DNA重组技术的工具

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1、目目 录录专题专题1 基因工程基因工程专题专题2 细胞工程细胞工程专题专题3 胚胎工程胚胎工程专题专题4 生物技术的安全性和伦理问题生物技术的安全性和伦理问题专题专题5 生态工程生态工程专题专题1 基因工程基因工程本章考纲要求：本章考纲要求：（1）基因工程的诞生）基因工程的诞生 （2）基因工程的原理及技术）基因工程的原理及技术 （3）基因工程的应用）基因工程的应用 （4）蛋白质工程）蛋白质工程 学习重难点学习重难点专题重点专题重点专题难点专题难点 DNA 重组技术的基本工具重组技术的基本工具 基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序 基因工程在农业和医疗等方面的应用基因工程在农业和医疗等方

2、面的应用 蛋白质工程的原理和意义蛋白质工程的原理和意义 基因工程载体需要具备的条件基因工程载体需要具备的条件 利用利用 PCR 技术扩增目的基因技术扩增目的基因基因治疗的应用基因治疗的应用 蛋白质工程和基因工程的关系蛋白质工程和基因工程的关系学习目标1、简述、简述DNA重组技术所需三种基本工具的作用重组技术所需三种基本工具的作用.2、认同基因工程的诞生和发展离不开理论研究、认同基因工程的诞生和发展离不开理论研究 和技术创新。和技术创新。学习重、难点学习重、难点1、DNA重组技术所需的三种基本工具的作用。重组技术所需的三种基本工具的作用。 （重点）（重点）2、基因工程载体所需要具备的条件。、基因

3、工程载体所需要具备的条件。 （难点）（难点）一、基因工程的概念 是指按照是指按照人们的愿望人们的愿望，进行严格的设计，并通，进行严格的设计，并通过过体外体外DNADNA重组和转基因技术重组和转基因技术，赋予生物以新的遗，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。又叫做型和生物产品。又叫做DNADNA重组技术重组技术或或基因拼接技基因拼接技术术。基因工程的基因工程的别名别名操作环境操作环境操作对象操作对象操作水平操作水平操作目的操作目的原理原理结果结果基因拼接技术或基因拼接技术或DNADNA重组重组技术技术生物体外生物体

4、外基因基因DNADNA分子水平分子水平定向定向地改造生物的遗传性状地改造生物的遗传性状不同生物间的不同生物间的基因重组基因重组人类需要的新的生物类型和生物产品人类需要的新的生物类型和生物产品人类需要的新的生物类型和生物产品人类需要的新的生物类型和生物产品思考思考：思考： 与诱变育种相比，其特点与诱变育种相比，其特点是是 与杂交育种相比，其特点与杂交育种相比，其特点是是是是是是 ；与杂交育种相比，其特点是与杂交育种相比，其特点是定向改造生物性状定向改造生物性状克服远缘杂交不亲和的障碍克服远缘杂交不亲和的障碍 思考 从结构上分析，为什么不同生物的从结构上分析，为什么不同生物的DNA能能够重组？够重

5、组？基本单位相同基本单位相同空间结构相同空间结构相同碱基配对方式相同碱基配对方式相同基因工程的产物基因工程的产物二、基因工程的诞生和发展二、基因工程的诞生和发展离不开理论研究和技术创新离不开理论研究和技术创新v阅读课本：科学探索之路阅读课本：科学探索之路v 基础理论基础理论v 技术发明技术发明基础理论基础理论催生了基因工程催生了基因工程科技探索之路科技探索之路1)DNA是遗传物质的证明是遗传物质的证明2)DNA双螺旋结构和中心法则的确立双螺旋结构和中心法则的确立3)遗传密码的破译遗传密码的破译19441944年年艾弗里艾弗里证明证明DNADNA是遗传物质是遗传物质DNADNA可从一种生物个体可

