《基因抑制对细胞生长和增殖的影响课件》由会员分享，可在线阅读，更多相关《基因抑制对细胞生长和增殖的影响课件（15页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、第五部分第五部分 POLD1基因表达受到抑制基因表达受到抑制后对后对MCF-7细胞的生长及周期的影响细胞的生长及周期的影响基因抑制对细胞生长和增殖的影响课件实验方法实验方法nTrizol提取MCF-7细胞总RNA n反义POLD1表达重组质粒pXJ41-as-POLD1的构建及鉴定n细胞转染及稳定表达细胞株的筛选 n细胞生长曲线实验n血清依赖性实验 n单细胞克隆形成实验 n软琼脂集落形成实验 n胸腺嘧啶核苷（TdR）双阻断法同步化MCF-7细胞 n流式细胞光度术（FCM）进行细胞周期分析nWestern blot鉴定转染细胞中特异性蛋白的表达 基因抑制对细胞生长和增殖的影响课件反义RNAn反义
2、RNA是指与mRNA互补的RNA分子, 也包括与其它RNA互补的RNA分子。由于核糖体不能翻译双链的RNA，所以反义RNA与mRNA特异性的互补结合, 即抑制了该mRNA的翻译。n近年来通过人工合成反义RNA的基因, 并将其导入细胞内转录成反义RNA, 即能抑制某特定基因的表达,阻断该基因的功能, 有助于了解该基因对细胞生长和分化的作用。基因抑制对细胞生长和增殖的影响课件结果与讨论n生长曲线的测定 n血清依赖性实验结果 n单细胞克隆形成率的比较 n软琼脂集落形成比较 nTdR 双阻断细胞后，流式细胞光度术（FCM）观察转染细胞周期的变化 nWestern blot检测转染细胞中周期相关基因的表
3、达基因抑制对细胞生长和增殖的影响课件引物设计上游： 5 ATG TTT GGG TAC CAC GGG CAC 3631 gctcccgaga gagcatgttt gggtaccacg ggcacggccc ctccccgttc ctgcgcatca下游： 5 CCA GGA ATT CGA ATG TTT GTA 3Kpn IEcoR I1261 ttccgtacct catctctcgg gcccagaccc tcaaggtaca aacattccct ttcctgggcc 基因抑制对细胞生长和增殖的影响课件pXJ41-as-POLD1重组质粒图谱重组质粒图谱 基因抑制对细胞生长和增殖的
4、影响课件生长曲线的测定生长曲线的测定基因抑制对细胞生长和增殖的影响课件转染细胞的血清依赖性实验 基因抑制对细胞生长和增殖的影响课件单细胞克隆形成率的比较单细胞克隆形成率的比较1: MCF -as-POLD1 2: MCF-7 3: MCF-pXJ41基因抑制对细胞生长和增殖的影响课件软琼脂集落形成比较软琼脂集落形成比较 1: MCF -as-POLD1 2: MCF-7 3: MCF-pXJ41基因抑制对细胞生长和增殖的影响课件TdR 双阻断细胞后，流式细胞光度术双阻断细胞后，流式细胞光度术（FCM）观察转染细胞周期的变化）观察转染细胞周期的变化Con 145G1SG2/MG1SG2/MG1S
5、G2/MG1SG2/MA66.8 22.9 10.3 0.2 99.7 0.1 5.7 90.3 4.0 4.2 42.4 53.4 B59.8 31.7 8.5 2.8 93.9 3.3 1.8 95.6 2.5 3.0 83.0 13.9 基因抑制对细胞生长和增殖的影响课件 6 10 11 12 G1SG2/MG1SG2/MG1SG2/MG1SG2/MA8.5 17.5 74.5 59.5 7.0 33.4 84.0 4.8 11.2 83.1 7.7 9.1 B11.6 65.2 23.3 5.7 22.9 71.4 33.1 13.9 53.1 40.0 13.5 46.6 基因抑制对
6、细胞生长和增殖的影响课件131518 20 G1SG2/MG1SG2/MG1SG2/MG1SG2/MA88.0 5.4 6.6 89.5 8.0 2.5 41.3 51.6 7.1 26.4 62.1 11.5 B70.1 10.0 19.9 77.9 12.3 9.8 82.5 9.9 7.7 70.8 24.6 4.6 基因抑制对细胞生长和增殖的影响课件22 24 26 28 G1SG2/MG1SG2/MG1SG2/MG1SG2/MA16.4 75.0 8.6 13.4 64.6 22.0 52.5 17.1 30.4 58.0 15.5 26.5 B27.7 64.9 7.3 20.0 74.4 5.7 19.1 60.7 20.221.6 52.7 25.7 基因抑制对细胞生长和增殖的影响课件Western blot检测转染细胞中周检测转染细胞中周期相关基因的表达期相关基因的表达 1 2 3A: CyclinE B: CDK2 C: CyclinD1 D: CDK4 E:Tublin 1: MCF -as-POLD1 2: MCF-7 3: MCF-pXJ41ABCDE基因抑制对细胞生长和增殖的影响课件
