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1、 疟原虫常识与镜检 技术的临床应用儋州市第一人民医院检验科儋州市第一人民医院检验科 范学成范学成 2010.12.13 2010.12.13主要内容：主要内容： 一一. 疟原虫的种类与分布疟原虫的种类与分布 二二. 疟原虫生活史与病症概述疟原虫生活史与病症概述 三三. 疟原虫的形态与镜检技术疟原虫的形态与镜检技术 四四. 培训实时测验培训实时测验 “疟疟”字释疑：字释疑： 根据根据新华字典新华字典 “疟疟” 属属 多音字多音字 1. 疟疟（读Yo） 指疟疾，俗称。指疟疾，俗称。 2. 疟疟（读N） 指疟疾，一种急性传染病，病原体指疟疾，一种急性传染病，病原体 是疟原虫，传染源是蚊子，为周期性是
2、疟原虫，传染源是蚊子，为周期性 发冷发热的症状。发冷发热的症状。 历史回顾历史回顾 3千多年前，千多年前， “疟疟”的象形文字出现在隋代的象形文字出现在隋代诸病源候论诸病源候论，及以后国内外某些医学家均认为疟疾是及以后国内外某些医学家均认为疟疾是 “瘴气瘴气”所引起的。所引起的。 1880年法国人年法国人Alphonse Laveran在疟疾病人红细胞中发现疟原虫。在疟疾病人红细胞中发现疟原虫。 1897年英国人年英国人Ronald Ross发现蚊虫与传播疟疾的关系。发现蚊虫与传播疟疾的关系。 1948 -1960年年 Shortt及及Garnham证实了人类疟原虫的肝细胞外期。证实了人类疟原
3、虫的肝细胞外期。 1977-1980年年 Lysenko 和和Krotoski等等 提出提出“休眠子休眠子”学说。学说。 经过一个世纪的研究，疟原虫生活史得以基本阐明。经过一个世纪的研究，疟原虫生活史得以基本阐明。 一一.疟原虫的分布与种类疟原虫的分布与种类 分分 布布 疟原虫主要分布在地球热带、亚热带各国，即非洲、东疟原虫主要分布在地球热带、亚热带各国，即非洲、东南亚、南美等地区，约有南亚、南美等地区，约有20亿人口在疫区。每年死于疟疾的亿人口在疫区。每年死于疟疾的儿童约儿童约100万。我国在华南、华中的某些地区，特别是万。我国在华南、华中的某些地区，特别是云南和云南和海南省，海南省，因此，
4、疟疾仍是我国重点防治的寄生虫病之一。因此，疟疾仍是我国重点防治的寄生虫病之一。种种 类类 至今全球发现疟原虫有至今全球发现疟原虫有130多种，宿主：人类、哺乳动多种，宿主：人类、哺乳动物、鸟类及爬行类。物、鸟类及爬行类。 寄生于人体的疟原虫共有如下四种：寄生于人体的疟原虫共有如下四种： 间日疟原虫间日疟原虫（Plasmodium vivax P.v ）间日疟间日疟48h温带温带普遍感染普遍感染流行最广流行最广恶性疟原虫恶性疟原虫(Plasmodium falciparum P.f) 恶性疟恶性疟 3648h热带热带亚热带亚热带海南、云海南、云南、贵州南、贵州三日疟原虫三日疟原虫(Plasmod
5、ium malariae P.m)三日疟三日疟 72h热带热带少见少见卵形疟原虫卵形疟原虫(Plasmodium ovale P.o)卵形疟卵形疟 48h热带热带罕见罕见目前，我省只有目前，我省只有间日疟间日疟和和恶性疟恶性疟。 卫生部要求：卫生部要求： 我省应在我省应在2012年消除疟疾！年消除疟疾！寄生于人体的四种疟原虫寄生于人体的四种疟原虫通过通过按蚊按蚊叮咬进入人体叮咬进入人体二.疟原虫生活史概述疟原虫生活史概述子孢子雌蚊吸血，经皮肤侵入人体移入肝细胞速发型子孢子迟发型子孢子（约6-12个月休眠）无性裂体生殖裂殖体胀破肝C释放裂殖子某些因素刺激侵入血流进入RBC环状体裂体增殖大滋养体早