6、从一种生物个体转移转移到另一种生物个体到另一种生物个体 19531953年年沃森沃森、克里克克里克提出提出DNADNA的的双螺旋结构双螺旋结构模型模型19581958年年梅塞尔松梅塞尔松、斯塔尔斯塔尔证明证明DNADNA的的半保留复制半保留复制19581958年克里克年克里克等提出等提出中心法则中心法则19631963年年尼伦伯格尼伦伯格和和马太马太破译编码氨基酸的破译编码氨基酸的遗传密码遗传密码，19661966年年霍拉纳霍拉纳用实验加以证明用实验加以证明。技术发展催生了基因工程技术发展催生了基因工程科技探索之路科技探索之路1)基因转移载体的发现基因转移载体的发现2)工具酶的发现工具酶的发现

7、3)DNA合成和测序技术的发明合成和测序技术的发明4) DNA体外重组的实现体外重组的实现5)重组重组DNA表达实验的成功表达实验的成功6)第一例转基因动物问世第一例转基因动物问世7)PCR技术的发明技术的发明问题探讨问题探讨苏云金芽孢杆菌苏云金芽孢杆菌毒蛋白毒蛋白毒蛋白毒蛋白问题探讨：想一想想一想需要做哪些关键工作？需要做哪些关键工作？基因工程的基因工程的“专用工具专用工具”一一“分子手术刀分子手术刀” 限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶二二“分子缝合针分子缝合针” DNA连接连接酶酶三三“分子运输车分子运输车” 基因进入受体细胞的载体基因进入受体细胞的载体来源来源种类种类作用作用作用结作用结

8、果果 阅读课本阅读课本4-5页页“限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶分子手术刀分子手术刀”的的相关内容，填写下表相关内容，填写下表自主学习自主学习主要从原核生物中分离纯化而来主要从原核生物中分离纯化而来已经分离出大约已经分离出大约4000种种1、识别双链、识别双链DNA分子的某种特定分子的某种特定核核苷酸序列苷酸序列2、使每一条链中使每一条链中特定部位特定部位的两个核的两个核苷酸之间的苷酸之间的磷酸二酯键磷酸二酯键断开。断开。形成两种末端；形成两种末端；形成两种末端；形成两种末端；黏性末端或平末端黏性末端或平末端黏性末端或平末端黏性末端或平末端（一类酶一类酶）限制性内切酶作用过程点击播放点击播放

9、 G1234512345 A3,5-磷磷酸二酯酸二酯键键3端5端3端5端磷酸二酯键磷酸二酯键21仔细观察各限制酶仔细观察各限制酶 识别的特定序列有识别的特定序列有何何 特点？特点？限制酶的识别序列限制酶的识别序列限制酶所识别的序列的特点是：限制酶所识别的序列的特点是：1、呈现碱基互补对称，呈现碱基互补对称，2、都可以找到一条中心轴线，、都可以找到一条中心轴线，3、中轴线两侧的双链中轴线两侧的双链DNA上的上的碱基是碱基是反向对称重复反向对称重复排列的排列的 ，称为称为回文序列回文序列中轴线在G与A之间切割大肠杆菌的一种限制酶(EcoR)只能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。EcoRIE

10、coRI限制酶的作用限制酶的作用黏性末端黏性末端黏性末端黏性末端EcoRIEcoRI限制酶的切割限制酶的切割 被限制酶切开的被限制酶切开的DNA两条两条单链的切口，带有几个单链的切口，带有几个伸出的伸出的核苷酸核苷酸，他们之间正好互补配他们之间正好互补配对，这样的切口叫对，这样的切口叫黏性末端黏性末端。高考命题研究高考命题研究 主要考察对主要考察对基因工程概念基因工程概念的理解，的理解，结合实例考查基因工程的结合实例考查基因工程的操作工具操作工具。 分析近五年高考题，命题往往给分析近五年高考题，命题往往给出具体的出具体的限制酶及切割位点限制酶及切割位点图示，图示，通过分析切割的结果考查通过分析

11、切割的结果考查限制酶的限制酶的作用作用。回顾回顾1 1、基因工程的概念、基因工程的概念2 2、限制性核酸内切酶、限制性核酸内切酶 来源、种类、作用特点、作用结果来源、种类、作用特点、作用结果限制酶识别的限制酶识别的核苷酸序列核苷酸序列、断裂的、断裂的化学键化学键、产生的、产生的末端末端一、基因工程的概念 通俗地说，就按照通俗地说，就按照 ，通过严格，通过严格的设计，并通过的设计，并通过 和和 等技术，赋予生物以新的等技术，赋予生物以新的 ，从而创造出更符合人们需要的新的，从而创造出更符合人们需要的新的 和和 。由于基因工程是在。由于基因工程是在 水平上进行设计和水平上进行设计和施工的，因此施工

