能导入你能分析出不能导入单子叶植物的原因吗单子叶植物的原因吗?若将一个抗病基若将一个抗病基因导入小麦中因导入小麦中,理论上讲你应该怎样做理论上讲你应该怎样做?要选择合适的农杆菌菌株，因为要选择合适的农杆菌菌株，因为不是所有的农杆菌菌株都可以侵染单子不是所有的农杆菌菌株都可以侵染单子叶植物；叶植物；要加趋化和诱导的物质，一般为要加趋化和诱导的物质，一般为乙酰丁香酮等，目的是使农杆菌向植物乙酰丁香酮等，目的是使农杆菌向植物组织的受伤部位靠拢（趋化性）和激活组织的受伤部位靠拢（趋化性）和激活农杆菌的农杆菌的Vir区（诱导）的基因，使区（诱导）的基因，使T-DNA转移并插入到染色体转移并插入到染色体DNA上。上。