6、期裂殖体成熟裂殖体裂殖子 胀破RBC释放经过几次裂体增殖雌配子体雄配子体雌蚊吸血进入蚊胃雌配子雄配子合子配子结合动合子穿过胃壁在胃壁下卵囊孢子增殖侵入新的RBC遗传基因多态性分型自然气温自然气温16-30蚊体内蚊体内P.V 8-9天天P.f 10天天RBC外期外期P.V 8天天 P.f 5天天RBC内内期期P.V 48hP.f 36-48h 内潜伏期内潜伏期外外潜潜伏伏期期 人疟原虫完成其生活人疟原虫完成其生活史需要人和按蚊两个宿主。史需要人和按蚊两个宿主。 1. 在按蚊体内进行有在按蚊体内进行有性繁殖，按蚊是疟原虫的性繁殖，按蚊是疟原虫的终末宿主终末宿主。 2. 在人体内进行无性在人体内进行
7、无性增殖，人是疟原虫的增殖，人是疟原虫的中间中间宿主宿主。电镜下电镜下MP感感染的染的RBC和和裂殖子的释裂殖子的释出出（人卫版本科教材）（人卫版本科教材）疟疾病症疟疾病症典型症状：典型症状： 周期性寒战、高热（周期性寒战、高热（T：39-40 ）、出汗、出汗, 每次发作时间每次发作时间 610h。热热 型：型： 即周期性与红内期裂体增殖周期一致。即周期性与红内期裂体增殖周期一致。 P.v、P.o 48h P.f3648h，渐不规则，渐不规则 P.m72h贫贫 血：血： A. 与与RBC大量直接破坏有关。大量直接破坏有关。 B. 脾亢，脾肿大脾亢，脾肿大 、单核巨噬细胞增生所致，、单核巨噬细胞
8、增生所致，26 倍大，巨噬细胞增多，吞噬增强倍大，巨噬细胞增多，吞噬增强 。 C. 骨髓中骨髓中RBC生成障碍。生成障碍。D. 自身免疫破坏自身免疫破坏RBC。37C 0 发烧发烧发烧发烧 裂体增殖裂体增殖48h 隔日隔日PV热型与原虫发育的关系热型与原虫发育的关系海南省琼中县儿童因疟疾引起的脾脏肿大海南省琼中县儿童因疟疾引起的脾脏肿大（人卫版本科教材） 疟原虫营养代谢胞饮、吞噬摄取营养胞饮、吞噬摄取营养蛋白质：氨基酸来自血红蛋白、血浆蛋白质：氨基酸来自血红蛋白、血浆 RBC珠蛋白珠蛋白+血红素血红素疟色素疟色素（R除外除外各期各期 消化分解消化分解Hb后的最终产物后的最终产物 ）能量：能量：
9、 葡萄糖来自血浆，但要利用葡萄糖来自血浆，但要利用RBC 中的中的G6PD 缺乏缺乏G6PDG6PD的病人对疟原虫有选择抗性的病人对疟原虫有选择抗性 疟原虫的寿命疟原虫的寿命 疟疟原原虫虫在在人人体体内内有有一一定定的的寿寿命命，恶恶性性疟疟原原虫虫约约1年年，其其中中大大部部分分只只活活到到68个个月月；间间日日疟原虫为疟原虫为1年半至年半至3 年年，不超过，不超过4年年。 人人体体免免疫疫力力对对疟疟原原虫虫的的生生存存是是有有影影响响的的，所所以以，这这里里说说的的疟疟原原虫虫的的寿寿命命与与指指疟疟原原虫虫在在一一定定条条件件下下的的寿寿命命；或或者者说说是是感感染染后后的的疟疟疾疾病