12、的，因此基因工程又叫做基因工程又叫做 或或 。人们的意愿人们的意愿体外体外DNA重组重组转基因转基因遗传特性遗传特性生物类型生物类型生物产品生物产品DNA分子分子DNA重组技术重组技术基因拼接技术基因拼接技术基因工程概念的理解基因工程概念的理解别名：别名：操作对象：操作对象：操作水平：操作水平：操作环境：操作环境：操作目的：操作目的：原理：原理：结果：结果：基因拼接技术、基因拼接技术、DNA重组技术重组技术基因基因DNA分子水平分子水平生物体外生物体外定向改造生物的遗传性状定向改造生物的遗传性状不同生物间不同生物间的基因重组的基因重组人类需要的新的人类需要的新的生物类型生物类型和和生物产品生物

13、产品二、限制性核酸内切酶二、限制性核酸内切酶分子手术刀分子手术刀(1)来源：主要从来源：主要从_生物中分离纯化出生物中分离纯化出来来。(2)种类：迄今已分离出约种类：迄今已分离出约 4 000 种。种。(4)结果：产生黏性末端或结果：产生黏性末端或_。(3)作用：识别特定的作用：识别特定的_序列，切割序列，切割 特定的特定的两个核苷酸之间的两个核苷酸之间的_。原核原核核苷酸核苷酸磷酸二酯键磷酸二酯键平末端平末端特异性特异性专一性专一性限制限制酶的命名的命名根据根据细菌种菌种类而定，以而定，以EcoRI为例为例：EEscherichia（属）（属）cocoli（种）（种）RRY13（品系）（品系

14、）I首先首先发现在此在此类细菌中菌中发现的的顺序序三、限制酶识别的核苷酸序列的特点三、限制酶识别的核苷酸序列的特点1、呈现碱基互补对称；呈现碱基互补对称；2、都可以找到一条中心轴线；、都可以找到一条中心轴线；3、中轴线两侧的双链、中轴线两侧的双链DNA上的碱基是上的碱基是 反向对称、重复排列反向对称、重复排列 大多数限制酶识别大多数限制酶识别6个核苷酸序列，少数限制个核苷酸序列，少数限制酶识别酶识别4、5或或8个核苷酸序列个核苷酸序列黏性末端黏性末端黏性末端黏性末端EcoRIEcoRI限制酶的切割限制酶的切割EcoR黏性末端黏性末端黏性末端黏性末端Go backGo backSmaISmaI只

15、能识别CCCGGG序列，并在C和G之间切开。中轴线SmaISmaI限制酶的作用限制酶的作用在G与C之间切割平末端平末端平末端平末端平末端平末端平末端平末端SmaISmaI限制酶的切割限制酶的切割 当限制酶从识别序列的当限制酶从识别序列的中心轴线处中心轴线处切开时，切开的切开时，切开的DNADNA两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫平末端平末端。思考思考1 1、要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性几个切口？可产生几个黏性( (平平) )末端？末端？、用限制酶切一个特定基因要切断几个磷酸

16、二用限制酶切一个特定基因要切断几个磷酸二酯键？酯键？要切两个切口，产生四个黏性要切两个切口，产生四个黏性( (平平) )末端。末端。个个3、如果把两种来源不同的如果把两种来源不同的DNADNA用同一种限制酶切用同一种限制酶切割，结果如何割，结果如何？产生相同黏性（平）末端产生相同黏性（平）末端思考4000种限制酶识别种限制酶识别85种核苷酸序列。种核苷酸序列。一种一种限制酶限制酶只能识别一种只能识别一种核苷酸序列核苷酸序列。一种一种核苷酸序列核苷酸序列可以被多种不同可以被多种不同限制酶限制酶识识别。别。 原核生物易受自然界外源原核生物易受自然界外源DNA的入侵，的入侵，但生物但生物在长期的进化

17、过程中形成了一套完善的防御机在长期的进化过程中形成了一套完善的防御机制，以防止外来病原物的侵害。制，以防止外来病原物的侵害。限制酶限制酶就是细就是细菌的一种菌的一种防御性工具，防御性工具，当外源当外源DNA侵入时，会侵入时，会利用限制酶利用限制酶将外源将外源DNA切割掉，切割掉，以保证自身的以保证自身的安全。所以，安全。所以，限制酶在原核生物中主要起到切限制酶在原核生物中主要起到切割外源割外源DNA、使之失效，从而达到保护自身的、使之失效，从而达到保护自身的目的。目的。 你能推测限制酶存在于原核生物中的你能推测限制酶存在于原核生物中的作用是什么吗？作用是什么吗？寻根问底寻根问底为什么限制酶不剪

18、切细菌本身的为什么限制酶不剪切细菌本身的DNA？ 通过长期的进化，细菌中含有某种限通过长期的进化，细菌中含有某种限制酶的细胞，其制酶的细胞，其DNADNA分子中分子中不具备这种限不具备这种限制酶的识别切割序列制酶的识别切割序列，或者，或者通过甲基化酶通过甲基化酶将甲基转移到所识别序列的碱基上，使限将甲基转移到所识别序列的碱基上，使限制酶不能将其切开制酶不能将其切开。这样，尽管细菌中含。这样，尽管细菌中含有某种限制酶也不会使自身的有某种限制酶也不会使自身的DNADNA被切断，被切断，并且可以防止外源并且可以防止外源DNADNA的入侵。的入侵。 原核生物中不存在该酶的识别序列或识别原核生物中不存在

19、该酶的识别序列或识别序列已经被修饰序列已经被修饰,尽管细菌中含有某种限制尽管细菌中含有某种限制酶也不会使自身的酶也不会使自身的DNA被切断，并且可以防被切断，并且可以防止外源止外源DNA的入侵的入侵。请写出请写出EcoRIEcoRI限制酶限制酶切割形成黏性末端的过程。切割形成黏性末端的过程。下列下列DNA片段属于同种限制酶切割的是片段属于同种限制酶切割的是42类型来源功能相同点差别EcoliDNA连接酶连接酶T4DNA连接酶连接酶大肠杆菌T4噬菌体恢复磷酸二酯键只能连接黏性末端能连接黏性末端和平末端(效率较低) 阅读课本第阅读课本第5页页“分子缝合针”DNA连接酶的相关的相关内容，填写下表内容

20、，填写下表自主学习自主学习 将脱氧核糖和磷酸连接起来催化形成磷酸二酯键DNADNA连接酶的作用连接酶的作用两两DNADNA片段要具有片段要具有互补互补的黏性末端的黏性末端才能拼起来才能拼起来DNADNA连接酶的缝合作用连接酶的缝合作用可把黏性末端之间的可把黏性末端之间的缝隙缝隙“缝合缝合”起来起来，注意：注意： DNADNA连接酶可连接双链连接酶可连接双链DNADNA中的中的DNADNA单链缺口，但单链缺口，但不能连接单链不能连接单链DNADNA（目前未发现目前未发现）！）！ 可把黏性末端之间的可把黏性末端之间的缝隙缝隙“缝合缝合”起来，起来，Ecoli DNAEcoli DNA连接酶或连接酶

21、或连接酶或连接酶或T T4 4DNADNA连接酶连接酶连接酶连接酶即即即即恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键 T T4 4 DNA DNA连接酶连接酶还可把还可把平末端之间的缝隙平末端之间的缝隙“缝合缝合”起来，但效率较低起来，但效率较低DNADNA连接酶的缝合作用连接酶的缝合作用DNADNA连接酶与连接酶与限制酶的联系限制酶的联系DNA连接酶的作用： 将双链DNS片段“缝合”起来，恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二脂键。DNA连接酶连接酶DNA聚

22、合酶聚合酶相相同同点点作用实质作用实质化学本质化学本质不不同同点点模板模板作用对象作用对象 作用结果作用结果用途用途都能催化形成都能催化形成磷酸二酯键磷酸二酯键都是蛋白质都是蛋白质不需要不需要需要需要形成完整的重形成完整的重组组DNA分子分子形成形成DNA的一条的一条链链基因工程基因工程DNA复制复制DNA连接酶与连接酶与DNA聚合酶的比较聚合酶的比较只能将只能将单个核苷单个核苷酸酸连接到已有的连接到已有的DNADNA片段上，形片段上，形成磷酸二酯键成磷酸二酯键在在两个两个DNADNA片段片段之间之间形成磷酸形成磷酸二酯键二酯键几种工具酶的作用比较几种工具酶的作用比较 项目项目 种类种类作用底