10、程。病程。三三.疟原虫的形态与镜检技术疟原虫的形态与镜检技术 1. 形形 态态 人体人体 疟原虫的基本构造：疟原虫的基本构造：胞核、胞质和包膜胞核、胞质和包膜 疟原虫形态检查三要素：疟原虫形态检查三要素：胞核、胞质和虐色素胞核、胞质和虐色素 胞胞胞胞 核核核核 即细胞核或染色质粒。在正常情况下核呈鲜红色，呈圆形或不规则的颗粒状。即细胞核或染色质粒。在正常情况下核呈鲜红色，呈圆形或不规则的颗粒状。即细胞核或染色质粒。在正常情况下核呈鲜红色，呈圆形或不规则的颗粒状。即细胞核或染色质粒。在正常情况下核呈鲜红色，呈圆形或不规则的颗粒状。核的结构致密，只有在个别发育阶段较为疏松。例如间日疟原虫雄配子体的
11、核的结构致密，只有在个别发育阶段较为疏松。例如间日疟原虫雄配子体的核的结构致密，只有在个别发育阶段较为疏松。例如间日疟原虫雄配子体的核的结构致密，只有在个别发育阶段较为疏松。例如间日疟原虫雄配子体的核，有时因胞浆厚密或染色深蓝，使核呈暗红或紫红色。核，有时因胞浆厚密或染色深蓝，使核呈暗红或紫红色。核，有时因胞浆厚密或染色深蓝，使核呈暗红或紫红色。核，有时因胞浆厚密或染色深蓝，使核呈暗红或紫红色。 胞胞胞胞 质质质质 被染成蔚蓝色或深蓝色，随着虫体发育长大，细胞浆逐渐增多。间日疟原虫发被染成蔚蓝色或深蓝色，随着虫体发育长大，细胞浆逐渐增多。间日疟原虫发被染成蔚蓝色或深蓝色，随着虫体发育长大，细胞
12、浆逐渐增多。间日疟原虫发被染成蔚蓝色或深蓝色，随着虫体发育长大，细胞浆逐渐增多。间日疟原虫发育到大滋养体阶段，胞浆呈阿米巴样活动，胞浆内有空泡。育到大滋养体阶段，胞浆呈阿米巴样活动，胞浆内有空泡。育到大滋养体阶段，胞浆呈阿米巴样活动，胞浆内有空泡。育到大滋养体阶段，胞浆呈阿米巴样活动，胞浆内有空泡。 疟色素疟色素疟色素疟色素 不着色，颜色和颗粒的形状，因疟原虫种类而异。不着色，颜色和颗粒的形状，因疟原虫种类而异。不着色，颜色和颗粒的形状，因疟原虫种类而异。不着色，颜色和颗粒的形状，因疟原虫种类而异。间日疟原虫的色素颗粒呈细间日疟原虫的色素颗粒呈细间日疟原虫的色素颗粒呈细间日疟原虫的色素颗粒呈细
13、小杆状，黄褐色；恶性疟原虫色素呈块状，黑褐色；小杆状，黄褐色；恶性疟原虫色素呈块状，黑褐色；小杆状，黄褐色；恶性疟原虫色素呈块状，黑褐色；小杆状，黄褐色；恶性疟原虫色素呈块状，黑褐色；三日疟原虫的色素呈砂三日疟原虫的色素呈砂三日疟原虫的色素呈砂三日疟原虫的色素呈砂粒状，深褐色；卵形疟原虫的色素与间日疟原虫相似。疟色素在虫体内散在粒状，深褐色；卵形疟原虫的色素与间日疟原虫相似。疟色素在虫体内散在粒状，深褐色；卵形疟原虫的色素与间日疟原虫相似。疟色素在虫体内散在粒状，深褐色；卵形疟原虫的色素与间日疟原虫相似。疟色素在虫体内散在分布或聚集成团块。分布或聚集成团块。分布或聚集成团块。分布或聚集成团块。
14、 各期疟原虫形态比较各期疟原虫形态比较英文缩写代号：英文缩写代号： MP疟原虫疟原虫 P. v间日疟原虫间日疟原虫 P.f 恶性疟原虫恶性疟原虫 P.m 三日疟原虫三日疟原虫 P.o 卵形疟原虫卵形疟原虫 R 环状体（小滋养体）环状体（小滋养体） T 大滋养体大滋养体 S 裂殖体裂殖体 G 配子体配子体 P.f的的T、S主要在皮下、脂肪和内脏主要在皮下、脂肪和内脏微血管中发育，微血管中发育， G成熟后，约在无性体成熟后，约在无性体出现后出现后710天才见于外周血液中。天才见于外周血液中。 因此，通常外周血检查只见到因此，通常外周血检查只见到R和和G这两期的这两期的P.f，这是鉴别，这是鉴别P.
15、v、P.f的要点的要点之一。之一。被疟原虫寄生的被疟原虫寄生的被疟原虫寄生的被疟原虫寄生的RBCRBC变化变化变化变化 虫种虫种虫种虫种 RBCRBC大小大小大小大小 RBCRBC颜色颜色颜色颜色间日疟间日疟间日疟间日疟 胀大胀大胀大胀大 变淡变淡变淡变淡 恶性疟恶性疟恶性疟恶性疟 正常或缩小正常或缩小正常或缩小正常或缩小 正常正常正常正常 薄血膜中薄血膜中 P.v 的形态的形态环状体环状体(P.v.R(P.v.R) )P.v.RP.v.R 约占寄生红细胞的约占寄生红细胞的1/31/3，很少见到一个红细胞寄生，很少见到一个红细胞寄生2 2个环状体和一个环状体有个环状体和一个环状体有2 2个核。
16、个核。 P.v.RP.v.R大大滋养体滋养体(P.v.T(P.v.T) )经经8 81010小时，虫体增大，胞质增多，伸出伪足。小时，虫体增大，胞质增多，伸出伪足。出现黄褐色的疟色素。出现黄褐色的疟色素。红细胞胀大，变形，颜色变淡，并出现数量较多，淡红色的红细胞胀大，变形，颜色变淡，并出现数量较多，淡红色的小点，称薛氏小点小点，称薛氏小点成熟裂殖体成熟裂殖体（P.v.SP.v.S）红细胞红细胞： 胀大，褪色，可见薛氏小点。胀大，褪色，可见薛氏小点。大大 小小： 个体较大。个体较大。胞浆和核胞浆和核：裂殖子裂殖子12241224个平均个平均1616个，排个，排 列不规则，核红色，胞浆浅兰色。列不
17、规则，核红色，胞浆浅兰色。色色 素素： 黄褐色常集于疟原虫的一边。黄褐色常集于疟原虫的一边。 P.v.S实体标本镜检形态实体标本镜检形态（吉氏染色）（吉氏染色）间日疟原虫间日疟原虫雄配子体雄配子体(P.v.G(P.v.G) ) 间日疟原虫间日疟原虫雌配子体雌配子体(P.v.G(P.v.G) )虫体较小，占满胀大的红细胞虫体较小，占满胀大的红细胞胞质浅蓝胞质浅蓝核大疏松，淡红色，多位于虫体核大疏松，淡红色，多位于虫体的中央。的中央。疟色素分散疟色素分散 虫体较大，占满胀大的红细胞虫体较大，占满胀大的红细胞胞质致密，色深蓝胞质致密，色深蓝核小致密，深红色，多位于虫核小致密，深红色，多位于虫体一侧体
18、一侧疟色素分散疟色素分散 P.V雄配子体P.V雌配子体实体标本镜检形态实体标本镜检形态（吉氏染色）（吉氏染色）P.V.G 的雌雄实体的雌雄实体间间日疟大滋养体日疟大滋养体(T)(T)与配子体与配子体(G)(G)的区别的区别 T G虫体： 较小较小 较大较大胞浆： 边缘不规则可见空泡边缘不规则可见空泡 边缘规则无空泡边缘规则无空泡 核： 较小、不规则较小、不规则 较大有不染色带较大有不染色带色素： 较少、分布不匀，较少、分布不匀， 色素分布均匀色素分布均匀TG薄血膜中薄血膜中 P.f 的形态的形态虫体：约虫体：约占占RBCRBC的的1/5-1/61/5-1/6, ,环状。常见几个虫同时寄生在同一
19、细胞环状。常见几个虫同时寄生在同一细胞核：核： 小致密规则、常见小致密规则、常见2 2个核个核胞浆：纤细完整胞浆：纤细完整P.f.RP.f.RP.f.GP.f.GP.f.G疟原虫厚、薄血膜镜检的主要形态变异疟原虫厚、薄血膜镜检的主要形态变异 薄薄血血膜膜：原原虫虫寄寄生生在在红红细细胞胞里里,形形态态典典型型,易易鉴鉴别别,但但一一般只用于教学和虫种鉴别般只用于教学和虫种鉴别. 厚厚血血膜膜：经经染染色色血血红红蛋蛋白白溶溶解解，轮轮廓廓消消失失，但但有有时时尚尚留留下下残残骸骸的的“影影子子”或或点点彩彩。 厚厚血血膜膜由由于于细细胞胞重重迭迭，干干燥燥缓缓慢慢，虫虫体体形形态态发发生生较较