23、物作用底物作用部位作用部位作用结果作用结果限制酶限制酶DNA 分子分子磷酸二酯键磷酸二酯键形成黏性末端形成黏性末端或平末端或平末端DNA 连接酶连接酶DNA 分子分子片段片段磷酸二酯键磷酸二酯键形成重组形成重组 DNA 分子分子DNA 聚合酶聚合酶脱氧核苷酸脱氧核苷酸磷酸二酯键磷酸二酯键形成新的形成新的 DNA 分子分子DNA(水解水解)酶酶DNA 分子分子磷酸二酯键磷酸二酯键初步水解初步水解形成形成四种四种脱氧核苷酸脱氧核苷酸DNA 分子分子磷酸二酯键磷酸二酯键氢键氢键 彻底水解彻底水解成膦酸、脱成膦酸、脱氧核糖和含氮碱基氧核糖和含氮碱基DNA 解旋酶解旋酶DNA 分子分子碱基对间的碱基对间

24、的氢键氢键形成单链形成单链 DNA 分子分子以下是两种限制酶切割后形成的以下是两种限制酶切割后形成的DNA片段，试分析：片段，试分析：GC AATTC GC CTTAA CG G CG G (1)其中其中和和 是由一种限制酶切割形成的是由一种限制酶切割形成的 末端，两者要重组成一个末端，两者要重组成一个DNA 分子，所用分子，所用DNA连接连接酶通常是酶通常是 。 （2） 和和 是由另一种限制酶切割形成的是由另一种限制酶切割形成的 末端，两者要形成重组末端，两者要形成重组DNA片段，所用的连接酶通常片段，所用的连接酶通常是是 。反馈练习：反馈练习：T4DNA连接酶连接酶EcoliDNA连接酶连

25、接酶52【应城一中生物】 如图，就下列与核酸相关酶的作用机理填空：限制酶 解旋酶 DNA连接酶 DNA聚合酶 RNA聚合酶baA.切断a处的酶为_B.连接a处的酶为_C.切断b处的酶为_D.连接b处的酶为_无载体的作用载体的作用载体的必载体的必要条件要条件载体的种类载体的种类阅读课本第阅读课本第6页页“分子运输车分子运输车”运载体运载体的相关内容，填写下表的相关内容，填写下表自主学习自主学习1 1）能够在宿主细胞中）能够在宿主细胞中）能够在宿主细胞中）能够在宿主细胞中复制复制复制复制并稳定地并稳定地并稳定地并稳定地保存保存保存保存。2 2）具多个）具多个）具多个）具多个限制酶切点限制酶切点限制

26、酶切点限制酶切点，以，以，以，以便与外源基因连接便与外源基因连接便与外源基因连接便与外源基因连接。3 3）具有某些）具有某些）具有某些）具有某些标记基因标记基因标记基因标记基因，便于进行，便于进行，便于进行，便于进行鉴定鉴定鉴定鉴定和和和和选择选择选择选择。4 4）必须是）必须是）必须是）必须是安全安全安全安全的的的的 ，对受体细胞，对受体细胞，对受体细胞，对受体细胞无害无害无害无害。5 5）载体）载体）载体）载体DNA DNA 分子应分子应分子应分子应大小适中大小适中大小适中大小适中，以便于，以便于，以便于，以便于提取提取提取提取和和和和操作操作操作操作1 1）作为）作为）作为）作为运载工具

27、运载工具运载工具运载工具，将目的基因导入受体细胞中，将目的基因导入受体细胞中，将目的基因导入受体细胞中，将目的基因导入受体细胞中2 2）在受体细胞内对目的基因进行）在受体细胞内对目的基因进行）在受体细胞内对目的基因进行）在受体细胞内对目的基因进行大量复制大量复制大量复制大量复制质粒（存在于许多质粒（存在于许多细菌细菌以及以及酵母菌酵母菌等生物细胞中）等生物细胞中）病毒：病毒：噬菌体衍生物噬菌体衍生物噬菌体衍生物噬菌体衍生物、动植物病毒等。、动植物病毒等。 有有标记基因标记基因的的存在，可用存在，可用含含青霉素的培养青霉素的培养基基鉴别鉴别。有有切割位点切割位点能能复制复制并带着并带着插入的插入