20、大大变变化化,特特别别是是小小滋滋养养体体和和大大滋滋养养体体变变化化就就更更大大，常常呈呈分分号号“；”和和感感叹叹号号“！”状状；飞飞鸟鸟“.”、“V”状状。而而大大滋滋养养体体空空泡泡消消失失，胞胞浆浆断断裂裂成成块块是是它它的的特特点点。裂裂殖殖体体和和配配子子体体的的形形态态则则无无明明显显变变化化。虽虽然然大大、小小滋滋养养体体形形态态千千变变万万化化，但但只只要要掌掌握握疟疟原原虫虫的的核核、胞胞浆浆、色色素素三个要点是不难鉴别的。三个要点是不难鉴别的。 厚血膜厚血膜 一一般般门门诊诊须须检检查查2001000个个油油镜镜视视野野（相相当当于于0.52.5l血血量量），才才能能确
21、确保保镜镜检检的的敏敏感感性性和和可可重重复复性性。通通常常的的敏敏感感性性可可达达约约1020个个原原虫虫/l血。血。 由由于于厚厚血血膜膜比比薄薄血血膜膜用用血血量量大大，涂涂布布面面积积小小，阳阳性性检检出出率率较较高高。查查出出疟疟原原虫虫数数是是薄薄血血膜膜的的1525倍倍。因因此此，疟疟疾疾诊诊断断性性镜镜检检应应以以检检查查厚厚血血膜膜为为主主。均均应应查查完完整整个个厚厚血血膜膜，未未查查见见疟疟原原虫虫则则判判为为阴性。阴性。间日疟原虫间日疟原虫恶性疟原虫恶性疟原虫厚血膜集中视野厚血膜集中视野各种不同时期疟原虫形态的比较各种不同时期疟原虫形态的比较薄血膜薄血膜 P.v.R P
22、.f.R大小：大小：约占RBC的1/3 约占RBC的1/5部位：部位：RBC里少见多个虫同时寄生 RBC的边缘 、常见多个虫同时寄生核：核： 大、较松、两核少见 小、致密、两核多见 胞浆：胞浆：较粗、不规则 纤细、规则 P.v.R 对对 比比 P.f.R厚血膜厚血膜厚血膜厚血膜P.v.G 对对 比比 P.f.G血片中的血片中的PC、杂质、杂质注意杂质与疟原虫的区分注意杂质与疟原虫的区分P C杂质杂质镜镜 检检 技技 术术 1. 采血时间：采血时间： P.v 发作后发作后10小时内小时内采血，各期（采血，各期（R、T、S、G）疟原虫均可）疟原虫均可查见。见。 P.f 发作时采血发作时采血可查到查
23、到 R；发作后；发作后10天天左右采血可查左右采血可查见 G。 2. 厚薄片的制作：厚薄片的制作： 厚血膜厚血膜取约取约4ul血液置于玻片合适位置上，用推片一角由里向外旋血液置于玻片合适位置上，用推片一角由里向外旋 转转2-4圈，涂成直径圈，涂成直径0.8-1厘米大小的圆形均匀血膜。厘米大小的圆形均匀血膜。 薄血膜薄血膜取约取约1ul血液置于玻片合适位置上，推成宽血液置于玻片合适位置上，推成宽2厘米、长厘米、长2.5厘米厘米 的血膜。的血膜。 同片可制作两个厚血膜，一个薄血膜（见下图）。同片可制作两个厚血膜，一个薄血膜（见下图）。玻片头可粘玻片头可粘 贴患者信贴患者信 息，亦可在薄片头以铅笔写
24、上患者姓名、编码等。息，亦可在薄片头以铅笔写上患者姓名、编码等。 3. 染色染色 （1）首先晾干血片，以甲醇或无水酒精固定薄血膜。应用）首先晾干血片，以甲醇或无水酒精固定薄血膜。应用 吉氏染色吉氏染色法，每张玻片约需染液法，每张玻片约需染液1ml。 （2）配制染色工作液：）配制染色工作液：1ml清洁水（清洁水（Ph7.0-7.2）+1-2滴吉滴吉 氏原液氏原液/血片，混匀。须现配现用。血片，混匀。须现配现用。 （3）将配好的吉氏染液滴入血片，并均匀分布染色）将配好的吉氏染液滴入血片，并均匀分布染色10-20分钟。然后用分钟。然后用 清水轻轻将染液冲洗干净，晾干待检。清水轻轻将染液冲洗干净，晾干
25、待检。4. 镜检镜检 （1）一般只查）一般只查厚片厚片，薄片仅作为疟原虫分类参考和编号用。，薄片仅作为疟原虫分类参考和编号用。 （2）可先以）可先以油镜头配合油镜头配合5X低倍目低倍目镜镜检，有疑问时可调换镜镜检，有疑问时可调换10X目镜目镜进行进行 观察。观察。 （3）检查时应从厚血膜的上缘开始，按下图示意的顺序方向，视野稍叠）检查时应从厚血膜的上缘开始，按下图示意的顺序方向，视野稍叠 视野地查完整个血膜。视野地查完整个血膜。厚血膜镜检示意图厚血膜镜检示意图5. 结果报告结果报告 阴性：阴性：报告报告“未查到未查到MP”阳性：阳性：报告报告“查到查到XXXMP”厚血膜疟原虫镜检厚血膜疟原虫镜
26、检“记号记号”报告法：报告法： 全血膜同种同期疟原虫全血膜同种同期疟原虫10个以内均记实际数，个以内均记实际数，10个以上但还不到个以上但还不到平均平均1个个/视野则记为视野则记为“少少”。报告格式如。报告格式如P.v.T . S . G , P.f. R . G 。 平均每个视野同种同期疟原虫：平均每个视野同种同期疟原虫： 1-5个个 “+” 如如P.f.R 6-10个个“+” 如如P.f.R 10-100 个个“+” 如如P.v.R. G 100个以上个以上“+” 如如P.f.R 注注 意：意： A.抗凝血制作的血片其粘附力差，染色冲洗易于脱落，可抗凝血制作的血片其粘附力差，染色冲洗易于脱
27、落，可 先用生理盐水洗涤先用生理盐水洗涤2-3次后，再制作厚、薄片。次后，再制作厚、薄片。 B.油镜与玻片的清洗：油镜与玻片的清洗： 加清洗液（加清洗液（7份乙醚份乙醚3份无水乙醇）适量，用搽镜纸吸去。份无水乙醇）适量，用搽镜纸吸去。 少少31少少2+P.V 与与 P.f 鉴别报告鉴别报告1、当血膜中发现环状体时，且数量较多，环纤细，此时应、当血膜中发现环状体时，且数量较多，环纤细，此时应注意观察全血膜有无间日疟的其他期原虫，如无可判定为注意观察全血膜有无间日疟的其他期原虫，如无可判定为恶恶性疟性疟。 2、当血膜中发现间日疟原虫时，此时应注意观察全血膜有、当血膜中发现间日疟原虫时，此时应注意观察全血膜有无恶性疟的配子体，如无可判为无恶性疟的配子体，如无可判为间日疟间日疟，如有可判为此两型，如有可判为此两型疟原虫疟原虫混合感染混合感染。 3、当全血膜中出现少数环状体时，且形态不典型，则最好、当全血膜中出现少数环状体时，且形态不典型，则最好间隔数小时后再取血检查，如此时无间日疟则可判为定间隔数小时后再取血检查，如此时无间日疟则可判为定恶性恶性疟疟。