28、的目的基目的基因因一起复制一起复制最常用运载体最常用运载体质粒质粒 质粒质粒质粒质粒本质：独立于拟核或细胞核之外的本质：独立于拟核或细胞核之外的本质：独立于拟核或细胞核之外的本质：独立于拟核或细胞核之外的DNADNA分布：许多细菌、酵母菌等生物分布：许多细菌、酵母菌等生物分布：许多细菌、酵母菌等生物分布：许多细菌、酵母菌等生物特点：特点：特点：特点：自主复制、裸露、双链、小型自主复制、裸露、双链、小型自主复制、裸露、双链、小型自主复制、裸露、双链、小型环状环状环状环状 质粒质粒质粒质粒本质：独立于拟核或细胞核之外的本质：独立于拟核或细胞核之外的本质：独立于拟核或细胞核之外的本质：独立于拟核或细

29、胞核之外的DNADNA分布：许多细菌、酵母菌等生物分布：许多细菌、酵母菌等生物分布：许多细菌、酵母菌等生物分布：许多细菌、酵母菌等生物特点：特点：特点：特点：自主复制、裸露、双链、小型自主复制、裸露、双链、小型自主复制、裸露、双链、小型自主复制、裸露、双链、小型环状环状环状环状 最常用：大肠杆菌质粒最常用：大肠杆菌质粒最常用：大肠杆菌质粒最常用：大肠杆菌质粒天然天然DNA分子可以直接用做基因工程载体吗？分子可以直接用做基因工程载体吗？ 自然存在的质粒自然存在的质粒DNA分子并不完全具分子并不完全具备备所需所需条件，条件，都都要进行要进行人工改造人工改造后才能用后才能用于基因工程操作于基因工程操

30、作。课堂小结课堂小结基因工程基因工程的工具的工具限制酶限制酶主要存在于原核生物中主要存在于原核生物中具有专一性具有专一性(识别序列识别序列)切开切开DNA分子的磷酸二酯键分子的磷酸二酯键DNA连连接酶接酶连接磷酸二酯键连接磷酸二酯键种类种类E.coliDNA连接酶连接酶T4 DNA连接酶连接酶运载运载工具工具具备的具备的条件条件结构简单结构简单,大小适中大小适中能在宿主细胞中自能在宿主细胞中自我复制并稳定存在我复制并稳定存在具一个多个限制酶切位点具一个多个限制酶切位点具标记基因具标记基因质粒、质粒、噬菌体衍生物、动植物病毒噬菌体衍生物、动植物病毒 已知某种限制性内切酶在一线性已知某种限制性内切

31、酶在一线性DNA分子上有分子上有3个酶个酶切位点，如图中箭头所指，如果该线性切位点，如图中箭头所指，如果该线性DNA分子在分子在3个酶切个酶切位点上都被该酶切断，则会产生位点上都被该酶切断，则会产生a、b、c、d四种不同长度四种不同长度的的DNA片段。现在多个上述线性片段。现在多个上述线性DNA分子，若在每个分子，若在每个DNA分子上至少有分子上至少有1个酶切位点被该酶切断，则从理论上讲，经个酶切位点被该酶切断，则从理论上讲，经该酶切后，这些线性该酶切后，这些线性DNA分子最多能产生长度不同的分子最多能产生长度不同的DNA片段种类数是片段种类数是 （ ）练习练习A.3 B.4 C.9 D. 1

32、2A.3 B.4 C.9 D. 12C 已知标记基因有抗四环素基因和抗氨苄青霉已知标记基因有抗四环素基因和抗氨苄青霉已知标记基因有抗四环素基因和抗氨苄青霉已知标记基因有抗四环素基因和抗氨苄青霉素的基因，素的基因，素的基因，素的基因，现探讨某细菌的质粒中有无标记基因或现探讨某细菌的质粒中有无标记基因或现探讨某细菌的质粒中有无标记基因或现探讨某细菌的质粒中有无标记基因或标记基因是什么标记基因是什么标记基因是什么标记基因是什么？请设计实验、预期实验结果，并？请设计实验、预期实验结果，并？请设计实验、预期实验结果，并？请设计实验、预期实验结果，并得出相应的实验结论。得出相应的实验结论。得出相应的实验结

33、论。得出相应的实验结论。对照组：对照组：对照组：对照组：不添加不添加不添加不添加抗抗抗抗生素生素生素生素实验组实验组实验组实验组1 1 1 1：添加一定添加一定添加一定添加一定浓度的浓度的浓度的浓度的四四四四环素环素环素环素实验组实验组实验组实验组2 2 2 2：添加一定添加一定添加一定添加一定浓度的浓度的浓度的浓度的氨氨氨氨苄青霉素苄青霉素苄青霉素苄青霉素实验组实验组实验组实验组3 3 3 3：添加一定添加一定添加一定添加一定浓度的浓度的浓度的浓度的四四四四环素环素环素环素和和和和氨氨氨氨苄青霉素苄青霉素苄青霉素苄青霉素练习练习对照对照组组实验实验组组1 1实验实验组组2 2实验实验组组3

34、3结结 论论预期预期一一预期预期二二预期预期三三预期预期四四对照组：对照组：对照组：对照组：不添加不添加不添加不添加抗抗抗抗生素生素生素生素实验组实验组实验组实验组1 1 1 1：添：添：添：添加一定浓度加一定浓度加一定浓度加一定浓度的的的的四环素四环素四环素四环素实验组实验组实验组实验组2 2 2 2：添：添：添：添加一定浓度的加一定浓度的加一定浓度的加一定浓度的氨苄青霉素氨苄青霉素氨苄青霉素氨苄青霉素实验组实验组实验组实验组3 3 3 3：添加：添加：添加：添加一定浓度的一定浓度的一定浓度的一定浓度的四环四环四环四环素素素素和和和和氨苄青霉素氨苄青霉素氨苄青霉素氨苄青霉素既既既既含有抗四环

35、素基因含有抗四环素基因含有抗四环素基因含有抗四环素基因也也也也含有含有含有含有抗氨苄青霉素基因抗氨苄青霉素基因抗氨苄青霉素基因抗氨苄青霉素基因只含有抗四环素基因只含有抗四环素基因只含有抗四环素基因只含有抗四环素基因只含有抗氨苄青霉素基因只含有抗氨苄青霉素基因只含有抗氨苄青霉素基因只含有抗氨苄青霉素基因既既既既不含有不含有不含有不含有抗四环素基因也抗四环素基因也抗四环素基因也抗四环素基因也不不不不含有含有含有含有抗氨苄青霉素基因抗氨苄青霉素基因抗氨苄青霉素基因抗氨苄青霉素基因限制性内切酶限制性内切酶的识别序列和切点是的识别序列和切点是GGATCC，限制，限制性内切酶性内切酶的识别序列和切点是的识

36、别序列和切点是GATC。在质粒上有。在质粒上有酶酶的一个切点，在目的基因的两侧各有一个酶的一个切点，在目的基因的两侧各有一个酶的切点。的切点。（1）请画出质粒被限制酶）请画出质粒被限制酶切割后所形成的黏性末端。切割后所形成的黏性末端。（2）请画出目的基因两侧被限制酶）请画出目的基因两侧被限制酶切割后所形成的黏性切割后所形成的黏性末端。末端。（3）在）在DNA连接酶作用下，上述两种不同限制酶切割后形连接酶作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接？为什么？成的黏性末端能否连接？为什么？可以连接。因为由两种不同限制酶切割后形成的黏可以连接。因为由两种不同限制酶切割后形成的黏性末端是相同的（或是可以互补的）性末端是相同的（或是可以互补的） 小试身手小试身手基因工程原理及特点1原理：外源基因在受体细胞中能够表达。(1)DNA 是生物的主要遗传物质，不同生物间 DNA 分子的结构基本相同。(2)不同生物进行基因表达时都遵循“中心法则”：即(3)所有生物共用一套密码子。